黄芩苷抗哮喘作用与HMGB1/TLR4传导通路的相关性研究

目的:研究黄芩苷对支气管哮喘防治的作用及其可能的作用机制。方法:将54只SD大鼠按体质量随机分为正常组、哮喘模型组、地塞米松组及黄芩苷高、低剂量组。用卵清蛋白(OVA)诱发致敏大鼠建立支气管哮喘的动物模型,给予相应药物灌胃给药4周,1次/d,其中正常组及哮喘模型组药物以等量生理盐水代替。用药物干预性治疗后,观察各组药物对大鼠的哮喘程度及哮喘潜伏期的影响。实验结束后,24 h内处死大鼠,取材,测定并比较支气管壁厚度、气道上皮下胶原沉积程度;测定血中HMGB1浓度;免疫组织化学测定支气管平滑肌中α-SMA和气道组织TLR4的蛋白表达; RT-PCR法测定肺组织HMGB1 mRNA表达变化。结果:黄芩苷可明显改善病鼠的哮喘程度,延长哮喘潜伏期(P 0. 05～0. 01);可有效减轻病鼠支气管管壁增厚及气道上皮下胶原沉积程度(P 0. 05);明显降低血浆中HMGB1的含量,肺组织中的HMGB1 mRNA表达呈下降趋势,但差异无统计学意义(P 0. 05);可明显降低气道组织中的TLR4,气管平滑肌中α-SMA的蛋白表达及TLR4 mRNA的表达水平(P 0. 05)。结论:黄芩苷具有抗哮喘作用,其作用可能与其影响HMGB1/TLR4通路的信号传导相关。     

金银花体外抗呼吸道合胞病毒作用研究

目的:研究金银花体外抑制呼吸道合胞病毒作用的效果和强度。方法:采用细胞病变抑制实验,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性,观察金银花在人宫颈癌传代细胞(Hela)中对人呼吸道合胞病毒3型的抑制作用,以治疗指数(TI)为评价指标。结果:金银花对Hela细胞半数中毒浓度(TC50)为5 mg/mL,最大无毒浓度(TC0)为3.6 mg/mL。对呼吸道合胞病毒有直接灭活作用,其半数抑制率(IC50)为0.16 mg/mL,TI为31.2;在吸附阶段也有作用,其IC50为0.48 mg/mL,TI为10.5;同时金银花有抑制呼吸道合胞病毒生物合成作用,其IC50为1.0 mg/mL,TI为5.0;金银花不能阻止呼吸道合胞病毒侵入细胞。结论:金银花在体外主要通过直接灭活、阻止病毒吸附和抑制生物合成三种方式发挥抗呼吸道合胞病毒作用。     

清热合剂体外抗呼吸道合胞病毒作用

目的：了解清热合剂对呼吸道合胞病毒（RSV）的抑制作用。方法：采用细胞培养技术，以双黄连为阳性对照药，观察清热合剂在非洲绿猴肾细胞（VERO）和咽喉癌上皮细胞（HEP-2）细胞中对RSV的抑制作用。结果：在VERO细胞中，清热合剂半数中毒浓度（TD50）为31．62mg／mL，抗合胞病毒的半数有效浓度（IC50）为0．50mg／mL，治疗指数（33）为63．24；在HEP-2细胞中，TD50为32．10mg／mL，抗合胞病毒的IC50为0．54mg／mL，TI为59．44。且对RSV抑制作用存在明显的量效反应关系（P〈0．01）。结论：清热合剂在VERO和HEP-2细胞中对RSV有明显抑制作用。     

毛支饮体外抗呼吸道合胞病毒作用的研究

随着抗生素的广泛应用,细菌感染性疾病明显减少,但病毒感染性疾病日益增多.近年来,毛细支气管炎(以下简称毛支)的发病率呈逐年上升的趋势,毛支多发生在婴幼儿,主要由呼吸道合胞病毒(RSV)引起.RSV感染可引起患儿反复喘息,与哮喘的发病密切相关.Sigurs等[1]对RSV毛支住院患儿随访,发现7年后毛支组与对照组哮喘累积患病率分别为30％、3％,喘息累积发生率为68％、34％.     

