脆性X综合征的细胞遗传学研究

本研究从１０个Ｘ－连锁智力低下家系中，经细胞遗传学检查，检测出５个Ｆｒａ（Ｘ）综合征家系，共１５名患者和携带者检查发现：１、不同成份培养液对脆性Ｘ表达有影响。２、活性Ｘ染色体Ｘｑ２７迟复制与Ｆｒａ（Ｘ）综合征患者智力密切相关。３、Ｆｒａ（Ｘ）染色体的活性与女性携带者的智力有一定的关系     

脆性X综合征的遗传学研究

为研究脆性Ｘ综合征的遗传学特征,提高诊断和遗传咨询水平,积极有效地治疗,降低复发风险。本实验采用低叶酸ＴＣ１９９培养基诱导脆性Ｘ染色体的方法,对具有Ｆｒａ ＸＳ临床特征的智低患儿４５０名进行ＦｒａＸ检测,发现ＦｒａＸＳ９５名,检出率２１．１１％,检测智低患儿母亲３２０名,有ＦｒａＸ表达者４８名。结果提示,ＦｒａＸＳ经临床筛选后有较高检出率,其智低程度与ＦｒａＸ表达频率有关;分析和探讨了ＦｒａＸＳ动     

35例智力低下儿童染色体脆性部位分析

３５例智力低下儿童染色体脆性部位分析张晓珍，余继英，霍晓春，饶兆英近年来，对脆性Ｘ综合征的研究引起了医学遗传学界的广泛关注。脆性Ｘ染色体（ＦｒａＸ）与Ｘ连锁智力低下（ｍｅｎｔａｌｒｅｔａｒｄａｔｉｏｎ，ＭＲ）有关，进而使人们对罕见型脆性位点发生极大兴...     

人肺癌细胞中生长因子的自泌循环和癌基因表达

用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ核酸杂交技术对４个人肺癌细胞系进行了表皮生长因子（ＥＧＦ）、转化生长因子α（ＴＧＦα）以及表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）的基因表达研究，发现这些肺癌细胞系中均有ＥＧＦ和ＴＧＦ＿α的基因表达，３／４中亦有ＥＧＦＲ的基因表达。这些癌细胞系中自泌的生长因子作用于自身的ＥＧＦ受体形成的自泌循环，不断刺激其自身的增殖，这可能是癌细胞无休止生长的主要原因之一。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ核酸杂交结果还表明：在这４个肺癌细胞系中，无ｃ－ｍｙｃ癌基因表达的细胞系中有大量的ＥＧＦ和ＴＧＦα的基因表达。用ＥＧＬ抗ＥＧＦ和抗ＥＧＦＲ抗体处理这些人肺癌细胞系，抗ＥＧＦ和抗ＥＧＦＲ抗体在一定程度上可抑制其增殖，这也说明这些癌细胞中生长因子自泌环路的存在。     

多聚酶链式反应检测FMR－1基因突变

采用多聚酶链式反应（ＰＣＲ）结合银染或非同位素杂交的方法，对１５例脆性Ｘ染色体阳性的患者和携带者进行了检查。结果显示，该方法可以检出ＦＭＲ－１正常扩增带、前突变与完全突变，与细胞遗传学检查相比，ＰＣＲ检测更为快捷与准确。     

用FISH技术检测肝癌及喉癌细胞系染色体畸变

目的探讨肝癌及喉癌细胞系染色体畸变。方法选用９种染色体特异性探针，分别对肝癌及喉癌细胞系的染色体进行荧光原位杂交检测。结果在两种细胞系中，这些探针均呈现异常的杂交信号。肝癌细胞系中主要是结构畸变，而喉癌细胞系中染色体数目畸变占主要地位。两种细胞系中染色体畸变所涉及的范围极广，而且畸变类型极为复杂。结论与常规的细胞遗传学分析方法比较，荧光原位杂交技术具有快速、准确、灵敏等优点，可以用于肿瘤细胞染色体畸变的检测     

