HSP90抑制剂17-DMAG影响结肠癌SW620细胞生长的实验研究

目的研究热休克蛋白90(HSP90)新型抑制剂17-DMAG对结肠癌细胞株SW620增殖及凋亡的影响,并对其机制作初步探讨。方法以不同浓度的17-DMAG作用于对数生长期的结肠癌SW620细胞,显微镜下观察细胞凋亡形态学变化;应用CCK8法检测其吸光度值,并计算细胞生长抑制率;以Annexin V-FITC和PI双染法检测各组细胞凋亡率的变化;采用流式细胞仪分析各组细胞的细胞周期变化。结果光学显微镜观察到17-DMAG药物处理组的细胞出现细胞凋亡现象。CCK8法显示17-DMAG对结肠癌SW620细胞株的生长增殖有抑制作用,并呈时间-剂量依赖性(P<0.05)。Annexin-FITC/PI双染色法检测结果显示17-DMAG浓度为1.0μmol/L、2.5μmol/L、5.0μmol/L的细胞凋亡率分别为30.03%、50.50%和77.23%,与对照组相比有统计学差异(P<0.05)。流式细胞仪细胞周期分析显示,经17-DMAG药物处理过的不同浓度的药物组与对照组比较,G0/G1期细胞比例显著上升,S期细胞比例下降,G2/M期细胞比例显著上升,有统计学差异(P<0.05);但各浓度17-DMAG药物组间比较,G0/G1期、S期、G2/M期细胞比例无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 HSP90抑制剂17-DMAG对结肠癌细胞SW620的生长增殖有明显的抑制作用,呈时间和剂量依赖性,并诱导其凋亡;同时,17-DMAG影响SW620细胞的周期,但这种影响与17-DMAG的浓度无关。     

HSP抑制剂对食管鳞癌细胞株 TE-凋亡的影响及作用机制研究

目的探讨抑制热休克蛋白90（Hsp90）对食管鳞癌细胞株TE-1凋亡的影响。方法采用不同浓度（0.25、0.5、1.0、2.0 μmol/L）、不同时间（24、48、72 h）HSP90抑制剂17-烯丙胺-17-脱甲氧格尔德霉素(17-AAG)处理食管鳞癌细胞株TE-1,分别采用MTT法、流式细胞仪及western blot检测细胞增殖、细胞凋亡及Hsp90、Hsp70、Akt、Fas蛋白表达。 结果17-AAG对TE-1细胞体外增殖抑制率和细胞凋亡率有明显促进作用,并呈现时间-剂量依赖性。17-AAG 处理后TE-1 细胞Hsp90、Akt 蛋白表达明显降低,Hsp70、Fas蛋白表达明显上调。 结论17-AAG可显著抑制TE-1增殖,促进凋亡,其机制可能是通过抑制Hsp90活性、影响其相关信号通路所致。       

5-Aza-CdR对CEM细胞生长抑制的实验研究

目的:观察不同剂量5-氮杂-2 '-脱氧胞苷(5-Aza-2’-deoxycytidine,5-Aza-CdR)在体外作用48 h 对人急性淋巴细胞白血病CEM细胞生长的影响.方法:用MTS法及流式细胞仪分析5-Aza-CdR对CEM细胞的生长抑制情况.结果:1.0、2.5、5.0μmol/L的5-Aza-CdR处理CEM细胞48 h,对CEM细胞的抑制率分别为1.6％、5.6％、7.5％,5.0 μmol/L有明显抑制作用(P＜ 0.01); 5-Aza-CdR可使CEM细胞凋亡率增加,且作用呈浓度依赖性,1.0、2.5、5.0μmol/L组细诱导胞早期凋亡率分别为4.8％、8.2％、13.8％.结论:5-Aza-CdR能抑制CEM细胞生长,并且可诱导其凋亡.     

