HBsAg阳性产妇所生新生儿的HBV血清标志物及HBVDNA的检测结果分析

目的 观察HBsAg阳性产妇所生新生儿血清乙型肝炎标志物及HBV DNA的表达.方法 对282例HBsAg阳性产妇所生283例（一例双胞胎）新生儿进行乙型肝炎病毒血清免疫标志物（五项）和血清HBV DNA检测.结果 283例新生儿乙型肝炎血清标志物表现为12种模式,以HBeAg、抗HBc阳性组合最多占48.41％（137/283）,其次为抗HBe、抗HBc阳性组合占22.26％（62/283）,HBsAg、HBeAg、抗HBc阳性组合占12.37％（35/283）,含HBsAg阳性的有5种组合占16.61％（47/283）,未见五项全阴和单抗- HBs阳性者.血清HBV DNA≥1×103IU/mL者5例占1.77％.结论 HBsAg阳性产妇所生新生儿血清乙型肝炎标志物表现复杂,以HBeAg、抗HBc阳性组合为主.血清HBV DNA≥1×103IU/mL不多见.     

带有HBV基因的腺相关病毒为载体的重组病毒感染树突状细胞的研究

目的探讨腺相关病毒（Adeno-associated virus，AAV）为载体的含有HBV—S、C或X基因的重组病毒（rAAV—HBV—S，C，X）感染正常人树突状细胞的效率。方法分别构建含有HBV-S、C和x基因的从v质粒，在293细胞中包装成重组病毒，测定病毒滴度。从正常人外周血中分离出单核细胞进行体外培养，在培养的第1天分别用rAAV—HBV—S、C、X和作为对照的293细胞裂解液感染刺激单核细胞，感染后的单核细胞在GM-CSF、IL-4和TNF-α作用下继续培养7d获得成熟的树突状细胞。用RT-PCR及流式细胞仪细胞内染色检测HBV基因的RNA和蛋白的表达。结果重组rAAV—HBV—S、C、X的病毒滴度可以达到10^7拷贝／ml，用重组病毒分别感染树突状细胞。与对照组相比，感染的树突状细胞可表达相应的HBV基因RNA，流式细胞仪检测显示约90％的树突状细胞有相应HBV蛋白的表达。结论rAAV-HBV可有效感染树突状细胞，提示可以通过该途径刺激树突状细胞提呈抗原。     

树突状细胞和HBV感染的研究进展

树突状细胞(Dendritic Cell,DC)是一类专职抗原提呈细胞(Antigen-presenting Cell,APC),目前认为DC与机体抗乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus,HBV)免疫和HBV感染后慢性化的作用机制相关,DC易影响HBV并且细胞内HBV的存在与DC功能缺陷有关,这在HBV慢性化中起到重要作用.现将DC的特点,及HBV与DC之间相互影响及作用机制作一综述.     

慢性HBV感染者外周血树突状细胞亚群的检测和分析

采用流式细胞术对慢性HBV感染者和健康人 (抗HBs阳性 )外周血树突状细胞 (DC )进行检测 ,并观察其变化规律 ,为进一步了解DC与慢性HBV感染及免疫耐受的关系。结果表明 ,慢性HBV感染者外周血DC的CD11c+ 和CD11c 两个亚群均明显低于健康人。提示DC在慢性乙型肝炎的发病过程中有重要作用 ,检测DC有利于进一步研究HBV感染的发病机制和治疗方案。     

慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞功能状态与HBV载量的关系

目的：探讨慢性乙型肝炎（CHB）患者外周血树突状细胞功能状态与HBV载量的关系。方法：采集23例CHB患者和8例健康人的抗凝外周静脉血，分离外周血单个核细胞（PBMCs），在重组人白细胞介素4和重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的作用下培养使DCs增殖、成熟，以间接免疫荧光流式细胞技术分别检测DCs表面CD80、CD86、HLA-DR及ICAM-1的表达；以ELISA法检测DCs培养上清液中IL-12的水平；将培养成熟的DCs与HBsAg共同孵育，用丝裂霉素C处理后再与自体PBMCs共同培养，在培养结束前12小时加入^3H-TDR，收集细胞，以β液闪计数仪测定cpm值；同期用定量聚合酶链反应技术测定CHB患者外周血HBV载量。结果：患者DCs表面CD86、HLA-DR和ICAM-1的表达水平，DCs的抗原提呈能力及其分泌IL-12的水平均显著低于健康对照组；CD80、CD86、HLA-DR及ICAM-1的表达与HBV载量呈显著负相关关系（分别为P〈0．01、P〈0．01、P〈0．001和P〈0．001）；DCs的抗原提呈能力及其分泌IL-12的水平也与HBV载量呈显著负相关关系（分别为P〈0．001和P〈0．01）。结论：CHB患者外周血DCs的成熟和功能存在障碍，DCs的功能状态与血液中HBV的载量密切相关，并可能对HBV的清除产生重要的影响。     

