血管内皮生长因子基因疗法诱导缺血心肌血管生成(9例报告)

目的 探讨血管内皮生长因子（VEGF）基因疗法促进缺血心肌血管生成作用。方法 患者9例，对角支供血范围广但对角支血管远端弥散病变且通畅欠佳或闭塞而无法进行旁路移植，将pCD2-VEGF121质粒注入患者左室前侧壁心肌中，3个月后进行冠状动脉造影。结果 造影显示，注射pCD2-VEGF121的局部心肌可见小血管形成，结论 血管内皮生长因子 基因疗法能促进缺血心肌血管生成，提示VEGF基因疗法可作为冠状动脉旁路移植术的补充方法。为弥漫性冠状动脉病变的病人提供更有效的治疗方法。     

大鼠心肌缺血的血管内皮生长因子基因治疗

目的：应用血管内皮生长因子（ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ, ＶＥＧＦ） 基因治疗心肌缺血。方法：雄性Ｗｉｓｔａｒ 大鼠２０ 只,结扎冠状动脉前降支造成心肌梗死模型。心脏多点注射构建的ｐｃＤ２／ＶＥＧＦ真核表达质粒。应用逆转录聚合酶链反应,ＶＥＧＦ免疫组织化学染色,心肌碱性磷酸酶染色及血管计数等方法检测ＶＥＧＦ 基因在缺血心肌中的表达及生物学作用。结果：转移ＶＥＧＦ基因后在大鼠缺血心肌中有ＶＥＧＦｍＲＮＡ 高表达, ＶＥＧＦ 免疫组化染色可见ＶＥＧＦ蛋白表达水平升高。心肌碱性磷酸酶染色显示,转移ＶＥＧＦ基因能够促进缺血心肌新生血管的形成。结论：ＶＥＧＦ基因能够在大鼠缺血心肌中获得表达,并发挥其促进新血管形成的作用。为ＶＥＧＦ 基因治疗心肌缺血奠定基础。     

纳米粒子介导血管内皮生长因子基因治疗兔心肌缺血的疗效

目的观察纳米粒子介导血管内皮生长因子(VEGF)基因转染的可行性,了解心肌缺血动物模型经心肌直接注射VEGF基因纳米粒子后新生血管以及心功能改善情况。方法应用聚乳酸聚乙醇酸共聚物(PLGA)和聚乙烯醇(PVA)包载VEGF165基因质粒,制备纳米级粒子混合物,检测其载药量、体外释放情况及粒径;培养乳鼠心肌细胞,转染VEGF165基因纳米粒子(VEGF纳米粒子),应用RT-PCR法检测VEGF mRNA水平,ELISA法检测VEGF蛋白表达水平;将VEGF纳米粒子悬浮液注射至活体家兔心肌内,96h后心肌注射部位取材,电镜观察其向心肌组织内传递基因的可行性;建造兔心肌缺血模型,分别将VEGF纳米粒子(12只)、VEGF165裸质粒(12只)或生理盐水(对照组,8只)注射至缺血部位心肌,1个月后心脏超声监测,然后处死,组织学切片观察心肌组织中毛细血管生成情况。结果制备的纳米粒子载药量为1·87%,粒径为50~300nm;RT-PCR和ELISA结果提示纳米粒子可将目的基因转移至培养的心肌细胞中;体内实验显示心肌细胞胞质内及胞核内可见大量被吞噬的纳米粒子;术后1个月超声检查显示,VEGF纳米粒子组室壁运动幅度(1·87mm±0·32mm)、左室射血分数(60%±10%)较裸质粒组(1·59mm±0·24mm,50%±6%)及对照组(0·93mm±0·40mm,40%±8%)改善更加明显,各组之间差异均有统计学意义(均P<0·05);组织学检查显示,在100倍光镜视野下心肌内毛细血管数VEGF纳米粒子组(57个±12个)明显高于裸质粒组(41个±14个)及对照组(24个±8个),各组之间差异有统计学意义(均P<0·05)。结论纳米粒子可作为VEGF基因向心肌组织转运的载体,在兔心肌缺血模型经心肌直接注射VEGF165基因纳米粒子,能够促进心肌内毛细血管新生,达到改善心功能的目的。     