冬凌草甲素对急性单核细胞白血病细胞株THP-1的作用研究

目的探讨冬凌草甲素对急性单核细胞白血病细胞株THP-1的抗白血病效应及其作用机制。方法以急性单核细胞白血病细胞株THP-1为研究对象,应用改良四甲基偶氮唑盐法测定4、6、8μmol/L浓度冬凌草甲素处理72 h后THP-1细胞的增殖抑制率,以及计算2、4、6、8、10μmol/L冬凌草甲素处理24、72、120 h后的细胞生存率并绘制生长曲线;显微镜下观察4、6、8μmol/L冬凌草甲素处理24 h后THP-1细胞的形态学变化;采用流式细胞术检测0、4、6、8μmol/L冬凌草甲素处理24 h后THP-1细胞凋亡率;采用Western blot法检测6μmol/L冬凌草甲素处理THP-1细胞0、12、24 h后Akt/m TOR、Raf/MEK/ERK细胞信号转导通路的变化,以及凋亡调节蛋白Bcl-2和Bax的变化。结果 14、6、8μmol/L冬凌草甲素处理72 h后细胞增殖抑制率分别为(20.02±11.15)%、(45.99±12.76)%、(86.39±9.18)%,与4μmol/L冬凌草甲素比较,6、8μmol/L冬凌草甲素处理后细胞增殖抑制率均升高,差异均有统计学意义(P0.05或P0.01);冬凌草甲素处理72 h后细胞半抑制浓度为(6.12±1.48)μmol/L;细胞生长曲线显示,冬凌草甲素对THP-1细胞的生长抑制作用呈时间和浓度依赖性。2冬凌草甲素处理24 h后,THP-1细胞出现凋亡,形成凋亡小体,浓度越高细胞凋亡小体形成越多。30、4、6、8μmol/L冬凌草甲素(分别设为对照组及4、6、8μmol/L组)处理24 h后,THP-1细胞凋亡率分别为(3.7±1.1)%、(16.2±3.3)%、(30.1±4.3)%、(49.5±6.7)%,对照组与各浓度组凋亡率比较差异均有统计学意义(P0.05或P0.01);与4μmol/L组比较,6、8μmol/L组凋亡率均升高,差异均有统计学意义(P0.05)。4经Western blot法检测6μmol/L冬凌草甲素处理THP-1细胞24 h后可抑制细胞内Akt/m TOR、Raf/MEK/ERK信号转导通路的活化,并下调Bcl-2、上调Bax的表达。结论冬凌草甲素通过抑制Akt/m TOR、Raf/MEK/ERK信号转导通路的活化,以及调节凋亡调节蛋白Bax和Bcl-2的表达而发挥抗白血病效应。     

活性氧在荆花牡荆素诱导人肺癌A549细胞凋亡中的作用

目的 探讨紫花牡荆素(CAS)诱导人肺腺癌A549细胞凋亡及其机制.方法 体外培养A549细胞.MTT法测定CAS对A549细胞增殖的抑制;Annexin V/PI双染色分析细胞凋亡率;H2DCFH-DA探针流式细胞术分析活性氧(ROS)生成.结果 CAS能抑制人肺癌A549细胞增殖,呈浓度依赖性.Annexin V/PI法检测结果显示10 μmol/L的CAS作用A549细胞12 h、24 h、48 h后,其凋亡率分别为22.39%、38.66%、64.82%.H2DCFH-DA探针流式细胞术分析表明,完全培养基组、溶媒(0.1% DMSO)组对A459细胞作用0 h;CAS(10 μmol/L)对A549细胞作用3 h、6 h、12 h;N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC,10 mmol/L)+CAS(10 μmol/L)组对A549细胞作用6 h的ROS生成水平分别为8.47、15.26、66.2、74.1、82.2、67.3,随着CAS作用时间延长,细胞内ROS水平增加.NAC对细胞凋亡有抑制作用.结论 CAS可诱导A549细胞凋亡,其作用机制可能与提高细胞内ROS产生增加有关.     

