牡丹皮及奎尼丁对体外培养乳鼠心肌细胞电生理影响

全部实验均用培养5-12天的Wistar种乳鼠心肌细胞团为标本。奎尼丁、牡丹皮制成水煮酒沉提取液。PH6.8。离子浓度为K~ 0.8毫克当量,无Na~ Ca~( )。实验时以灌流液稀释到所需浓度。 细胞浴槽置于倒置显微镜载物台上,标本以恒温(32℃±1℃)的Eagle培养基灌流。灌流液充以Co_25％和O_295％的混和气体。pH保持在7.4。电信号用玻璃微电极引导。电极尖端阻抗为10-30MΩ充灌     

体外反搏后心肌梗死犬心肌形态学的观察

目的：探讨体外反搏对心肌梗死犬超微结构的影响。方法：19只健康杂种犬随机分为对照组、梗死组和反搏组3组，采用透射电镜观察梗死区心肌组织的超微结构变化，并通过图像分析系统对线粒体进行形态定量分析。结果：形态学观察发现反搏组犬心肌肌小节、肌丝、线粒体和血管内皮细胞损伤比梗死组明显减轻。定量分析发现反搏组犬心肌线粒体数密度和比表面均明显高于梗死组，而线粒体体积和平均表面积均小于梗死组（P〈0．05）。结论：体外反搏可减轻心肌梗死犬的心肌超微结构损伤。     

血管内皮细胞的体外培养及形态学观察

为探索经济有效的体外培养血管内皮细胞的方法，实验分别用（Ⅰ）全胶原酶；（２）全胶原酶；（３）胰酶（５份）和胶原酶（１份）三种方法分离牛主动脉内皮细胞。     

培养心肌细胞的被动电特性及其重建

材料为新生3—5天Wistar大鼠乳鼠,取其心尖组织,以常规方法消化培养,得到搏动或无搏动的心肌细胞簇。在倒置显微镜下,以玻璃微电极记录培养心肌细胞的电活动,并触发MEZ8201放大器产生nA级恒流刺激。当向细胞内注入内向或外向电流刺激时,可在细胞内引导出去极化或超极化方向的膜电位反应波形,由     

新生大鼠心肌细胞的体外培养和生物学观察

体外分离培养心肌细胞,为心肌组织工程提供种子细胞.采用胰酶连续消化法,分离新生大鼠心室肌细胞并在体外培养,倒置显微镜下观察细胞形态和搏动情况,并通过免疫组化染色法,检测心肌细胞的α肌节型肌动蛋白及连接蛋白Cx43.结果表明:培养2d后,心肌细胞开始自发搏动,在培养过程中心肌细胞的搏动频率逐渐加快,细胞聚集成团,随后成簇同步搏动,心肌细胞搏动可维持60d以上;α肌节型肌动蛋白及连接蛋白Cx43的表达量也逐渐增加.本研究体外培养出了状态良好的心肌细胞,在体外二维培养环境下,心肌细胞也有一定程度的生长发育,为心肌组织工程种子细胞来源的研究提供了实验依据.     

心肌细胞与胶原材料复合再造组织工程心肌移植心肌梗死大鼠的心肌电生理变化

背景：组织工程化心肌组织移植可修复大鼠心肌梗死。 目的：应用微电极阵标测技术分析心肌细胞与胶原材料复合组织工程再造心肌移植心肌梗死大鼠的心肌电生理特性。 方法：将成年SD大鼠随机分组：假手术组、模型组、移植组。后2组制作心肌梗死动物模型,假手术组仅开胸不结扎冠状动脉,移植组造模后移植心肌细胞与胶原材料复合组织。应用微电极阵标测技术记录心室肌场电位振幅,激活-恢复时间及激动传导时间。 结果与结论：①心室肌场主波振幅：与模型组相比,移植组梗死区、对立区及周围区部位增高(P < 0.05)。②激活-恢复时间：模型组与移植组梗死区与梗死周边区均明显延长,且梗死周边区小于梗死区(P < 0.05)。与模型组相比,移植组梗死区、对立区及周围区部位激活-恢复时间缩短(P < 0.05)。③心室前壁激动传导时间：移植组高于假手术组,但低于模型组(P < 0.05)。表明移植的心肌细胞/胶原复合体能改善心肌梗死大鼠心室肌收缩功能及电传导时间,部分修复心脏功能。     

食管上皮细胞的体外原代培养及形态学观察

食管上皮细胞为未角化的复层鳞状上皮,我们借鉴了表皮细胞的培养方法,摸索了新生牛食管上皮细胞体外原代培养的条件,并进行了形态学观察和细     

心肌细胞数学模型及其在模拟电生理变化中的应用

以心肌细胞数学模型的历史发展为线索,综述了有关心肌细胞的数学模型及其在模拟电生理中的应用。     

体外培养滑膜细胞形态学和吞噬作用的观察

用关节腔穿刺酶消化法和滑膜组织块种植法,分别对狗膝关节和大白鼠颞下颌关节的滑膜进行培养。作了活细胞观察;H-E、Giemsa染色及HRP摄取试验,进行光镜和电镜观察。体外培养滑膜细胞在形态上不能分型。HRP摄取试验显示滑膜细胞具有吞噬活性,似可作为体外培养滑膜细胞的分类依据.     

