木香烃内酯诱导卵巢癌细胞凋亡机制研究

目的研究木香烃内酯对卵巢癌细胞的作用。方法通过MTT法检测木香烃内酯对卵巢癌细胞的生长抑制作用,采用流式细胞仪检测木香烃内酯对卵巢癌细胞的凋亡诱导作用,采用RT-PCR分析木香烃内酯对NF-κB基因表达的影响,采用Western Blot分析木香烃内酯对NF-κB以及凋亡相关蛋白Caspase-3和Caspase-9的影响。结果木香烃内酯能够浓度依赖性地抑制卵巢癌细胞的生长和诱导卵巢癌细胞的凋亡,能够抑制NF-κB基因表达和NF-κB蛋白、Caspase-3蛋白、Caspase-9蛋白表达。结论木香烃内酯可通过抑制NF-κB基因及蛋白表达,激活Caspase-3和Caspase-9而诱导卵巢癌细胞的凋亡。     

木香中去氢木香内酯和木香烃内酯提取工艺优选

目的:优选木香中去氢木香内酯和木香烃内酯的提取工艺。方法:以木香烃内酯和去氢木香内酯提取率为指标,采用单因素试验考察提取方法;以木香烃内酯和去氢木香内酯提取率为指标,选取乙醇体积分数、料液比、提取时间及提取次数为考察因素,通过正交试验优选2种内酯的提取工艺。结果:最佳提取工艺为采用乙醇温浸法,加6倍量90%乙醇于40℃温浸提取2次,每次2 h。木香烃内酯提取率92.3%,去氢木香内酯提取率94.1%,得膏率12.7%。结论:优选的提取工艺稳定可行,木香中2种内酯的提取率高,适用于工业大生产。     

六味木香散中木香烃内酯去氢木香内酯的含量测定

目的:建立六味木香散中木香的主要有效成分木香烃内酯、去氢木香内酯的含量测定方法。方法:采用反相高效液相色谱法,Allteah C_(18)色谱柱(5μm,250mm×4.6mm),流动相为甲醇-水(65:35),流速为1.0ml/min,检测波长为225nm。结果:木香烃内酯线性范围为119.48ng～1792.2ng(r=0.999)、去氢木香内酯线性范围为122.84ng～1842.6ng(r=0.999),平均加样回收率为100.3%、99.8%。结论:该方法灵敏、准确、重复性好,具有专属性。     

去氢木香内酯诱导乳腺癌SK-BR-3 细胞凋亡的机制研究

目的观察去氢木香内酯(Dehydrocostuslactone,Dehy)对乳腺癌SK-BR-3细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其分子机制。方法体外培养乳腺癌SK-BR-3细胞,分别加入不同浓度Dehy(5、10、20、30、40、50、60、80、100μmol·L-1)作用24、48、72 h,采用CCK-8法检测细胞增殖抑制率。将SK-BR-3细胞分为空白对照组(0μmol·L-1)和Dehy 10、20、30μmol·L-1浓度组,干预48 h后,利用倒置显微镜观察乳腺癌SK-BR-3细胞的形态;采用流式细胞术检测细胞周期;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;Hoechst 33258荧光染色法检测细胞凋亡的形态学变化;Western Blot法检测Bcl-2、Bax、Caspase-3和Cleaved Caspase-3蛋白的表达。结果Dehy干预SK-BR-3细胞24、48、72 h后的IC50值分别为24.84、19.39、11.45μmol·L-1,且呈现浓度和时间依赖性。与空白对照组比较,Dehy 10、20、30μmol·L-1浓度组的SK-BR-3细胞数量明显减少,细胞结构松散、轮廓消失、变圆,贴壁不良;Dehy 10、20、30μmol·L-1浓度组的G2/M期细胞比例及细胞凋亡率均显著升高(P<0.05,P<0.01),呈明显的浓度依赖性;Dehy 10、20、30μmol·L-1浓度组的SK-BR-3细胞出现不同程度的细胞核浓染、固缩及碎裂等凋亡现象,且细胞核致密浓染的比例显著升高(P<0.05,P<0.01);Dehy 10、20、30μmol·L-1浓度组的Bax、Caspase-3和Cleaved Caspase-3蛋白表达显著上调(P<0.05,P<0.01),Bcl-2蛋白表达明显下调(P<0.05,P<0.01),Bax/Bcl-2比值明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论Dehy能够抑制乳腺癌SK-BR-3细胞的增殖及诱导其凋亡,可能与其调控Bax/Bcl-2/Caspase-3凋亡信号通路来抑制乳腺癌细胞的抗凋亡能力有关。     

