干扰素α2a对人结肠癌细胞胸苷磷酸化酶表达和5′-脱氧氟尿苷抗癌活性的影响

目的 探讨干扰素-α2a(IFN-α2a)对人结肠癌细胞胸苷磷酸化酶(TP)mRNA表达水平以及5′-脱氧氟尿苷(5′-DFUR)和氟尿嘧啶(5-FU)抗癌效应的影响.方法 不同剂量IFN-α2a分别处理人结肠癌细胞LOVO和SW480,荧光定量PCR检测TP mRNA表达水平;MTT法检测联合应用IFN-α2a前后5-FU和5′-DFUR对LOVO和SW480抑制作用的半数有效浓度(IC50)变化情况.结果 与0 U/ml IFN-α2a浓度组相比,500 U/ml及5000 U/ml组可明显上调LOVO和SW480细胞TPmRNA表达(P＜0.01),而50 U/ml则对上述两种细胞TPmRNA表达水平无明显影响(P＞0.05).联合应用浓度为20 U/ml的IFN-α2a后,5-FU对LOVO和SW480细胞的IC50无明显改变(P＞0.05),但5′-DFUR的IC50则明显降低(P＜0.05).结论 IFN-α2a能上调结肠癌细胞TP mRNA的表达水平,并可使5′-DFUR对结肠癌细胞的IC50明显下降,而对5-FU则无明显影响.     

转染胸苷磷酸化酶基因对5’-脱氧氟尿苷抑制结肠癌细胞的影响

目的探讨转染胸苷磷酸化酶（TP）cDNA对5’-脱氧氟尿苷（5＇-DFUR）抑制人结肠癌细胞LOVO作用的影响。方法将TPcDNA序列克隆以慢病毒表达载体包装后转染人结肠癌细胞LOVO（LOVO．TP组）,另设空白对照组和LOVO．载体组。以流式细胞仪检测3组细胞转染效率,RT—PCR法检测3组细胞TPmRNA表达;Westernblot法检测转染前后TP蛋白水平;MTF法检测转染前后LOVO对5’-DFUR药物敏感性的变化;高效液相色谱法（HPLC）检测3组细胞转化不同浓度5’-DFUR生成5-FU量的情况。结果转染11P基因并传代5代后,LOVO细胞的转染效率在95％左右。转染TP基因后,LOVO．TP组的TPmRNA表达水平为空白对照组的（282．5＋86．8）倍（P〈O．01）,而LOVO．载体组与对照组相比差异无统计学意义（P〉O．05）;Westernblot检测显示,LOVO．TP组的TP蛋白表达明显高于对照组和LOVO．载体组。5＇-DFUR对LOVO细胞半数有效剂量（IC50）对照组为（1607．3~56．8）~mol／L,明显高于LOVO．TP组的（1087．7~89．1）μmol／L（P〈0．01）;而LOVO-染载体组为（1699．5~38．7）μmol／L,与对照组相比差异无统计学意义（P〉O．05）。培养基中分别加入0、500、1000和2000μmol／L的5＇-DFUR后,对照组培养基中分别检出0、2．10、3．13和7．19μmol／L的氟尿嘧啶（5．FU）;而在LOVO．TP组的细胞培养基中则分别检出0、22．16、30．94和40．02μmol／L的5．FU;而LOVO-载体组的培养基中则几乎无5．Fu检出。结论转染TPcDNA能够明显提高LOVO细胞的TPmRNA及TP蛋白表达水平。使细胞外5’-DFUR转化为5-Fu增多．明显提高5’-DFUR对LOVO的细胞毒性作用。     

