流式细胞术检测TH1/TH2的方法探讨

1986年Mosm ann等[1]根据T辅助淋巴细胞(CD4 )分泌的细胞因子谱的不同,将CD4 细胞分为TH1和TH2亚群。测定TH1和TH2亚群的变化,可以了解机体的免疫状况,为临床调整TH1/TH2失衡提供正确的治疗措施。由于目前尚无区分TH1和TH2细胞的表面标志物,所以只能根据细胞亚群分泌细胞因子的不同,间接检测TH1和TH2细胞的数目和功能[2]。以往用流式细胞术(flow cytom etry,FCM)检测TH1/TH2细胞的方法主要有两种:一是用单标记法对细胞膜表面分子和胞内的细胞因子进行染色,以FCM分析通过群组信息来确定TH1/TH2细胞的表达水平[3];二是用三标…     

胃癌患者TH1/TH2漂移的研究

目的观察胃癌病人外周血TH1/TH2细胞及其细胞因子水平的变化,为肿瘤的免疫治疗提供实验依据.方法应用ELISPOT法检测TH1/TH2细胞,ELISA法检测细胞因子.结果胃癌病人TH1细胞及其细胞因子降低,TH2细胞及其细胞因子升高,TH1/TH2比值降低.正常人外周血单个核细胞加IL-12和抗IL-4单抗组,TH1细胞阳性率增加,TH2细胞阳性率降低,TH1/TH2比值升高;加IL-4和抗IFN-γ单抗组TH1细胞阳性率降低,TH2细胞阳性率升高,TH1/TH2比值降低(P＜0.05).结论胃癌病人TH1细胞受抑制,TH2细胞亢进,导致机体的抗肿瘤免疫应答受抑制.利用IL-12诱导TH1细胞的增殖,有可能恢复TH1/TH2平衡.     

TH细胞检测研究的现状

T淋巴细胞是高度异质性的群体,根据发育过程中出现的分化抗原的不同,分为CD4^ 和CD8^ T细胞,这种分类对于区分T细胞的异质性有一定的价值。但随着对T细胞功能研究的深入,人们发现,T细胞的功能主要是由其分泌的细胞因子介导的。1986年Mosmann等根据小鼠的CD4^ T细胞克隆产生细胞因子类型的不同,将CD4^ T细胞分为TH1和TH2两种类型,随后Romagnani等人证实人体内也存在相应的TH1和TH2亚群。     

CpG-ODN2216刺激健康人外周血淋巴细胞TH1/TH2细胞因子的表达

目的 观察CpG-ODN2216对健康人外周血单个核细胞（PBMC）中TH1/TH2淋巴细胞的极化作用,以及培养上清液中TH1/TH2型细胞因子的水平.方法 取健康献血员外周血用淋巴细胞分离液分离PBMC,与CpG-ODN2216共培养24 h,流式细胞仪检测PBMC中TH1/TH2淋巴细胞的改变,ELISA法测定培养上清液中IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10的释放水平.结果 CpG-ODN2216能刺激淋巴细胞向TH1、Tc1转化,对TH2无明显的刺激作用.培养上清液中IFN-γ的表达水平显著增高（P＜0.01）,IL-2、IL-4和IL-10无明显改变（P＞0.05）.结论 CpG-ODN2216可以促进外周血淋巴细胞向TH1、Tc1极化,并诱导PBMC产生高水平的TH1型细胞因子IFN-γ,介导TH1型免疫应答.     

TH1,TH2细胞与外科应激

机体许多因素参与ＴＨ１、ＴＨ２细胞分化和功能的维持。在机体遭受创伤，烧伤，出血、手术等应激性打击以后，ＴＨ１、ＴＨ２细胞反应类型便受到神经－内分泌和其自身分泌的细胞因子的调节。     

卵巢癌患者TH1／TH2型细胞因子的测定

[目的]探讨THl／TH2型细胞因子水平与卵巢癌患者发生、发展之间的关系。[方法]采用夹心酶联免疫吸附实验和逆转录PCR法,对36例卵巢癌及32例健康对照组外周血淋巴细胞中TH1／TH2型细胞因子的蛋白水平及其mRNA水平进行了测定。[结果]与健康对照组相比,卵巢癌患者外周血淋巴细胞培养上清中的IL-2、IFN-v水平显著降低,而IL-4、IL-6和IL-10则显著增高,具有统计学意义。相应的外周血淋巴细胞mRNA水平与蛋白水平相同。(结论]卵巢癌患者异常分泌的TH1／TH2型细胞因子水平与卵巢癌的发生、发展密切相关。     