腺病毒介导HSP70-HBsAg嵌合基因转染树突状细胞及生物学特性分析

目的 分析携带热休克蛋白70(HSP70)和乙肝表面抗原(HBsAg)嵌合基因的腺病毒表达载体感染人外周血诱导培养树突状细胞(DC)后其生物学特性的改变.方法 从正常人外周血中分离单个核细胞,经Ad-HSP70-HBsAg感染刺激后.在含细胞因子粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白介素-4(IL-4)、肿瘤坏死因子(TNF-α)的培养液体中体外诱导培养DC;采用荧光倒置显微镜、RT-PCR、流式细胞仪(FACS)和混合淋巴细胞反应(MLR)试验对人外周血来源的DC进行生物学特性分析.结果 Ad-HSP70-HBsAg感染后的DC能够有效表达示踪蛋白GFP和转录基因HSP70-HBsAg,病毒感染组和对照组的DC在细胞形态、DC细胞表面分子表达和刺激同种异体的人外周血幼稚型T细胞增殖能力的方面无明显差别.结论 Ad-HSP70-HBsAg可有效转染DC,感染后的病毒对DC的生长和生物学特性无显著影响.     

树突状细胞疫苗对慢性乙型肝炎的治疗作用

目的：探讨自体乙肝疫苗致敏的树突状细胞（DC）对慢性乙型肝炎（CHB）免疫治疗的作用。 方法： 取患者外周血20 mL分离单个核细胞，加入重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（rGM-CSF）和白细胞介素4（IL-4）进行DC体外扩增，于培养第5 d加入50 mg/L乙型肝炎疫苗，7 d收获细胞。34例慢性乙肝患者根据年龄和发病时间分为治疗1、2、3组，皮内回输DC。对照组患者注射等量生理盐水，均每周1次，连续8次。于回输DC后2周检测患者血清乙型肝炎病毒DNA（HBV-DNA）含量。 结果： 培养可得到形态及功能典型的DC，治疗1、2、3组患者回输DC后血清HBV-DNA拷贝数均显著低于对照组（P<0.01），总应答率58.8%（20/34），对照组输注前后没有明显差异（P<0.05）；治疗1组与3组相比HBV-DNA定量拷贝数降低幅度有显著差异（P<0.01），治疗1组与2组、2组与3组相比无显著差异（P＞0.05）。 结论： 经乙型肝炎疫苗致敏的DC回输患者后，其血清HBV-DNA含量明显降低，且降低幅度与感染病毒时间和/或患者年龄有一定关系。     

正常妊娠中人外周血树突状细胞亚群的研究

目的：探讨髓样DC（MDC） 和浆细胞淋巴样DC（PDC）在正常妊娠中母胎免疫耐受机制中的作用。 方法： 选择正常妊娠妇女30例，分别在每个妊娠妇女早期、中期和晚期妊娠时采集外周血。应用流式细胞仪术，检测MDC和PDC占外周血单个核细胞的百分率及MDC/PDC比率，正常未妊娠女性为对照组。 结果： 与未妊娠妇女外周血中MDC和PDC的百分率（MDC, 0.32%±0.08%; PDC, 0.12%±0.05%）及MDC/PDC比率(2.96±1.39)相比：早期妊娠妇女外周血中MDC和PDC的百分率（MDC, 0.29%±0.07%; PDC, 0.11%±0.04%）及MDC/PDC比率(2.95±0.85)无显著差异（P>0.05）；中期妊娠妇女外周血中MDC和PDC的百分率（MDC, 0.11%±0.06%; PDC, 0.07%±0.03%）及MDC/PDC比率(1.52±0.44)降低（P<0.01）；晚期妊娠妇女外周血中MDC和PDC的百分率（MDC, 0.12%±0.06%; PDC, 0.08%±0.03%）及MDC/PDC比率(1.54±0.43)降低（P<0.01）。与正常早期妊娠妇女外周血中MDC和PDC的百分率及MDC/PDC比率相比，中、晚期妊娠显著降低（P<0.01）。 结论： 正常妊娠妇女中期和晚期妊娠时外周血中MDC和PDC的百分率及MDC/PDC比率均降低。     