干扰素α2a对人结肠癌细胞胸苷磷酸化酶表达和5＇脱氧氟尿苷抗癌活性的影响

目的探讨干扰素-α2a（IFN-αt2a）对人结肠癌细胞胸苷磷酸化酶（TP）mRNA表达水平以及5＇-脱氧氟尿苷（5’-DFUR）和氟尿嘧啶（5-FU）抗癌效应的影响。方法不同剂量IFN-α2a分别处理人结肠癌细胞LOVO和SW480．荧光定量PCR检测TPmRNA表达水平：MTT法检测联合应用IFN-α2a前后5．FU和5＇-DFUR对LOVO和SW480抑制作用的半数有效浓度（IC50）变化情况。结果与0U／mlIFN-α2a浓度组相比．500U／ml及5000U／ml组可明显上调LOVO和SW480细胞TPmRNA表达（P〈0．01）,而50U／ml则对上述两种细胞TPmRNA表达水平无明显影响（P〉0．05）。联合应用浓度为20U／ml的IFN-α2a后．5．FU对LOVO和SW480细胞的IC50无明显改变（P〉0．05）．但5’-DFUR的IC50则明显降低（P〈0．05）。结论IFN-α2a能上调结肠癌细胞TPmRNA的表汰水平并可使5＇-DFIIR对结肠痛细胞的1C50明显下降而对5-FI7则无明显影响。     

氟尿嘧啶对人结肠癌SW480细胞ABCG2表达的影响

目的观察氟尿嘧啶（5-FU）对人结肠癌SW480细胞ABCG2表达的影响。方法用不同药物浓度的5-FU处理SW480细胞,用CCK8法检测5-FU在SW480中的IC50,流式细胞仪检测SW480细胞ABCG2的阳性表达率．RT—PCR检测ABCG2的mRNA在SW480细胞中的表达差异。结果5-FU对SW480细胞的IC50随着药物浓度的增加而升高（P〈0．05）。流式细胞仪检测发现,正常SW480细胞（A组）中ABCG2阳性表达率为（6．26±0．86）％;在药物处理48h后即刻检测时（B组）的阳性表达率下降至（3．43±1．18）％（P〈0．05）;在药物处理48h后的第2代细胞检测时（c组）则升高至（12．91±3．42）％（P〈0.05）。3组ABCG2mRNA表达趋势与流式细胞仪检测结果的趋势一致。结论不同浓度的5-FU可以影响人结肠癌SW480细胞ABCG2的表达。     

microRNA-34a增加奥沙利铂对结肠癌细胞敏感性的实验研究

目的:构建奥沙利铂耐药结肠癌细胞株(SW480/ADR),观察miRNA-34a对SW480/ADR细胞奥沙利铂敏感性的影响。方法:使用浓度梯度法构建奥沙利铂耐药细胞株(SW480/ADR)。miR-34a慢病毒转染SW480/ADR细胞,MTT法检测细胞增殖,Real-time PCR定量检测miR-34a表达,Western blot检测蛋白表达。结果:SW480、SW480/ADR和过表达miR-34a-SW480/ADR细胞miR-34a的2-△△Ct值为0.15±0.03、0.12±0.02和0.74±0.13,各组间差异有统计学意义(P<0.01)。奥沙利铂对SW480、SW480/ADR和过表达miR-34a-SW480/ADR细胞的IC50值分别为8.64±1.54、24.16±3.72和11.52±1.22μmol/L,各组间差异有统计学意义(P<0.01)。SW480、SW480/ADR和过表达miR-34a-SW480/ADR细胞OCT-4蛋白的相对灰度值为0.096±0.014、0.352±0.053和0.136±0.017,各组间差异有统计学意义(P<0.01)。结论:miR-34a可以显著降低结肠癌奥沙利铂耐药细胞OCT-4蛋白表达,逆转结肠癌细胞对奥沙利铂的耐药。     

