血清HBV标志或HBsAg阴性慢性肝炎患者肝内HBV DNA原位杂交分析

本文采用原位杂交及免疫组化方法对23例血清HBV标志或HBsAg阴性慢性肝炎患者的HBV感染状态进行了研究。发现肝内乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBV DNA),HBsAg,HBcAg的检出率分别为43.48％、38.89％.16.67％;肝内有HBV感染依据者占65.22％,表明半数以上的血清HBV标志或HBsAg阴性患者肝内仍然存在HBV复制或基因表达。含HBV DNA的肝细胞及表达HBsAg,HBcAg的肝细胞大多毗邻灶状坏死和(或)碎屑样坏死灶,提示HBV复制及其产物表达与患者的慢性化、活动性坏死性炎症密切相关。     

血清HBV DNA与乙型肝炎病毒血清学标志物的关系

目的探讨荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）技术定量检测HBV DNA与乙型肝炎病毒（HBV）血清学标志物之间的关系。方法采用ELISA检测乙肝病毒血清学标志物,FQ-PCR法检测HBVDNA,比较不同乙肝病毒血清学标志物阳性组合HBVDNA阳性情况。结果HBsAg、HBeAg和HBcAb性组HBVDNA阳性率为100％（155／155）;HBsAg、HBeAb和HBcAb阳性组HBV DNA阳性率为35．2％（50／142）;HBsAg、HBcAb阳性组HBV DNA阳性率为30．2％（38／126）,HBsAg阳性组血清HBVDNA阳性率为10．0％（3／30）。结论荧光定量PCR法检测血清中衄VDNA含量可以准确地反映病人体内病毒的感染和复制情况,可准确地为临床提供科学的诊断依据。     

肝细胞浆内HBV DNA与HBV感染状态关系的探讨

在原位杂交研究的基础上,本文对慢性乙肝患者胞浆型HBV DNA及肝内其它乙肝指标进行综合分析。发现胞浆型HBV DNA可分3种类型:①肝内同时有核衣壳蛋白(HBcAg)与包膜蛋白(HBsAg)表达,此与HBV复制的产物表达特征一致;②肝内仅有HBsAg表达,此与HBVDNA和宿主基因组整合后的表达特点相似;③肝内HBsAg、HBcAg表达均缺如,可能代表一种HBV非复制状态。由此表明在HBV非复制期,出现胞浆HBV DNA杂交信号可能系DNA RNA杂交体所致。     

乙型肝炎病毒感染者HBV DNA与血清病毒标志物的关系

目的　探讨乙型肝炎病毒 (HBV)感染者HBVDNA检出情况及其与血清病毒标志物的关系。方法　采用实时荧光定量PCR(FQ PCR)检测 2 0 0份HBV感染者血清中HBVDNA含量 ,同时用全自动免疫分析仪检测HBV 5项血清标志物。结果　 2 0 0份血清中 ,乙型肝炎病毒标志物不同组合组的HBVDNA阳性率有差异 ,HBsAg、HBeAg和 (或 )HBcAb阳性组阳性率约为 98.1% ,其中 96 %以上HBVDNA≥ 10 4copy/ml;HBsAg、HBcAb和 (或 )HBeAb阳性组HBVDNA阳性率约为 76 .5 % ,但其中 90 %以上HBVDNA≤ 10 4copy/ml;单纯HBV抗体阳性组HBVDNA阳性率约为13.0 % ,但均为HBVDNA≤ 10 3 copy/ml。三组间HBVDNA阳性率及分布均有明显差异 (P <0 .0 5 )。而且HBVDNA含量与疾病严重程度相关。结论　FQ PCR检测HBVDNA含量结合血清病毒标志物的检测结果对乙型肝炎的临床诊断与病情判断有重要意义     

