缺血后处理对大鼠肾缺血再灌注损伤的影响

目的探讨缺血后处理对大鼠肾缺血再灌注（I／R）损伤的影响及其机制。方法18只雄性SD大鼠随机分为3组（n=6）：假手术组（S组）、缺血再灌注组（I／R组）和缺血后处理组（IPo组）。采用夹闭双侧肾蒂45min-再灌注6h制备肾脏缺血再灌注损伤模型。IPo组在夹闭双侧肾蒂45min后，再灌注10s，缺血10s，重复3次后，完全恢复肾血流。再灌注6h时开胸，取心脏血后处死大鼠，取肾组织。测定血清肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）和尿酸（UA）浓度，肾组织中丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性；光镜下观察肾组织病理学改变；采用原位末端脱氧核苷酸转移酶标记（TUNEL）法检测肾组织中凋亡细胞，光镜下计数凋亡细胞，并计算肾小管上皮细胞凋亡指数（AI）。结果与S组比较，I／R组和IPo组Cr和BUN浓度升高（P〈0．05），UA浓度差异无统计学意义（P〉0．05），肾组织SOD活性降低，MDA含量升高，肾小管上皮细胞凋亡指数增加（P〈0．05），病理损伤明显。与I／R组比较，IPo组Cr和BUN浓度降低（P〈0．05），UA浓度差异无统计学意义（P〉0．05），SOD活性升高，MDA含量降低，肾小管上皮细胞凋亡指数减少（P〈0．05），病理损伤减轻。结论缺血后处理能减轻大鼠肾缺血再灌注损伤，其机制与增强肾脏抗氧化能力和抑制肾组织细胞凋亡有关。     

缺血预处理-后处理对大鼠肠缺血再灌注损伤的影响

目的 评价缺血预处理.后处理对大鼠肠缺血再灌注损伤的影响.方法 清洁级成年雄性SD大鼠40只.体重225～275 g,随机分为5组(n=8):假手术组(S组)仅分离肠系膜上动脉(SMA),不夹闭;肠缺血再灌注组(IIR组)采用夹闭SMA 60 min,再灌注60 min的方法制备肠缺血再灌注损伤模型;缺血预处理组(IPr组)夹闭SMA 10 min,再灌注10 min,余同IIR组;缺血后处理组(IPo 组)夹闭SMA 60 min后,再灌注30 s,缺血30 s,反复3次,再灌注60 min;缺血预处理.后处理组(IPr-IPo组)先行缺血预处理,再行缺血后处理,操作过程同IPr组和IPo组.于再灌注60 min时各组取肠粘膜组织,观察肠粘膜形态并行Chiu评分,检测丙二醛(MDA)含量,超氧化物歧化酶(SOD)及髓过氧化物酶(MPO)活性,同时采集动脉血样检测血浆肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白细胞介素6(IL-6)浓度.结果 与S组比较,其余各组Chiu评分、MDA含量、MPO活性、血浆TNF-α与IL-6浓度升高,SOD活性降低(P<0.05).与IIR组比较,IPr组、IPo组及IPr-IPo组Chiu评分、MDA含量、MPO活性、血浆TNF-α和IL-6浓度降低.SOD活性升高(P<0.01).与IPr组和IPo组比较,IPr-IPo组Chiu评分和MDA含量降低,SOD活性升高(P<0.05).IPr组与IPo组各指标比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 缺血预处理-后处理可减轻大鼠肠缺血再灌注损伤,较单独应用时效果好.     

mito-KATP通道在缺血后处理减轻大鼠肾缺血再灌注损伤中的作用

目的 评价线粒体ATP敏感性钾通道(mito-KATP通道)在缺血后处理减轻大鼠肾缺血再灌注损伤中的作用.方法 健康成年雄性SD大鼠35只,体重250～280 g,随机分为5组(n=7):假手术组(S组)仅分离双侧肾蒂,暴露45 min不夹闭;肾缺血再灌注组(I/R组)夹闭双侧肾蒂缺血45 min,再灌注6 h制备大鼠肾缺血再灌注模型;缺血后处理组(Ipo组)夹闭双侧肾蒂缺血45 min,再灌注10 s,缺血10 s,反复3次,再灌注6 h;mito-KATP通道阻断剂5-羟葵酸+I/R组(5-HD+I/R组)缺血前30 min腹腔注射5-HD 10 mg/kg,余处理同I/R组;缺血后处理+5-HD组(5-HD+Ipo组)缺血前30 min腹腔注射5-HD 10 mg/kg,余处理同Ipo组.于再灌注6 h时采集心脏血样,取肾并分离肾小管上皮细胞,测定血清Cr和BUN的浓度、肾小管上皮细胞线粒体膜电位、细胞内活性氧(ROS)含量和游离Ca2+浓度.结果 与S组比较,I/R组、Ipo组、5-HD+I/R组和5-HD+Ipo组血清Cr和BUN的浓度、肾小管上皮细胞内游离Ca2+浓度和ROS含量升高,线粒体膜电位降低(P＜0.05);与I/R组比较,Ipo组血清Cr和BUN的浓度、肾小管上皮细胞内游离Ca2+浓度和ROS含量降低,线粒体膜电位升高(P＜0.05),5-HD+I/R组和5-HD+Ipo组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05);与Ipo组比较,5-HD+I/R组和5-HD+Ipo组血清Cr和BUN浓度、肾小管上皮细胞内游离Ca2+浓度和ROS含量升高,线粒体膜电位降低(P＜0.05).结论 mito-KATP通道的开放参与了缺血后处理减轻大鼠肾缺血再灌注损伤的过程.     