氯化镧对人大肠癌HT-29细胞增殖及肿瘤相关microRNA变化的影响

目的探讨氯化镧对人大肠癌HT-29细胞增殖及肿瘤相关microRNA表达的影响。方法常规培养HT-29细胞,MTT法测定氯化镧对HT-29细胞的增殖影响,实量定量PCR法检测氯化镧作用HT-29细胞后microRNA let-7和miR34a的表达情况。结果 25μmol/L氯化镧可抑制HT-29细胞生长,肿瘤生长抑制率为:14.33%,且随着浓度增加(50、100μmol/L),肿瘤抑制率分别为:36.35%和64.52%,与对照组(0%)相比,差异显著,可见氯化镧可显著抑制大肠癌细胞HT-29的增殖(P<0.01)。实量定量PCR实验结果表明:低浓度氯化镧(25μmol/L、50μmol/L)对大肠癌HT-29细胞let-7表达的影响不明显(0.61±0.30,0.82±0.37),而100μmol/L氯化镧则可显著上调let-7的表达(2.64±0.57,与对照组相比P<0.05)。低浓度氯化镧(25μmol/L、50μmol/L)对大肠癌HT-29细胞miR34a表达的影响不明显(0.66±0.26,0.86±0.33),而100μmol/L氯化镧则可显著上调miR34a的表达(4.77±0.78,与对照组相比P<0.01)。结论一定浓度氯化镧可抑制人大肠癌细胞的增殖并上调抑癌相关microRNA的表达。     

熊果酸抑制人结肠癌HT-29细胞增殖并诱导凋亡的研究

目的探讨熊果酸对人结肠癌HT-29细胞的抗增殖和凋亡诱导作用。方法采用MTT法观察熊果酸对HT-29细胞增殖作用的影响;Hoechst 33258染色观察不同浓度熊果酸诱导的凋亡情况;流式细胞术检测熊果酸对细胞周期的影响。结果熊果酸对HT-29细胞具有明显的增殖抑制作用;20 mol/L、40 mol/L的熊果酸分别作用于HT-29细胞24 h后,较多细胞呈凋亡特征性改变;熊果酸可将HT-29细胞阻滞于G1期,随着熊果酸浓度的增加,细胞凋亡率也相应增加。结论熊果酸对HT-29细胞有较强的增殖抑制和诱导凋亡作用,其诱导凋亡的机制与熊果酸阻滞HT-29细胞的细胞周期有关。     

尼美舒利联合阿霉素对胃癌MGC803细胞的体外作用

目的:探讨尼美舒利联合阿霉素对胃癌MGC803细胞的协同作用。方法:通过MTT法和流式细胞仪AnnexinV-FITC/PI荧光染色法检测不同浓度的尼美舒利及其与阿霉素联合对胃癌MGC803细胞的生长抑制作用和凋亡率。结果:25μmol/L尼美舒利作用24h、72h细胞生长抑制率为10.90%和32.52%;浓度400μmol/L时,抑制率升为39.90%和91.78%。单用阿霉素(0.25mg/L)作用48h抑制率为28.56%,合用25、400μmol/L尼美舒利抑制率升为68.50%和89.30%。100μmol/L尼美舒利作用6h时细胞的凋亡率为5.67%,作用24h时凋亡率升为29.60%。结论:尼美舒利能抑制胃癌MGC803细胞的增殖并诱导其凋亡,与阿霉素具有协同作用。     

