miR-149促进鼻咽癌细胞侵袭和上皮-间质转变

目的:探讨miR-149在鼻咽癌中的功能和机制.方法:Real-time PCR和2-△△Ct 计算方法验证miR-149在鼻咽癌细胞系中的表达,分别应用MTT实验、划痕实验和transwell迁移实验分析miR-149对鼻咽癌细胞的增殖、迁移和侵袭功能的影响.Western印迹检测E-cadherin的变化.结果:相...     

miR-33-5p靶向调控JNK1/c-Jun通路降低口腔鳞状细胞癌多重耐药性

目的 探讨miR-33-5p调控c-Jun氨基末端激酶1(JNK1)通路对人口腔鳞状细胞癌多重耐药性的影响.方法 CAL-27细胞分为CAL-27组、CAL-27/CBP组、CAL-27/CBP+scramble inhibitor组、CAL-27/CBP+miR-33-5 p inhibi-tor组,卡铂(CBP)诱...     

miR-149-5p在肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的分析miR-149-5p在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中的表达及其临床意义。方法应用qRT-PCR方法检测40对HCC癌组织和癌旁肝组织中miR-149-5p的表达,并分析miR-149-5p的表达与肝癌患者临床病理之间的关系,进一步将以红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)为报告基因的miR-149-5p慢病毒(LV-miR-149-5p)感染MHCC97-H肝癌细胞,以过表达miR-149-5p,采用MTT检测感染后细胞增殖的变化,采用流式细胞仪测定感染后细胞周期的变化,并采用Transwell侵袭实验检测感染后细胞的体外侵袭能力的变化。结果 qRT-PCR结果提示miR-149-5p在HCC癌组织中的相对含量(5.522±1.104)低于癌旁肝组织(9.279±1.594)(P<0.05),统计分析表明miR-149-5p在癌和癌旁肝组织中相对含量的比值与AFP含量负相关(P<0.05)。体外实验证实,miR-149-5p过表达不能影响细胞周期但能抑制细胞增殖(P<0.05),而在Transwell侵袭实验中,LV-miR-149-5p感染MHCC97-H细胞后,对照细胞组透膜细胞数为(86.3±11.8)/视野,对照慢病毒组透膜细胞数为(83.7±4.0)/视野,LV-miR-149-5p组透膜细胞数为(50.6±3.4)/视野,实验组细胞侵袭能力较对照组细胞显著降低(P<0.05)。结论 miR-149-5p的过表达可抑制MHCC97-H细胞的增殖和侵袭,因此,miR-149-5p可作为一种抑癌基因在HCC的诊断及治疗中发挥作用。     

miR-139-5p靶向Notch1抑制前列腺癌细胞上皮间质转化与转移

目的 探讨miR-139-5p靶向调节Notch1表达对前列腺癌(PCa)细胞上皮间质转化(EMT)和转移能力的影响。方法 收集福建医科大学附属泉州第一医院泌尿外科手术切除的PCa组织标本,购买PCa细胞系,分别以良性前列腺增生(BPH)标本和人前列腺上皮细胞系为对照。采用qRT-PCR实验和Western-blot实验分别检测组织和细胞中miR-139-5p和Notch1的表达;采用双荧光素酶报告实验验证miR-139-5p与Notch1的靶向关系;采用Western-blot实验检测细胞EMT标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和Vimentin蛋白水平;采用Transwell实验检测细胞迁移能力;采用裸鼠尾静脉注射肿瘤细胞的方式建模,评估肺部肿瘤转移灶的情况。结果 在组织学和细胞水平上,与BPH组织比较,前列腺癌miR-139-5p低表达,而Notch1高表达,差别有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,高表达miR-139-5p的PC-3细胞E-cadherin表达升高,N-cadherin和Vimentin表达降低;Tra...     

miR-7在口腔鳞状细胞癌中的表达及潜在临床意义

目的 研究miR-7在口腔鳞状细胞癌(OSCC)中的表达及潜在临床意义.方法 获取原发性OSCC患者肿瘤组织53例及正常健康组织27 例,利用qRT-PCR检测各组织中miR-7的表达,并分析其与上皮间质转化的相关性.利用质粒转染技术将含miR-7 序列片段的质粒导入OSCC细胞株SCC9中,通过建立过表达miR-7 的SCC9 细胞进一步验证miR-7与OSCC上皮间质转化的关系.结果 与健康组 织比较,miR-7 在 OSCC 肿瘤组织中的表达显著降低( P ＜0. 01);miR-7的表达与上皮间质转化过程呈显著相关性(P＜0. 001).与对照组细胞比较,过表达miR-7促进SCC9细胞E-cadherin的表达,抑制 Fibronectin 的表达( P ＜0. 01).结论 miR-7在OSCC中低表达,与上皮间质转化过程高度相关.     