乙肝患者血浆HBVDNA水平与乙肝五项指标关系分析

目的探讨乙型肝炎病毒核酸（HBV-DNA）水平与乙型肝炎免疫标志物五项指标之间的关系。方法回顾性分析来我院就诊的267例乙型肝炎患者的HBV-DNA含量与乙型肝炎免疫标记物（乙肝五项）的表达关系。患者血浆标本中HBV-DNA含量的检测采用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）,根据含量高低分为四个等级（小于103/ml、103-105/ml、105-107/ml、大于107/ml）;乙肝五项指标（HBsAg、抗HBsAb、HBeAg、抗HBeAb、抗HBcIgM）的检测采用酶联免疫法,按照阳性、阴性统计。结果乙肝患者血浆中HBV-DNA检出率为61.8%,HB-sAg、抗-HBsAb、HBeAg、抗-HBeAb、抗-HBcIgM的检出率分别为98.50%、1.12%、42.70%、40.45%、96.25%。在HBV-DNA含量不同的患者中,乙肝五项的检出率也不相同,随着HBV-DNA含量的升高,HBsAg、抗-HBcIgM的检出率变化不大,而HBeAg的检出率逐渐升高,抗-HBeAb检出率逐渐降低。结论血浆中HBVDNA含量与乙型肝炎免疫标志物之间存在密切的关系,随着HBV-DNA水平的升高,乙型肝炎免疫标志物出现不同的表达,这对临床医生更准确地判断患者病情及指导抗病毒药物的应用具有重要价值。     

检测慢乙肝病人外周血HBV DNA含量的临床意义

目的研究荧光定量PCR法检测慢性乙型肝炎病人血清HBV DNA含量的临床意义。方法血清HBV DNA定量检测采用荧光PCR法（FQ—PCR）;采用免疫组化ABC法标记相应肝组织中aBcAg,研究二者之间的关系。结果血清HBV DNA含量较低组（A、B组）,肝组织中aacAg的表达呈阴性或少数阳性;而血清HBV DNA含量较高组（C、D组）,肝组织HBcAg表达多数呈阳性或强阳性,随着血清HBV DNA含量的升高肝组织HBcAg表达强度和范围也随之增加。结论血清HBV DNA定量检测能较好地反映乙肝病毒在体内的复制状况。     

慢性乙型肝炎患者血清抗Hp抗体检测及抗Hp抗体与HBV载量和HBV基因型的关系

目的：探讨幽门螺杆菌(Hp)在慢性乙型肝炎中的作用。方法：对376例慢性乙型肝炎患者 （分为肝炎组、乙型肝炎肝硬化组和并发肝癌组）的Hp感染状况与HBV DNA定量、HBV DNA分型进行检测,并与健康对照组和慢性胃炎组进行对比。 结果：慢性乙型肝炎组（56.2%）、乙型肝炎肝硬化组（69.9%）和乙型肝炎并发肝癌组（75.0%）Hp感染率明显高于健康对照组（43.4%）（P<0.01）,各组与慢性胃炎组（57.9％）比较差异无显著性（P>0.05）,其中肝硬化组和并发肝癌组Hp感染率均高于肝炎组（P<0.05）。不同病毒载量的慢性乙型肝炎患者的Hp感染率均明显高于健康对照组（P<0.01）,但不同病毒载量之间差异无显著性（P>0.05）。B、C和D基因型慢性乙型肝炎患者Hp感染率分别为61.3%、63.3%和50.0%,3组之间比较差异无显著性（P>0.05）。结论：慢性乙型肝炎患者Hp感染率明显增加,且Hp感染率随着肝脏病变程度的进展而增加。     

抗HBe阳性慢性肝炎患者的HBV感染状态研究

本文结合肝内HBsAg与HBcAg的表达情况对15例抗-HBe阳性慢性肝炎患者进行了肝细胞内HBV DNA原位杂交分析。发现其HBV感染状态可分为3种类型;①HBV活动复制型(4例,26.7％),肝内HBV DNA、HBsAg、HBcAg三者或HBsAg、HBcAg阳性;②HBV不完全复制或表达型(8例,53.3％),肝内HBV DNA、HBsAg阳性;③HBV非复制型(3例,20.0％),肝内HBV DNA及HBV标志均阴性。提示:在血清HBeAg向抗-HBe转换的病例中,HBV感染状态不尽相同,部分患者仍存在HBV活动性复制,少数病例的HBV复制已停止,半数病例处于由活动性复制相向非复制相过渡阶段。     