慢性乙型肝炎患者抗病毒治疗前后外周血树突状细胞和淋巴细胞亚群的变化及意义

目的 分析慢性乙型肝炎患者拉米夫定抗病毒治疗前后外周血树突状细胞和淋巴细胞亚群变化。方法 对16例拉米夫定抗病毒治疗有效的慢性乙型肝炎患者动态观察48周，在治疗前、后对外周血单核细胞来源的树突状细胞进行体外培养，用流式细胞仪检测DC表面分子及淋巴细胞亚群水平，观察治疗前、后的变化。结果 16例患者中，11例治疗持续有效，未发生YMDD变异，5例发生变异。无变异组的慢性乙肝患者，治疗12周时，HLA—DR水平较治疗前降低（P〈0．05）；治疗48周时，CD80、CD40和CD1a与治疗前比明显提高（P〈0．05）而HLA—DR恢复至治疗前水平。变异组患者。治疗12周时，CD83及HLA—DR降低（P〈0．05）；治疗48周时，HLA-DR仍低于治疗前（P〈0．05）。无变异组患者，治疗12周时，CD4^＋T细胞、CD8^＋T细胞、NK细胞、CD19^＋B细胞和CD4^＋／CD8^＋T细胞比值均无明显变化；48周时，CD4^＋T细胞比例增高，NK细胞比例下降（P〈0．05）。而变异组患者的淋巴细胞亚群则无显著改变。结论 拉米夫定治疗持续有效组，DC表面共刺激分子CD80、CD40可随着HBV被长时间有效抑制而得到部分恢复，治疗过程中有DC表面的HLA-DR暂时降低，而后HLA—DR水平恢复和CD1a明显提高，同时外周血CD4^＋T细胞比例上升和NK细胞比例下降。而发生YMDD变异组。DC表面HLA—DR呈现持续性降低。     

HBV感染患儿外周血NK及NKT细胞分析与临床意义

目的 探讨慢性乙型肝炎(CHB)患儿外周血NK及NKT细胞变化特点及与肝病病情的关系.方法 采用流式细胞术对CHB息儿42例、正常儿童15例的外周血NK细胞及NKT细胞进行检测,并结合血清转氨酶(ALT)和病毒载量水平进行统计学分析.结果 CHB患儿外周血NK细胞与正常儿童相应的细胞群比较,差异有统计学意义(P<0.05),而NKT细胞则无统计学(P<0.05).结论 CHB患儿外周血NK细胞频数较正常儿童明显升高.     

Dendritic cell subsets in the intestinal lamina propria: Ontogeny and function

The intestinal mucosa is exposed to large amounts of foreign antigen (Ag) derived from commensal bacteria, dietary Ags, and intestinal pathogens. Dendritic cells (DCs) are believed to be involved in the induction of tolerance to harmless Ags and in mounting protective immune responses to pathogens and, as such, to play key roles in regulating intestinal immune homeostasis. The characterization of classical DCs (cDCs) in the intestinal lamina propria has been under intense investigation in recent years but the use of markers (including CD11c, CD11b, MHC class II), which are also expressed by intestinal MΦs, has led to some controversy regarding their definition. Here we review recent studies that help to distinguish cDCs subsets from monocyte‐derived cells in the intestinal mucosa. We address the phenotype and ontogeny of these cDC subsets and highlight recent findings indicating that these subsets play distinct roles in the regulation of mucosal immune responses in vivo.     

孕妇乙肝感染状态与新生儿发生宫内感染的关系

目的探讨新生儿发生宫内感染与孕妇不同的乙肝感染状态的关系。方法将110例乙肝表面抗原（HBsAg）阳性的孕妇分为乙肝大三阳组及乙肝小三阳组，对其进行乙肝两对半及PCR-HBV-DNA值的检测，对其所生的新生儿在出生后24h内进行乙肝两对半的检测。结果乙肝大三阳孕妇其体内HBV-DNA基因拷贝值明显高于乙肝小三阳孕妇，新生儿发生宫内感染者多数为大三阳孕妇，乙肝大三阳孕妇其体内HBV—DNA值〉10^5基因拷贝／ml时发生新生儿宫内感染明显高于体内HBV—DNA值〈10^5基因拷贝／ml。结论孕妇乙肝大三阳且体内高HBv-DNA值是发生新生儿宫内感染的高危因素，应加强对这类病人进行宫内阻断，减少新生儿乙肝宫内感染的发生。     

慢性乙型肝炎患者外周血树突细胞CD40、CD80表达和免疫活性的体外研究

目的 :探讨慢性乙型肝炎患者DC表面协同刺激分子CD4 0和CD80表达与其抗原呈递功能的关系 ,为进一步研究慢性乙型肝炎的发病机制及治疗提供新的思路。方法 :分离培养慢性乙型肝炎患者和健康人外周血DC ,流式细胞仪测定DC表面CD4 0和CD80的表达 ,混合淋巴细胞反应测定两组DC的功能。结果 :慢性乙型肝炎患者DC表面CD4 0和CD80的表达较健康人低 ,刺激同种异种T细胞增殖反应也较健康人低。结论 :乙肝病毒感染可通过抑制患者DC表面CD4 0、CD80等协同刺激分子的表达 ,从而使其抗原呈递功能降低     