肾缺血后处理对热休克蛋白表达的影响及作用

目的 评价肾缺血后处理(ischemic postconditioning,IPo)对热休克蛋白(heat shock protein,HSP)70、HSP27和血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1,即HSP32)表达的影响及在减轻肾缺血/再灌注损伤(ischemia/reperfusion injury,I/RI)中的作用.方法 健康雄性SD大鼠140只,体重250 g～280 g,采用随机数字表法随机分为4组(每组35只):假手术组(S组)仅开腹,游离双侧肾脏,分离双侧肾蒂不夹闭;缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)组,夹闭双侧肾蒂缺血45 min,恢复灌注;IPo组,夹闭双侧肾蒂45 min,再灌注10 s,缺血10s,反复3次,恢复灌注;HSP抑制剂槲皮黄酮+IPo组(Q+IPo组),缺血前lh腹腔注射槲皮黄酮100 mg/kg,余操作同IPo组.于再灌注即刻(T0)、1、3、6、12、24、48 h(T1～6)时取5只大鼠经心脏抽血后迅速处死取肾,采用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学法分别检测各时点肾组织HSP70、HSP27和HO-1的mRNA和蛋白表达,测定T3时血清肌酐(creatinine,Cr)和尿素氮(urea nitrogen,BUN)浓度、肾组织丙二醛(methylene dioxyamphetamine,MDA)含量和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性、肾组织核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)表达和血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorα,TNF-α)浓度,光镜下观察肾组织病理学结果. 结果 S组HSP70、HSP27和HO-1的mRNA有微量表达,蛋白几乎无表达,其余组在To时开始表达,逐渐升高,T3时达高峰,随后逐渐下降.与S组比较,其余组各时点HSP70、HSP27和HO-1的mRNA和蛋白表达上调(P＜0.05),IPo组较I/R组T2～5时HSP70、HSP27和HO-1的mRNA和蛋白表达上调(P＜0.05),Q+IPo组较IPo组T2～5时HSP70、HSP27和HO-1的mRNA和蛋白表达下调(P＜0.05).T3时血清Cr、BUN和TNF-α浓度I/R组分别为(102±5) μmol/L、(25.7±3.9) mmol/L、(2.29±0.18) μg/L,IPo组分别为(64±5)μmol/L、(11.3±3.0) mmol/L、(1.76±0.13)μg/L,Q+IPo组分别为(101±6)μmol/L、(26.5±4.5) mmol/L、(2.31±0.17) μg/L,均高于S组(46±6) μmol/L、(5.1±1.9) mmol/L和(1.13±0.14) μg/L(P＜0.05),IPo组三者浓度较I/R组降低(P＜0.05),Q+IPo组较IPo组升高(P＜0.05).T3时MDA含量I/R组(2.20±0.23) nmol/mgprot、IPo组(1.35±0.13) nmol/mgprot和Q+IPo组(2.25±0.16) nmol/mgprot较S组(1.02±0.19) nmol/mgprot升高(P＜0.05),SOD活性I/R组(104±6) U/mgprot、IPo组(124±4) U/mgprot和Q+IPo组(106±5) U/mgprot较S组(147±6) U/mgprot 降低(P＜0.05),IPo组与I/R组比较MDA含量降低和SOD活性升高(P＜0.05),Q+Ipo组与IPo组比较MDA含量升高和SOD活性降低(P＜0.05),肾组织NF-κB表达I/R组、IPo组和Q+IPo组较S组增高,IPo组较I/R组表达降低,Q+IPo组较IPo组表达增高(P＜0.05).I/R组与Q+Ipo组相比,各指标差异无统计学意义(P＞0.05).与S组比较,其余3组有程度不等的肾组织病理学损伤,IPo组损伤较I/R组减轻,Q+IPo组损伤程度与I/R组相似. 结论 IPo上调了HSP70、HSP27和HO-1的表达;HSP高表达参与了肾IPo减轻肾I/RI的过程.     