清肺祛瘀汤体外抗呼吸道合胞病毒作用的研究

为了寻找有效的抗呼吸道合胞病毒药物,通过观察病毒感染细胞所致的细胞病变(CPE)来评价药物在体外实验抗呼吸道合胞病毒作用。结果显示清肺祛瘀汤50%药物毒性浓度(TC50)为220mg/mL,在最大无毒浓度62.5mg/mL可以完全抑制呼吸道合胞病毒。     

大青叶有效单体抗呼吸道合胞病毒作用的实验研究

目的 探讨中药大青叶单体1#,2#,3#,4#体外抗呼吸道合胞病毒(RSV)的作用.方法 通过观察病毒引起的细胞病变效应(Cytopathogenic effect,CPE)和MTT[Methyl Thiazolyl Tetrazolium,3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐]法检测药物抗RSV活性, 计算药物对病变的抑制率和半数抑制浓度(50% inhibiting concentration ,IC50),并从药物抗病毒吸附,药物对病毒的直接杀灭作用及抑制病毒在细胞内的生物合成3个方面初步探索大青叶单体抗RSV活性的作用机制.结果 大青叶单体1#,2#,3#,4#对RSV无直接灭活作用,也不能阻止RSV的吸附,而能抑制RSV在Hep-2细胞内的的生物合成,其半数抑制浓度(IC50)分别为32.57,26.37,31.60,29.61 μg/ml,治疗指数(TI) 分别为6.15,10.50,9.21,13.22,其抗病毒效果优于病毒唑(IC50=103.20 μg/ml, TI=5.21)和抗病毒口服液(IC50=105.21 μg/ml, TI=5.03) ,P<0.01.结论 大青叶单体1#,2#,3#,4#能安全高效地抑制RSV在Hep-2细胞中的增殖,抑制作用发生在病毒入侵细胞后.     

金贝清肺颗粒体内抗呼吸道合胞病毒作用的实验研究

目的观察金贝清肺颗粒的体内抗呼吸道合胞病毒(RSV)作用。方法采用小鼠体内感染呼吸道合胞病毒实验观察金贝清颗粒的抗病毒作用。结果金贝清肺颗粒能抑制呼吸道合胞病毒在小鼠体内的增殖。结论金贝清肺颗粒具有明显的体内抗呼吸道合胞病毒作用。     

柴胡皂苷d-黄芩苷配伍对CCl_4诱导大鼠HSC的TLR4-NF-κB通路作用研究

目的:探讨柴胡皂苷d-黄芩苷(SaikosaponinD-Baicalin,SB)对CCl4诱导肝星状细胞(Hepatic stellate cell,HSC)的作用机制。方法:HSC分空白对照(无药物处理),CCl4诱导(6mmol/L CCl_4作用6h),给药(6mmol/L CCl4作用6h后,2.5、5、10ug/ml的SB作用24h),TAK-242、BYA 11-7082组(6mmol/L CCl_4作用6h后,TAK-242 10mol/L、BYA 11-7082 2mol/L作用24h)。ELISA法检测透明质酸酶(Hyaluronidase,HA)、层粘连蛋白(Laminin,LN)、III型前胶原(ProcollagenⅢ,PCIII)、IV型胶原(Collagen Type IV,IV-C)浓度,RT-PCR、Western blot方法检测细胞中Toll样受体4(Toll-like receptors4,TLR4)、核转录因子(NF-κB)基因、蛋白的表达。结果:与CCl4干预组比较,SB、TAK-242、BYA 11-7082可降低CCl4造成的HSC细胞增殖,HA、LN、PCIII、HA细胞释放水平及NF-κB基因、蛋白的表达。SB、TAK-242可下调TLR4基因、蛋白表达。结论:SB可以抑制CCl4诱导的炎症因子基因、蛋白表达,改善肝纤维化相关指标,其作用机制可能与TLR4-NF-κB转录活性及蛋白活性相关。     