Dissecting the dendritic cell controversy in chronic hepatitis B virus infection

Therapeutic vaccines to boost endogenous T-cell immunity rely on the stimulatory capacity of dendritic cells (DCs). The functionality of DCs in chronic hepatitis B virus (HBV) infection has been a long-standing debate. Therefore, we have attempted to summarize multiple studies investigating DC function in chronic HBV patients to determine whether common observations can be drawn. We found that the frequency and function of ex vivo-tested myeloid and plasmacytoid DCs were largely intact in patients with HBV infection and similar to those of healthy donor DCs. The main exception was reduced IFN-α production by plasmacytoid DC from chronic HBV patients. This reduced IFN-α production correlated with liver inflammation in multiple studies but not with viral load, suggesting that viral antigens have little effect on DC function. The majority of the confusion about DC function arises from studies reporting the reduced function of healthy donor DCs exposed to various sources of HBV in vitro. These direct effects of viral antigens are in contrast to data from HBV-infected patients. The variations in the assays used and areas that require further investigation are also covered     

慢性乙肝患者树突状细胞抗原递呈功能状态的初步研究

目的:研究慢性乙肝患者树突状细胞(DC)抗原递呈功能的改变。方法:从慢乙肝患者和健康人外周血分离单个核细胞,诱导培养出DC,显微镜下观察DC形态并计数,流式细胞仪检测DC表面协同刺激分子(CD80,CD86),MTT法检测DC刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力,ELISA法测定培养上清液中IL-12、r-IFN水平。结果:慢乙肝患者外周血单个核细胞诱导培养所获得的DC数量及表面协同刺激分子(CD80,CD86)表达水平、刺激同种异体淋巴细胞增殖能力和细胞因子产生水平均明显低于健康者(P<0.05)。结论:慢乙肝患者DC的数量及抗原递呈、免疫刺激功能状态均处于低下水平。     

HBV感染不同病程中病毒载量与肝功能相关指标及免疫功能的变化分析

目的 探讨HBV感染者外周血肝功能主要指标、T细胞亚群以及病毒载量在不同病程中的变化及其临床意义.方法 170例HBV感染患者根据病程分成急性乙肝组(18例)、慢性乙肝组(73例)、肝硬化组(41例)及肝癌组(38例),正常对照组40例.用全自动生化分析仪和流式细胞仪检测各组肝功能相关指标及T细胞亚群含量;采用实时荧光定量PCR法检测HBV-DNA含量.结果 四组实验组与正常对照相比谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)均升高,差异具有统计学意义(P＜0.05),且以急性乙肝升高最为显著,慢性乙肝次之,组间比较可见慢性乙肝患者组比急性乙肝患者组ALT、AST有所下降,且差异具有统计学意义(P＜0.05),而肝癌患者组和肝硬化组之间则变化不显著,差异无统计学意义(P＞0.05);碱性磷酸酶ALP的升高见于肝癌患者组,慢性乙肝患者组ALP水平较低;各组总蛋白(TP)均在正常参考范围内.四组实验组外周血CD3+T细胞均比正常对照组低,其中肝癌组、肝硬化患者组降低最为明显,CD4+T细胞比例上升见于急性乙肝组,而CD8+T细胞的比例在急性乙肝患者组中最低.外周血中HBV病毒核酸载量升高的最为明显的是慢性乙肝患者组,而急性乙肝患者组、肝硬化患者组、肝癌患者组的HBV-DNA水平比较低,以急性乙肝最低,各组与其相比均具有统计学差异(P＜0.05).结论 HBV不同病程中患者的肝功能相应指标、T细胞亚群表达、HBV-DNA含量存在显著差异,联合检测这些项目可为临床正确评估患者的病情及病程提供相应指导,为疾病转归的判断及治疗提供可靠的依据.     

HBV对树突状细胞的作用导致乙肝慢性化

近年来,对于HBV与DC间的作用机制有了一系列的进展,作为免疫系统的哨兵,DC在抗HBV免疫的产生中具有重要意义。HBV感染期间,DC在功能上发生了改变,HBV即通过改变DC功能逃避天然和固有免疫。在这篇综述中,我们突出了HBV与DC间相互作用的具体机制,以进一步阐明乙肝慢性化的原因。