转染血管内皮生长因子基因治疗勃起功能障碍

根据文献归纳,总结勃起功能障碍治疗现状和进展、血管内皮生长因子的临床应用以及应用血管内皮生长因子治疗勃起功能障碍的研究进展情况。 转血管内皮生长因子基因治疗已被应用于临床治疗人缺血性疾病,并已取得很好疗效;阴茎勃起功能障碍适合于这种治疗方法。 应用血管内皮生长因子转基因治疗勃起功能障碍具有光明的前景。内皮生长因子/治疗应用;     

血管内皮生长因子与缺血心肌治疗性血管新生

缺血性心脏病在西方国家是发病率和死亡率均占主导地位的疾病，全球大约有数亿缺血性心脏病患者。冠状动脉血流灌注不足导致相应心肌缺血缺氧是进展期缺血性心脏病的主要问题，因此合理的治疗策略是增加冠状动脉的灌注。目前而言，传统的血运重建治疗包括冠状动脉搭桥术（CABG）和经皮腔内冠状动脉成形术（PTCA）对多数患者可以增加冠状动脉灌注，基本实现治疗目的，但对冠状动脉纤细和病变弥散的患者这些治疗手段则难以奏效。     

美托洛尔对大鼠缺血心肌血管新生及血管内皮生长因子表达的影响

目的: 观察美托洛尔对大鼠缺血心肌血管新生和缺血心肌血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法: 运用大鼠心肌缺血模型,随机分为给药组和模型组,并记录心率.用免疫组织化学方法检测缺血心肌中内皮细胞数、毛细血管密度、VEGF蛋白质的表达,用RT-PCR方法检测VEGF mRNA的表达.结果: (1)与模型组比较,给药组大鼠缺血心肌毛细血管密度和内皮细胞数均明显增加(P＜0.01),其心率明显降低(P＜0.01);(2)与模型组比较,给药组大鼠缺血心肌VEGF蛋白质及mRNA的表达均明显增加(P＜0.01).结论: (1)美托洛尔能促进大鼠缺血心肌的血管新生;(2)美托洛尔减慢心肌缺血大鼠的心率和上调VEGF的表达可能是其促大鼠缺血心肌血管新生的机制之一.     

血管内皮生长因子基因防治兔髂动脉狭窄

目的从基因治疗方面探讨解决经皮血管成型术和其他血管再塑引起的血管内膜损伤,血管狭窄途径。方法构建了ｐｃＤＮＡ３／血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）真核表达载体,通过多聚赖氨酸基因球囊法,将ＶＥＧＦ基因定位导入球囊拉伤的兔髂动脉内壁,应用原位杂交,免疫组织化学,电磁血流量仪,扫描电镜和光镜等方法检测ＶＥＧＦ基因作用效果。结果ＶＥＧＦ基因组球囊拉伤血管２周时内膜有大量ＶＥＧＦｍＲＮＡ和蛋白表达,内膜内皮化范围明显大于空载质粒对照组,内膜与中膜面积之比小于对照组,血流量明显改善。结论血管内导入ＶＥＧＦ基因,可促进内皮细胞增生,加速损伤内膜的修复,抑制血管内膜平滑肌细胞的增生,防治血管狭窄     