用双色荧光原位杂交检测人精子染色体非整倍体率

目的检测人精子染色体非整倍体率。方法采用双色荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）方法,取少量精标本经洗后制片,用二硫苏糖醇（ＤＴＴ）和二碘水杨酸锂（ＬＩＳ）处理,使精子头部染色质去凝集。然后,与生物素标记的α卫星Ｘ染色体特异ＤＮＡ探针（ＤＸＺ１）和地高辛标记的α卫星Ｙ染色体特异ＤＮＡ探针（ＤＹＺ３）进行原位杂交。用ＣＹ３－链亲和素、山羊抗链亲和素检测Ｘ染色体探针杂交信号;用鼠抗地高辛抗体、与荧光素结合的兔抗鼠抗体检测Ｙ染色体探针杂交信号。结果在Ｎｉｋｏｎ荧光显微镜下可以清楚看到精子头部的杂交信号,头部有１个红色荧光杂交信号的精子为Ｘ染色体精子（Ｘ精子）,有１个绿色荧光杂交信号的精子为Ｙ染色体精子（Ｙ精子）。精子头部有２个荧光杂交信号的精子为染色体数目异常精子。若用１条常染色体探针和１条性染色体探针进行ＦＩＳＨ,可以区别头部有２个相同颜色荧光杂交信号的精子属非整倍体精子或二倍体精子。结论双色荧光原位杂交（ＦＩＳＨ）方法,可以用于测定接触致突变剂和非整倍体诱导剂后,人精子染色体非整倍体率的变化。     

EBV转化的人B淋巴母细胞和人B淋巴细胞杂交瘤细胞表面标记表达的研究

本文用碱性磷酸酶－抗碱性磷酸酶（ＡＰＡＡＰ）免疫组化染色技术，对ＥＢ病毒（ＥＢＶ）转化的人Ｂ淋巴母细胞（ＬＣＬ）、人Ｂ淋巴细胞杂交瘤以及它们的亲本骨髓瘤细胞系的部分表面标记进行了检测。结果显示，人Ｂ淋巴细胞在ＥＢＶ转化或杂交过程中表面标记发生了较大的变化；对ＬＣＬ和杂交瘤细胞表面标记的检测可能为探寻人Ｂ细胞在这些过程中染色体保留或丢失的规律提供一种手段。此外，ＬＣＬ及人Ｂ细胞杂交瘤细胞系有可能被用     

FRAXA与FRAXE位点的快速基因筛查

Ｘ染色体长臂末端罕见脆性位点Ａ与Ｅ与分别由一个可遗传的三核苷酸重复序列的延长所致二种脆 性位占在细胞遗传学水平难以区别。为了建立快速筛查ＦＲＡＸＡ与ＦＲＡＸＥ位点的基因诊断法，本文采用毛细管ＰＣＲ－序列胶银染显示法对正常人，脆性Ｘ综合征家系及智力儿童三组样本进行了检测，结果显示正常人群的Ｐ（ＣＧＧ）ｎ与Ｐ（ＧＣＣ）ｎ均呈多态分面     

表达反义Ki－ras的逆转录病毒载体对人胰腺癌细胞恶性表型的影响

用重组逆转录病毒载体构建能表达反义Ｋｉ－ｒａｓ癌基因ＲＮＡ的重组体，经磷酸钙沉淀法导入病毒包装细胞ＰＡ３１７中。ＲＮＡ杂交分析表明，转化包装细胞系中有重组病毒载体的表达。利用转化包装细胞分泌的病毒上清液感染人胰腺癌细胞系ＰＣ－２细胞，经Ｐｕｒｏｍｙｃｉｎ筛选得到稳定的转化细胞系。ＲＮＡ杂交证实转化的胰腺癌细胞中有病毒高度表达，靶基因表达明显减弱。反义Ｋｉ－ｒａｓＲＮＡ使人胰腺癌细胞生长速率下降约６５％。￣３Ｈ胸腺嘧啶掺入、软琼脂集落形成能力以及裸鼠致瘤能力等均显著下降。这一结果表明，反义Ｋｉ－ｒａｓ逆转录病毒载体能有效地抑制靶基因的表达，使胰腺癌细胞恶性表型部分逆转。     

骨巨细胞瘤的细胞遗传学研究

对１９例手术切除骨巨细胞瘤组织和４例骨巨细胞瘤细胞系进行了细胞遗传学研究，发现瘤细胞多为异倍体，染色体众数多为亚二倍体。核型分析表明第１７，１８号染色体丢失频率较高，染色体末端缺失和端粒融合是骨巨细胞瘤最常见的细胞遗传学改变。我们将骨巨细胞瘤染色体高度非随机断裂点和同一患者体细胞染色体脆性部位与目前公认的癌基因点进行比较，发现三个位点分别与癌基因ＭＥＴ，ＦＬＴ，ＹＥＳ２／ＰＤＧＦＢ（ｓｉｓ）同位或     

