彗星试验琼脂糖凝胶片保存方法研究

单细胞凝胶电泳技术检测环境因素致ＤＮＡ损伤具有很高的灵敏性 ,已在国内外广泛用于职业危险因素引起的人群健康效应研究[1 ] 。国内多数现场与实验室距离较远 ,不具备荧光显微镜和图像存储设备 ,因此极大地限制了该技术的应用和推广。湿片在保存和运输方面困难较大 ,并且储存时间越长 ,ＤＮＡ扩散的可能性就越大 ,结果越不稳定。找到一种稳定可靠的凝胶片保存方法 ,是将该方法推广应用于现场工作的迫切需求。国内有文献报道使用冷冻法保存凝胶片 ,但只能保存 2～ 3天。国外已有研究使用甲醇脱水干燥法和乙醇脱水干燥法保存凝胶片 ,但尚没…     

蚤类标本制作方法的改进

[目的] 探索更佳的蚤类标本制作、保存方法。[方法] 从玻片的消毒、蚤体的冲洗、针对蚤体差异分别消化、增加脱水步骤等方面进行改进，研究提高标本清晰度、延长保存时间的标本制作方法。[结果] 采用本方法制作的玻片标本，显微镜下观察蚤体结构清晰、视野干净，有利于蚤的分类鉴定；玻片内不易生长杂菌，有利于标本的长时间保存。[结论] 此方法值得推广。     

HBV感染者外周血淋巴细胞DNA损伤的监测

[目的]对HBV感染者外周血淋巴细胞DNA损伤进行监测。[方法]采用单细胞凝胶电泳法，在荧光显微镜下观察淋巴细胞损伤情况。[结果]56名HBV感染者外周血淋巴细胞DNA损伤率为24．1％，其中急性感染者为28．5％，慢性感染者损伤率为22．5％，携带者损伤率为18．6％(P＜0．001)；82名健康者的损伤率为10．3％(与感染者比较P＜0．001)。[结论]HBV感染可以造成外周血淋巴细胞DNA损伤，且不同感染模式的损伤情况不同。该法可作为HBV转归与药物疗效评价的可靠依据。     

短小芽胞杆菌抗辐射力影响因素的研究

目的 ]研究短小芽胞杆菌抗辐射力的影响因素 ,使其作为电离辐射灭菌指示菌的应用标准化、规范化。 [方法 ]应用 60 Coγ射线对不同存在状态的短小芽胞杆菌进行辐照 ,测定D10 值并对其差异进行显著性检验。 [结果 ]短小芽胞杆菌E60 1悬浮于蒸馏水中D10 值为 1 76kGy ,低于 2 %牛血清、2 %基质液和 10 %基质液中的D10 值 ,差异有显著性 ;干燥芽胞的D10 值在滤纸菌片和布菌片低于塑料膜菌片和可溶性菌片 ,可溶性菌片又高于塑料菌片 ;短小芽胞杆菌布菌片干燥不同时间后D10 值有差异 ,干燥 10 0minD10 值小于干燥 3 0min。 [结论 ]有机物对短小芽胞杆菌具有保护作用 ,可使其D10 值增高。干燥芽胞的抗辐射力除受共存有机物影响外 ,载体及芽胞干燥程度对其也有影响。     

同型半胱氨酸致血管内皮细胞DNA损伤的作用

[目的]探讨同型半胱氨酸（HCY）对血管内皮细胞的DNA损伤作用。[方法]体外培养鼠主动脉内皮细胞,随机分为正常对照组和HCY9种浓度组,MTT法检测细胞毒作用,彗星试验检测DNA损伤情况,取培养液测定丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活力。[结果]（1）对照组细胞呈单层鹅卵石样,紧密排列。1、2．5、5mmol／L HCY组细胞无明显变化,而自10mmol／L起,HCY组细胞排列杂乱,聚集成团。MTT法显示细胞生长明显受抑制,抑制率达20％;（2）彗星试验显示自5mmol／L HCY起尾长、尾矩和Olive尾矩明显增加;（3）自10mmol／L起HCY培养液中MDA含量高于对照组,SOD活力低于对照组。[结论]HCY具有明显的细胞毒作用,其机制可能与HCY直接造成DNA损伤和促进氧化应激有关     