血管内皮生长因子基因重组腺病毒载体的构建

目的 :构建携带人血管内皮生长因子基因的重组腺病毒载体。方法 :将人源性的 VEGF1 6 5c DNA正向插入到穿梭质粒 p HCMVSP1A的 CMV启动子之下 ,构建重组质粒 ,通过脂质体与 p JM17共转染 2 93细胞 ,经同源重组获得携带人 VEGF1 6 5基因的重组腺病毒 ,通过 PCR扩增法鉴定所构建的腺病毒 ,扩增、纯化并测定滴度。结果 :人VEGF1 6 5c DNA成功地正向插入到 p HCMVSP1A载体中 ,以重组病毒基因组 DNA为模板 ,同时扩增出 5 76 bp的VEGF1 6 5c DNA基因片段和 86 0 bp的腺病毒骨架基因片段 ,证实了所构建病毒的正确性 ,病毒滴度为 2 .5× 10 9pfu/ m l。结论 :成功构建了表达人 VEGF1 6 5基因重组腺病毒载体 ,使 VEGF基因的高效转染成为可能     

血管内皮生长因子治疗心肌缺血的研究进展

冠心病是由于冠状动脉循环病理改变引起冠状血流和心肌需求之间不平衡,从而导致不同程度的心肌缺血.随着诊疗技术的不断提高,经皮冠脉腔内成型术(PTCA)和冠状动脉搭桥术等介入方法的应用,其临床症状和预后有明显改善,但术后在狭窄率仍高达25%～35%[1].     

血管内皮生长因子基因多态性与恶性肿瘤关系研究进展

血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）是目前已知的作用最强的促血管生成因子之一。VEGF在恶性肿瘤的血管生成过程中具有重要的意义,与肿瘤的发生、发展和转移关系密切。VEGF基因至少有30个单核苷酸多态性位点,本文就有关VEGF基因多态性与恶性肿瘤关系研究的现状作一综述。     

腺病毒介导的反义血管内皮生长因子基因转染治疗胰腺癌的实验研究

目的：构建并鉴定反向插入VEGF165cDNA的重组腺病毒,探讨腺病毒介导的VEGF165反义核酸治疗胰腺癌的可行性。方法：应用基因重组技术，将513bp的人VEGF165cDNA反向克隆入腺病毒粘粒载体pAxCAwt。重组粘粒与腺病毒DNA－TPC混合后以磷酸钙共沉淀法转染293细胞制备重组腺病毒。建立胰腺癌裸鼠皮下种植瘤模型，瘤体内直接注射重组腺病毒，观察肿瘤的生长及血管生长情况。结果：成功构建了反向插入VEGF165cDNA的腺病毒粘粒载体pAxCAwt-αVEGF并制备出高滴度的重组腺病毒。实验第5周时肿瘤生长速度Ad-αVEGF治疗组比PBS和Ad-LacZ对照组均明显减慢（P＜0．01）；肿瘤微血管密度Pd-αVEGF治疗组比两个对照组均明显减少（P＜0．01）。结论：腺病毒介导的VEGF165反义核酸可以抑制胰腺癌的血管生成和肿瘤的生长，为抗血管生成的基因治疗提供了实验依据。     

腺病毒介导的血管内皮生长因子165对兔外周血管生成作用的研究

目的：检验以腺病毒为载体的 血管内皮生长因子165（Ad-VEGF165)基因的表达规律及能否促进缺血骨骼肌血管生成。方法：将兔右股动脉离断后,在缺血肌肉组织中直接注入Ad-VEGF165或磷酸盐缓冲液（PBS）,5周后,以血管造影、免疫组化检查及单光子发射计算机断层（SPECT）显像检测局部缺血组织血管新生情况。用酶联免疫分析法（ELISA）检测血浆和肌肉组织中Ad-VEGF165的表达。结果：Ad-VEGF165注入缺血肌肉组织后24h达到表达高峰,1周时降至基线水平,血浆及对侧健康的肌肉组织中无目的基因表达,治疗缺血肢体侧枝血管（P＜0．01）、血管密度（P＜0．05）及相对血流（P＜0．01）均明显高于对照组。结论：缺血肌肉组织中直接注入Ad-VEGF165可诱导局部VEGF蛋白表达,促进缺血部位的血管生成,增加血流量。     