miR-149-5p通过靶向AEBP1调控胃癌细胞的迁移侵袭

目的：探讨miR-149-5p对胃癌细胞迁移侵袭能力的影响及分子机制。方法：qRT-PCR检测胃癌细胞株和组织标本中miR-149-5p的表达,分析其表达水平与胃癌患者临床病理特征参数及预后的相关性,建立过表达和干扰miR-149-5p的胃癌细胞株,Transwell实验检测miR-149-5p表达水平对胃癌癌细胞迁移侵袭能力的影响;生物信息学网站预测miR-149-5p的靶基因,采用荧光素酶报告基因实验加以验证。结果：miR-149-5p在胃癌组织和细胞株中均低表达（均P<0.05）。miR-149-5p的表达水平与胃癌患者的浸润深度（P=0.016）、淋巴结转移（P=0.001）和TNM分期（P=0.023）相关。miR-149-5p低表达是胃癌患者总生存期的独立危险因素。与对照组相比,miR-149-5p mimics明显抑制胃癌细胞的迁移侵袭能力（均P<0.01）,而转染miR-149-5p inhibitors后得到了相反的结果（均P<0.05）。miR-149-5p靶向调控脂肪细胞增强结合蛋白1(Adipocyte enhancer binding pro...     

miR-216a-3p miR-128-3p通过调控RGS17抑制口腔鳞状细胞癌细胞表型恶化的机制研究

目的:观察miR-216a-3p、miR-128-3p对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞表型表达的影响,并探究其潜在的作用机制。方法:运用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测癌组织、癌旁组织、人正常口腔角质形成细胞(hNOK)、OSCC癌细胞(SCC-9、SCC-25、HN4)中miR-216a-3p、miR-128-3p、G蛋白信号调节器17(RGS17)的表达;脂质体法将mimic-NC组(转染mimic)、mimic-miR-216a-3p组(转染miR-216a-3p mimic)、mimic-miR-128-3p组(转染miR-128-3p mimic)、si-NC组(转染si-NC)、si-RGS17组(转染si-RGS17)、mimic-miR-216a-3p+pcDNA组(共转染miR-216a-3p mimic和pcDNA)、mimic-miR-216a-3p+pcDNA-RGS17组(共转染miR-216a-3p mimic和pcDNA-RGS17)、mimic-miR-128-3p+pcDNA组(共转染miR-128-3p mimic和pcDNA)...     

HOXA11-AS/miR-149-3p通路在肺鳞状细胞癌中的作用及机制研究

目的 探究长链非编码RNA HOXA11-AS在肺鳞状细胞癌发生过程中的确切机制。方法 采用定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测HOXA11-AS、miR-149-3p和SPT16表达变化。并通过MTT法检测细胞活力。双荧光素酶报告基因检测miR-149-3p与HOXA11-AS或SPT16的互作关系。结果 在肺鳞状细胞癌组织和细胞中HOXA11-AS和SPT16的表达升高,而miR-149-3p的表达降低。miR-149-3p是HOXA11-AS的作用靶点,而SPT16是miR-149-3p的作用靶点。HOXA11-AS的敲低抑制了肺鳞状细胞癌细胞的增殖能力,而使用miR-149-3p抑制剂可拮抗HOXA11-AS敲低对肺鳞状细胞癌细胞增殖的抑制作用。此外,上调SPT16可减弱si-HOXA11-AS介导的肺鳞状细胞癌细胞的抗增殖作用。结论HOXA11-AS的敲低可通过调控miR-149-3p/SPT16轴在肺鳞状细胞癌中发挥抑癌作用。     

miR-454-3p通过靶向STAT3调控CNE-2人鼻咽癌细胞上皮-间质转化

目的：探讨miR-454-3p和STAT3在鼻咽癌组织中的表达情况,以及miR-454-3p靶向STAT3对鼻咽癌细胞上皮-间质转化的影响。方法：收集2023年6月～8月右江民族医学院附属医院和百色市人民医院的鼻咽癌组织和正常组织各5例,采用qRT-PCR检测各样本中miR-454-3p与STAT3的表达情况;以未处理的鼻咽癌细胞CNE-2作为空白对照组(blank group),采用Lipofectamine^TM 3000将miR-454-3p mimics、mimics NC(negative control)、miR-454-3p inhibitor、inhibitor NC(negative control)分别转染CNE-2细胞作为miR-454-3p mimics组、mimics NC组、miR-454-3p inhibitor组、inhibitor NC组;利用Targetscan预测miR-454-3p与STAT3的靶向关系并用双荧光素酶实验验证;分别采用qRT-PCR检测转染效率及转染后STAT3的mRNA水平变化;划痕愈合实验、Transwel...     