多种人结肠癌5-氟尿嘧啶耐药细胞株的建立及耐药机制初步研究

目的:通过建立多种5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药的人结肠癌细胞株,探讨耐药的结肠癌细胞的生物学特性与耐药机制。方法:选用人结肠癌HT-29、LoVo和SW480细胞,通过高浓度5-FU反复接触结合药物浓度递增法建立耐药株HT-29/5-FU、LoVo/5-FU和SW480/5-FU。不同浓度5-FU作用所建立的耐药细胞株及其亲本细胞后,分别用MTT法、流式细胞术、qRT-PCR、Westernblot检测细胞对5-FU的敏感性、周期分布、耐药相关分子[P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)、ATP结合盒超家族G成员2(ABCG2)]及第十号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)与蛋白激酶B(Akt)的mRNA和蛋白的表达,并用Akt活性检测试剂盒检测细胞Akt活性。结果:与各自的亲本细胞比较,构建的HT-29/5-FU、LoVo/5-FU和SW480/5-FU对5-FU的IC50均明显升高(均P0.05),耐药指数分别为7.213、5.849和15.940。随着5-FU处理浓度的升高,亲本细胞和耐药细胞G0/G1期细胞数量均明显增加(均P0.05),但同一浓度5-FU处理下,各耐药株G0/G1期细胞数量均明显少于其对应亲本株(均P0.05)。与各自的亲本细胞比较,对应耐药株的P-gp、MRP1、ABCG2、Akt的mRNA和蛋白表达水平均明显升高,而PTEN表达均明显降低(均P0.05),且Akt活性均明显提高(均P0.05)。结论:成功建立了结肠癌5-FU耐药细胞株,其耐药机制可能与PTEN下调所致的PI3K/Akt降低PI3K/Akt通路活化有关。     

T-box3基因对结肠癌细胞增殖、凋亡的影响及其机制

目的探讨T-box3基因(TBX3)对结肠癌细胞增殖、凋亡的影响, 并初步探讨其机制。方法应用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白印迹(Western blot)方法检测结肠癌患者及结肠癌细胞株TBX3的mRNA和蛋白表达。培养结肠癌SW620细胞株并进行干预, 分为小干扰RNA(siRNA)-TBX3转染组、siRNA-对照组转染组、空白组。转染48 h后噻唑蓝(MTT)实验检测SW620细胞活性, 流式细胞术检测细胞凋亡。RT-qPCR和Western blot检测各组细胞增殖、凋亡相关基因、蛋白表达。结果结肠癌患者肿瘤组织TBX3 mRNA和蛋白相对表达水平显著高于癌旁组织(3.77±0.92、0.66±0.14比0.90±0.22、0.18±0.03, t=25.02、28.21, P<0.01);结肠癌SW620细胞株TBX3 mRNA和蛋白相对表达水平显著高于HIEC(3.01±0.44、0.92±0.06比1.15±0.17、0.24±0.03), 差异均有统计学意义(t=9.68、24.08, P<0.01)。siRNA-TBX3转染组SW620...     

类巨噬细胞增强 5’-脱氧氟尿苷抗结直肠癌细胞活性

目的探讨类巨噬细胞表达的胸苷磷酸化酶(dThdPase)能否增强细胞内激活抗癌药物5'-脱氧氟尿苷(5'-DFUR)抗结直肠癌细胞作用。方法应用ELISA法分别检测结直肠癌细胞系LS174T、CloneA、Colo320、CX-1、LOVO、MIP101和类巨噬细胞系THP-1、U937的dThdPase蛋白含量。采用MTT分析,分别测定出氟尿嘧啶(5-FU)和5'-DFUR在6株结直肠癌细胞的半数有效浓度(IC50)。把5-FU或5'-DFUR同THP-1或U937细胞一起培养24h,其上清液2倍稀释后加入结直肠癌细胞中行MTT分析,测定IC50有无改变。并在培养THP-1或U937的培养基中加入定量5'-DFUR后检测5-FU的生成量。结果6株结直肠癌细胞中仅LS174T检出0.5U/mg、LOVO检出8.9U/mg的dThdPase蛋白,其他4株未检出。而THP-1和U937的dThdPase蛋白含量则分别为18.2U/mg和19.3U/mg。5'-DFUR对全部癌细胞的IC50高于5-FU的14.5～94.4倍(P<0.01)。5-FU和5'-DFUR同THP-1(或U937)细胞一起培养24h后,5-FU对6种癌细胞的IC50无明显改变(P>0.05),而5'-DFUR的IC50则分别下降到原来的5.4%～41.8%(P<0.001)。并从加入400μmol5'-DFUR的THP-1和U937的培养液中分别检出40.2μmol和32.9μmol的5-FU。结论6株结直肠癌细胞基本无dThdPase活性,不能在细胞内转化5'-DFUR为5-FU。类巨噬细胞表达的dThdPase可以转化5'     