13号环状染色体综合征的临床及其细胞遗传学研究

本文对一例罕见的１３号环状染色体综合征患儿家系进行了外周血淋巴细胞培养、ＧＴＧ、ＣＢＧ、Ａｇ－ＮＯＲ显带和高分辨Ｇ显带等细胞遗传学研究，证实患儿核型为４５，ＸＸ，－１３／４６，ＸＸ，ｒ（１３）／４６，ＸＸ，ｒ（１３；１３）／４７，ＸＸ，２ｒ（１３；１３）（ｐ１１．２；ｑ３４），为一新生的、由４种不同异常细胞系组成的嵌合体，并对其产生原因及其与临床症状间的关系进行了讨论。     

EBV转化的人B淋巴母细胞和人B淋巴细胞杂交瘤细胞表面标记表达的研究

本文用碱性磷酸酶—抗碱性磷酸酶（ＡＰＡＡＰ）免疫组化染色技术，对ＥＢ病毒（ＥＢＶ）转化的人Ｂ淋巴母细胞（ＬＣＬ）、人Ｂ淋巴细胞杂交瘤以及它们的亲本骨髓瘤细胞系的部分表面标记进行了检测。结果显示，人Ｂ淋巴细胞在ＥＢＶ转化或杂交过程中表面标记发生了较大的变化；对ＬＣＬ和杂交瘤细胞表面标记的检测可能为探寻人Ｂ细胞在这些过程中染色体保留或丢失的规律提供一种手段。此外，ＬＣＬ及人Ｂ细胞杂交瘤细胞系有可能被用作一种新的模型，来研究人Ｂ淋巴细胞的分化和功能。     

多聚酶链式反应检测FMR—1基因突变

采用多聚酶链式反应结合银染或非同位素杂交的方法，对１５例脆性Ｘ染色体阳性的患者和携带者进行了检查。结果显示，该方法可以检出ＦＭＲ－１正常扩增带、前突变与完全突变，与细胞遗传学检查相比，ＰＣＲ检测更为快速与准确。     

先天性智力低下的遗传学研究

为探索先天性智力低下的遗传异质性,对２４０例先天性智力低下患者进行Ｇ显带分析和低叶酸诱导脆性Ｘ染色体检测,并以先证者为核心进行家系调查。发现先天性智力低下患者中,Ｄｏｗｎ综合征占１０．４２％,Ｆｒａ（Ｘ）综合征占５．４２％,染色体倒位、易位及缺失共占３．７５％,染色体正常８０．４２％。表明先天性智力低下具有多种遗传学病因和不同的复发风险率。     

γ-干扰素基因修饰人肝癌细胞的免疫原性研究

目的研究ＩＦＮ－γ基因修饰后人肝癌细胞的免疫原性。方法利用逆转录病毒载体ＬＸＳＮ分别建立了四种ＩＦＮ－γ基因修饰人肝癌细胞，经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ及Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交进行鉴定分析，流式细胞仪（ＦＡＣＳ）分析细胞表面ＭＨＣ分子表达，灭活肿瘤细胞体外刺激诱导细胞毒Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）产生。结果Ｓｏｕｔｈｅｒｎ及Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交结果表明，ＩＦＮ－γ基因在宿主细胞中获得了正确整合和表达。ＦＡＣＳ分析结果表明，ＩＦＮ－γ基因修饰后人肝癌细胞表面ＨＬＡⅠ类分子表达强度显著增强，Ⅱ类分子的表达阳性百分率有显著提高。一些ＩＦＮ－γ基因修饰人肝癌细胞在体外诱导细胞毒Ｔ淋巴细胞的能力有所提高。结论ＩＦＮ－γ基因修饰可增强人肝癌细胞的免疫原性，为基因工程瘤苗的临床应用提供了一定依据。     