慢性HBV和HCV合并感染患者肝损害的血清学改变

目的了解乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)合并感染的患者肝损害的血清学改变特点。方法收集225例慢性肝病(包括慢性乙型肝炎,慢性丙型肝炎,乙、丙肝病毒合并感染引起慢性肝炎或肝硬化,肝炎后肝硬化)患者的肝穿病理标本;所有病例均常规检测肝功能、血清HBVDNA、HBV血清标志物、血清HCVRNA,抗-HCV。所有肝活检标本均用10%中性福尔马林固定,石蜡包埋,做苏木素-伊红染色,进行肝炎分级分期,HBsAg、HBcAg免疫组化,HBVDNA、HCVRNA原位杂交检测。结果①重度慢性肝炎患者:HBV/HCV合并感染的患者(B加C组)谷-丙转氨酶(ALT)、谷-草转氨酶(AST)、总胆红素(TB)、直接胆红素(DB)水平与HCV单独感染(C组)患者相比差异无显著性(P>0.05),而比HBV单独感染的患者(B组)低(P<0.05)。②非重度慢性肝炎患者:三组的血清学改变差异无显著性(P>0.05)。③C组与B加C组患者的发病年龄相似(P>0.05),但明显大于B组患者(P<0.01)。④单独感染组发病的病程长短差异无显著性(P>0.05),但比合并感染组长,与单纯感染组相比,合并感染组发展为重肝的时间要短(P<0.01)。结论在重度慢性肝炎的患者中,肝功能损害的血清学指标(AST、ALT、TB、DB)不能很好地反映肝内损害严重度。与单纯感染组相比,HBV与HCV合并感染组发展为重度肝炎的时间要短。     

乙肝病毒相关性肾炎肾组织中HBVDNA分布的分子生物学检测

应用原位杂交（ＩＳＨ）技术观察１２例血清乙肝病毒（ＨＢＶ）标志物阳性的肾炎病人肾组织中ＨＢＶＤＮＡ的存在状况。结果表明，采用地高辛素（Ｄｉｇ）标记ＨＢＶＤＮＡ全长段探针ＩＳＨ时１０例肾组织中显示有ＨＢＶＤＮＡ。这１０例用Ｓ＋Ｃ段探针检测仍阳性者８例，ＨＢＶＤＮＡ最常见于肾小管上皮细胞内，呈核型或浆核型，其次是肾小球系膜区和毛细血管袢。ＬＳＡＢ免疫组化法示ＨＢｓＡｇ与ＨＢＶＤＮＡ的存在部位相吻合。提示ＨＢＶ引起的肾脏病变不仅是免疫介导的损害，亦可能有病毒直接侵犯，从分子病理水平为探讨ＨＢＶ相关性肾炎发病机理提供了新的依据。     

慢性乙型肝炎患者血清HBVDNA与HBV标志的关系

目的：探讨慢性乙肝患者血清乙肝病毒脱氧核糖核酸（ＨＢＶＤＮＡ）与ＨＢＶ标志的关系。方法：应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）对１２６例慢性乙肝患者的血清ＨＢＶＤＮＡ进行检测。结果：ＨＢｅＡｇ阳性患者血血清ＨＢＶＤＮＡ检出率为７３．３％,ＨＢｓＡｇ阳性和抗－ＨＢｅ阳性患者血清ＨＢＶＤＮＡ检出率分别为５５．０％和４０．８％。结论：ＨＢＶＤＮＡ反映乙肝病毒复制方面比ｅ系统更敏感,是反映乙肝病毒复制的重要指标之一。     