同型异型盒C11基因在结肠癌细胞增殖中的作用及其机制

目的探讨同型异型盒C11(HOXC11)基因在结肠癌增殖中的作用及其机制。方法在肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库检索结肠癌相关基因进行分析。定量聚合酶链反应(qPCR)法检测河北医科大学第四医院胃肠外科2019年1月至2019年12月行结肠癌根治术的70例临床结肠癌组织、癌旁正常黏膜组织中HOXC11表达;检测结肠癌细胞株人类肿瘤细胞系116(HCT116)、人类大肠癌H-29细细胞(HT-29)、人结肠癌SW480细胞(SW480)及肠上皮细胞株新型人肠胚胎细胞模型(HIEC)(均购自中国科学院上海细胞资源中心)中HOXC11表达,对数据库结果进行验证。用HOXC11-小干扰RNA(siRNA)转染SW480细胞,检测转染对SW480细胞活性及增殖的影响;同时检测抑制HOXC11后SW480细胞增殖相关基因表达。使用STRING数据库对结肠癌中HOXC11的功能进行蛋白相互作用(PPI)网络分析及富集分析。两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果TCGA数据库结果显示HOXC11在结肠癌高表达(|logFC|>2,P<0.05),高表达HOXC11是患者预后差的标志(χ²=3.92,P<0.05),验证结果与数据库结果一致。结肠癌细胞株HOXC11水平在SW480为1.073±0.190、HT-29为0.743±0.029,明显高于HIEC(0.247±0.042),SW480细胞中HOXC11水平最高(F=40.221,P<0.05),差异均有统计学意义。PPI网络分析显示HOXC11与其相邻节点呈现出共表达趋势,功能富集分析显示HOXC11的靶基因影响了生长、发育、增殖等很多生物学过程。HOXC11-siRNA转染后SW480细胞活性低于对照物及无关序列组,细胞活性在对照组、无关序列组、HOXC11-siRNA组分别为0.993±0.114、0.980±0.077、0.468±0.077(F=65.011,P<0.05)、细胞周期处于G0/G1期的细胞比例高于对照物及无关序列组,处于S期的比例明显低于对照物及无关序列组,处于G0/G1期3组数值分别为53.767±9.150、53.433±6.240、79.300±6.252(F=12.248,P<0.05);处于S期3组数值分别为33.200±7.529、36.167±7.731、13.367±4.565(F=10.071,P<0.05);G2/M期3组数值分别为12.967±3.584、10.367±1.620、7.300±2.022(F=3.700,P<0.05)。HOXC11-siRNA转染后SW480细胞Cyclin D1、CDK4表达分别为1.032±0.142、0.967±0.058、0.439±0.101;1.028±0.139、0.964±0.091、0.467±0.075明显低于对照组及无关序列组(F=18.798,P<0.05;F=17.011,P<0.05),而p21的表达分别为0.457±0.105、0.486±0.132、0.847±0.060(F=8.932,P<0.05),明显高于对照组及无关序列组,差异均有统计学意义。结论HOXC11在结肠癌中表达增强与预后有关,并可能通过促进细胞增殖导致肿瘤进展。     