TH1、TH2细胞与外科应激

机体许多因素参与TH1、TH2细胞分化和功能的维持。在机体遭受创伤、烧伤、出血、手术等应激性打击以后，TH1、TH2细胞反应类型便受到神经-内分泌和其自身分泌的细胞因子的调节。在上述外科应设过程中，机体免疫反应中淋巴细胞的示现并不是单纯的免疫抑制，而是从TH1诱导的反应转向TH2诱导的反应占优势为特征。     

类风湿关节炎患者TH细胞亚群上CD137的表达变化

目的 探讨类风湿关节炎(RA)患者外周血中TH1/TH2亚群细胞上CD137的表达变化特点及其临床意义.方法 应用流式细胞术检测32例RA患者及34名正常对照者外周血CD4+iFN-γ+(TH1)细胞和CD4+IL-4+(TH2)细胞上CD137的表达水平.结果 正常组中TH1+CD137+和TH2+CD137+细胞水平无明显差异;而在RA组中TH1+CD137+细胞水平明显高于TH2+CD137+水平.TH1+CD137+在RA活动组的水平明显高于稳定组和正常组(表达百分率分别为95.57±11.56、69.12±7.85和53.22±6.83,P＜0.01);而TH2+CD137+在RA稳定组的水平明显高于活动组和正常组(表达百分率分别为62.91±8.56、56.32±6.93和51.90±4.13.P＜0.01).RA活动期TH1+CD137+细胞百分率与急性期指标ESR、CRP及活动期指标Stroke指数正相关(r=0.865,P＜0.01;r=0.854,P＜0.01;r=0.103.P＜0.05);而稳定期TH2+CD137+也与RA活动期指标RF星正相关关系(r=0.306,P＜0.05).结论 RA患者外周血中TH1、TH2亚群细胞上CD137的表达存在异常.同时CD137的表达异常与RA患者不同病程和病情活动度相关.提示CD137参与了RA免疫反应的发展.尤其是在疾病的活动期,CD137有助于CD4+T细胞向TH1细胞的偏移,从而加速促炎性细胞因子IFN-γ的分泌.而在稳定期,CD137可能通过刺激体液免疫来维持免疫反应.     

TH17细胞与自身免疫病

CD4辅助T淋巴细胞是一群由多个亚型细胞共同组成的复杂细胞,包括：TH1细胞、TH2细胞、Treg细胞和TH17细胞。这些细胞来源于共同的淋巴干细胞,在体内不同的微环境下发育为生物学功能有显著差异、甚至完全相反的各类效应细胞,并分别具有自己特异的转录子。用不同的细胞因子组合模拟体内微环境,     

TH胶冠状静脉栓塞治疗门脉高压食管胃底曲张静脉出血22例

ＴＨ胶冠状静脉栓塞治疗门脉高压食管胃底曲张静脉出血２２例安阳市人民医院外科王好仁哈尔滨市道里公费医院张葳安阳市中医院孟庆莉门静脉高压症食管胃底静脉出血是外科临床常见的一种凶险疾病。其首次出血死亡率即高达３０─５０％。患者入院时常伴有休克，内科治疗常因...     

内镜下TH胶栓塞治疗门脉高压食管静脉曲张出血16例

1994年2月～2000年2月,我院共收治肝硬化门脉高压所致的食管静脉曲张破裂出血39例,1997年2月至今3年间对16例采用内镜下TH胶栓塞治疗(下称TH胶组),取得了较好的效果。并对内镜下治疗前3年间用三腔二囊管压迫止血治疗的23例进行对比分析(下称三腔管组),现报告如下: 1 临床资料与方法 1.1 确诊为肝硬化所致的门脉高压食管静脉曲张者,治疗前均经腹部B超、肝功能及胃镜检查证实为食管静脉曲张破裂出血,排除其它原因所致的上消化道出血。TH胶组16例,男13例,女3     

食管胃底静脉曲张破裂出血TH胶栓塞治疗的护理

总结30例肝硬化食管胃底静脉曲张破裂出血行TH胶栓塞术治疗的护理。治疗前做好各项准备,治疗中密切观察生命体征,治疗后加强病情观察,及早发现并发症,出院前予详细的指导,对提高治疗成功率具有重要意义。     