清肺口服液早期抗呼吸道合胞病毒肺炎的作用机制

目的探讨清肺口服液早期抗呼吸道合胞病毒肺炎的作用机制。方法将45只BALB/c小鼠随机分为空白组、模型组、利巴韦林组[利巴韦林颗粒0.05g/(kg·d)]和清肺低剂量组[清肺口服液37g/(kg·d)]、清肺高剂量组[清肺口服液111g/(kg·d)],每组9只。除空白组外,其余各组均给予呼吸道合胞病毒(RSV)50μl/只滴入鼻孔造模,造模48h后开始给药。24h后观测肺组织病理改变程度,检测肺组织中γ干扰素(IFN-γ)、T-bet、GATA3蛋白水平及脾组织中Th1/Th2细胞平衡水平。结果与空白组比较,模型组肺组织病理评分显著增高、IFN-γ水平降低、Th1/Th2水平下降(P0.01);与模型组比较,利巴韦林组、清肺高剂量组肺组织病理评分显著下降、IFN-γ水平升高、Th1/Th2水平升高(P0.01)。与空白组比较,模型组T-bet水平降低而GATA3水平升高(P0.01);与模型组比较,各给药组T-bet水平升高而GATA3水平下降(P0.01)。结论早期采用清肺口服液干预呼吸道合胞病毒肺炎可抑制炎症变化,其机制可能与降低肺组织GATA3水平,升高T-bet水平,诱生IFN-γ表达,从而达到Th1/Th2细胞平衡相关。     

咽康片抗呼吸道合胞病毒实验研究

目的:探讨咽康片的抗病毒作用.方法:采用微量细胞培养法进行抗病毒疗效和病毒滴定.结果:咽康对呼吸道合胞病毒的最小治疗浓度为4.06μl/ml(30.47μg/m1),咽康对呼吸道合胞病毒的治疗指数(therapyindex,TI)等于16.经最小有效剂量咽康作用后,呼吸道合胞病毒的滴度0.1ml/103.5TCID50下降为0.1ml/101.3TCID50.结论:咽康在体外对呼吸道合胞病毒有一定的治疗作用.     

清热药抗呼吸道合胞病毒的研究进展

呼吸道合胞病毒(RSV)是引起小儿下呼吸道感染最常见的一种病毒,目前西医主要对症治疗,无成熟的疫苗上市;传统中药治疗病毒感染性疾病具有多成分、多靶点的优势,副作用小,在抗呼吸道合胞病毒新药开发方面具有极大的潜力。本文从RSV生物学特性、清热药抗RSV感染机制研究、清热药抗RSV主要活性成分研究进展、清热药抗RSV筛选思路方面进行综述,旨在为从清热药中优化出抗RSV的药物提供参考。     

甘草体外抑制呼吸道合胞病毒作用研究

目的:开发安全有效的抗呼吸道合胞病毒的新药.方法:采用细胞病变抑制实验观察甘草在Hela细胞中对呼吸道合胞病毒的抑制作用.结果:甘草半数中毒浓度(TC50)为3.43g/L;抑制呼吸道合胞病毒的半数有效浓度(EC50)为0.2535g/L,治疗指数(TI)为13.53;甘草对呼吸道合胞病毒的抑制作用存在量效反应关系;在感染后0 h、2 h、4 h、6 h、8 h,甘草均有抑制呼吸道合胞病毒的作用.结论:甘草在Hela细胞中对呼吸道合胞病毒有明显的抑制作用,其作用机制是多途径的.     