RIZ1基因表达缺陷对结肠癌细胞增殖凋亡的影响

目的 观察抑癌基因Rb结合锌指结构基因(RIZ1)表达缺陷对结肠癌细胞增殖和凋亡能力的影响.方法 以表达RIZ1的LoVo细胞和不表达RIZ1的SW480细胞作为研究对象,采用甲基化特异性PCR(MSP)法检测2株结肠癌细胞的RIZ1基因启动子的甲基化状况;以3×105/瓶为细胞观察单位,5 μmol/L的5-杂氮2'-脱氧胞苷(5-aza-CdR)对细胞进行去甲基化处理48 h,用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot分别检测RIZ1的mRNA和蛋白表达,观察处理前后的差异;细胞增殖实验和流式细胞仪分别检测细胞的增殖和凋亡.结果 在SW480细胞中可以扩增出RIZ1基因启动子的甲基化条带,经去甲基化处理后,则能检测出该基因的mRNA和蛋白的表达条带,其增殖速度明显减慢,凋亡率从(4.4±1.7)%增高到(23.8±2.6)%,差异有统计学意义(P＜0.05),5 μmol/L的5-aza-CdR可显著上调SW480中RIZ1的表达;而LoVo细胞中未检测到基因启动子的甲基化,处理前后其基因表达、增殖和凋亡差异均无统计学意义(P＞O.05).结论 抑癌基因RIZ1启动子异常甲基化在调节其表达中发挥重要作用,对RIZ1进行去甲基化处理使其重新表达能明显减缓结肠癌SW480细胞的生长,促进其凋亡.     

萝卜硫素对结肠癌SW480细胞增殖、侵袭及Notch通路的影响

目的研究萝卜硫素（SFN）对人结肠癌SW480细胞增殖、侵袭及Notch通路的影响。 方法MTT法测定不同浓度SFN对SW480细胞生长抑制作用,Transwell侵袭实验测定1、2、5 μmol/L SFN对SW480细胞体外侵袭能力的影响,划痕实验测定1、2、5 μmol/L SFN对SW480细胞体外迁移能力的影响,Western blotting法测定1、2、5 μmol/L SFN处理后SW480细胞Notch、Hes1、Ki-67、增殖细胞核抗原（PCNA）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）、E-cadherin蛋白表达水平。 结果与对照组比较,1、2、5、10、20、40 μmol/L SFN处理后均能显著抑制SW480细胞增殖（P<0.05）。5 μmol/L SFN作用48 h后对SW480细胞抑制率为（26.38±3.24）%,细胞活力大于70%,为防止SW480细胞活力过低导致侵袭实验和划痕实验出现假阳性结果,因此后续实验选取SFN浓度1、2、5 μmol/L进行。侵袭和迁移实验发现,与对照组比较,人结肠癌SW480细胞经1、2、5 μmol/L SFN处理48 h后侵袭能力、迁移能力、Ki-67、PCNA、MMP-9蛋白表达水平显著降低（P<0.05）,E-cadherin蛋白表达水平显著升高（P<0.05）,呈浓度依赖性;与对照组比较,人结肠癌SW480细胞经1、2、5 μmol/L SFN处理48 h后,Notch、Hes1蛋白表达水平显著降低（P<0.05）。 结论SFN可能通过阻断Notch通路活化,下调Hes1表达水平,达到抑制结肠癌SW480细胞增殖、迁移、侵袭的目的。     

转染胸苷磷酸化酶基因对肝癌细胞的双重影响

目的 探讨转染胸苷磷酸化酶(TP)cDNA对肝癌细胞SMMC-7721药理及生理作用的影响。方法构建包含TP cDNA全长的真核表达载体,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测TP mRNA表达水平,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测药物的敏感性,Boyden小室法检测诱导内皮细胞移动的能力,流式细胞仪检测凋亡细胞百分比。结果 阳性转染克隆(SMMC-7721-pTP)与转染空载体(SMMC-7721-vec)相比,TP mRNA表达水平由0.48±0.06升高至2.09±0.16(P<0.01);氟铁龙的IC50则由(162.25±11.03)μmol／L降至(56.81±9.85)μmol／L(P<0.01);凋亡细胞百分比由(6.36±1.97)％降至(3.76±0.50)％;诱导内皮细胞穿过微孔滤膜的数目则由122±35升高至275±29(P<0.01)。结论转染TP cDNA能够提高SMCC-7721细胞对5-FU前体药物的敏感性,但同时具有抑制细胞凋亡和诱导内皮细胞移动能力增强的不良作用。转染TPcDNA的途径无治疗肝细胞癌的潜在临床价值。     