西达本胺联合地西他滨对霍奇金淋巴瘤细胞株增殖及凋亡的影响

目的探讨西达本胺联合地西他滨对霍奇金淋巴瘤(HL)细胞株Hs445和L428细胞增殖及凋亡的影响。方法采用MTT法检测西达本胺单用或联合使用地西他滨对Hs445和L428细胞的增殖与抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡情况及线粒体膜电位变化,Western blot检测细胞内cleaved PARP蛋白的表达。结果西达本胺作用24、48、72 h可抑制Hs445和L428细胞增殖,且呈现浓度和时间依赖性,对2种细胞的IC50(μmol/L)分别为1.91和3.46。西达本胺(μmol/L)(对Hs445为0.25、0.5,对L428为1、2)与地西他滨(μmol/L)(0.5、2)分别联合作用72h,对2种细胞的增殖抑制率(%)分别为35.76±0.97、54.20±1.32、54.12±1.24、73.13±0.45,41.05±0.67、56.40±0.39、67.80±0.89、82.35±1.45,对应浓度的西达苯胺单药组的增殖抑制率(%)为12.02±1.41、31.00±0.90,18.03±0.91、36.00±0.21(P0.05),且均为两药相互作用的协同指数(CI)1。0.5μmol/L西达本胺单用或其与2μmol/L地西他滨联合作用48 h后Hs445细胞凋亡率(%)分别为13.22±3.12 vs 67.26±7.87(P0.01);2μmol/L西达本胺单用或其与2μmol/L地西他滨联合作用48 h后L428细胞凋亡率(%)分别为34.03±4.67 vs 70.58±5.76(P0.01);联合用药组cleaved PRAP蛋白表达和线粒体膜电位的下降也明显高于单药组。结论西达本胺可抑制HL细胞株增殖并诱导其凋亡,与地西他滨联用对HL细胞株的增殖抑制及诱导凋亡具有明显著的协同效应。     

紫杉醇与顺铂联合化疗对宫颈鳞癌细胞株HCE1作用的实验研究

目的 观察紫杉醇加顺铂联合化疗在宫颈鳞癌细胞株HCE1中的协同效应,指导进一步临床应用.方法 (1)培养宫颈鳞癌细胞株HCE1,观察活细胞生长情况并摄片.(2)实验分组及检测:①终浓度为20 μmol/L、40 μmol/L、80 μmol/L的紫杉醇培养HCE1细胞;②终浓度为20 μg/ml、40 μg/ml、80 μg/ml顺铂培养HCE1细胞;③紫杉醇联合顺铂培养HCE1细胞,通过MTT比色法检测培养24 h、48 h、72 h后细胞增殖活力,并计算细胞生长抑制率;流式细胞仪分别检测24 h、48 h、72 h三个不同时间点的细胞凋亡发生率,并分析细胞周期改变.结果 (1)紫杉醇处理后凋亡细胞明显增多,细胞缩小变圆,细胞膜出泡等.(2)经终浓度分别为20 μmol/L、40 μmol/L、80 μmol/L紫杉醇处理HCE1细胞24 h时,细胞抑制率分别为(9.5±0.66)%、(17.1±1.51)%、(33.3±1.77)%,48 h时,细胞抑制率分别为(28.0±2.27)%、(45.2±3.15)%、(66.0±2.95)%,72 h时,细胞抑制率分别为(39.4±2.81)%、(66.2±7.02)%、(81.5±1.78)%;经终浓度分别为20 μg/ml、40 μg/ml、80 μg/ml顺铂处理HCE1细胞24 h时,细胞抑制率分别为(3.6±0.56)%、(6.5±0.98)%、(14.1±2.52)%,48 h时,细胞抑制率分别为(6.5±0.46)%、(9.9±1.35)%、(20.0±3.05)%,72 h时,细胞抑制率分别为(14.1±3.05)%、(42.1±3.90)%、(59.4±4.26)%;联合处理组以48 h 20 μmol/L紫杉醇联合20 μg/ml顺铂对HCE1细胞的增殖抑制作用为例,细胞增殖抑制率为(30.2±3.34)%,综上可见紫杉醇和顺铂以时间和剂量依赖性特点抑制宫颈癌细胞的增殖,紫杉醇联合顺铂对人宫颈癌HCE1细胞的增殖抑制具有协同作用.(3)流式细胞仪细胞周期分析表明,紫杉醇处理组G1期细胞比例有所增加,S期细胞比例明显降低,顺铂处理组G1期细胞比例明显降低,反之S期细胞比例明显升高,紫杉醇联合顺铂处理组G1期细胞比例和S期细胞比例介于紫杉醇处理组和顺铂处理组之间.以20 μmol/L紫杉醇作用HCE1细胞48 h为例,G1期细胞比例和S期细胞比例分别为(86.0±3.01)%、(9.1±0.66)%,40 μg/ml顺铂作用HCE1细胞48 h G1期细胞比例和S期细胞比例分别为(2.1±0.26)%、(92.2±6.24)%,20 μmol/L紫杉醇联合40 μg/ml顺铂作用HCE1细胞48 h G1期细胞比例和S期细胞比例分别为(13.2±0.78)%、(80.5±2.46)%.(4)细胞凋亡分析表明,紫杉醇处理组细胞凋亡率较对照组升高,呈时间和剂量依赖性特点;顺铂处理组细胞凋亡率较对照组也升高,呈时间和剂量依赖性特点;紫杉醇联合顺铂处理组细胞凋亡率较单药处理组高.结论 紫杉醇与顺铂联合对宫颈癌细胞的抑制作用明显增强,提示紫杉醇可与顺铂对宫颈癌细胞增殖的抑制产生协同作用.     