木香炮制品中木香烃内酯和去氢木香内酯的HPLC测定

木香系菊科植物木香Aucklandia lappa Decne.的干燥根,味苦,性辛温,归脾、胃、大肠、胆、三焦经,具有行气止痛、消食健脾之功效。木香烃内酯和去氢木香内酯是木香的主要活性成分之一。木香烃内酯具有利胆和抑制溃疡,抑制由KCl诱导的主动脉收缩[1],诱导癌细胞凋亡的作用[2]。木香的炮制方法有蒸制、酒制(酒泡)、煨制(面煨、纸煨、麸煨)和清炒等[3],现在多用煨法和清炒法。本实验采用HPLC法测定木香生品及其不同炮制品中木香烃内酯和去氢木香内酯的变化,探讨其炮制机制。1材料与仪器木香购于广东广弘药材有限公司,经南方医科大学中医药学…     

提取木香中木香烃内酯及去氢木香内酯影响因素的初步研究

目的 考察溶媒、温度、加热时间对木香活性成分木香烃内酯和去氢木香内酯的影响.方法 用水和乙醇回流提取木香,分别将其提取物控制在不同的温度和时间范围内加热,用HPLC法测定木香烃内酯和去氢木香内酯的含量变化.结果 醇提取物中木香烃内酯和去氢木香内酯的含量远远高于水提取物,以乙醇为溶媒,两成分含量变化小;以水为溶媒,随着温度升高,加热时间延长,两成分下降明显,尤其是木香烃内酯.结论 溶媒、温度对木香烃内酯影响最为显著,时间因素次之,在含有木香的制剂工艺制备过程中要充分考虑这些影响因素,最大程度地保留有效成分.     

HPLC法测定六味木香胶囊中木香烃内酯和去氢木香内酯

目的建立以HPLC法测定六味木香胶囊中木香烃内酯和去氢木香内酯的方法。方法色谱柱为VP-ODS柱(250mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-水(72∶28),检测波长为225 nm,柱温为25℃,体积流量为1.0 mL/min。结果木香烃内酯、去氢木香内酯进样量分别在203.12~2 031.20、207.84~2 078.40 ng与峰面积积分值呈良好的线性关系(r=0.999 9);平均回收率分别为101.1%、101.2%,RSD分别为0.48%、0.73%(n=6)。结论建立的方法简便、准确、重复性好、专属性强,可用于该制剂的质量控制和评价。     

超临界流体色谱分离纯化木香中的木香烃内酯和去氢木香内酯

目的:建立超临界流体色谱(supercritical fluid chromatography,SFC)分离纯化木香中的木香烃内酯和去氢木香内酯的方法。方法:采用超临界二氧化碳(supercritical carbon dioxide,SC-CO2)作流动相,探究各个条件对SFC分离过程的影响,利用半制备型超临界流体色谱对木香粗提物进行分离纯化,采用高效液相色谱法和核磁共振对得到的化合物进行纯度分析和结构鉴定,并研究色谱过程的热力学规律。结果:采用YMC-C_(18)色谱柱(10 mm×250 mm,5μm),流动相SC-CO2,0. 13%甲醇为改性剂,流速12. 0 m L·min~(-1),背压13 MPa,柱温318℃,检测波长225 nm,重复进样20次,粗提物进样量4 mg,根据色谱图收集各个目标成分。经高效液相色谱测定分离纯化后的化合物纯度均 99%,经核磁共振确定其结构为木香烃内酯和去氢木香内酯。在此色谱条件下SFC分离过程为正相色谱过程。结论:该方法分离纯化得到的成分纯度高,有机溶剂残留少,可用于木香中木香烃内酯和去氢木香内酯的高效快速制备。     

