MTT比色法检测IL—2和杀伤细胞活性的研究

本文采用ＭＴＴ比色法测定了ＬＡＫ和ＴＩＬ细胞培养上清ＩＬ－２活性及ＬＡＫ细胞介导对体外培养的白血病细胞株的杀伤活性。结果表明ＬＡＫ细胞和ＴＩＬ细胞培养上清有较高的ＩＬ－２活性，可用于支持培养ＩＬ－２依赖株的生长；ＬＡＫ细胞对体外培养的白血病细胞株有明显的杀伤作用。其杀伤效应随效靶比例增加而增高；同时亦证明：活的白血病细胞数与ＭＴＴ甲赞形成产物呈直线相关性，提示通过ＭＴＴ法测定ＯＤ值能较好地反映活细     

γ—干扰素在淋巴细胞介导的子宫颈角化上皮细胞毒…

本研究以子宫颈角化上皮为靶细胞，用试管培养技术及非同位素细胞毒性试验，探讨了干扰素（ＩＦＮ－γ）对淋巴细胞介导的对宫颈角化上皮细胞毒作用的影响及细胞间吸附分子１（ＩＣＡＭ－１）与白细胞功能相关抗原１（ＬＦＡ－１）在细胞毒作用中的意义。结果显示ＣａＳｋｉ、Ｓｉｈａ、ＨｅＬａ、Ｗ１２及ＮＣｘ均为ＮＫ抵抗、ＬＡＫ敏感细胞。ＩＦＮ－γ预处理靶细胞明显增加ＬＡＫ细胞的杀伤活性，但对ＮＫ活性影响不大；ＩＦＮ－     

γ－干扰素在淋巴细胞介导的子宫颈角化上皮细胞毒作用中的意义

本研究以子宫颈角化上皮为靶细胞，用试管培养技术及非同位素细胞毒性试验，探讨了干扰素（ＩＦＮ－γ）对淋巴细胞介导的对宫颈角化上皮细胞毒作用的影响及细胞间吸附分子１（ＩＣＡＭ－１）与白细胞功能相关抗原１（ＬＦＡ－１）在细胞毒作用中的意义。结果显示ＣａＳｋｉ、ＳｉＨａ、ＨｅＬａ、Ｗ１２及ＮＣｘ均为ＮＫ抵抗、ＬＡＫ敏感细胞。ＩＦＮ－γ预处理靶细胞明显增加ＬＡＫ细胞的杀伤活性，但对ＮＫ活性影响不大；ＩＦＮ－γ预处理效应细胞可增强ＬＡＫ细胞对上述靶细胞的溶解作用，但并不改变ＮＫ对靶细胞的选择性；抗ＩＣＡＭ－１与ＬＦＡ－１单克隆抗体能有效地降低ＬＡＫ细胞对靶细胞的杀伤作用，而抗ＨＬＡＡＢＣ及ＨＬＡＤＲ则无此作用。提示ＩＦＮ－γ仅对ＬＡＫ细胞介导的对宫颈角化上皮的细胞毒作用有明显增强作用，而对ＮＫ细胞无明显影响；ＩＣＡＭ－１－ＬＦＡ－１通路为ＬＡＫ细胞结合并溶解靶细胞的主要通路，且这种细胞毒作用是非ＭＨＣ限制的。     

MTT比色法检测IL－2和杀伤细胞活性的研究

本文采用ＭＴＴ比色法测定了ＬＡＫ和ＴＩＬ细胞培养上清ＩＬ－２活性及ＬＡＫ细胞介导对体外培养的白血病细胞株的杀伤活性。结果表明ＬＡＫ细胞和ＴＩＬ细胞培养上清有较高的ＩＬ－２活性，可用于支持培养ＩＬ－２依赖株的生长；ＬＡＫ细胞对体外培养的白血病细胞株有明显的杀伤作用。其杀伤效应随效靶比例增加而增高；同时亦证明：活的白血病细胞数与ＭＴＴ甲赞形成产物呈直线相关性，提示通过ＭＴＴ法测定ＯＤ值能较好地反映活细胞数目及细胞毒效应。     

LAK及TIL对靶细胞杀伤活性中效靶作用的细胞表面物质基础

在LAK及TIL杀伤靶细胞过程中介导效靶作用的细胞表面分子主要包括细胞粘附分子(CAM)群类中的各种分子、其它一些尚未鉴定分属CAM大类的糖蛋白、糖脂、层粘连蛋白(laminin)类似物和波形纤维蛋白(vimentin)类似物等.这些分子是效靶特异识别、结合的物质基础.虽然TIL较LAK杀伤活性呈现对靶细胞的特异性,但两者均存在不同程度的非特异性.本文以介绍LAK及TIL杀伤活性中效靶作用的细胞表面分子为主,从单个细胞水平和效应细胞群体水平上解释其非特异性机制,以进一步了解LAK及TIL杀伤活性的实质.     