输血前经微柱凝胶法检测相容性的价值

正输血疗法是临床医疗治疗过程中不容忽视的一种治疗方式,不规则抗体测定、血型测定以及交叉配血等与输血相容性有关的试验是保障临床输血安全的必要检验[1]。目前微柱凝胶技术被广泛应用于国内外输血前的血清检查。文献报道,与传统检查相比,微柱凝胶法具有操作简便、用血量少、可有效保存以及结果稳定等无可比拟的优点,其能有效解决或处理临床血清血型技术中的各种问题[2]。本文对输血前经微柱凝胶法检测相容性的临床价值进     

对虾中胆固醇的气相色谱测定

[目的]用气相色谱法测定中国对虾中的胆固醇。[方法]样品经皂化法预处理,再用乙醚提取未皂化物,干燥脱水,用气相色谱法测定。[结果]方法的特异性强,分离效果好,精密度和准确度均好,变异系数为3．1%,平均回收率为 98．1%,。[结论]本方法可用于中国对虾中胆固醇的测定。     

蝎形引物PCR快速检测环境水样中沙门菌方法研究

[目的]以蝎形引物PCR技术为基础建立一套环境水样沙门菌的快速检测方法。[方法]选择沙门菌himA基因设计出以荧光素(FAM)和淬灭物(DABCYL)双标记探针的茎环尾状结构构成蝎形引物，对8种沙门菌和8种非沙门菌经增菌、DNA提取后，以蝎形引物PCR方法进行检测，探讨该检测方法的可行性、特异性和灵敏度，并与普通引物PCR法检测50份环境水样进行比较。[结果]蝎形引物PCR方法检测沙门菌，细菌密度与荧光相对强度存在着量比关系，与普通引物PCR法比较，具有快速、特异、灵敏度高的特点，在50μl PCR及反应体系中最低可检出2cfu沙门菌。[结论]沙门菌蝎形引物在PCR扩增中，探针可特异地与目的DNA片段杂交，使DABCYL不能有效地淬灭FAM产生的荧光，荧光可经仪器直读检出。所建立的快速检测方法可定性或定量的用于环境水样中沙门菌检测。     

硫酸铜对小鼠脾细胞DNA损伤研究

[目的]观察不同剂量硫酸铜作用不同时间对小鼠脾细胞DNA链断裂损伤的影响。[方法]采用单细胞凝胶电泳法(SCGE)分别测定小鼠灌胃1次染毒硫酸铜50、100、200mg/kg和连续每天1次灌胃硫酸铜12.5、25.0和50.0mg/kg2周及连续灌胃3、6和12mg/kg1个月后小鼠脾细胞DNA链断裂损伤情况。各染毒组均没相应的对照组。[结果]50、100和200mg/kg硫酸铜1次染毒;25.0和50.0mg/kg硫酸铜染毒2周;6和12mg/kg硫酸铜染毒1个月后,脾细胞均出现DNA链断裂损伤的频率以及尾长均明显高于对照组。[结论]硫酸铜可引起脾脏细胞明显的DNA链断裂损伤,此损伤作用存在蓄积效应。     