结核性盆腔炎患者外周血TH17/Treg细胞的表达

目的了解结核性盆腔炎患者外周血T_H17/Treg细胞免疫应答情况,探讨其在结核性盆腔炎发病中的作用。方法采用胞内流式细胞术分别检测46例结核性盆腔炎患者治疗前外周血T_H17和Treg细胞的表达水平,以健康育龄期妇女25例作为对照,并对28例患者抗结核治疗3个月和6个月后T_H17/Treg细胞的变化情况进行随访检测。结果结核性盆腔炎患者外周血T_H17细胞的百分比为(3.26±1.30)%,明显低于对照组(4.92±1.71)%(P0.01),Treg细胞的百分比为(5.18±1.53)%,明显高于对照组(3.26±1.10)%(P0.01);结核性盆腔炎患者治疗6个月后T_H17细胞表达水平(4.67±1.75)%明显高于治疗前(3.26±1.30)%及治疗3个月(3.70±1.06)%,差异均有统计学意义(P均0.01);治疗6个月后Treg细胞表达水平为(3.93±0.94)%,明显低于治疗前(5.18±1.53)%及治疗3个月(4.94±1.51)%,差异有统计学意义(P均0.01);治疗6个月后Treg细胞仍高于对照组(P0.05);治疗前T_H17/Treg细胞的比值较对照组明显降低(P0.01),治疗3个月后升高不明显,治疗6个月后T_H17/Treg细胞的比值(1.18±0.34)%较治疗3个月(0.77±0.21)%和治疗前(0.55±0.13)%升高明显(P均0.01),但仍未恢复至正常水平(P0.01)。结论 T_H17/Treg细胞参与了结核性盆腔炎患者的免疫应答,并存在T_H17/Treg的失衡状态。     

重度颅脑损伤急性期T细胞亚群TH,TS和DTH的变化及其临床意义

重度颅脑损伤急性期可引起免疫功能失调，进而可严重影响病人的病情和预后。我们于1995年8月～1996年1月对25例重度颅脑损伤病人的T细胞亚群中辅助性T细胞（TH），抑制性T细胞（TS）和迟发性超敏反应（DTH）进行了测定，现报告如下；资料与方法本组共25例，其中男性19例，女性6例；年龄16～40岁16例，41～60岁9例。25例中，车祸伤13例，坠落伤7例，打击伤5例；入院时GCS计分；6～8分21例，3～6分4例；CT头颅扫描证实；广泛脑挫裂伤合并颅骨骨折4例，硬膜下血肿9例，硬膜外血肿7例，脑内血肿3例，脑内多发血肿2例。人院后第1天采末稍血…     

医用TH胶栓塞建立月骨缺血性坏死兔模型

背景：目前缺乏与人类月骨缺血性坏死病理过程类似的Kienb？ck病动物模型。〈br〉 目的：采用医用TH胶栓塞法建立一种新型月骨缺血坏死兔模型,并探讨造模方法的合理性。〈br〉 方法：选择健康成年新西兰兔30只,雌雄不限。采用自身对照方法随机分为实验侧和对照侧,实验侧采用月骨中心钻孔,注射医用TH胶0.2 mL,反复注药3次;对照侧月骨中心钻孔注射同等量的生理盐水。于实验4,8,12周行X射线、大体观察、Micro-CT 骨计量学及组织病理学检测。 结果与结论：大体标本、X射线及组织学检测结果可见实验侧造模后8周月骨出现缺血坏死表现,12周月骨缺血坏死更为典型。Micro-CT 骨小梁微观参数中,实验侧骨小梁密度参数骨体积分数及骨小梁数量均明显低于对照侧（P＜0.05）;骨小梁空间参数明显增高,其中实验侧骨小梁离度及结构模型指数明显高于对照侧。提示注射医用TH胶栓塞后8周实验侧出现月骨缺血坏死表现,注药后12周可建立月骨缺血坏死兔模型,可以实现在周围组织无明显损伤情况下出现月骨内血运受损、骨小梁骨折、空骨陷窝等与人类月骨坏死类似的改变。     

TH17细胞及IL-17在原发性抗磷脂综合征中的表达及临床意义

目的观察T_H17细胞及相关细胞因子IL-17在原发性抗磷脂综合征(PAPS)中的表达水平,并初步探讨其临床意义。方法收集32例PAPS患者及33例健康对照者静脉血标本,分离外周血单个核细胞(PBMC),流式细胞术检测T_H17细胞百分率,ELISA法检测血浆IL-17的表达水平,并分析IL-17水平与PAPS患者临床病理特征及实验室指标[抗心凝脂抗体(a CL)、抗β2糖蛋白Ⅰ(β2GPⅠ)和狼疮抗凝物(LA)]的关系。结果 PAPS患者外周血T_H17细胞百分率为(1.98±0.78)%,血浆IL-17水平为(60.72±18.71)pg/m L,均显著高于健康人对照组(P均0.01),且T_H17细胞百分率与血浆IL-17水平呈正相关(r=0.586,P0.01)。PAPS患者血浆IL-17水平与患者a CL、抗β2GPⅠ抗体和LA均无明显相关性(P均0.05)。与近期(≥3月)无相关临床事件发生的PAPS患者相比,新近(≤1月)发生动脉血栓事件的患者血浆IL-17水平差异无统计学意义(P=0.074),静脉血栓和血小板减少的PAPS患者IL-17蛋白水平显著升高(P0.01)。结论 T_H17细胞及IL-17与PAPS血栓形成和血小板减少密切相关,提示T_H17细胞及IL-17参与了PAPS脉管症状的发病机制。     