抵抗LAK细胞杀伤的胃癌细胞株的建立及生物学特性的研究

人胃癌细胞系ＭＧＣ－８０３经反复与ＬＡＫ细胞共培养十个周期，获得对ＬＡＫ细胞杀伤抵抗的特性，命名该细胞变株为ＭＧＣ－８０３Ｒ。当效靶比为４０∶１时，对该细胞变株的杀伤率仅为４０％，而对亲代细胞的杀伤率为９０％。用“冷”靶细胞抑制试验、电镜、ＦＡＣＳ及荧光标记技术分析，证实ＭＧＣ－８０３Ｒ细胞膜结合识别位点有改变，ＭＨＣ－Ⅰ表达升高，ＩＣＡＭ－１表达降低，相互粘附的细胞数减少，胞内Ｆ肌动蛋白小体消失，微丝恢复有序排列，细胞生长速率减慢。上述结果提示经免疫筛选对杀伤有抵抗的ＭＧＣ－８０３Ｒ细胞在生物学特性上有所改变。     

CD3AK过继性免疫治疗人脑胶质瘤实验及临床初步观察

取人脑胶质瘤患者周围静脉血，加入抗人ＣＤ３单抗诱导ＣＤ３ＡＫ，按不同效靶比与人脑胶质瘤细胞作用，同时以ＬＡＫ细胞组作对照。结果显示，ＣＤ３ＡＫ对胶质瘤细胞具有强大杀伤活性，效靶比越高，杀伤活性越强（Ｐ＜０．０５），其杀伤率明显高于ＬＡＫ细胞组（Ｐ＜０．０１）。临床应用ＣＤ３ＡＫ治疗脑胶质瘤患者，初步观察无明显副作用，且对患者免疫功能具有明显增强作用。     

自身LAK和肿瘤细胞在TIL大量扩增中的作用

将肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）分别与自身ＬＡＫ细胞、肿瘤细胞以及后二者共同混合培养，结果均使ＴＩＬ的体外扩增能力和细胞毒活性大为提高，体外扩增有效期和高细胞毒活性持续时间均较单纯ＩＬ－２培养的ＴＩＬ延长。以与自身ＬＡＫ和肿瘤细胞混合培养的ＴＩＬ对自身肿瘤的杀伤活性提高最明显。     

LICC对H＿（22）腹水型肝癌的抑制作用及对荷瘤鼠细胞免疫的影响

应用正交试验对影响ＬＩＣＣ的生成及其杀伤较大的因素（诱导时间，ＩＬ－２浓度，细胞毒细胞分化因子－ＣＣＤＦ，效应细胞与靶细胞的比例）进行筛选，以获得高杀伤活性的ＬＩＣＣ。对荷瘤动物分组用毛细管法进行白细胞移动抑制试验（ＭＩＴ），在Ｈ＿２２攻击后的第５周、第７周ＬＩＣＣ实验动物的ＭＩＴ阳性率明显高于对照组，其差异有显著性（Ｐ＜０．０５），提示ＬＩＣＣ能维持或提高机体对Ｈ＿２２的特异性细胞免疫功能。同时，实验组动物死亡率明显低于对照组，荷瘤存活时间较对照组也明显延长，提示ＬＩＣＣ对荷瘤动物有保护作用。是继ＬＡＫ细胞、ＴＩＬ细胞之后的又一种新型的肿瘤过继性免疫治疗细胞。     

脐血LAK细胞对白血病细胞杀伤作用研究

脐血ＬＡＫ细胞对白血病细胞杀伤作用研究李学荣（青岛医学院附属医院儿科青岛２６６００３）沈柏均，张洪泉，侯怀水，时庆，马秀峰（山东医科大学附院低温医学室济南２５００１２）据报道，脐血ＬＡＫ（ＣＢ－ＬＡＫ）对一些靶细胞株的杀伤活性至少与成人外周血ＬＡＫ（...     