板蓝根提取物体外抗呼吸道合胞病毒机制研究

目的:研究板蓝根活性提取物体外抗呼吸道合胞病毒(RSV)的作用。方法:MTT法检测人喉癌上皮细胞(hep-2)中板蓝根活性提取物对RSV的抑制作用。荧光定量RT-PCR检测药物对RSV非结构蛋白NS1和L蛋白RNA合成的影响。结果:MTT结果显示药物治疗组和预防组在0.25~1 mg/m L浓度时均表现出抑制RSV的作用,其中0.5 mg/m L药物对RSV的抑制率分别是34.2%和52.2%,药物没有显示出直接杀伤和抑制RSV的效应。荧光定量RT-PCR检测表明药物作用1 h,RSV的NS1和L的RNA水平均显著低于病毒组(P0.05)。结论:RSV感染hep-2过程中,板蓝根活性提取物具有预防和早期抗病毒复制的效应,但未显示出直接杀伤RSV的功能。     

基于TLR4-NFκB的柴胡皂苷d-黄芩苷配伍抗CCl_4损伤肝细胞的作用研究

目的:探讨柴胡皂苷d-黄芩苷配伍(柴芩皂苷)对四氯化碳(CCl4)损伤L-02细胞的保护作用。方法:体外培养正常人肝细胞株L-02细胞,采用CCl4诱导肝细胞损伤,应用柴胡皂苷d-黄芩苷配伍不同剂量干预。采用MTT法测定各组L-02细胞增殖情况;酶联免疫法检测各组培养上清液中AST和ALT水平;采用免疫组化法测定各组细胞中TLR4及NFκBp65蛋白的表达。结果:CCl4损伤组L-02细胞增殖明显降低,细胞培养液中AST和ALT水平明显升高,L-02细胞中TLR4和NFκBp65蛋白表达增高,柴胡皂苷d-黄芩苷配伍干预后,1.75、1.5μg/m L组对L-02细胞有促进增殖作用,并可降低细胞培养液中AST和ALT水平,L-02细胞中的TLR4和NFκBp65蛋白也有一定抑制作用。结论:柴胡皂苷d-黄芩苷配伍对CCL4损伤L-02细胞有一定保护作用。其机制可能与下调体内TLR4-NFκB信号通路,降低炎症有关。     

苇茎五虎颗粒冲剂抗呼吸道合胞病毒作用的实验研究

1 材料 苇茎五虎颗粒剂批号910803,用三蒸水溶解配成每ml含主药1g的浓度,以此为100％浓度,G_6抽滤除菌。4℃冰箱保存备用。取Hela细胞用1640(GIBCO)USA进口分装)加10％灭活小牛血清常规培养,待细胞长满单层后,选形态良好的细胞供实验用。呼吸道合胞病毒(RSV)(NJ3165)首都儿童医院病毒研究所提供。将RSV在Hela细胞中增殖、传代,测定其滴度,置-30℃冰箱保存。实验用病毒浓度为100TCID50/0.1ml。病毒唑:湖北天门制药厂生产的注射液,100mg/ml,批号:910603。实验时用细胞维持液稀释成50μg/ml。2 方法 RSV滴度测定 按文献方法。细胞对药物的最大     

抗人呼吸道合胞病毒中药抑制剂研究进展

人呼吸道合胞病毒(h RSV)是世界范围内婴幼儿下呼吸道感染的重要病原病毒之一,至今缺乏有效的h RSV感染治疗药物和疫苗。从中药有效成分、单味中药、中药复方抑制剂研发3个方面,对抗h RSV感染中药的最新研究进展进行综述,为抗h RSV新药研发与探索新的h RSV感染的治疗策略奠定理论基础。     

黄芩苷体外抗流感病毒作用的研究

[目的]通过观察黄芩苷对甲型流感病毒(H1N1)感染人肺癌细胞株(A549细胞株)的作用,探讨其在体外抗甲型流感病毒的作用。[方法]通过细胞病变效应(CPE)观察黄芩苷对病毒致细胞病变作用的影响,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测药物对人肺癌细胞株A549的最大无毒浓度(TC0)和半数中毒浓度(TC50)。检测药物不同给药方式和作用时间的吸光度,比较各组抗病毒有效率,找出黄芩苷最佳抗病毒作用方式。采用Probit回归计算最佳作用方式时其对病毒感染的半数抑制浓度(IC50)以及治疗指数(TI)。[结果]在7.920~0.495 mg/L范围内的黄芩苷作用24~48 h,对流感病毒所致的细胞病变作用有明显的抑制作用,细胞存活率明显高于病毒感染组。其中,抗病毒生物合成组(Ⅲ)在给药后48 h,其抗病毒有效率最高,浓度为3.960 mg/L组的细胞存活率最高,抗病毒有效率达89.107%。计算该条件下黄芩苷IC50为1.399 mg/L,TI为22.608。[结论]黄芩苷在一定浓度下有抗病毒作用,主要是通过抑制病毒在感染的A459细胞内生物合成而发挥抗病毒作用。     