多氯联苯对苯并[a]芘致HepG2细胞DNA损伤作用的影响

目的观察多氯联苯(PCBs)153和苯并[a]芘(B[a]P)单独及联合处理对人肝肿瘤细胞HepG2的DNA损伤作用。方法以HepG2细胞为靶细胞,以DMSO为溶剂对照,PCB153设4个剂量组:0.1、1、10和100μmol/L,B[a]P设4个剂量组:12.5、25、50和100μmol/L。应用单细胞凝胶电泳试验检测PCB153和B[a]P单独和联合处理对HepG2细胞DNA损伤的影响;通过荧光分光光度法分别测定PCB153对HepG2细胞CYP1A1(EROD)、CYP2B1(PROD)酶活性的影响。结果与溶剂对照相比,B[a]P各剂量组Olive尾矩均显著增加(P<0.01);而PCB153各剂量组均不引起Olive尾矩显著增加,与50μmol/LB[a]P单独作用相比,0.1~10μmol/L的PCB153与50μmol/LB[a]P联合作用可使Olive尾矩增加,但只有10μmol/L PCB153与50μmol/LB[a]P联合作用极显著增加Olive尾矩(P<0.01);100μmol/L PCB153与50μmol/LB[a]P联合作用与50μmol/LB[a]P单独作用相比,Olive尾矩则显著降低(P<0.01)。酶活性分析表明,PCB153各剂量组均可诱导EROD、PROD活性显著增加,差异有统计学意义。结论PCB153在一定浓度范围内使B[a]P诱导的HepG2细胞DNA损伤作用显著增强,可能与其诱导的CYP1A1、CYP2B1酶活性升高有关。     

改良单细胞凝胶试验与标准方法的对比研究

本文报导了采用在透明玻片上预先制备琼脂层的改良单细胞凝胶试验与标准方法的对比实验结果。研究表明，本法对ＤＮＡ损伤与修复效应的检测灵敏度与标准方法相同。但本法能明显改善ＤＮＡ迁移形态的视野清晰度和稳定性，且凝胶片经固定可长期保存。文中还对该法某些实验条件进行了探讨。     

吸烟者CYP1A1和GSTM1基因多态性与DNA损伤关系

[目的]探讨吸烟者Ⅰ相代谢酶CYP1A1和Ⅱ相代谢酶GSTM1基因多态性与DNA损伤的关系。[方法]选择吸烟量、性别、年龄、生活方式基本相同的吸烟者123例,应用Pyrosequencing技术进行个体基因型测定,彗星试验测定外周血淋巴细胞DNA损伤程度。[结果]在123名吸烟者中,CYP1A1突变型(CYP1A1Val/Val)占CYP1A1等位基因型的28.5%,GSTM1缺失型(GSTM1null)占GSTM1等位基因型的56.1%。具有CYP1A1Val/Val和GSTM1null基因型的个体有19名,占吸烟者总数的15.4%。同时具CYP1A1突变型和GSTM1缺失型纯合个体,淋巴细胞的拖尾形成率为97.5%,尾长达120.9μm,尾矩为42.4μm,显著高于野生型个体(P<0.05),且尾部DNA的荧光强度明显升高,而突变杂合型个体DNA损伤无明显加重。[结论]CYP1A1突变型与GSTM1缺失型共同携带者对DNA损伤敏感,多个突变基因对DNA损伤可能具有协同作用。     

硫酸铟对小鼠成纤维细胞毒性作用的研究

[目的]了解硫酸铟对小鼠成纤维细胞（L929）的细胞毒性、DNA损伤及活性氧含量的影响。[方法]以体外培养的L929细胞为研究对象,采用四氮唑盐比色分析法（MTT法）观察不同染毒浓度（1、2、4、8mmol／L硫酸铟）在不同时间段（2、24、48h）染毒对L929细胞的毒性作用;采用单细胞凝胶电泳技术（SCGE）检测在2h作用下,不同浓度（1、2、4mmol／L硫酸铟）染毒致DNA损伤的情况及活性氧（reactive oxygen species,ROS）含量的变化。[结果]硫酸铟对L929细胞生长具有抑制作用,在各个浓度及时间段内光密度值随染毒浓度增加及染毒时间延长而降低,阴性组与染毒组差异有统计学意义（P〈0．05）。单细胞凝胶电泳结果显示,彗星拖尾率、彗尾DNA％、尾长、Olive尾矩随染毒浓度增加而增加,阴性组与染毒组之间的差异有统计学意义（P〈0．05）,且ROS含量随染毒浓度增加表现递增。[结论]本实验条件下,硫酸铟能够明显抑制L929细胞增殖,存在明显的剂量-效应关系和时间-效应关系,并在短时间内能够引起DNA单链断裂及ROS含量增多。     