缺血后处理对小鼠肠缺血再灌注致肾损伤时Nrf2蛋白表达的影响

目的 评价缺血后处理对小鼠肠缺血再灌注致肾损伤时核因子E2相关因子2(Nrf2)蛋白表达的影响.方法 健康雄性C57BL/6J小鼠36只,9～12周,采用随机数字表法,将其随机分为3组(n=12):假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)、缺血后处理+缺血再灌注组(IPO组).采用夹闭肠系膜上动脉根部45 min恢复灌注的方法制备小鼠肠缺血再灌注损伤模型,IPO组于缺血45 min时再灌注30s,缺血30s,重复3次后恢复灌注.于再灌注2h时采集颈动脉血样,然后处死小鼠,取肾组织,测定血清BUN、Cr和中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)水平,检测肾组织Nrf2和HO-1蛋白表达、MDA含量、SOD活性、TNF-α、IL-6和IL-10的含量.显微镜下观察肾组织病理学结果,并行病理学损伤评分.结果 与S组比较,I/R组血清BUN、Cr和NAGL浓度升高,肾脏组织Nrf2及HO-1蛋白表达上调,MDA含量升高,SOD活性降低,肾脏组织病理学损伤评分升高(P＜0.05);与I/R组比较,IPO组血清BUN、Cr和NAGL浓度降低,肾脏组织Nrf2及HO-1蛋白表达上调,MDA含量降低,SOD活性升高,肾脏组织病理学损伤评分降低(P＜0.05).各组肾脏组织TNF-α、IL-6和IL-10含量比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 缺血后处理可减轻小鼠肠缺血再灌注致肾损伤,其机制可能与促进Nrf2蛋白表达,从而上调HO-1蛋白表达有关.     

缺血后处理对大鼠肾缺血再灌注损伤的影响

目的探讨缺血后处理对大鼠肾缺血再灌注损伤的影响。方法SD大鼠32只,雌雄不拘,随机分为4组（n=8）,假手术组（Ⅰ组）;对照组（Ⅱ组）建立肾缺血再灌注（I/R）模型;不同时间缺血后处理组（Ⅲ组和Ⅳ组）,建立I/R模型,Ⅲ组于缺血后再灌注10s,停灌10s,反复3次;Ⅳ组缺血后再灌注2min,停灌2min,反复3次。测定再灌注24h时血清尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）浓度、超氧化物岐化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）浓度,光镜下进行肾组织病理形态学观察,采用免疫组化法测定肾组织血红素氧合酶-1（HO-1）表达。结果再灌注24h时,与Ⅰ组比较,其余3组血清Cr、BUN和MDA浓度升高,SOD活性和HO-1表达降低（P〈0.01）;与Ⅱ组比较,Ⅲ组和Ⅳ组血清Cr、BUN、MDA浓度和HO-1表达降低,SOD活性升高（P〈0.05或0.01）;Ⅲ组和Ⅳ组各指标差异无统计学意义（P〉0.05）。Ⅲ组和Ⅳ组病理改变明显轻于Ⅱ组。结论缺血后处理可减轻大鼠肾缺血再灌注损伤,其机制与上调HO-1的表达和清除氧自由基有关。     

细胞穿透肽PEP-1导入血红素加氧酶-1蛋白对大鼠肾缺血再灌注损伤的影响

目的 评价细胞穿透肽PEP-1导入血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白对大鼠肾缺血再灌注损伤的影响.方法 健康雄性SD大鼠18只,周龄7～9周,体重210 ～ 260 g,采用随机数字表法,将其随机分为3组(n=6):假手术组(S组)、肾缺血再灌注组(I/R组)和融合蛋白PEP-1/HO-1+肾缺血再灌注组(HO组).采用夹闭双侧肾动脉45 min恢复灌注的方法制备大鼠肾缺血再灌注损伤模型.HO组于夹闭双侧肾动脉前30 min时静脉注射融合蛋白PEP-1/HO-1.于再灌注6h时取右侧颈总动脉血样,测定血清BUN和Cr浓度;取肾组织检测MDA含量和SOD活性;采用免疫组化法检测肾组织HO-1的表达.结果 与S组比较,I/R组和HO组肾组织MDA含量、血清BUN和Cr浓度升高,肾组织SOD活性降低,HO-1蛋白表达上调(P＜0.05);与I/R组比较,HO组肾组织MDA含量、血清BUN和Cr浓度降低,肾组织SOD活性升高,HO-1蛋白表达上调(P＜0.05).结论 细胞穿透肽PEP-1将HO-1蛋白成功导入肾组织,导入的HO-1蛋白通过抑制脂质过氧化反应减轻肾缺血再灌注损伤.     