人源碱性成纤维细胞因子基因对缺血心肌血管新生的影响

目的探讨人源碱性成纤维细胞因子(hbFGF)基因对兔缺血心肌血管生成的影响。方法分别向40只新西兰兔心肌缺血模型的心肌注射1010、1012、1013v.g./Kg的携带hbFGFcDNA的腺相关病毒载体或磷酸盐缓冲液。4周后取心肌组织,采用RT-PCR检测hbFGF基因的表达;并于高倍镜下计数缺血区域新生血管数目。结果随着治疗剂量的增加,治疗各组的hbFGFmRNA表达依次增高,差异均具有显著性(P<0.05)。单个高倍视野(HPF)内的新生血管数分别为(4.52±1.37)、(10.78±1.62)和(18.64±3.32)条,而对照组为(4.46±1.42)条。高、中剂量组的新生血管计数结果显著高于对照组(P<0.05)。结论rAAV-2载体介导的hbFGF基因能诱导缺血心肌血管生成,且呈剂量依赖性。     

酸性成纤维细胞生长因子基因转染猪慢性缺血心肌促进侧支血管的增生

目的：探讨人酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)基因重组腺病毒载体（Ad.aFGF)转染缺血心肌后促进侧支血管增生的作用。方法：实验用小型猪开胸于左冠回旋支（Lcx)放置Ameroid环，4周后，将Ad.aFGF(n=7)、Ad.Null(n=6)、PBS（n=6)直接注射到Lcx供血区域，每只10点，每点10^9pfu或100μl；4周后心脏超声检测局部心功能的改善，体外冠状动脉造影观察侧支血管的增生，注射点心肌Ⅷ因子免疫组化染色检测心肌中的新生血管。结果：冠状动脉造影显示Ad.aFGF组较其他两组心肌中有明显的侧支血管增生，局部室壁功能显著提高；Ⅷ因子免疫组化染色显示Ad.aFGF组心肌中新生血管的密度显著高于另两组（P＜0.01)。结论：Ad.aFGF转染慢性缺血心肌后可促进侧支血管增生，可以成为治疗缺血性心脏病的有效途径。     

血管内皮细胞生长因子基因在骨髓间充质干细胞中的表达

目的： 研究血管内皮细胞生长因血管内皮细胞生长因子基因在骨髓间充质干细胞中的表达子（VEGF）基因转染兔骨髓间充质干细胞（MSCs）后的表达和分泌情况,为构建一种血供丰富、成骨能力及骨块存活能力更强的组织工程化人工颅骨奠定实验室基础。方法： 应用基因重组技术,将VEGF165基因全长片段克隆于真核表达载体pcDNA3中,构建pcDNA3-VEGF165真核表达质粒;应用阳离子脂质体介导的基因转染技术,将pcDNA3-VEGF165真核表达质粒转染进入兔骨髓间充质干细胞中;利用RT-PCR及Western blotting方法检测VEGF基因在MSCs中的表达情况。结果： 构建的真核表达质粒-pcDNA3-VEGF165经双酶切后分别在5 400 bp和600 bp处出现条带,证实其构建成 功;成功进行了兔MSCs的原代及传代培养,并建立兔MSCs库,原代细胞初为淋巴细胞样小圆细胞,此后逐渐变为圆形、梭形或不规则形,而传代细胞则变为形态更均一、排列更有序的成纤维细胞样细胞;RT-PCR及Western blotting检测到瞬时转染后的细胞有VEGF mRNA及VEGF蛋白的表达。结论： pcDNA3-VEGF165真核表达质粒通过脂质体能够有效转染兔MSCs,转染后的细胞具有表达VEGF蛋白的能力。     

大鼠颌下腺血管内皮生长因子cDNA的转移及表达

目的：探讨以颌下腺为靶器官,进行血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）基因治疗后,颌下腺中ＶＥＧＦ含量变化。方法：构建了ＶＥＧＦ基因表达的真核细胞表达载体,以阳离子脂质体为介质,向大鼠颌下腺转染外源性的ＶＥＧＦ基因,应用ＲＴ－ＰＣＲ技术观察ＶＥＧＦ基因的表达,ＥＬＩＳＡ方法检测颌下腺中ＶＥＧＦ的含量变化。结果：转ｐＢＫＣＭＶ－ＶＥＧＦ１２１基因后第１天,大鼠颌下腺内ＶＥＧＦ的表达及涎液中ＶＥＧＦ的含量即开始     