不同剂量蛋白酶体抑制剂MG-132在诱导K562细胞株凋亡中的作用

本研究探讨不同剂量蛋白酶体抑制剂MG．132对人慢性粒细胞白血病急性红白血病细胞株K562的干预作用。应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测不同剂量（0、2、4、8、16、32μmol／L）的MG-132作用48小时对K562细胞株增殖的影响;应用免疫细胞组织化学法检测相同条件下MG-132对K562细胞株中的核因子-κB（NF—κB）及糖皮质激素受体（glucocorticoidreceptor,GR）表达的影响;采用流式细胞术检测相同条件下MG-132对K562细胞株凋亡的影响。结果表明：不同剂量的MG-132作用48小时后K562细胞株的抑制率呈剂量依赖性,实验组的抑制率明显高于对照组,以32μmol／L剂量组的抑制率最高,为（45．24±4．12）％;K562细胞株中的NF—KB、GR的表达水平均表现出对MG-132剂量的依赖性,NF—κB的表达水平实验组明显低于对照组,以32μmol/L剂量组表达最低,为63．60±2．95。GR在16μmol／L剂量组表达最高,为75．62±2．70。K562细胞株的凋亡率亦表现出对MG-132剂量的依赖性,而且在实验组明显高于对照组,以32μmol／L剂量组的凋亡率最高,为（21．37±2．02）％。结论：MG-132可能是通过下调NF—κB、上调GR的表达诱导了K562细胞的凋亡和抑制,其效应表现为剂量的依赖性。     

三氧化二砷对转化生长因子β1诱导的大鼠肺成纤维细胞增殖的影响

目的探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)对转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的成纤维细胞增殖的影响。方法实验采用分离培养正常健康SD大鼠肺组织的成纤维细胞。取对数生长期的细胞随机分为空白组(正常成纤维细胞)、模型组(加入0.5μg/L浓度的TGF-β1的成纤维细胞)、以及干预组(在TGF-β1诱导的成纤维细胞中分别加入浓度为0.5、1、2μmol/L的As2O3),取12、24、48小时为观察时间点。用活细胞动态分析系统(Cell-IQ)观察各组细胞的形态和生长情况。用四甲基偶氮唑蓝(MTT)方法观察各组细胞的增殖抑制率。结果不同浓度As2O3干预组中大鼠肺成纤维细胞的增殖均受到抑制,抑制程度具有明显的剂量—时间依赖性,细胞增殖抑制率以各浓度As2O3干预组48小时观察时间点和2μmol/L干预组最为明显(P<0.01)。不同浓度As2O3干预组在48小时观察时间点的细胞增殖抑制率分别为(14.76±2.16)%、(32.55±2.80)%、(57.41±3.25)%(均P<0.01);2μmol/L干预组12小时、24小时、48小时的细胞增殖抑制率分别为(30.53±2.38)%、(41.29±2.67%)%、(57.41±3.25)%(均P<0.01),并且分别与0.5μmol/L及1μmol/L干预组在这3个时间点的细胞增殖抑制率相比,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论 As2O3能抑制TGF-β1诱导的大鼠肺成纤维细胞增殖,从而可能起到减轻肺纤维化的作用。     