HPLC测定木香槟榔丸中 木香烃内酯和去氢木香内酯的含量

目的:建立木香槟榔丸中木香烃内酯和去氢木香内酯的含量测定方法。方法:采用HPLC,色谱柱为Agilent C18(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相甲醇-水(65∶35),检测波长225 nm,柱温30℃,流速1.0 mL.min-1。结果:木香烃内酯和去氢木香内酯的线性范围分别为0.046 4～0.3 712μg(r=0.999 6)和0.045 2～0.361 6μg(r=0.999 5);平均加样回收率分别为99.0%(RSD 0.86%,n=6)和99.2%(RSD 0.23%,n=6)。结论:该法简便,快速,结果准确,重复性好,可用于控制木香槟榔丸的质量。     

不同产地和采收时间木香药材中木香烃内酯和去氢木香内酯的测定

目的:测定不同产地和采收时间木香药材中木香烃内酯和去氢木香内酯的含量.方法:采用高效液相色谱法,色谱柱为Venusil XBP C18(4.6 mm×250 mm,5μrn),以甲醇-水(65:35)为流动相,检测波长225 nm,流速1.0 mL· min-1,柱温30℃.结果:木香烃内酯线性范围为0.2～3.0 μg(r =0.9997),去氢木香内酯线性范围为0.2～3.0 μg(r =0.9998),木香烃内酯、去氢木香内酯回收率分别为99.27％,99.46％.结论:不同产地木香药材在9～12月期间采收均符合药典标准,10月份云南采收木香质量最佳.     

稳心颗粒对心律失常大鼠凋亡、炎症及氧化应激的影响

目的 探讨稳心颗粒对心律失常大鼠凋亡、炎症及氧化应激的影响。方法 60只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组及稳心颗粒低、中、高剂量（1.34、2.68、5.36 g/kg）组和胺碘酮（35.7 mg/kg）组。各组大鼠连续预防性给药21 d,对照组和模型组ig纯水。末次给药后1 h将大鼠麻醉,尾iv乌头碱以诱导心律失常。采用多道生理信号采集处理系统记录大鼠注射乌头碱前后的心电图变化;采用苏木素-伊红（HE）、Masson染色观察心肌组织病理损伤情况;TUNEL染色观察心肌细胞凋亡情况;采用试剂盒检测血清中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性及丙二醛（malonaldehyde,MDA）、还原型谷胱甘肽（glutathione,GSH）、白细胞介素-18(interleukin-18,IL-18)、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平;采用Western blotting检测心肌组织兰尼碱受体2(ryanodine receptor 2,RYR2)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-li...     

白藜芦醇抑制人脑胶质瘤U251细胞增殖及诱导其凋亡的实验研究

目的研究白藜芦醇对人脑胶质瘤细胞U251细胞生长抑制及诱导细胞凋亡的作用。方法采用MTT法检测白藜芦醇对U251细胞的增殖活性的影响,采用流式细胞仪检测白藜芦醇对U251细胞早期、晚期凋亡率的影响,用倒置显微镜观察不同浓度的白藜芦醇作用后U251细胞的形态学改变。结果白藜芦醇对U251脑胶质瘤生长有抑制作用,且具时间及剂量依赖性;白藜芦醇能诱导U251细胞早、晚期凋亡,且具时间及剂量依赖性。结论白藜芦醇能抑制U251脑胶质瘤的增殖并能诱导细胞凋亡。     

重楼皂苷D对人胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响

重楼皂苷D(polyphyllin D)是重楼中的一种甾体皂苷单体,具有抗菌、镇痛、镇静、抗肿瘤等多种药理作用,但在胰腺癌中少有报道。该研究通过检测凋亡相关指标,探讨polyphyllin D对人胰腺癌Panc-1细胞增殖和凋亡的影响及相关作用机制。采用CCK-8法检测不同浓度的(0,1,2,3,4,5μg·μL-1)polyphyllin D分别处理胰腺癌Panc-1细胞24,48,72 h后,观察对细胞增殖的影响。采用流式细胞术对细胞周期、细胞线粒体膜电位(mitochondrial membrane protential,MMP)进行检测,Annexin-V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况,Western blot法检测细胞色素C (cytochrome C,Cyto C),Bax,Bcl-2,cleaved caspase-3,cleaved caspase-9的蛋白表达情况。结果表明,与对照组相比,polyphyllin D能够时间和浓度依赖性地抑制Panc-1细胞的增殖活性。流式细胞术检测显示polyphyllin D能浓度依赖性使细胞阻滞于S期和G2/M期,MMP明显降低,细胞凋亡率随polyphyllin D作用浓度增加而增加。Western blot结果显示,polyphyllin D能浓度依赖性地上调Bax,Cyto C,cleaved caspase-3和cleaved caspase-9的蛋白表达水平,下调Bcl-2的蛋白表达水平。以上研究结果提示,polyphyllin D能抑制胰腺癌Panc-1细胞的增殖,其机制可能与阻滞细胞的生长周期以及通过线粒体途径诱导细胞的凋亡相关。     