miR-365-3p抑制CDK-10表达对口腔鳞癌细胞增殖、凋亡和周期的影响

目的探讨miR-365-3p通过周期素依赖性激酶-10(CDK-10)影响口腔鳞癌(OSCC)细胞增殖、凋亡与周期的机制。方法收集在本院就诊的40例口腔鳞癌患者肿瘤组织样本及癌旁正常组织样本,检测其miR-365-3p和CDK-10表达水平。随机将人舌鳞癌细胞系(CAL-27)分为空白组、对照组及miR-365-3p三组。对照组与miR-365-3p组分别转染miR-365-3p NC与miR-365-3p mimic,空白组不进行转染。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测miR-365-3p表达,CCK-8法及流式细胞术(FCM)检测细胞周期和细胞凋亡。qPCR和Western blot检测CDK-10的表达水平。结果相较于对照组与空白组,miR-365-3p在miR-365-3p组的表达水平显著升高(P＜0.05),细胞增殖指数显著降低(P＜0.05);细胞凋亡水平显著升高(P＜0.05)。转染72 h后,相较于空白组与对照组,miR-365-3p组G1期比例显著降低(P＜0.05),S期+G2期比例则显著增加(P＜0.05)。转染48 h与72 h后,相较于空白组与对照组CDK-10蛋白在miR-365-3p组的相对表达量显著降低(P＜0.05)。结论miR-365-3p在口腔鳞癌细胞中的高表达能够抑制CDK-10表达,从而抑制细胞增殖,调节细胞周期,促进细胞凋亡。     

MicroRNA-149 对肺鳞状细胞癌转移能力的 影响及分子机制研究

目的 研究microRNA-149（miR-149）在肺鳞状细胞癌（LSCC）的临床意义及其对细胞迁移 和侵袭的作用。方法 选取2010 年1 月-2015 年12 月西南医科大学附属医院收治的60 例LSCC 患者的癌 灶及癌旁组织。采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miR-149 在LSCC 及癌旁组织中的表达。 通过转染miR-149 模拟物升高LSCC 细胞系NCI-H226 中miR-149 的表达,划痕愈合试验检测过表达miR- 149 对NCI-H226 细胞迁移的影响,Transwell 小室探究miR-149 对NCI-H226 侵袭的影响。qRT-PCR 及Western Blot 检测miR-149 过表达对NCI-H226 细胞中叉头盒蛋白M1（FOXM1）及其靶基因基质金 属蛋白酶2（MMP-2）表达的影响。结果 miR-149 在LSCC 中表达水平低于癌旁组织（P <0.05）;过表 达miR-149 能够降低NCI-H226 细胞的迁移及侵袭能力（P <0.05）。过表达miR-149 能够下调其下游靶 点FOXM1 mRNA 和蛋白表达水平,抑制FOXM1 靶基因MMP-2 的表达（P <0.05）。结论 miR-149 在 LSCC 中呈低表达,miR-149 通过抑制FOXM1/MMP-2 信号通路来抑制LSCC 的细胞转移能力。     

转录因子FoxO1与miR-142-3p在口腔鳞癌中的表达关系及意义

【摘要】 目的 探讨转录因子叉头框转录因子O亚族1（FoxO1）与微小RNA-142-3p（miR-142-3p）在口腔鳞癌（OSCC）中的表达关系及意义。 方法 选取2016年5月～2018年6月于本院手术中留取的OSCC组织72份为观察组,选取50份形态学正常的癌旁口腔黏膜组织为对照组,比较两组FoxO1、miR-142-3p表达与OSCC临床病理特征的关系及二者的相关性,并采用COX回归模型分析OSCC患者预后不良事件的影响因素。 结果 观察组较对照组FoxO1阳性表达率、miR-142-3p表达均较低（P＜0.05）;高分化、中分化、低分化相比,FoxO1阳性表达率、miR-142-3p表达均依次降低（P＜0.05）;与Ⅰ~Ⅱ期相比,Ⅲ~Ⅳ期FoxO1阳性表达率、miR-142-3p表达均较低（P＜0.05）;与无淋巴结转移相比,淋巴结转移者FoxO1阳性表达率、miR-142-3p表达均较低（P＜0.05）。Spearman结果显示,观察组FoxO1、miR-142-3p表达呈正相关（P＜0.05）。单因素分析显示,性别、年龄、BMI、病理分级均与OSCC患者不良预后无关（P＞0.05）,临床分期、淋巴结转移、FoxO1、miR-142-3p均是OSCC患者不良预后的影响因素（P＜0.05）。多因素分析显示,临床分期、淋巴结转移、FoxO1、miR-142-3p均是影响OSCC患者预后发生不良事件的独立危险因素（P＜0.05）。 结论 FoxO1、miR-142-3p与OSCC的发生、发展及预后密切相关,FoxO1可能受miR-142-3p的靶向调控,这一结果可为病情评估及治疗靶点提供临床参考依据。     