咖啡因对棕榈酸作用下β细胞增殖和凋亡影响

目的观察咖啡因对游离脂肪酸棕榈酸作用下体外培养的β细胞增殖和凋亡的影响。方法根据不同浓度咖啡因(1、10、25μmol/L)和游离脂肪酸棕榈酸(500μmol/L)同时作用于体外培养胰岛β细胞分为5组:空白组(不含游离脂肪酸)、咖啡因1μmol/L组(含咖啡因1μmol/L+500μmol/L棕榈酸)、咖啡因10μmol/L组(咖啡因10μmol/L+500μmol/L棕榈酸)、咖啡因25μmol/L组(咖啡因25μmol/L+棕榈酸500μmol/L)和PA组(500μmol/L棕榈酸的脂性培养基)。以四甲基偶氮唑蓝(MTT)法反映细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡并计算凋亡率。结果 PA组细胞培养48小时、72小时、96小时于490nm光密度值分别为0.144±0.011、0.184±0.026、0.261±0.033,明显低于空白组(P<0.05)。咖啡因10μmol/L组培养72小时、96小时光密度值分别为0.274±0.031、0.452±0.039;咖啡因25μmol/L组培养72小时、96小时光密度值分别为0.280±0.049、0.463±0.051,显著高于PA组(P<0.05)。培养96小时PA组细胞凋亡率(40.55±20.33)%,较空白组(6.68±1.09)%明显升高(P<0.05)。咖啡因10μmol/L和25μmol/L组细胞凋亡率分别为(19.12±10.56)%和(20.97±9.75)%,较PA组明显下降(P<0.05)。结论游离脂肪酸棕榈酸导致体外培养β细胞增殖活性显著受抑、细胞凋亡增加。在一定浓度范围内,咖啡因可能改善棕榈酸诱导的胰岛β细胞增殖受抑和细胞凋亡。     

三氧化二砷对白血病HL-60细胞株的凋亡作用

目的：探讨三氧化二砷对HL-60的诱导凋亡作用。方法：琼脂糖电泳检测DNA条带;Hoecst 33258染色后荧光显微镜观察细胞核的变化。用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果：10μmol/L三氧化二砷处理HL-60细胞24~48 h可见到DNA出现梯形条带;处理24~48 h HL-60细胞核呈现细胞核浓缩和核碎裂现象。流式细胞仪测定12、24、和48 h的细胞凋亡率分别为（8.5±2.1）%、（12.8±3.4）%及（21.4±5.8）%,而培养48 h的HL-60细胞自然凋亡率仅为（1.5±0.5）%（P〈0.05）。结论：三氧化二砷可诱导HL-60细胞凋亡。     

偏钒酸钠对HL-60细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨偏钒酸钠对HL-60细胞增殖及凋亡的影响.方法 MTT法观察生长抑制情况;琼脂糖电泳检测DNA条带;Hoecst33258染色后荧光显微镜观察细胞核的变化;流式细胞仪（FCM）检测细胞凋亡率.结果 不同浓度的偏钒酸钠处理HL-60细胞,24h采用MTT检测结果显示低剂量的偏钒酸钠促进细胞增殖,高剂量的偏钒酸钠抑制细胞的生长;24h时高浓度偏钒酸钠处理HL-60细胞可见到DNA出现梯形条带,且细胞核呈现细胞核浓缩现象;流式细胞仪测定不同浓度偏钒酸钠5×10-7mol/L、1×10-7mol/L、1×10-8mol/L、1×10-9mol/L、1×10-11mol/L处理HL-60细胞,24h细胞凋亡率分别是（69.1±2.3）%、（56.3±4.9）%、（39.6±6.5）%、（31.4±1.6）%、（12.2±3.4）%,而培养24h的HL-60细胞自然凋亡率仅为（1.2±0.5）%（P＜0.05）.结论 偏钒酸钠可诱导HL-60细胞凋亡.     