慢性乙型肝炎患者乙肝病毒B、C基因型和阿德福韦酯耐药基因的相关性

目的:研究本地区HBV基因型分布;探讨阿德福韦酯长期治疗的慢性乙型肝炎患者HBV基因型和阿德福韦酯耐药基因突变的关系。方法:选取320例阿德福韦酯治疗>3年,治疗前乙肝病毒载量>105拷贝/ml、无相关耐药基因的自然变异并符合其他入选标准慢性乙型肝炎患者进入此研究。PCR法检测HBV基因分型,305例单一B型或C型的患者中,36例可疑耐药的患者用基因芯片法检测乙型肝炎病毒阿德福韦酯相关耐药突变位点。结果:①慢性乙型肝炎患者中HBV基因型包括B型53.1%(170/320)、C型42.2%(135/320)、B和C混合型4.7%(15/320)、未检出其他型。②305例基因型为B型或C型的患者中36例发生病毒学突破,病毒学突破率为11.8%。③36例出现病毒学突破的患者中有35例检测出阿德福韦耐药突变基因型。B基因型患者阿德福韦酯相关基因突变占54%(19/35),C基因型患者阿德福韦酯相关基因突变占46%(16/35),B、C两种基因型耐药基因突变率无差别(P=0.854)。④C基因型患者阿德福韦酯相关基因突变主要为N236T及其混合突变型69%(11/16)。结论:皖南地区HBV基因型以B型为主;HBV基因型与阿德福韦酯耐药突变无关,但C基因型患者以N236T及其混合突变型为主;检测HBV基因型和相关耐药突变是评价慢性乙型肝炎临床治疗疗效的重要指标。     

慢性HBV感染者血清HBsAg定量水平 HBVDNA与肝脏组织病理学分析

目的 对丙氨酸转氨酶（ALT）≤2 ULN的慢性HBV感染者进行肝组织病理学检查,探讨血清HBsAg定量、HBVDNA、ALT与肝组织病理学的关系.方法收集154例ALT≤2 ULN慢性HBV感染者的肝穿刺病理结果,根据不同肝脏病理炎症活动度（G）分为两组,G1 组（0≤G〈2）和G2 组（2≤G≤4）,根据不同纤维化分期（S）亦分成2组,S1组（0≤S〈2）和S2组（2≤S≤4）,根据不同ALT水平分为2组,A1组（ALT≤40 U/L）和 A2组（40 U/L0.05）;S1组和S2组患者血清lgHBsAg定量分别是3.58（0.68,5.33）IU/ml和2.57（1.45,4.87）IU/ml,两组差异有统计学意义（P〈0.05）,S1和S2组患者lgHBVDNA定量分别是6.08（3.0,9.32）copies/ml和4.87（3.0,8.65）copies/ml,两组差异有统计学意义（P〈0.05）;A1组和A2组患者肝组织炎症程度及纤维化分期组间差异无统计学意义（P〉0.05）.结论 不同肝脏炎症程度和纤维化程度的慢性HBV 感染者间的lgHBsAg定量可能存在差异,肝脏炎症程度和纤维化程度较高者lgHBsAg定量水平可能较低,同样肝脏纤维化程度较高者lgHBVDNA水平可能较低.     

942例病毒性肝炎的HBV五项标志物检测结果及其临床意义

用ELISA对942例病毒性肝炎进行HBV五项标志物检测,结果表明,小儿组单项HBeAg检出率及HBsAg、HBeAg、抗-HBc三项共存阳性的检出率高于两个成人组(P<0.01),各单项阳性的检出率及各阳性模式的检出率在男性组与女性组之间差异均无显著性(P>0.05)。随着HBV标志物检测项目的增加可提高HBV感染的检出率。     

干扰素治疗慢性乙型肝炎病毒学指标的观察

采用人白细胞干扰素治疗慢性乙型肝炎,并观察病毒学指标的改变,认为以多项病毒学指标综合考察疗效为优,其中血清HBcAg,HBV-DNA的检测具灵敏、可靠等优点,是追踪、考核疗效不可缺少的手段。在治疗终末时进行肝脏HBV-DNA检测,对判断疗效、预后以及指导研究具有重要的价值。     