细胞密度对结肠癌细胞整合素αγβ6表达和基质金属蛋白酶9分泌的影响

目的 探讨细胞密度对结肠癌细胞整合素αγβ6表达和基质会属蛋白酶9(MMP-9)分泌的影响. 方法用流式细胞仪榆测结肠癌细胞系WiDr和人正常角质细胞系HaCaT细胞株在高、低细胞密度培养条件下αγβ6表达的情况;用Biotrak MMP-9测定仪和明胶酶谱法分别测定不同的结肠癌细胞WiDr和SW480细胞株在高、低密度培养条件下MMP-9的活性和分泌水平. 结果表达αγβ6的结肠癌WiDr细胞出现细胞密度依赖的αγβ6表达增加,而正常角质细胞系HaCaT细胞在高、低密度培养条件下αγβ6表达无改变.Biotrak MMP-9活性分析显示,每个表达αγβ6的WiDr细胞和SW480β6细胞的MMP-9分泌量在高密度培养条件下分别是(3.3±1.2)×10-7-ng和(27.2±3.0)×10-7ng,在低密度培养条件下分别足(1.8±0.7)×10-7ng和(10.9±2.0)×10-7ng,而每个缺乏αγβ6表达的SW480 wild细胞在高、低细胞密度培养条件下分别足(3.9±1.7)×10-7ng和(3.8±0.7)×10-7ng,MMP-9分泌水平无明显变化(t=0.47,P＞0.05).明胶酶谱分析显示SW480 β6细胞的MMP-9活性水平在高密度培养时比低密度培养明显增加,而SW480 wild和HaCaT细胞的MMP-9活性水平无明显改变.结论 细胞高密度诱导结肠癌细胞αγβ6表达,促进MMP-9的分泌,构成了癌细胞永生化侵袭浸润性生长的基础.     

脆性组氨酸三联体基因对结肠癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨脆性组氨酸三联体基因（FHIT）转染对结肠癌细胞株SW480增殖和凋亡的影响及其作用机制.方法 将重组真核表达质粒pRc/CMV2-FHIT通过脂质体转染技术导入人结肠癌细胞株SW480（实验组）,筛选稳定转染的细胞并扩增培养,以转染了空质粒pRc/CMV2的SW480细胞作为阴性对照,以正常SW480细胞作为空白对照.应用MTT法检测细胞的增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期分布和细胞凋亡率,Western blot分析caspase-8酶原的变化,半定量RT-PCR检测caspase-8 mRNA水平的改变,肽核酸标记底物的比色法检测caspase-8的相对活性.结果 转染96 h后,实验组和阴性对照组细胞生长抑制率分别为71.7%和16.9%,G0/G1细胞比例分别为（63.3±3.5）%和（50.6±2.1）%,细胞凋亡率分别为（40.5±3.1）%和（18.6±2.6）%,caspase-8 mRNA条带光密度积分值分别为107和41,caspase-8蛋白相对活性分别为0.43和0.25;上述差异均有统计学意义（P＜0.05）.当加入FHIT抑制剂后,caspase-8蛋白相对活性恢复至对照组水平（0.22）.结论 FHIT基因转染能够明显抑制人结肠癌细胞株SW480的增殖,诱导SW480细胞发生G0/G1期阻滞,其作用机制可能与caspase-8表达及活性上调有关.     

吉非替尼对结肠癌细胞的生长抑制作用与PTEN表达的关系

目的 观察表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼对人结肠癌细胞的生长抑制作用,探讨这种作用与结肠癌细胞PTEN表达的关系.方法 应用体外药物敏感实验检测吉非替尼对6种人结肠癌细胞系的生长抑制作用;应用RT-PCR检测不同结肠癌细胞中PTEN mRNA水平;应用Western blot 检测结肠癌细胞中PTEN蛋白表达水平.结果 吉非替尼在体外对6种结肠癌细胞系的生长抑制作用差异很大(F=325.51,P＜0.05).吉非替尼作用浓度为1 μmol/L时,Lovo细胞系抑制率达34%,对吉非替尼最为敏感,其半量抑制浓度(IC50)＜10 μmol/L;HT29和SW480为中度敏感(10μmol/L＜IC50＜100 μmol/L);而HCT116、LS174T和SW620不敏感,其IC50＞100 μmol/L.各个细胞系中PTEN mRNA和PTEN蛋白均有表达.结论 吉非替尼对结肠癌细胞的生长抑制作用与PTEN mRNA和PTEN蛋白表达水平无明显相关,即PTEN表达状态还不能作为预测结肠癌对吉非替尼敏感性的可靠生物学指标.     