高功率微波辐照对原代培养心肌细胞超微结构及肌动蛋白表达的影响

[目的 ]研究高功率微波 (HPM)对原代培养心肌细胞超微结构和肌动蛋白表达的影响 ,以探讨其对心肌细胞的损伤和修复规律及损伤机制。 [方法 ]HPM辐照细胞后 ,采用扫描电镜、透射电镜、原子力显微镜和免疫组织化学技术 ,观测心肌细胞超微结构和肌动蛋白表达的变化。 [结果 ]HPM辐照后 ,心肌细胞膜凹陷、穿孔和破裂 ,孔洞直径 ( 840± 5 7.5 9)nm ,深度 ( 2 0 8± 17.2 1)nm。线粒体肿胀 ,高尔基体和内质网扩张肿胀 ,多量髓鞘样结构出现。肌动蛋白的表达明显降低并与辐照剂量密切相关 ,r =-0 .945 (P <0 .0 1)。 [结论 ]HPM对心肌细胞超微结构特别是细胞膜结构造成明显损伤 ,损伤可能存在剂量 效应关系 ,并且有一定的发展和修复规律。     

微柱凝胶试验检测冷凝集素综合征

微柱凝胶试验比传统的玻片法和试管盐水介质凝集试验更准确、更敏感、更简单 ,结果可较长期保存[1] ,国外输血界已常规采用[2 ] ,国内尚处于引进阶段。我科引进微柱凝胶试验技术以来 ,定血型 2 0 91例 ,其中 2例为冷凝集素综合征 (ｃｏｌｄａｇｇｌｕｔｉｎｉｎｓｙｎｄｒｏｍｅ ,ＣＡＳ) ,血型结果显示特异 ,需作进一步处理才能准确显示 ,现报道如下。1　材料与方法1·1　材料　微柱凝胶血型卡、低离子介质溶液、标准反定型 0 8%红细胞悬液、ＩＤ -Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ 12ＳⅡ离心机及ＩＤ -Ｉｎｃｕｂａｔｏｒ 37ＳⅠ孵育器 ,均为瑞士Ｄ…     

Fe2O3纳米颗粒对人肝癌细胞游离钙的影响

[目的]探讨三氧化二铁（Fe2O3）纳米颗粒对人肝癌细胞（HepG2细胞）形态学和游离钙（[Ca^2＋]i）的影响,为研究Fe2O3纳米颗粒诱导细胞凋亡的机制提供依据。[方法]以不同浓度（0.173、0.347、0.694g／L）的Fe2O3纳米颗粒对HepG2细胞染毒1、12、24h,用激光扫描共聚焦显微镜检测HepG2细胞[Ca^2＋]i荧光强度的变化。[结果]与对照组相比,染毒不同时间各染毒组细胞内[Ca^2＋]i含量差异均有统计学意义（P〈0.05）;染毒不同浓度时,Fe2O3纳米颗粒均能不同程度地引起HepG2细胞的形态学改变及其细胞内[Ca^2＋]i的升高。0.347、0.694g／L组染毒不同时间点的平均荧光强度分别为127.33±20.13、108.88±19.15、144.00±13.86和119.67±1.15、122.35±11.47、186.40±17.34,均明显高于对照组54.33±6.43,差异有统计学意义（P〈0.05）。[结论]HepG2细胞凋亡可能与Fe2O3纳米颗粒引起的细胞[Ca^2＋]i升高有关。     

鱼藤酮对神经瘤细胞线粒体膜电位的影响

[目的 ]探讨农药鱼藤酮对神经细胞线粒体的毒性作用机制。 [方法 ]采用 0 5、0 75、1 0 0 μmol/L三种浓度的鱼藤酮对神经瘤细胞 (SH SY5Y)染毒 2 4h ,通过线粒体特异性染料罗丹明 1 2 3进行荧光标记 ,利用激光扫描共聚焦显微镜观察染毒细胞线粒体的膜电位变化 ,并与未染毒的细胞对照组进行比较。 [结果 ]经图象扫描每个细胞得到 1 6个荧光强度变化数值 ,并对其荧光变化值进行分析。表明鱼藤酮可引起线粒体膜电位的改变 ,高、中剂量组荧光强度变化值(1 2 4 84±0 2 4 0 5、1 2 4 86± 0 30 5 7)与低剂量组、溶剂对照组、空白对照组荧光强度变化值 (1 52 3 0± 0 442 0、1 770 1±0 391 9、1 72 5 4±0 2 70 5)差异均存在显著性 (P <0 0 5) ,且随剂量增高 ,有降低趋势。 [结论 ]提示线粒体膜电位的改变是鱼藤酮神经细胞毒性作用的重要环节之一。     