热休克蛋白70和血红素加氧酶-1表达在肾缺血后处理减轻肾缺血再灌注损伤中的作用

目的 评价热休克蛋白70(HSP70)和血红素加氧酶-1(HO-1)表达在肾缺血后处理减轻肾缺血再灌注损伤中的作用.方法健康雄性SD大鼠140只,体重250～280 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为4组(n=35):假手术组(S组)仅开腹,游离双侧肾脏,分离双侧肾蒂不夹团;肾缺血再灌注组(I/R组)夹闭双侧肾蒂缺血45 min,恢复灌注;缺血后处理组(IPo组)夹闭双侧肾蒂45 min,再灌注10 s,缺血10 s,反复3次,恢复灌注;HSP抑制剂槲皮黄酮+缺血后处理组(Q+IPo组)缺血前1 h 腹腔注射槲皮黄酮100 mg/kg,余操作同IPo组.于再灌注即刻(T0)、1、3、6、12、24、48 h(T1～6)时各组随机取5只大鼠抽心脏血后取肾,检测肾组织HSP70、HO-1的mRNA和蛋白表达,T3时抽心脏血,测定血清肌酐(Cr)和尿素氮(BUN)浓度、caspase-3 mRNA的表达,TUNNEL法检测肾组织凋亡细胞,计算凋亡指数(AI),光镜下观察肾组织病理学结果.结果 与S组比较,其余组T3时血清Cr和BUN浓度和AJ升高,caspase-3 mRNA表达上调,各时点HSF70、BO-1的mRNA和蛋白表达上调(P＜0.05);与I/R组比较,IPo组T3时血清Cr和BUN浓度和AI降低,caspase-3 mRNA表达下调,T1～5时HSP70、HO-1的mRNA和蛋白表达上调(P＜0.05);与IPo组比较,Q+IPo组T3时血清Cr和BUN浓度和AJ升高,caspase-3mRNA表达上调,T1～5时HSP70、HO-1的mRNA和蛋白表达下调(P＜0.05).IPo组肾组织病理学损伤较I/R组减轻,Q+IPo组肾组织病理学损伤程度与I/R组相似.结论 HSP70和H0-1表达参与了肾缺血后处理减轻肾缺血再灌注损伤的过程.

Abstract：

Objective To evaluate the role of the expression of heat shock protein 70 (HSP70) and heme oxygenase-1 (HO-1) in the reduction of renal ischemia-reperfusion (I/R) injury by ischemic postconditioning in tats.Methods One hundred and forty healthy male SD rats weighing 250-280 g were randomized into 4 groups ( n = 35 each) : sham operation group (S group) ; I/R group; ischemic postconditioning group (IPo group); quercetin (an inhibitor of HSP) + ischemic postconditioning group (Q + IPo group). Renal I/R was produced by clamping bilateral renal pedicels for 45 min followed by reperfusion. In group S, bilateral kidneys were only exposed through a midline incision but their- pedicels were not clamped. In IPo and Q + IPo groups, 45 min ischemia was followed by three 10 s episodes of ischemia at 10 s intervals for reperfusion and in addition intraperitoneal quercetin 100 mg/kg was injected at 1 h before ischemia in group Q + IPo. Blood samples from hearts were obtained at 0, 1, 3, 6, 12, 24 and 48 h of reperfusion (T0-6) and the rats were then sacrificed and kidneys removed to detect the expression of HSP70 and HO-1 mRNA and protein in renal tissues. The blood samples obtained at T3 were used to determine serum creatinine (Cr) and urea nitrogen (BUN) concentrations and the expression of caspase-3 mRNA . The apoptosis in the renal tissues was detected using TUNEL and apoptotic index ( AI) was calculated. Microscopic examination was performed with light microscope. Results Compared with group S, the serum Cr and BUN concentrations and AI were significantly increased at T3,the expression of caspase-3 mRNA was up-regulated at T3, and the expression of HSP70 and HO-1 mRNA and protein was up-regulated at T0-6 in the other groups (P ＜ 0.05) . Compared with group I/R, the serum Cr and BUN concentrations and AI were significantly decreased at T3, the expression of caspase-3 mRNA was down-regulated at T3, and the expression of HSP70 and HO-1 mRNA and protein was up-regulated at T1-5 in group IPo ( P ＜ 0.05) . Compared with group IPo, the serum Cr and BUN concentrations and AI were significantly increased at T3, the expression of caspase-3 mRNA was up-regulated at T3, and the expression of HSP70 and HO-1 mRNA and protein was down-regulated at T1-5, in group Q + IPo ( P ＜ 0.05) . The microscopic examination showed that the renal I/R injury was significantly attenuated by ischemic postconditioning and the degree of injury in group IPo was similar to that in group I/R. Conclusion The expression of HSP70 and HO-1 is involved in the reduction of renal I/R injury by ischemic postconditioning in rats.     