脆性组氨酸三联体基因转染对人结肠癌细胞株SW480奥沙利铂敏感性的影响

目的 观察脆性组氨酸三联体基因(FHIT)转染对人结肠癌细胞株SW480奥沙利铂敏感性的影响.方法 将重组真核表达质粒pRc/CMV2-FHIT通过脂质体转染技术导入人结肠癌细胞株SW480,筛选稳定转染的细胞并扩增培养,以转染了空质粒pRc/CMV2的SW480细胞(SW480-pRc/CMV2)和正常SW480细胞为对照.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测FHIT基因的mRNA转录水平.以奥沙利铂作用于3组细胞,用噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞的生长抑制率,用流式细胞仪检测奥沙利铂处理前后各组结肠癌细胞的凋亡率及细胞周期的变化.结果 SW480-FHIT细胞的RT-PCR产物经凝胶电泳有明显的阳性条带,而对照组则无;经奥沙利铂处理后,转染FHIT基因的SW480细胞的凋亡水平与空质粒转染组及结肠癌细胞株组比较明显增高(第2、3、4天A值比较P<0.05),并且FHIT基因与奥沙利铂有轻度的协同促进凋亡作用;同时奥沙利铂处理前后实验组结肠癌细胞的生长周期较对照组均出现了明显的G_0/G_1期阻滞,且细胞的生长抑制率存在浓度和时间依赖性.结论 外源性FHIT基因表达与奥沙利铂协同促进SW480细胞凋亡及细胞周期阻滞,FHIT基因可增加结肠癌细胞对奥沙利铂的敏感性.     

靶向于人端粒酶逆转录酶的miR-138增强结肠癌细胞SW480对5-氟尿嘧啶的敏感性

目的 观察miR-138对结肠癌细胞SW480人端粒酶逆转录酶(hTERT)表达的影响,探讨miR-138模拟体mimic沉默hTERT在SW480对5-氟尿嘧啶(5-Fu)化疗药物敏感性中的作用.方法 流式细胞仪检测50 nmol/L和10 nmol/L miR-138模拟体(mimic)转染SW480后hTERT的表达;5μl异硫氰酸荧光素(FITC)标记的细胞核增殖抗原(Ki-67)抗体染色转染和未转染50 nmol/Lmimic的SW480,流式细胞仪检测1 mmol/L 5-Fu处理和未处理的细胞增殖;碘化丙锭(PI)单染和膜联蛋白Ⅴ(Annexin Ⅴ)-PI双染转染和未转染50 nmol/L mimic的SW480,流式细胞仪检测1 mmol/L5-Fu处理和未处理的细胞周期和凋亡状态.结果 miR-138 mimic在50 nmol/L和10 nmol/L时,hTERT表达率分别为(30.25±1.34)％和(60.03±2.78)％,而阴性对照组为(87.50±1.63)％;转染miR-138 mimic的SW480细胞组与非转染组Ki-67阳性细胞分别为(58.18±2.90)％和(83.45±2.41)％;sub-G0期分别为(27.33±1.70)％和(1.05±0.19)％;凋亡率达(29.50±2.27)％和(5.30±1.74)％;mimic转染组、5-Fu处理组和mimic转染与5-Fu联合组的细胞增殖率分别为(61.00±1.73)％、(57.00±2.03)％和(23.00±1.24)％,sub-G0期细胞分别为(28.12±1.47)％、(34.87±2.01)％和(70.94±3.04)％;凋亡细胞比例分别为(32.15 ±2.76)％、(40.07±2.58)％和(80.84±3.06)％,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 MiR-138 mimic可以抑制SW480中hTERT表达并增强SW480对5-Fu的敏感性.     