心肌肥厚的电生理研究进展

心肌肥厚时心肌细胞动作电位时程延长，钾、钙、钠等许多膜通道蛋白及相应离子流的质与量发生改变，这些电生理改变可导致各种心律失常甚至猝死。明确这些变化对临床心肌肥厚的病理生理机制特别是对伴发的心律失常的探讨具有深远意义     

新生大鼠心肌细胞的体外培养

心肌细胞培养作为一种体外实验研究模型,可以更方便地从细胞和分子水平研究心血管疾病的发病机制,成为心血管疾病研究的一项主要手段和基本技术。如何使心肌细胞培养的方法更为简单并且使分离的心肌细胞达到理想的存活率和纯度,是体外培养心肌细胞模型的关键问题。我们在本实验室多年新生大鼠心肌细胞培养的经验和方法的基础上加以改进,获得了简单并且稳定、可靠的心肌细胞培养的方法。     

骨髓间质细胞对体外培养的缺氧心肌细胞影响的初步研究

目的：探讨缺氧条件下骨髓间质细胞对培养 的心肌细胞凋亡的作用。方法:共培养乳鼠心肌细胞和骨髓间质细胞。 利用厌养罐模拟细胞缺氧，观察细胞形态、检测细胞凋亡亚二倍体、观察细胞脱氧核苷酸断 裂情况及凋亡相关蛋白的表达。 结果:单独培养的骨髓间质细胞对缺 氧不敏感，而单独培养的心肌细胞在缺氧后24 h出现凋亡，表现为明显的凋亡亚二倍体峰和 “DNA ladder”。当两种细胞缺氧共培养24 h后，混合细胞的凋亡亚二倍体峰明显减少，“ DNA ladder”消失，抗凋亡蛋白Bcl-2表达无显著差异而促凋亡蛋白Bax表达降低。 结论:缺氧条件下体外细胞共培养模型表明骨髓间质细胞对心肌细胞的凋亡有一 定的拮抗作用，可能是通过抑制Bax蛋白的表达而实现的。     

体外培养新生大鼠心肌细胞内心钠素的观察

本文对体外培养新生大鼠的心房和心室肌细胞进行了光镜和电镜观察,并以免疫组织化学方法对细胞内心钠素的分布和含量进行了探讨。实验用生后48小时内的Wistar大鼠,取其心房(包括左、右心耳)和心室组织,分     

体外长期培养大鼠中脑多巴胺神经元的形态学观察

本文研究了中脑多巴胺神经元在体外长期培养过程中的形态发育。动物选用胚胎14天SD大鼠,取中脑腹侧部制成细胞密度为2×10~5/ml的悬液,接种于24孔培养板中,培养1天至6周,以酪胺酸羟化酶免疫组化方法、单纯荧光组化方法和外源性儿茶酚胺荧光组化方法,观察中脑多巴胺神经元的体外长期培养发育状况。培养3天后多巴胺神经元已有单极或双极的突起发出,培养1周突起进一步伸长,并在沿途开始发出分支,有些末端见有生长锥。除散在分布的多巴胶神经元外,还能见到多巴胺神经元细胞群。培养2至3周,突起的分支增多,并明显出现念珠状膨大。在培养4-6周的标本中,仍可见到部分发育成熟的多巴胺神经元。多巴胺神经元在体外培养中的形态可分为二类,即梭形细胞和多极细胞。棱形细胞一般有两个突起,分别从胞体两极发出;多极细胞胞体呈圆形、多角形或三角形,可发出3-6个突起。实验结果表明多巴胺神经元的体外发育过程与在体相似。     

体外培养小鼠小脑的髓鞘形成及电生理研究

本文应用组织培养、免疫细胞化学和电生理方法研究了体外培养条件下小脑髓鞘形成及电生理表现。本文对体外培养条件下中枢神经系统髓鞘形成及小脑发育各阶段电生理表现进行了讨论。     

培养心肌细胞电生理学研究的进展

新兴的分子及细胞心脏病学(Molecular and Cellular Cardiology)是培养心肌细胞从分子,细胞水平进行研究,以求获得培养心肌细胞电生理等资料来解决心脏疾患的基础问题、现就此领域的一些进展,结合笔者的工作,简要介绍于下:     