MHC-Ⅰ类分子在肿瘤浸润性淋巴细胞识别人黑色素瘤细胞中的作用

应用人白细胞抗原－Ａ２阳性（ＨＬＡ－Ａ＋２）黑色素瘤病人的瘤块中分离得到的肿瘤浸润性淋巴细胞（ＴＩＬ），进行ＨＬＡ－Ａ２限制性ＴＩＬ抗人黑色素瘤细胞作用的研究。在实验中发现，ＴＩＬ对自身和同种异体的ＨＬＡ－Ａ＋２黑色素瘤细胞具有杀伤作用，而对ＨＬＡ－Ａ－２黑色素瘤细胞及ＨＬＡ－Ａ＋２非黑色素瘤细胞无作用。选择重组白细胞介素４（ｒＩＬ－４）＋肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）能促进黑色素瘤细胞ＨＬＡ－Ａ２表达量，并增强ＴＩＬ对瘤细胞的杀伤活性。抗ＣＤ３、抗ＨＬＡ－ＡＢＣ和抗ＨＬＡ－Ａ２单抗具有明显抑制ＴＩＬ的抗瘤细胞活性。结果表明ＴＩＬ杀伤黑色素瘤细胞依赖于Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）对瘤细胞共同抗原的识别，并有主要组织相容性复合体－Ⅰ类分子参与。     

人外周血树突状细胞在LAK抗HPBALL细胞中作用的研究

为探讨树突状细胞（ＤＣ）在ＬＡＫ抗ＨＰＢＡＬＬ细胞中的作用，采用多因素、多水平的杀伤试验，同时以光镜、电镜观察ＤＣ、ＬＡＫ、ＨＰＢＡＬＬ相互作用的形态特征及ＤＮＡ断端标记法检测瘤细胞是否凋亡。结果表明：（１）ＤＣ无直接杀伤ＨＰＢＡＬＬ作用。（２）５×１０５～１×１０７／ＬＤＣ有增强不同Ｅ／ＴＬＡＫ杀伤活性的趋势，而１×１０７～５×１０７／ＬＤＣ对ＬＡＫ活性有抑制趋势。（３）ＤＣ、ＬＡＫ杀伤ＨＰＢＡＬＬ的最佳组合条件为：ＤＣ培养４ｄ、浓度５×１０６／Ｌ，ＬＡＫＥ／Ｔ＝１０／１，ｒＩＬ－２＝０。（４）光镜、电镜下均可见ＤＣ的突起与ＬＡＫ、ＨＰＢＡＬＬ细胞紧密接触形成细胞簇。（５）ＤＮＡ断端标记法显示瘤细胞呈末端脱氧核糖核酸转移酶阳性反应。结论：ＤＣ对ＬＡＫ杀伤ＨＰＢＡＬＬ活性具有双向调节作用     

氧化苦参碱对LAK细胞活性的影响

ＬＡＫ细胞具有很强的广谱杀瘤作用，而氧化苦参碱具有较强的免疫抑制作用。本文研究了氧化苦参碱对ＬＡＫ细胞活力的影响，结果表明：氧化苦参碱可抑制ＩＬ－２对小鼠脾细胞的促增殖作用，并且对ＩＬ－２活化ＬＡＫ细胞杀伤Ｐ８１５的能力也有抑制作用。当ＩＬ－２（５００ｕ／ｍｌ）与２００μｇ／ｍｌ的氧化苦参碱共同孵育４ｄ后，可使ＬＡＫ细胞杀瘤能力（在效靶比为１００：１时）的８２．５％被抑制。同时氧化苦参碱本身对Ｐ８     

9.1C3分子抑制杀伤性细胞的细胞毒作用及其机制

目的 探讨９．１Ｃ３分子对杀伤细胞功能的影响。方法 以新鲜分离的ＰＢＭＣ或混合淋巴细胞培养活化的淋巴细胞为效应细胞,采用重导向杀伤实验（Ｒｅｄｉｒｅｃｔｅｄ ｋｉｌｌｉｎｇ ａｓｓａｙ,ＲＫＡ）观察９．１Ｃ３抗体效应细胞杀伤Ｐ８１５细胞作用及其杀伤过程中ＴＮＦ－α分泌的影响。结果 ９．１Ｃ抗体能显著抑制杀伤细胞对靶细胞的细胞毒作用,并使效应细胞分泌ＴＮＦ－α水平降低。结论：９．１Ｃ３分子是一种抑制     

LAK细胞识别,结合及杀伤肿瘤细胞分子机制的研究进展

ＬＡＫ细胞抗肿瘤机制二分复杂，可通过表面多种识别分子与肿瘤细胞表面配体分子相互识别结合，并释放多种杀伤介质直接杀伤肿瘤细胞，另外也可分泌多种细胞因子间接杀伤肿瘤细胞，本文重点介绍了ＬＡＫ细胞识别、结合、杀伤肿瘤细胞分子机制的一些最新进展，并控讨了肿瘤细胞抵抗ＬＡＫ细胞杀伤作用的分子机制。     