miR-145-5p对口腔鳞癌细胞增殖的调控作用及其机制

目的 探究miR-145-5p对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞增殖的调控作用及其机制。方法 利用GEO数据库构建OSCC的miRNA差异表达谱;通过生物信息学技术预测miR-145-5p靶基因并对其进行GO、KEGG及PPI分析;以人OSCC细胞株(HSC-3)为实验对象,将实验分为CN组(未做处理)、NC组(转染mimic NC)和miR-145-5p组(转染miR-145-5p mimic),通过CCK-8法检测不同剂量(50、100、200 nmol/L)miR-145-5p对HSC-3细胞增殖的影响;JC-1和Annexin V-FITC/PI染色结合流式细胞术检测miR-145-5p对HSC-3细胞的凋亡诱导情况;RT-qPCR检测miR-145-5p调控神经母细胞瘤鼠肉瘤同系物(NRAS)、C-JUN氨基端激酶(C-JUN)、信号转导和转录激活因子1(STAT1)的表达情况。结果 miRNA差异表达谱显示,miR-145-5p在OSCC中表达下调(P<0.05);GO和KEGG分析显示,miR-145-5p靶基因主要调控MAPK信号通路;PPI蛋白互作显示,NRAS是...     

MicroRNA-150-5p对肝细胞癌细胞增殖、凋亡和周期的影响

目的  研究microRNA-150-5p（miR-150-5p）在人正常肝细胞和肝细胞癌细胞中的表达,及其对肝细胞癌细胞增殖、凋亡和周期的影响及潜在机制。方法  通过实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测各处理组细胞中的miR-150-5p的表达水平;MTT法检测miR-150-5p对肝细胞癌细胞增殖的影响;流式细胞术检测miR-150-5p对肝细胞癌细胞凋亡和周期的影响;荧光素酶报告基因实验检测锌指蛋白609是否为miR-150-5p的直接靶基因。结果  miR-150-5p在肝细胞癌细胞系中的表达较人正常肝细胞细胞系降低,miR-150-5p可抑制肝细胞癌细胞的增殖,促进肝细胞癌细胞的凋亡,并阻滞细胞周期于G1期。miR-150-5p在肝细胞癌中发挥肿瘤抑制分子作用的潜在机制为直接靶向抑制ZNF609的表达。结论  miR-150-5p在肝细胞癌细胞中表达降低,并可通过调控ZNF609的表达而调控肝细胞癌细胞增殖、凋亡和周期。

     

miR-145抑制口腔鳞状细胞癌Tca-8113细胞增殖活性及其与CDK6的靶向关系

目的 在口腔鳞状细胞癌Tca-8113细胞中验证miR-145靶向CDK6对其细胞增殖活性的影响. 方法 构建pcD-NATM6.2-GW-pre-miR-145重组表达质粒并转染入Tca-8113细胞,以荧光实时定量PCR（qRT-PCR）检测转染后癌细胞miR-145的表达水平.MTT法评价miR-145对Tca-8113细胞增殖活性的影响,并通过双荧光素酶报告基因检测miR-145对候选靶基因CDK6的调控作用,同时采用Western blot法检测miR-145对CDK6蛋白表达水平的影响. 结果 成功构建miR-145真核表达载体,qRT-PCR显示miR-145组中miR-145的表达显著高于内源性表达量（P＜0.001）,说明miR-145在Tca-8113细胞中具有较高的转染效率.MTT法提示miR-145的过表达能够显著抑制Tca-8113细胞的增殖（P＜0.01）,同时双荧光素酶报告基因分析表明,共同转入miR-145与CDK6野生型（CDK6-WT）会显著抑制Tca-8113细胞中的荧光酶表达（P=0.002）;Western blot进一步证实了miR-145的过表达能够抑制内源性CDK6蛋白的表达. 结论 miR-145可能通过直接靶向CDK6来抑制口腔鳞状细胞癌Tca-8113细胞的增殖活性.     

miR-762通过靶向调控NCOR1表达对人舌鳞状细胞癌细胞增殖和凋亡的影响

探讨miR-762与核受体辅助抑制因子1（NCOR1）的靶向关系及其对人舌鳞状细胞癌（TSCC）细胞增殖和凋亡的影响,为TSCC临床诊断和治疗提供新的分子标志物和靶点。