前列腺素I2-内皮祖细胞保护氧化应激受损心肌细胞凋亡： 心肌电生理验证

BACKGROUND:Prostacyclin (PGI2) and its analogs have been reported to prevent pressure overload-induced cardiac hypertrophy, and to reduce cardiac ischemia/reperfusion injury. However, clinical application of PGI2 is challenging due to its short half-life (< 2 minutes). Thus, we have generated PGI2 expressing rat endothelial progenitor cell strains (PGI2-EPCs) that constitutively secrete prostacyclin. OBJECTIVE:To investigate the protective effect of PGI2-EPCs against oxidative stress-induced cardiomyocyte injury. METHODS:Cultured H9c2 cells in vitro were assigned into four groups: H9c2 cells treated by H2O2 for 4 hours. H9c2 cells were pretreated by conditioned medium (collected form EPCs and PGI2-EPCs or collected form EPCs and PGI2-EPCs mixed with native EPCs) before the addition of H2O2. PBS instead of conditioned mediums served as negative control. The paracrine effect of PGI2-EPCs on in vitro angiogenesis of native EPCs was evaluated. MTT and Hoechst 33342 assays were used to examine the protective effect of conditioned medium on H2O2-induced rat embryonic cardiomyocyte apoptosis and cell viability. Finally, the effect of conditioned medium on the electric activities of adult cardiomyocytes was measured by whole-cell patch clamp techniques. RESULTS AND CONCLUSION:When native EPCs mixed with conditioned medium of PGI2-EPCs, the total length of tubes was significantly longer compared with those mixed with CM of EPC. Rat embryonic cardiomyocytes pretreated with conditioned medium of PGI2-EPCs significantly reduced H2O2-induced apoptosis and preserved cell viability compared with pretreatment with EPC-conditioned medium and without pretreatment (P < 0.01). Pretreatment of rat adult cardiomyocytes with conditioned medium of PGI2-EPCs abolished H2O2-induced early after depolarization and shortened H2O2-induced action potential duration prolongation (P < 0.01) towards baseline. Our findings indicate that PGI2-EPCs protect against oxidative stress-induced cardiomyocyte injury through paracrine action. This Study provides the groundwork for an innovative cell therapy approach to treat ischemic heart disease. 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

体外培养状态下心肌细胞有丝分裂的证据

目的探讨体外培养状态下心肌细胞有丝分裂、增殖的证据。方法分离新生大鼠心肌细胞,分别原代培养0h至12d;免疫荧光分别双标心肌肌钙蛋白-T(c Tn T)、磷酸化组蛋白H3(H3P)和微管蛋白(tubulin),利用活细胞工作站和荧光显微镜观察处于分裂期的心肌细胞。结果原代培养的心肌细胞生长状态好、纯度高,可观察到分裂各期的心肌细胞及其微管蛋白的变化。处于分裂各期的心肌细胞不隆起变圆仍维持扁平状。分裂前期细胞核形状规则,染色质凝集,H3P开始表达;前中期核膜破裂,纺锤体形成;中期染色体排列在赤道面,纺锤体呈典型纺锤样;后期染色单体分开并移向两极;末期子核形成,平行微管聚结在两子核之间;胞质分裂期形成两个子细胞,两个细胞分开后,可见有少量微管呈丝状连接。原代培养1~12d的心肌细胞在整个细胞分裂图像中很少见到双核心肌细胞。培养第3天开始发现分裂象的心肌细胞,占总心肌细胞数的2/127(1.57%)和1/92(1.09%),培养第7天,分裂细胞比率达3/69(4.35%)和5/163(3.07%),培养第12天有2/100(2%)和0/60(0)的心肌细胞处于分裂期。结论体外培养的心肌细胞存在一定数量的完全有丝分裂,是心肌增殖和心肌再生的细胞学证据。     

心肌能量代谢与心律失常的电生理研究进展

心源性猝死多由恶性室性心律失常引起,但导致室性心律失常的机制尚不完全清楚。心肌能量代谢与心律失常的发生有关,本文通过引入心脏动作电位的异质性来描述心肌线粒体主导的能量代谢在改变心脏电功能中的作用,以及氧化应激下通过保持线粒体膜电位来预防心律失常的机制。     

人胚心肌细胞的分离与体外培养

由于在体内研究人心肌细胞具有一定的局限性，因此心肌细胞的分离与体外培养成为一项重要技术。把成年大鼠心肌细胞分离并维持原代培养已有20多年的历史。但是，由于成熟心肌细胞为终末分化细胞，并且以往的分离和培养方法很不理想，存在着分离步骤烦琐、培养液复杂和纯度不高及细胞不能增殖等问题，而人胚心肌细胞的分离和体外培养的方法未见系统报道，因此我们对此进行描述。