淋巴因子激活的NK细胞杀伤肿瘤细胞的免疫电镜观察

用胶体金标记的扫描与透射免疫电镜术观察ＣＤ１６＾＋淋巴因子激活的杀伤细胞杀伤肺腺癌细胞系ＬＴＥＰａ２或人红白血病细胞Ｋ５６２的过程。发现ＣＤ１６＾＋ＬＡＫ细胞能伸出分支的指状突起较深地插入肿瘤细胞浆内，造成靶细胞表面大小深浅不等的隐窝，及陷窝内局部细胞膜损伤，在ＣＤ１６＾＋ＬＡＫ细胞这种指状突起基底部附近的浆内，有大量胞浆颗粒与囊泡聚集。靶细胞被攻击后常发生凋落型死亡。同时可见坏死型死亡。说明ＣＤ     

转移因子和免疫核糖核酸对LAK细胞抗肿瘤活性的影响

本研究用重组白细胞介素２（ｒＩＬ－２）联合转移因子（ＴＦ）或抗肿瘤免疫核糖核酸（ｉＲＮＡ）作用于外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ），测定其对Ｋ５６２，Ｒａｊｉ及Ｈ７４０４细胞的杀伤活性。结果发现，高浓度ＴＦ（０．２５ｕ／ｍｌ）可抑制ＬＡＫ活性，ＴＦ进一步稀释（０．１２５ｕ／ｍｌ）可使其抑制作用消失。ＴＦ和抗肿瘤ｉＲＮＡ不能进一步提高最适剂量ｒＩＬ－２（５００ｕ／ｍｌ）诱导的ＬＡＫ活性，但能显著增强亚适剂量ｒＩＬ－２（２００ｕ／ｍｌ）诱导的ＬＡＫ活性，诱导ＬＡＫ活性增高的ＴＦ最适剂量为０．０３１ｕ／ｍｌ。ＴＦ或抗肿瘤ｉＲＮＡ单独不能诱导出ＬＡＫ活性，而当两者联合应用可诱导ＰＢＭＣ产生ＬＡＫ活性。本文为ＴＦ及抗肿瘤ｉＲＮＡ协同ＬＡＫ细胞疗法在临床应用提供实验基础。     

抗MHC I类单抗对NK细胞杀伤能力的影响

探讨ＮＫ细胞杀务与靶细胞表面ＭＨＣＩ类分子的关系。方法用ＨＬＡ－ＡＢＣ单抗培养上清或腹水封闭靶细胞Ｋ５６２表面的ＨＬＡ－ＡＢＣ分子后,分别观察了外周血新鲜ＮＫ细胞、纯化ＮＫ细胞、ＬＡＫ细胞和ＣＤ３ＡＫ细胞对Ｋ５６２细胞杀伤能力的变化。     

MHC－I类分子在诱导肿瘤浸润淋巴细胞细胞毒活性中的作用

选用Ｈ＿２２（小鼠肝癌）、Ｂ＿１６（小鼠黑色素瘤）和Ｅ＿（１０）（小鼠淋巴瘤）三种动物模型分离肿瘤浸润淋巴细胞（ＴｕｍｏｒｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇＬｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ，ＴＩＬｓ），在含ＩＬ－２２００Ｕ／ｍｌ的培养系统中以６０钴灭活自身瘤细胞，周期性刺激进行扩增。实验发现，被选用的三种动物瘤株中。仅从Ｅ＿（１０）淋巴瘤分离的ＴＩＬ显示明显的增殖和对自身瘤细胞的杀伤活性。对三种瘤株体外ＭＨＣ限制性观察结果表明，未测出Ｈ＿（２２）、Ｂ＿（１６）瘤株细胞表达Ｋ￣ｂ、Ｄ￣ｂ、Ｋ￣ｋ、Ｄ￣ｋ、Ｋ￣ｄ、Ｄ￣ｄ位点编码的ＭＨＣ－Ｉ类分子，而Ｅ＿（１０）瘤细胞则表达强阳性的Ｋ￣ｂ、Ｄ￣ｂ位点编码的ＭＨＣ－Ｉ类分子。此外，Ｈ＿（２２）、Ｂ＿（１６）瘤细胞可在多种品系（Ｃ＿（５７）ＢＬ／６、Ｃ＿３Ｈ、Ｂａｌｂ／Ｃ及昆明种）小鼠中生长，而Ｅ＿（１０）瘤株只限制在Ｃ＿（５７）ＢＬ／６品系小鼠中生长。     

340例恶性肿瘤病人NK、LAK细胞杀伤活性分析

３４０例恶性肿瘤病人ＮＫ、ＬＡＫ细胞杀伤活性分析刘红（北京军区总医院中医科北京１００７００）黄雪强（第二军医大学附属长海医院中医科上海２００４３３）本文以１２５Ｉ－ＵｄＲ标记的Ｋ５６２细胞及ＳＰＣ－Ａ－１细胞分别作为ＮＫ、ＬＡＫ的靶细胞，对３４０例恶...