miR-99a对类风湿性关节炎及TH17/Treg细胞的影响

目的探讨类风湿性关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMC)中miR-99a的表达与辅助性T细胞17(T helper cell 17,T_H17)、调节性T细胞(regulatory cells, Treg)比率失衡的关系。方法收集于我院就诊的RA患者80例,分为活动期RA组(42例)和稳定期RA组(38例),以体检健康者42例作为健康人对照组。流式细胞术测定各组外周血PBMC中T_H17、Treg细胞数;ELISA法检测各组血清IL-17、IL-6、TFN-α、IFN-γ、IL-4和IL-10的表达水平;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分别测定T_H17和Treg细胞特异性转录因子RORγt和FoxP3 mRNA以及RA患者PBMC中miR-99a的表达水平;western blot检测各组RORγt和FoxP3蛋白的表达水平。结果与健康人对照组相比,活动期和稳定期RA患者的T_H17细胞数、RORγt mRNA和蛋白质的表达水平均显著升高,Treg细胞数及FoxP3 mRNA和蛋白质的表达水平均显著降低(P均0.01)。活动期RA患者血清IL-17、IL-6、TNF-α、IFN-γ的表达水平均显著升高,而IL-4和IL-10的表达水平均显著降低(P均0.01)。此外,活动期RA患者T_H17细胞中miR-99a的表达水平显著升高,Treg细胞中miR-99a的表达水平显著降低(P均0.01)。Pearson相关分析结果显示,RA患者T_H17细胞中miR-99a与RORγt mRNA的表达水平呈正相关(r=0.721,P0.01),Treg细胞中miR-99a与FoxP3 mRNA的表达水平呈正相关(r=0.815,P0.01)。结论 RA患者T_H17和Treg细胞中miR-99a的表达与T_H17、Treg细胞发育分化关键转录因子RORγt、FoxP3密切相关,miR-99a可能通过影响RORγt和FoxP3,参与RA患者T_H17/Treg细胞比率失衡。     

TH基因修饰的神经干细胞脑内移植对帕金森病模型动物的旋转行为及神经生化的影响

背景：神经干细胞(neuronal stem cells，NSCs)能提供多巴胺能神经元来治疗帕金森病(Parldnson disease，PD)，但脑内移植NSCs治疗PD的疗效目前观察结果欠佳。研究显示酪氨酸羟化酶(tyrosine hydIDxylase，TH)基因脑内移植能缓解PD的症状，TH基因修饰的NSCs脑内移植可能使PD的治疗效果出现新的结局。目的：探讨TH基因修饰的NSCs脑内移植对PD模型动物旋转行为和神经生化的影响。设计：完全随机对照实验。地点和对象：本实验选择105只大鼠，在解放军第三军医大学新桥医院中心实验室完成。干预：构建pN2ATH反转录病毒载体质粒，用PA317细胞包装，G418筛选阳性克隆，病毒上清感染NSCs，将NSCs和表达TH的NSCs植入PD大鼠皱状体内，测定移植后不同时间PD大鼠旋转行为改善以及多巴胺和3，4-二羟基苯乙酸(dihydroxy-phenyl acetlc acid，OOPAC)含量变化。主要观察指标：PD大鼠旋转行为改善以及多巴胺和DOPAC含量变化。结果：TH基因修饰的NSCs移植8周后能显降低PD大鼠旋转行为。增加纹状体多巴胺和DOPAC含量，疗效好于单纯NSCs移植组和对照组。结论：TH基因修饰的NSCs脑内移植能增加纹状体多巴胺和DOPAC含量，降低PD大鼠旋转行为，从而对PD大鼠有明显的治疗作用。     

自身免疫性疾病的性别差异

自身免疫性疾病存在着明显的性别差异，性激素通过对TH细胞的调节，形成男女之间不同的免疫环境，是导致这一差异的主要原因。本文总结 了近年来对自身免疫性疾病性别差异的研究，探讨了该领域未来的研究方向。