黄芩苷对缺氧/复氧小胶质细胞TLR4通路的影响

目的:模拟脑梗塞时脑组织内的缺氧/再灌注病理过程,探索缺氧/复氧对原代培养的小胶质细胞Toll样受体4(TLR4)通路的影响和黄芩苷的干预作用;方法:原代培养小胶质细胞,采用缺氧/复氧的方式制备模型,用黄芩苷25μmol/L、50μmol/L和100μmol/L3个浓度梯度进行干预,用逆转录聚合酶链反应检测小胶质细胞TLR4 mRNA的表达,Western Blot检测TLR4、抑制因子(I-кB)、p38、ERK蛋白,免疫荧光双染观察髓性分化因子88(MyD88)和核因子кB(NF-кB)。结果:缺氧/复氧激活了TLR4通路,并通过MyD88依赖途径激活了TLR4和下游蛋白MyD88、NF-кB、ERK、I-кB和p38;黄芩苷高剂量组明显抑制了通路中TLR4、MyD88、NF-кB、ERK与p38蛋白的活性和I-кB蛋白的降解。结论:缺氧/复氧激活了小胶质细胞的TLR4通路,黄芩苷通过对TLR4通路蛋白的抑制降低了小胶质细胞的活性,发挥抗炎效应,促进脑缺血的恢复。     

地龙抗呼吸道合胞病毒的有效部位筛选

目的:研究地龙不同极性的粗提取物经纯化分离后对呼吸道合胞病毒(RSV)的体外抗病毒活性,从而确定抗病毒的有效部位。方法:预实验依次用乙酸乙酯、95%乙醇水溶液、水作为溶剂提取药物,采用RSV-Hep-2细胞感染模型,初步检测地龙的体外抗RSV活性。依据预实验的结果,分别采用水提醇沉法和醇提水沉法对粗提取物进一步地分离和纯化,将处理后的上清液和沉淀物分别进行体外抗病毒实验。然后根据实验结果将醇提水沉后的沉淀过大孔树脂DM130,分别用25%、50%、75%的乙醇水溶液洗脱,将洗脱液浓缩后做抗病毒实验,在显微镜下观察细胞的病变,用酶标仪测定中性红染色A540值,计算其治疗指数。结果:乙酸乙酯、乙醇、水3种粗提取物中水粗提取物对呼吸道合胞病毒的抑制效果最好,TI=74.21。将粗提取液水提醇沉或醇提水沉后发现醇提水沉的沉淀对呼吸道合胞病毒的抑制效果最好,TI=107.11。将地龙醇提水沉的沉淀过大孔树脂DM130发现75%乙醇2号水溶液冲洗的洗脱液抑制呼吸道合胞病毒的效果最好,TI=63.05.结论:地龙的醇溶性成分对RSV病毒具有明显的抑制作用。     

黄芩苷体内抗流感病毒作用

目的：研究黄芩苷体内抗流感病毒(influenza virus,IV)作用。方法：采用体内实验方法,对小鼠先预防给药(2 d)后感染流感病毒(A/FM/1/47)或先感染流感病毒(1 d)后治疗给药的方法观察黄芩苷的抗流感病毒作用。结果：黄芩苷可明显延长流感病毒感染小鼠的存活时间(P<0.01)；对小鼠肺内的流感病毒有一定的清除作用,能降低肺内流感病毒的血凝滴度和感染力；减轻小鼠肺内的炎性病变。结论：黄芩苷具有明显的抗流感病毒作用。