缺血后处理减轻犬肾缺血再灌注损伤的作用

目的 探讨缺血后处理减轻犬肾缺血再灌注损伤的作用及其相关机制.方法 随机将犬分为假手术组、缺血再灌注组和缺血后处理组,每组5只.假手术组:犬麻醉后,取其腹正中切口进入腹腔,游离双侧肾脏,切除右肾后,关腹.缺血再灌注组:手术操作与假手术组相同,仅在切除右肾和游离左肾之后,将左肾动、静脉夹闭60 min,然后开放血管.缺血后处理组:手术操作与缺血再灌注组相同,仅在肾动、静脉被夹闭60 min后,以再灌注(开放血管)30 s、夹闭血管30 s为1个循环,共进行6次循环,然后完全放开血管.分别于术后24、48及72 h采集犬静脉血2 ml,使用全自动生化分析仪测定各组犬血清肌酐(Cr)和尿素氮(BIJN)水平;术后第3天取犬肾组织,采用硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量,采用黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性,采用化学比色法测定髓过氧化物酶(MPO)活性,并观察犬肾组织的病理改变和细胞凋亡情况.结果 术后各时间点,缺血再灌注组、缺血后处理组和假手术组犬的血清Cr和BUN水平均依次降低,3组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05).术后第3天,缺血再灌注组、缺血后处理组和假手术组犬肾组织中SOD活性依次升高,而MDA含量和MPO活性均依次降低,3组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05).假手术组肾小球和肾小管结构正常,未见明显病理改变;缺血再灌注组肾间质水肿,大量炎症细胞浸润,肾小管上皮细胞刷状缘消失,大量上皮细胞坏死、脱落,管腔扩张,其中可见大量管型;缺血后处理组可见肾间质轻度水肿,肾小管上皮细胞扁平,部分刷状缘消失、坏死,偶见管型,管周血管有少量淤血.假手术组、缺血再灌注组、缺血后处理组犬肾的细胞凋亡指数分别为2.7±1.3、28.4±6.2和15.4±4.1,3组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 缺血后处理能减轻犬肾缺血再灌注损伤,其机制可能与缺血后处理减少氧自由基的产生、抑制细胞凋亡及减少炎症细胞浸润有关.     

缺血后处理对肾缺血再灌注损伤的抑制作用及对细胞凋亡的影响

目的 观察缺血后处理对大鼠急性.肾缺血再灌注损伤的抑制作用及其对细胞凋亡的影响.方法 建立原位大鼠单侧肾缺血再灌注动物模型,摘除右肾后对左肾行缺血后处理,即10 s再灌注,10 s缺血,6次循环后再灌注24 h.全自动生化分析仪检测血尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)含量,比色法测定血浆中脂质过氧化产物丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)含量,免疫组织化学法观察肾组织中细胞色素C的表达,流式细胞术检测细胞凋亡率,免疫印迹法(Western blot)检测胞浆中细胞色素C的含量.结果 肾缺血再灌注24 h后,血中BUN、Cr和MDA明显增高,肾细胞凋亡率明显增加.移植肾经缺血后处理,血中BUN、Cr和MDA含量均降低,SOD含量升高,细胞色素C释放减少,肾细胞凋亡率明显降低.结论 缺血后处理可以减轻移植肾脂质过氧化反应,减少肾细胞凋亡率,减轻肾缺血再灌注损伤.     

肾缺血预处理对肾小管上皮细胞内钙超载的影响

目的：通过观察肾缺血预处理（IPC）和缺血再灌注（I/R）过程中血清超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）和细胞内游离钙离子浓度（[Ca^2＋]i）含量的变化,进一步探讨肾IPC的保护机制。方法：将雄性SD大鼠88只随机分为11组,摘除右肾,分离并夹闭左肾动脉制备肾I/R和缺血预处理后缺血再灌注（IPC-I/R）动物模型。Ⅰa～Ⅴa（I/R）组为缺血再灌注0、1、24、48、72h组,Ⅰb～Ⅴb（IPC-I/R）组为缺血预处理后缺血再灌注0、1、24、48、72h组,Sham组为假手术组。比色法测定血清肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、SOD、MDA含量,流式细胞仪检测肾小管上皮细胞内[Ca^2＋]i水平,TUNEL原位标记法观察细胞凋亡情况。结果：除0h组外,IPC-I/R与I/R各组比较肾功能损害、细胞凋亡均明显减轻,SOD升高,MDA降低,[Ca^2＋]i水平下降;两种模型中均以再灌注24h组损伤最严重,Scr、BUN、MDA和[Ca^2＋]i水平最高,SOD水平最低,细胞凋亡最多;再灌注24h前损伤呈加重趋势,24h后逐渐减轻;组间比较,[Ca^2＋]i与血清SOD水平呈负相关,与MDA呈正相关。结论：肾IPC可以减轻I/R过程中膜脂质过氧化损伤和细胞内钙超载,从而减轻肾脏形态及功能损伤;膜脂质过氧化和细胞内钙超载相互作用,共同发挥对肾I/R损伤的保护作用。     