PCI-32765和Bortezomib对B细胞肿瘤细胞系细胞增殖、凋亡的影响及其机制的研究

本研究旨在探讨Btk抑制剂PCI-32765和蛋白酶体抑制剂bortezomib对Raji、Ramos细胞的增殖、凋亡的影响及其作用机制.PCI-32765和bortezomib单药及联合用药处理Raji和Ramos细胞后,分别运用CCK-8法及流式细胞术检测细胞的增殖与凋亡,Western blot法检测Btk、NFκB、c-IAP1、Bcl-xL、caspase-3等蛋白的表达.结果表明：①PCI-32765（0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0μmol/L）和bortezomib（10、20、30、40、50、60、80 nmol/L）处理Raji和Ramos细胞48 h,均可抑制细胞增殖,抑制率呈剂量依赖性,且两药具有协同作用;②PCI-32765（2.0μmol/L）、bortezomib（20 nmol/L）单药及联合用药处理Raji和Ramos细胞不同时间（8、12、24、36、48、72 h）,均可抑制细胞存活率,抑制率呈时间依赖性,且两药具有协同作用;③PCI-32765（2μmol/L）和bortezomib（20 nmol/L）单药及联合用药处理Raji和Ramos细胞48 h,可明显促进Raji及Ramos细胞的凋亡.Raji细胞实验结果,空白对照组、PCI-32765和bonezomib单药组、联合用药组的细胞凋亡率分别为10.34±0.53％、24.26±0.91％、43.66±1.08％与74.06±0.72％,各组间有统计学差异（P＜0.05）;Ramos细胞实验结果,空白对照组、PCI-32765和bortezomib单药组、联合用药组的细胞凋亡率分别为15.16±1.49％、71.36±0.82％、75.32±2.36％与84.30±0.91％,各组间有统计学差异（P＜0.05）;④PCI-32765和bonezomib单药处理Raji、Ramos细胞后,细胞内Btk、NFκB、Bcl-xl及c-.IAP1的表达水平较对照组降低,Caspase-3的表达水平升高,两药联用后,作用增强.结论：PCI-32765和bonezomib可以协同抑制Raji与Ramos细胞的增殖,促进其凋亡,其机制可能与抑制Btk、NFκB的活性,下调Bcl-xl及c-IAP1等抗凋亡蛋白,同时上调Caspase-3等凋亡蛋白的表达而发挥作用.     

藏红花素对缺氧环境下Wistar大鼠视网膜Muller细胞活性和胶质纤维酸性蛋白表达的影响

目的观察不同浓度藏红花素对缺氧条件下RMC活性和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达的影响。方法改良Reichenbach等方法原代培养Muller细胞,并采用GFAP和Vimentin染色鉴定RMC。RMC培养基中加人终浓度10μmoL／L、50μmoL／L和100μmoL／L藏红花素,于1—7d计数细胞,于24h和48h台盼蓝染色测定细胞活性,对照组RMC培养基中未加入藏红花素。培养液中加入终浓度为200μmol/L的CoCl2建立化学缺氧模型。实验分4组：缺氧组（H组）、藏红花素处理组（C组）、缺氧＋藏红花素处理组（HC组）和正常对照组（NC组）,其中C和HC组培养液中加入10μmol／L藏红花素。处理24h,台盼蓝染色检测细胞活性,采用Westernblot法半定量检测GFAP的表达。结果含10μmoL／L和50μmol／L藏红花素的培养液中,细胞生长无抑制;100μmol/L藏红花素的培养液中细胞增生受到抑制,培养24h和48hRMC活性分别为（68±7）％、（59±9）％,与对照组相比,明显降低（t24h=3．723,P〈0．05;t48h=4．103,P〈0．05）。在缺氧条件下,正常细胞和10μmoL／L藏红花素的培养液中细胞活性受到明显抑制,藏红花素可减轻缺氧环境对细胞活性的抑制作用。在缺氧条件下,GFAP表达明显升高（t=2．945,P〈0．05）;藏红花素可部分抑制GFAP高表达（t=3．362,P〈0．05）。结论缺氧能诱导体外培养视网膜Muller细胞死亡,适合浓度藏红花素可抑制缺氧诱导的视网膜Muller细胞死亡。     