沉默Lin28b基因表达促进人结肠癌细胞奥沙利铂化疗敏感性

目的 探讨人结肠癌细胞中Lin28b基因表达及其与奥沙利铂化疗敏感性之间的关系.方法 构建干扰Lin28b的shRNA质粒(sh-Lin28b),并转染至结肠癌细胞(Cac02、SW480和HCT116细胞);逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法分别检测结肠癌细胞中Lin28b在mRNA和蛋白水平的表达;用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测sh-Lin28b和奥沙利铂化疗协同作用,Transwell实验检测处理后的结肠癌细胞迁移能力.结果 RT-PCR和Western blot结果证实Cac02、HCT116及SW480结肠癌细胞中均有Lin28b基因表达,其中在SW480细胞中的蛋白表达量比在HCT116中高1.83倍.SW480和HCT116细胞中Lin28b的mRNA表达在50 nmol/L的sh-Lin28b作用下分别被下调36.4％和90.2％,在100 nmol/L的sh-Lin28b的条件下分别被下调61.8％和89.5％.CCK-8结果显示奥沙利铂处理48 h后,HCT116细胞的IC50值为(6.09±1.42) mg/L,SW480细胞升高34.3％,至(8.18 ±3.64) mg/L.sh-Lin28b联合奥沙利铂处理组比较于对照转染组(NC)抑制SW480和HCTll6细胞生存率分别为(55.10±0.78)％和(50.30±0.69)％.Transwell 实验结果显示SW480细胞的迁移能力在sh-Lin28b的作用下降低至(48.60±0.92)％.结论 沉默表达于结肠癌细胞的Lin28b,可显著抑制结肠癌细胞的迁移能力,并促进奥沙利铂的化疗敏感性.     

CCL19下调β-链蛋白、细胞周期蛋白D1抑制结肠癌

目的:研究趋化因子CCL19对SW1116结肠癌细胞增殖、周期及5-FU疗效的影响。方法 :构建慢病毒LV5-CCL19转染结肠癌细胞株,获得过表达CCL19结肠癌细胞株——SW1116-CCL19。通过细胞增殖实验(CCK-8法)、流式细胞技术、裸鼠体内成瘤实验,分别检测上调CCL19后对SW1116细胞增殖、细胞周期的影响。Western印迹检测细胞内β-链蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)表达。不同浓度5-FU处理细胞,检测处理后细胞存活率。结果:CCL19上调组SW1116细胞较阴性对照组及空白对照组增殖受抑,同时上调CCL19亦可将细胞周期阻滞在G1期。Western印迹显示CCL19上调组肠癌细胞内β-catenin、cyclin D1较阴性对照组明显降低。上调CCL19可抑制裸鼠皮下肿瘤生长。5-FU作用后,CCL19上调组细胞存活率较阴性对照组降低。结论:CCL19可通过抑制β-catenin、cyclin D1的表达抑制结肠癌的发生发展,提高5-FU的抗肿瘤疗效。     

BMI-1和MMP-9在结肠癌细胞中的表达及意义

目的探讨BMI-1mRNA和MMP-9mRNA在结肠癌细胞中的表达及其意义。方法采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测结肠癌细胞和人正常结肠平滑肌细胞中BMI-1mRNA和MMP-9mRNA的表达,分析二者的关系。结果在结肠癌SW620和LoVo细胞株中,BMI-1mRNA的表达量明显高于结肠癌细胞株SW480细胞和人正常结肠平滑肌细胞(P0.05);SW620和LoVo结肠癌细胞中MMP-9mRNA的表达亦明显高于SW480细胞和人正常结肠平滑肌细胞(P0.05)。在结肠癌细胞中BMI-1mRNA的表达与MMP-9mRNA的表达呈正相关(r=0.966,P0.05)。结论作为原癌基因,BMI-1可用作反映结肠癌细胞侵袭力的生物学指标。