8％乳化异氟醚预处理对缺血／再灌注损伤大鼠肾脏氧化应激反应的影响

目的 观察8％乳化异氟醚（emulsified isoflurane,EI）预处理对缺血/再灌注损伤（ischemia/reperfusion injury,I/RI）大鼠肾脏氧化应激反应的影响.方法 健康雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠32只,右肾切除后采用随机数字表法分为4组（每组8只）：假手术组（Sham组,仅分离左侧肾蒂,不阻断肾血流）、肾脏I/RI组（夹闭左侧肾蒂45 min后恢复再灌注）、EI预处理组（静脉泵注8％ EI 4 ml·kg-1h-130 min,停药15 min后夹闭左侧肾蒂,余同I/RI组）、脂肪方乳剂（lipid emulsion,LE）预处理组（静脉泵注30％ LE 4 ml· kg-1·h-1 30 min,停药15 min后夹闭左侧肾蒂,余同I/RI组）.于肾脏再灌注3h时采集腹主动脉血测血清肌酐（creatinine,Cr）、尿素氮（blood urea nitrogen,BUN）;取肾组织测超氧化物歧化酶活性及丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量,光镜下观察肾脏病理学变化,并行肾小管Paller评分.采用黄嘌呤氧化酶法测定肾组织总超氧化物歧化酶活性,采用硫代巴比妥酸法测定肾组织MDA含量.结果 各组大鼠血清Cr、BUN、肾组织MDA含量及肾小管Paller评分：I/RI组[Cr（98±7） μmol/L,BUN（14.5±4.7） mmol/L,MDA（2.05±0.31） μmol/g,Paller（33.5±5.6）分]、EI组[Cr（62±6） μmol/L,BUN（9.3±2.3） mmol/L,MDA（1.61 ±0.28） μmol/g,Paller（18.5±4.5）分]、LE组[Cr（94±15） μmol/L,BUN（13.9±4.5） mmol/L,MDA（1.91±0.35） μmol/g,Paller（32.2±3.8）分]与Sham组[Cr（24±6）μmol/L,BUN（6.5±1.6） mmol/L,MDA（1.32±0.19） μmol/g,Paller（1.6±0.9）分]比较,显著升高（P＜0.05）;肾组织超氧化物歧化酶活性：I/RI组[（78±12）×10^3 U/g]、EI组[（97±7）×10^3 U/g]、LE组[（79±13）×10^3 U/g]与Sham组[（117±10）×10^3 U/g]比较,显著降低（P＜0.05）.分别与I/RI组和LE组比较,EI组血清Cr、BUN、肾组织MDA含量及肾小管Paller评分均降低（P＜0.05）,肾组织超氧化物歧化酶活性均升高（P＜0.05）.I/RI组和LE组上述各指标     

缺血后处理对犬肾缺血再灌注损伤氧化应激反应的影响

目的：探讨缺血后处理对犬急性肾缺血再灌注损伤氧化应激反应的影响.方法：将15只成年雄性杂种狗分为3组,每组5只,即假手术组（S组）、缺血再灌注组（I/R组）、缺血后处理组（IPO组）.在肾缺血60min后立即给予再灌注30 s,再缺血30 s,循环3次,然后完全恢复灌注.术前及术后每天检测血清肌酐（Cr）浓度,检测肾组织超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量、过氧化氢酶（CAT）、总抗氧化能力（TAC）.术后犬存活3天,杀死后取左肾标本,光镜下观察肾组织病理学改变.结果：IPO组与I/R组术后3天连续比较,血清Cr浓度有显着降低,差异有统计学意义（P〈0.05）;IPO组与I/R组比较,SOD、CAT、TAC活性升高,MDA浓度降低,病理损伤明显减轻,差异有统计学意义（P〈0.05）.结论：缺血后处理能减轻肾缺血再灌注损伤氧化应激反应,其机制与氧自由基清除有关.     

腺苷后处理对大鼠心肌缺血再灌注时血清IL-10和TNF-α浓度的影响

目的 探讨腺苷后处理对大鼠心肌缺血再灌注时血清IL-10和TNF-α浓度的影响.方法 雄性SD大鼠24只,体重180～250 g,随机分为4组(n=6):假手术组(S组)、缺血再灌注组(IR组)、缺血后处理组(IP组)和腺苷后处理组(AP组).IR组、IP组和AP组结扎冠状动脉左前降支30 min后恢复再灌注.IP组缺血30 min时进行再灌注30 s缺血30 s,循环3次,然后再灌注120 min;AP组缺血30 min时静脉输注腺苷40 μg·kg-1·min-1,剂量1.5 mg/kg,然后再灌注120 min.于缺血前(基础状态)、缺血30 min、再灌注30、120 min时记录HR、SP和DP.再灌注120 min时采集动脉血样,测定血清IL-10和TNF-α的浓度.采集血样后,取心肌组织,测定MDA含量及心肌梗死面积,光镜下观察心肌病理学结果.结果 与S组比较,IR组HR、SP和DP降低,IP组和AP组SP降低,IR组、IP组和AP组血清IL-10、TNF-α浓度和心肌MDA含量升高,心肌梗死面积增加(P<0.05);与IR组比较,IP组和AP组HR、SP和DP升高,血清TNF-α浓度和心肌MDA含量降低,心肌梗死面积减小,血清IL-10浓度升高(P<0.05);IP组和AP组上述指标差异无统计学意义(P>0.05).IP组和AP组心肌病理学损伤程度轻于IR组.结论 腺苷后处理可促进IL-10生成,抑制TNF-α生成,从而减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤.     