Citrus fruit flavonoids influence on neutrophil apoptosis and oxidative metabolism

Citrus flavonoids are dietary antioxidants that may protect against oxidative stress linked to inflammation and reduce the risk of macromolecule damage caused by free radicals. Three citrus flavonoids - naringin, naringenin and hesperidin - have been examined for their ability to activate caspase-3, a marker of apoptosis execution, in human polymorphonuclear neutrophils in vitro, stimulated and non-stimulated with phorbol 12-myristate 13-acetate. The flavonoid potency to reduce reactive oxygen species generation was also assessed in measurements of superoxide radical and luminol dependent chemiluminescence. The caspase-3 activity depended on the time of flavonoid treatment and was increased markedly in phorbol-treated cells incubated with flavonoids for 24 h. Hesperidin at a concentration of 100 microm exerted the strongest stimulating effect on the enzyme (137% of control). Flavonoids inhibited the neutrophil ability to generate superoxide radical and 10-100 microM hesperidin appeared the most active phytochemical. The antioxidant capacity of the examined flavonoids was most prominently expressed in the chemiluminescent measurements. The obtained results suggest that reactive oxygen species may inhibit apoptosis via caspase-3 inhibition and the antioxidant action of citrus flavonoids may reverse this process.     

莫诺苷抑制H2O2诱导的神经细胞凋亡

目的：研究莫诺苷对氧化应急诱导的神经细胞凋亡的影响。方法：培养的人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)神经细胞加入莫诺苷(1,10,100 μmol·L^-1)预孵育24 h，加入H₂O₂(500 μmol·L^-1) 作用18 h诱导产生氧化损伤，测定对细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响；用Western blot方法检测caspase-3,caspase- 9，Bcl-2和Bax的表达。结果：莫诺苷(10,100 μmol·L^-1)抑制氧化损伤，与模型组相比，SOD活性分别增加了14%(P<0.01)和11%(P<0.05)；莫诺苷(1,10,100 μmol·L^-1) 与模型组相比，caspase-3的含量分别减少了31%(P<0.01)，103%(P<0.001)和95%(P<0.001)，caspase-9的含量分别减少了71%(P<0.001)，132%(P<0.001)和37%(P<0.05)，Bcl-2分别增加了88%(P<0.01),121%(P<0.001)和60%(P<0.01)，对Bax没有影响。结论：莫诺苷可通过抗氧化作用抑制H₂O₂诱导的神经细胞凋亡，具有神经保护作用。     

天麻素联合异钩藤碱抑制MPP+诱导的PC12细胞凋亡的抗氧化机制

天麻-钩藤药对是临床治疗帕金森病出现频次最高的药对,天麻素和异钩藤碱是天麻-钩藤药对抗帕金森病的主要有效成分.为了观察天麻素联合异钩藤碱对1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium,MPP+)诱导的PC12细胞凋亡的影响及探讨其抗氧化机制,该研究采用分光光度法检测细胞上清液乳酸脱...     

白藜芦醇对高糖诱导足细胞损伤的改善作用及机制探讨

[目的]观察白藜芦醇(RSV)对高糖诱导足细胞凋亡的影响及作用机制。[方法]采用体外高糖诱导作为足细胞损伤模型,细胞分为3组:对照组为5 mmol/L低糖培养液(LG);模型组为30 mmol/L高糖培养液(HG);RSV干预组:HG+5μmol/L RSV;HG+10μmol/L RSV,培养48 h后采用流式细胞术检测足细胞的凋亡情况;DHE探针观察细胞内活性氧自由基(ROS)生成;激光共聚焦检测线粒体膜电位及线粒体内ROS合成;Western blot检测线粒体凋亡途径相关蛋白含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)3、caspase 9的表达情况。[结果]与HG组相比,RSV可呈剂量依赖性的抑制高糖诱导的足细胞凋亡;荧光探针结果显示,RSV干预后细胞内及线粒体ROS生成明显低于HG组;JC-1染色显示,与HG组相比,RSV干预可显著提高线粒体膜电位;Western blot结果显示,随RSV干预浓度的提高,caspase 3、caspase 9表达水平明显下调,差异具有统计学意义(P0.05)。[结论]RSV呈浓度依赖性的抑制高糖诱导的足细胞凋亡,其保护作用可能与抑制氧化应激,改善线粒体功能障碍相关。     