苯并（a）芘致人支气管上皮细胞DNA损伤及与组蛋白H2A单泛素化水平的关系

[目的]通过体外细胞培养途径,探讨苯并（a）芘（benzo[a]pyrene,B[a]P）作用下人支气管上皮细胞（16HBE）DNA损伤与组蛋白H2A单泛素化表达水平的关系。[方法]取对数生长期16HBE细胞,采用2μmol/L B[a]P染毒不同时间（0、1、2、4、8、12、24、48h）进行实验,用碱性单细胞凝胶电泳实验检测细胞DNA损伤水平,并以Olive尾矩值（olivetail moments,OTM）评价DNA损伤程度;用Western-blot法检测组蛋白H2A单泛素化水平。[结果]单细胞凝胶电泳结果显示：2μmol/L B[a]P染毒不同时间时,随着染毒时间的延长,各染毒组细胞DNA损伤程度均明显增高,与对照组相比,差异均有统计学意义（P〈0.01）;Western-blot结果显示：2μmol/L B[a]P染毒不同时间时,与对照组相比,组蛋白H2A的单泛素化水平增高,且在染毒2h后,差异有统计学意义（P〈0.01）;回归分析显示,单泛素化H2A的表达水平与DNA损伤程度存在高度相关,决定系数（R2）为0.910,P〈0.01。[结论]B[a]P染毒致16HBE细胞DNA损伤与组蛋白H2A单泛素化水平之间存在密切关系。     

明胶片菌种保藏法的应用

[目的]建立一种保存菌种时间长、使用方便,便于基层推扩应用的菌种保藏方法.[方法]于2004年9月,采用明胶片菌种保藏法保存了标准菌种ATCC26003金黄色葡萄球菌和ATCC27853绿脓杆菌.[结果]2005～2009连续5年,通过每年的传代鉴定,菌种的存活率100%且各项生化特性保存完好未发生变异或丢失.达到了预期良好目的,现继续保存观察中.[结论]该方法保存菌种时阃长、使用方便又不需要昂贵的仪器设备,是一种特别适用于基层推扩应用的菌种保藏方法.     

3种消毒干燥法对呼吸机螺纹管保存时效期的评价

目的研究临床常用的3种呼吸机螺纹管的清洗消毒方法对其消毒干燥后保存时效期的效果进行评价,并探究最有效方法,确保患者安全。方法对2009年12月-2013年6月重复使用的不同类型相同长度呼吸机螺纹管分3组:A组95%乙醇浸泡消毒冲洗自然干燥法、B组烘干箱烘干法、C组全自动清洗消毒器清洗消毒干燥法,保存5、10、15、20、25、30d,每个时间段各105根螺纹管,分别进行螺纹管内采样细菌学检测,选取阳性率和合格率作为分析标准。结果重复使用的吸机螺纹管消毒后A组保存6个时间段样本均有细菌生长,B组20、25、30d出现阳性,C组仅30d为阳性;5、10、15、20、25、30d检测合格率,A组分别为94.29%、83.81%、75.24%、60.00%、43.81%、31.43%;B组分别为100.00%、100.00%、100.00%、95.23%、91.43%、83.81%;C组分别为100.00%、100.00%、100.00%、100.00%、100.00%、98.10%。结论 95%乙醇冲洗干燥法保存的呼吸机螺纹管时效期<5d,烘干箱烘干法保存时间为>15d,全自动清洗消毒器清洗消毒干燥法保存的呼吸机螺纹管时效期可以达到25d,且长期保存效果优于95%乙醇浸泡消毒冲洗自然干燥法和烘干箱烘干法。