Efficacy and safety of therapeutic angiogenesis from direct myocardial administr ation of an adenoviral vector expressing vascular endothelial growth factor 165

Objective To investigate whether direct administration of adenoviral vectors (Ad) containing the complementary deoxyribonucleic acid (cDNA) of vascular endothelial growth factor 165 (Ad- VEGF165) induces porcine coronary collateral vessel formation, improves regional myocardial perfusion and function and is safe. Methods Three weeks after miniature swine underwent left thoracotomy and placement of an Ameroid constrictor on the left circumflex coronary artery (LCX), Ad- VEGF165 (n=6) or the control, Ad expressing β- galactosidase cDNA (Ad- Gal, n=6), was directly administered into the ischemic myocardium in the circumflex distribution. All animals were sacrificed 4 wk after the second surgery. Myocardial perfusion and function were assessed by electrocardiogram- gated single photon emission computed tomography (GSPECT) imaging. Ex vivo coronary angiography was performed to examine collateral vessels. Toxicity was assessed by blood analyses on the day just before (day 0) and on day 1, 3, 7, 28 after vector delivery and by vascular, myocardial and liver histology after sacrifice. Results GSPECT imaging 4 wk after administration of Ad- VEGF165 demonstrated significant reduction in ischemic area (P＜0.01) and rest ischemic severity (P＜0.01) and significant improvement in the left ventricular ejection fraction (P＜0.01) and regional wall motion (P＜0.05) compared with that of Ad- Gal and before administration of Ad- VEGF165. Collateral vessel development assessed by coronary angiography was significantly greater in the Ad- VEGF165 group than in the Ad- Gal group (P＜0.05). General safety parameters, including routine blood parameters, liver and kidney function and cardiac specific parameters demonstrated no difference between Ad- VEGF165 and Ad- Gal animals except for the red blood cell count on day 28 (P＜0.05) and blood urea nitrogen on day 7 (P＜0.05).Only transient elevations in creatine phosphokinase (P＜0.05) and aspartate transaminase (P＜0.05) on day 1 were revealed compared with that before vector administration in both groups. Histologically, no atherosclerotic lesion in the circumflex and no inflammation in liver were revealed and only a small myocardial necrosis was observed in one Ad- VEGF165 animal (area≤20%) and one Ad- Gal animal (area＜10%). Conclusions Ad- VEGF165 can induce coronary collateral vessel formation, improve regional myocardial perfusion and function and is safe by means of direct injection, which suggesting that this strategy may be useful in treating human ischemic heart disease.     

Intrastriatal Gene Transfer of Vascular Endothelial Growth Factor Rescues Dopaminergic Neurons in a Rat Parkinson＇s Disease Model

To examine the ability of intrastriatal gene transfer of vascular endothelial growth factor 165 mediated by adenoviral vector to rescue dopaminergic neurons in a rat model of Parkinson＇s disease （PD）, we constructed recombinant replication-deficent adenoviral vectors carrying the gene of VEGF165 （Ad-VEGF）, and injected Ad-VEGF （or Ad-LacZ and PBS as controls） into the striatum of rats 7 days after the lesion by 6-hydroxydopamine. The rat rotational behavior analysis and tyrosine hydroxylase （TH） immunohistochemistry were performed to assess the change of dopaminergic neurons. Our results showed that the rats receiving Ad-VEGF injection displayed a significant improvement in apomorphine-induced rotational behavior and a significant preservation of TH-positive neurons and fibers compared with control animals, It is concluded that intrastriatal gene transfer by Ad-VEGF may rescue the dopaminergic neurons from degeneration in a rat model of PD.