原位杂交研究慢性乙型肝炎病毒感染者肝组织内HBV DNA清除模式

用地高辛素探针原位杂交技术研究52例慢性HBV感染者肝内HBV DNA分布,发现在病毒高复制期,HBV DNA阳性肝细胞以弥漫性分布为主,肝细胞HBV DNA表型为胞浆型和核型,在病毒低复制期肝内HBV DNA阳性肝细胞以小叶聚集分布为主,多分布于灶性坏死和碎片状坏死区,在病毒非复制期,HBV DNA阳性肝细胞以局灶性分布为主,表型多为包涵体型和核型。提示在漫长的HBV感染过程中,肝内HBV DNA阳性肝细胞的分布经历弥漫性—小叶聚集性—局灶性的演变过程,该过程反映肝组织内HBV的清除模式。HBeAg(+)的慢性HBV无症状感染者肝组织病变轻可能是由于HBV DNA易装配为完整的病毒排出肝细胞的结果。说明免疫活性细胞攻击的靶细胞主要是含有HBV DNA的肝细胞。     

慢性乙型肝炎患者口服拉米夫定耐药后HBV膜蛋白前S_2的变化

目的：探讨150例慢性乙型肝炎患者口服拉米夫定一年产生耐药后HBV膜蛋白前S（2HBV-S2）的变化。方法：应用ELISA方法检测实验组（产生耐药）与对照组（未产生耐药）患者的血清HBV-S2。结果：对照组HBV-S2阳性48例（阳性率32%）;实验组HBV-S2阳性117例（阳性率78%）。结论：产生耐药后HBV-S2的表达增加,表明耐药后HBV病毒又出现活动性复制,故检测HBV-S2的表达可及时指导临床医师调整治疗方案,避免延误病情及耐药菌株产生。     

慢性乙肝病毒感染者配偶感染乙肝病毒的风险调查

目的 了解慢性乙肝病毒感染者配偶感染乙肝病毒的风险.方法 对只有一位配偶的乙肝病毒感染者配偶采用问卷调查与乙肝血清标志物检测(酶联免疫吸附试验).结果 1 598例调者乙肝病毒感染率为74.41%.其中,男性感染率为80.00%,女性为73.00%.男性与女性感染者在感染模式上差异无显著性.但女性对预防乙肝病毒传播知识的了解率显著高于男性.结论 慢性乙肝病毒感染者配偶感染乙肝病毒的风险高于一般人群,其中女性感染者配偶感染乙肝病毒的风险显著高于男性配偶,但绝大部分感染呈现急性感染过程.     

慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA定量检测与抗原抗体模式的关系

目的探讨慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA含量与抗原抗体模式的关系,为慢性乙型肝炎的诊治及预防提供科学依据。方法采用荧光标记定量聚合酶链反应和酶联免疫吸附实验法检测180例慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA含量和抗原抗体,统计分析不同抗原抗体模式HBV DNA含量。结果在HBsAg和HBeAg同时阳性模式中,HBV DNA含量>103copy.ml-1者114例(91.20)%,其中>107copy.ml-1者44例(35.20%);在HBsAg和抗-HBe同时阳性模式中,HBV DNA含量>103copy.ml-1者18例(56.25%),其中>107copy.ml-1者4例(12.50%)。HBeAg阳性模式HBV DNA含量显著高于HBeAg阴性模式(Ρ<0.01)。结论HBeAg阳性模式HBV DNA含量高于HBeAg阴性模式,HBeAg阳性模式中少数人HBV DNA含量很低,HBeAg阴性模式中少数人HBV DNA含量很高。仅根据抗原抗体模式,难以准确地判断病毒复制程度及传染性的强弱。     

Extrahepatic and Intrahepatic Replication and Expression of Hepatitis C Virus

HepatitisCvirus(HCV)isthemajorpathogenofpost--transfusionalhepatitiswithachroniccourseinupto60%ofindividuals,leadingtocirrhosisandeventuallytohepatocellularcarcinomain20%ofindividuals[1'2].HCVcontainsasingleplusstrandRNAwhichissimilartopestivirusandflavivirusingenomestructures.HCVRNAcanbedetectedinsera,livertissues,peripheralbloodmononuclearcells(PBMCs)andsalivaglandsbypolymerasechainreaction(PCR)assay['-'j.Inthisstudy,theinsituhybridizationandimmunohistochemicaltechniqueusingdigoxinla…