七氟醚预处理对大鼠肾缺血再灌注损伤的影响

目的 评价七氟醚预处理对大鼠肾缺血再灌注损伤的影响.方法 雄性SD大鼠24只,体重250～300 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为3组(n=8):假手术组(S组)、肾缺血再灌注组(I/R组)和七氟醚预处理组(SP组).I/R组和SP组采用切除右肾然后夹闭左侧肾动脉45 min再开放的方法 制备肾缺血再灌注模型.SP组吸入2.2%七氟醚1 h,停止吸入后10 min时进行肾缺血.于再灌注2 h时采集静脉血样,测定血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)和胱抑素C(Cys C)的浓度,取肾组织,光镜下及透射电镜下观察病理学结果,并根据肾小管病变程度进行Paller评分.结果 与S组比较,I/R组血清Cr和BUN浓度差异无统计学意义(P＞0.05),血清Cys C浓度和Paller评分明显升高(P＜0.05);与I/R组比较,SP组血清Cys C浓度和Paller评分明显降低(P＜0.05).SP组肾组织损伤程度轻于I/R组.结论 七氟醚预处理可减轻大鼠肾缺血再灌注损伤.

Abstract：

Objective To investigate the effects of sevoflurane preconditioning on renal ischemia-reperfusion(I/R)injury in rats.Methods Twenty-four adult male SD rats weighing 250-300 g were randomly divided into 3 groups(n=8 each):sham operation group (group S);I/R group; sevoflurane preconditioning group (group SP). After the rats underwent right nephrectomy, renal I/R was produced by occlusion of left renal artery for 45 min followed by reperfusion in I/R and SP groups.In group SP, the rats inhaled 2.2% sevoflurane for 1 h, then the inhalation was stopped and renal ischemia was performed 10 min later. Venous blood samples were collected at 2 h of reperfusion to determine the concentrations of serum creatinine(Cr), urea nitrogen (BUN), cystatin C (Cys C) . The renal tissues were obtained for microscopic examination, and Paller's score was recorded. Results Compared with group S, there was no significant difference in the serum Cr and BUN concentrations (P＞0.05), while the serum Cys C concentration and Paller's score for acute renal tubular injury were significantly increased in group I/R(P＜0.05). The serum Cys C concentration and Paller's score were significantly lower in group SP than in group I/R(P＜0.05).I/R-induced renal injury was significantly reduced in group SP compared with group I/R. Conclusion Preconditioning with sevoflurane can provide significant protection against renal I/R injury.     

羟考酮预给药对大鼠肾缺血-再灌注损伤的影响

目的评价羟考酮预给药对大鼠肾缺血-再灌注损伤的影响。方法健康成年雄性SD大鼠30只,采用随机数字表法,将其分为三组(n=10),假手术组(S组):仅切除右肾、分离左侧肾动脉、肾静脉和输尿管;缺血-再灌注组(IR组):切除右侧肾脏,夹闭左侧肾动脉和肾静脉45min恢复灌注2h;羟考酮预给药+缺血-再灌注组(O组):缺血-再灌注前5min静脉注射羟考酮2mg/kg。于再灌注2h时经腹主动脉采集动脉血样,血清尿素氮(BUN)浓度采用脲酶法测定,血清肌酐(Cr)浓度采用速率法测定。处死大鼠,取部分左肾组织,超氧化物歧化酶(SOD)活性采用黄嘌呤氧化酶法测定,丙二醛(MDA)含量采用硫代巴比妥酸法测定。采用Western blot检测肾组织中B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关x蛋白(bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达。结果与S组比较,IR组和O组血清BUN和Cr的浓度明显升高(P0.05),肾组织MDA的含量明显升高,SOD活性明显降低(P0.05),肾组织bax、Caspase-3蛋白表达明显升高(P0.05),而bcl-2蛋白表达明显降低(P0.05)。与IR组比较,O组血清BUN和Cr的浓度明显降低(P0.05),肾组织MDA的含量明显降低,SOD活性明显升高(P0.05)肾组织bax、Caspase-3蛋白表达明显降低(P0.05),而bcl-2蛋白表达明显升高(P0.05)。结论羟考酮预给药可减轻大鼠肾缺血-再灌注损伤,其机制可能与其抑制肾组织氧化应激反应和细胞凋亡有关。     