一氧化氮诱导体外人气管平滑肌细胞凋亡

目的 观察一氧化氮（NO）是否在体外诱导人气管平滑肌细胞（airway smooth muscle,ASMCs）凋亡。方法 ASMCs用SNAP或SNP或8－溴－环磷酸鸟苷（8－Br-cGMP）处理。通过四甲基偶氮唑盐（dimethythiazol-zay17-2,5diphenylte-trazdium,MTT）法在6、，12，18，24，36h检测SNAP或SNP或8－Br-cGMP对细胞生长的作用。电镜、琼脂糖电泳、原位末端标记和免疫组化链霉菌抗生素蛋白－过氧化酶（streptavidin-peroxidase，SP）法技术用于检测凋亡。结果 ①SNAP组和SNP组ASMc存活的数量降低，而对照组和cGMP组无变化（P＜0．01）。②SNAP组和SNP组电镜显示核皱缩，染色体浓聚和凋亡小体形成。③用SNAP或SNP处理，ASMCs的凋亡指数显著升高（P＜0．01），但对照组成8－Br-CGMP组没有不同。④在SNAP或SNP组，琼脂糖电泳代表了核苷酸DNA长度整倍数的特征性的DNA梯状条带（大约180－200bp）。⑤SNAP或SNP在体外以时间和剂量表达显著高于对照组或8－Br-cGMP组，但Bcl－2基因表达是低于对照组或8－Br-cGMP组。结论 ①NO在体外以时间和剂量依赖的方式诱导人ASMCs凋亡。②NO这些作用通过的通路不涉及到鸟苷酸环化酶和cGMP依赖的蛋白激酶。③对人ASMCs的这种负性调节机制也许与治疗哮喘的气道重建有关。     

淫羊藿素对人卵巢癌SKOV3细胞增殖抑制及促凋亡作用

基于PI3K/Akt信号通路,观察人卵巢癌SKOV3细胞在不同浓度淫羊藿素(icaritin)干预下的增殖与凋亡变化过程,探讨可能存在的分子机制.研究对象为人卵巢癌细胞SKOV3,设置空白对照组和淫羊藿素不同浓度组(5,10,20μmol· L-1),药物干预48 h,采用cell counting kit-8 (CC...     

In vitro effects of beetroot juice and chips on oxidative metabolism and apoptosis in neutrophils from obese individuals

Oxidative stress and inflammation are involved in the development of obesity. Beetroot (Beta vulgaris var. rubra) is a food ingredient containing betalain pigments that show antioxidant activity. The in vitro effect of beetroot juice and chips on oxidative metabolism and apoptosis in neutrophils from obese individuals has been investigated. Fifteen obese women (aged 45 +/- 9 years, BMI >30 kg/m2) and nine healthy controls (women, aged 29 +/- 11 years, BMI = 22.2 +/- 1.6 kg/m2) were examined. The investigated products were used as concentrates and after transport and digestion in an artificial gastrointestinal tract. Neutrophil oxidant production, in response to phorbol 12-myristate 13-acetate, was characterized by luminol-dependent chemiluminescence and a flow cytometric dichlorofluorescin oxidation assay. Caspase-3 activity, a marker of apoptosis, was measured by cleavage of the fluorogenic substrate Ac-DEVD-AMC. Neutrophils from obese individuals had a significantly higher ROS production compared with the controls (p < 0.05). Beetroot products inhibited neutrophil oxidative metabolism in a concentration-dependent manner. Also observed were the pro-apoptotic effects of beetroot at a concentration range of 0.1-10% in 24 h culture of stimulated neutrophils. These natural products (in both the liquid and solid state) have antioxidant and antiinflammatory capacity, and could be an important adjunct in the treatment of obesity.