Apogossypolone诱导骨髓瘤细胞凋亡及其机制研究

本研究探讨棉酚衍生物apogossypolone（ApoG2）对多发性骨髓瘤细胞系的抑制增殖、诱导凋亡的作用及其作用机制。应用台盼蓝染色、Hoechst 33258染色、透射电子显微镜检、DNA凝胶电泳法、流式细胞仪分析细胞DNA含量等来判断ApoG2对多发性骨髓瘤细胞的抑制增殖和诱导凋亡作用。以caspase-3、caspase-9以及BCL-2、BCL—XL分析ApoG2诱导骨髓瘤细胞凋亡的可能机制。结果表明：ApoG2对多发性骨髓瘤细胞增殖具有明显的抑制作用,IC50值在U266细胞和Wusl细胞（48小时）分别为0．1、0．2μmol／L。ApoG2可以诱导骨髓瘤细胞凋亡且呈时间和剂量依赖性。ApoG2可以使骨髓瘤细胞周期停止在G2期,U266细胞G2期比例从9．7％增至19．6％。Wusl细胞从9．8％增至31．7％。ApoG2能导致U266、Wusl细胞caspase-9、caspase-3活性增高。U266细胞和Wusl细胞经ApoG2 25μmoL／L作用24小时后,BCL—XL表达分别下降（7．3±1．4）％和（11．2±6．2）％,Wusl细胞BCL-2表达下降84．4±3．4％。结论：ApoG2对多发性骨髓瘤细胞具有抑制增殖和诱导凋亡作用,其作用机制可能和下调BCL-2／BCL—XL表达以及影响细胞周期有关。     

辛伐他汀和普罗布考对TNF-α诱导的内皮细胞凋亡的影响

【目的】探讨辛伐他汀和普罗布考对TNF-α诱导人脐静脉内皮细胞（HUVEC）凋亡的影响及其影响的量效关系和时效关系。【方法】体外培养HUVES,取对数生长期的细胞分为四个组：①TNF-α干预的浓度依赖性组（Ac组）[按浓度分为Acl（Ong／mL）,Ac2（1ng／mL）,Ac3（10ng／mL）,Ac4（25ng／mL）];②TNF-α干预的时间依赖性组（At组）[按时间分为Atl（Oh）,At2（12h）,At3（24h）,At4（48h）];③10ng／mLTNF_a＋不同浓度辛伐他汀干预组（B组）[浓度分为B1（O μmol／L）,B2（O．01 μmol／L。）,B3（O．1 μmol／L。）,B4（1．0t μmol／L）];④1O ng／mL TNF-a不同浓度普罗布考干预组（c组）[浓度分为C1 （0 μmol／L。）,C2（20 μmol／L）,c3（40 μmol／L）,C4（80 μmol／L）]。以上四组均干预12h后,用流式细胞术检测各组凋亡率。【结果】①Ac组凋亡率分别为：Acl（O．81±0．25％）,Ac2（2．35±0．04％）,Ac3（4．54±0．32％）,Ac4（6．17±0．28％）,各组之间存在统计学差异（P〈0．01）。②At组凋亡率分别为,Atl（0．87±o．35％）,At2（4．53±0．32％）,At3（7．45±1．97％）,At4（10．92±1．27％）,各组间存在统计学差异（P〈O．01）。③B组凋亡率分别为,B1（4．46±0．53％）,B2（1．38±0．12％）,B3（2．89±0．27％）,B4（3．65±0．08％）,各干预组与对照组之间存在统计学差异（P〈O．01）。④C组细胞凋亡率分别为,C1（4．60±0．64％）,C2（2．61±0．18％）,C3（2．21±0．22％）,c4（1．28±0．34％）,各干预组与对照组之间存在统计学差异（P〈0．01）。【结论】①TNF-α可以诱导内皮细胞凋亡,且存在浓度依赖性和时．：良赖性。②辛伐他汀可以抑制TNF-α口诱导的内皮细胞凋亡,但无浓度依赖性。③普罗布考可以抑制TNF-α诱导的内皮细胞凋亡,但无浓度依赖性。