缺血后处理对大鼠肝缺血再灌注时肝细胞线粒体膜通透性转换和膜电位的影响

目的 评价缺血后处理对大鼠肝缺血再灌注时肝细胞线粒体膜通透性转换和膜电位(△Ψm)的影响.方法 成年健康雄性SD大鼠40只,体重220～260 g,采用随机数字表法,将其随机分为5组(n=8):假手术组(S组)、苍术苷+假手术组(A+S组)、缺血再灌注组(IR组)、缺血后处理组(IPO组)和苍术苷+缺血后处理组(A+IPO组).采用阻断肝中叶和左叶60 min,恢复血流灌注6 h的方法 建立大鼠肝缺血再灌注模型.S组和A+S组仅游离肝门,不阻断血管;A+S组关腹前静脉注射苍术苷5 mg/kg;IR组制备肝缺血再灌注模型;IPO组于再灌注前行缺血后处理,再灌注1 min,缺血1 min,反复3次;A+IPO组于再灌注前静脉注射苍术苷5 mg/kg.于缺血前即刻和再灌注6 h时,采集左颈静脉血样,测定血清ALT和AST的活性.再灌注6 h时处死大鼠,取肝左叶组织,观察超微结构和细胞凋亡情况,计算凋亡指数,测定细胞色素c(Cyt c)的表达水平、△Ψm和线粒体通透性转换孔(MPTP)活性.结果 与S组比较,A+S组时血清ALT和AST的活性、凋亡指数、Cyt c表达、△Ψm和MPTP活性差异无统计学意义(P＞0.05),IR组、IPO组和A+IPO组再灌注6 h时血清ALT和AST的活性、凋亡指数升高,Cyt c表达上调,△Ψm降低,MPTP活性升高(P＜0.05);与IR组比较,IPO组血清ALT和AST的活性、凋亡指数降低,Cyt c表达下调,△Ψm升高,MPTP活性降低(P＜0.05),肝组织病理学损伤减轻,A+IPO组各指标差异无统计学意义(P＞0.05);与IPO组比较,A+IPO组血清ALT和AST的活性、凋亡指数升高,Cyt c表达上调,△Ψm降低,MPTP活性升高(P＜0.05),肝组织病理学损伤加重.结论 缺血后处理可抑制肝细胞线粒体膜通透性转换,减少线粒体△Ψm的耗散,从而减轻大鼠肝缺血再灌注损伤.

Abstract：

Objective To investigate the effects of ischemic postconditioning on mitochondrial permeability transition and mitochondrial transmembrane potential(△Ψm)following hepatic ischemia-reperfusion(I/R)in rats.Methods Forty male SD rats weighing 220-260 g were randomly divided into 5 groups with 8 animals in each group:sham operation group(group S);atractyloside+sham operation group(group A+S);I/R group;ischemic postconditioning group(group IPO)and atractyloside+ischemic postconditioning group(group A+IPO).The animals were anesthetized with intramuscular injection of atropine 0.05 mg/kg.Hepatic I/R was produced by occlusion of hepatic blood flow for 60 min followed by 6 h reperfusion.In group A+S,atractyloside 5 mg/kg was injected intravenously before abdomen Was closed.In group IPO,the animals were subjected to 3 cycles of 1 min reperfusion interspersed with 1 min hepatic isehemia at the end of 60 min hepatic ischemia.In group A+IPO,atractyloside 5 mg/kg was injected intravenously before reperfusion. Venous blood samples were collected for determination of serum ALT and AST activities immediately before ischemia and at 6 h of reperfusion. The animals were then sacrificed.Their livers were removed for microscopic examination, detection of apoptosis and determination of cytochrome c (Cyt c) expression, △Ψm and mitochonerial permeability transition pore (MPTP)activity. Apoptosis index (AI) was calculated. Results There was no significant difference in serum ALT and AST activities, AI, Cyt c expression, △Ψm and MPTP activity between S and A + S groups (P＞0.05). Compared with group S, serum ALT and AST activities and AI were significantly increased, Cyt c expression was up-regulated, △Ψm was decreased and MPTP activity was increased in groups I/R, IPO and A+IPO(P＜0.05).Compared with group I/R, serum ALT and AST activities and AI were significantly decreased,Cyt c expression was down-regulated, △Ψm was increased and MPTP activity was decreased in group IPO(P＜0.05), while no significant change was found in group A+IPO(P＞0.05).Compared with group IPO,serum ALT and AST activities and AI were significantly increased, Cyt c expression was up-regulated, △Ψm was decreased and MPTP activity was increased in group A + IPO(P＜ 0.05).Microscopic examination showed that hepatic injury was reduced in group IPO compared with group I/R, while aggravated in group A+ IPO compared with group IPO. Conclusion Ischemic postconditioning can protect liver from I/R injury by attenuating the I/R-induced increase in MPTP opening and decrease in △Ψm in rats.