肿瘤坏死因子α与反义寡脱氧核苷酸联合作用对人胰腺癌细胞生长的影响

目的探讨肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）与反义寡脱氧核苷酸的联合应用对胰腺癌细胞生长的影响。方法用ＴＮＦα和硫代正磷酸修饰的反义寡脱氧核苷酸对本室自建的胰腺癌细胞系（ＰＣ－２）进行处理，并与单独用药和未用药组进行对比。用细胞计数和噻唑蓝（ＭＴＴ）法分析细胞生长速度和增殖率，用ＲＴ－ＰＣＲ－ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｌｏｔ检测药物对靶基因表达的影响，并对细胞的凋亡状况进行原位检测。结果联合用药组较单独用药组使细胞生长速度减慢的作用明显加强；针对Ｋｉ－ｒａｓ和ｃ－ｍｙｃ帽区的反义硫代正磷酸修饰的寡脱氧核苷酸（简称反义Ｋｉ－ｒａｓ和反义ｃ－ｍｙｃ）可以明显抑制内源性靶基因Ｋｉ－ｒａｓ和ｃ－ｍｙｃ的表达；ＴＮＦα与反义Ｋｉ－ｒａｓ、反义ｃ－ｍｙｃ联合应用凋亡细胞发生率为８．０％和８．４％，高于其分别单独应用的５．２％、４．８％和５．４％。结论ＴＮＦα与反义寡脱氧核苷酸的联合应用对细胞生长的影响大于单独作用。     

ras癌基因产物P21与肿瘤胚胎蛋白AFP、CEA在人肝癌中表达的对比研究

应用同一组织连续石蜡切片免疫组化染色技术，检测了ＡＦＰ、ＣＥＡ与Ｐ２１￣（ｒａｓ）在人肝细胞癌及其癌旁肝组织中的免疫定位关系，并探讨了ＡＦＰ与Ｐ２１￣（ｒａｓ）在肝癌辅助诊断中的意义。结果显示（１）ＡＦＰ及Ｐ２１￣（ｒａｓ）较ＣＥＡ与肝细胞癌的关系更为密切，半数以上肝癌可同时表达ＡＦＰ与Ｐ２１￣（ｒａｓ）两种抗原，且二者在组织中的阳性分布极相似；（２）癌组织ＡＦＰ的阳性率显著高于癌旁，而Ｐ２１￣（ｒａｓ）与之相反。由此可见，ＡＦＰ作为肝细胞癌相对特异的标志物用于肝癌的辅助诊断优于Ｐ２１￣（ｒａｓ）；癌旁同时表达ＡＦＰ与Ｐ２１￣（ｒａｓ）的肝细胞很可能是已经启动的、尚未产生表型转化的、已具备肿瘤性增殖能力的癌前细胞群。     

四例食管癌细胞系的分子细胞遗传学研究

目的为了探索染色体异常与食管癌的关系。方法应用间期核荧光原位杂交、染色体涂染、比较基因组杂交，对我室建立的４例食管癌细胞系ＥＣ８７１２、ＥＣ８７３３、ＥＣ８５０１和ＥＣ１０９进行分子细胞遗传学研究。结果发现４例细胞系均有１、２、３、８、１６、１７、２０号染色体增加。除ＥＣ１０９源于女性患者外，另３例细胞系均有Ｙ染色体丢失。４例细胞系均有５ｐ扩增，ＥＣ８７３３和ＥＣ８５０１有８ｑ扩增，ＥＣ１０９有８ｑ２４扩增，ＥＣ８７１２、ＥＣ８７３３和ＥＣ８５０１有ｄｅｌ（１）（ｐ）。结论提示非随机的染色体畸变在食管癌发生中可能起重要作用     

唾液酸化的路易斯寡糖—X抗原在结直肠癌细胞系LoVo,HT29？…

目的 探讨唾液酯化的路易期寡糖－Ｘ（ＳＬｅＸ）抗原的表达与结直肠癌转移潜能的相关性。方法 采用原位分子杂交技术,检测结直肠癌细胞表面ＳＬｅＸ抗原合成酶－－α１,３岩藻糖转移酶（α１,３Ｆｕｃ－Ｔ）在高、低转移民生结直肠癌细胞系ＬｏＶｏ、ＨＴ２９细胞内的ｍＲＮＡ水平的表达,并应用免疫组化ＬＳＡＢ法,流式细胞仪,从定性、定量两个方面直接检测ＳＬｅＸ抗原在ＬｏＶｏ、ＨＴ２９细胞内蛋白水平的表达。结果 高