细胞色素P450 2A13的基因多态性与肺癌易感性

细胞色素P4502A13(CYP2A13)是近年来新发现的具有代谢活化作用的细胞色素P450酶。该酶主要存在于呼吸系统,主要参与多种外源性药物及毒物的代谢。近年来研究发现,CYP2A13具有基因多态现象,这使该酶在不同人群的酶活性大小不同。而这可能与肿瘤发生的易感性大小有关。本文将着重对近年来该酶的多态性研究予以简要阐述。     

Influences of V5-epitope tag on the metabolic activation of AFB1 by human cytochrome P450 2A13

INTRODUCTION A flatoxin B1 (AFB1) , which is produced by Aspergillus flavus and Aspergillus parasitus, is a potent carcinogen in human and animals. Al- though AFB1 is best known as a liver carcinogen, it also induces lung tumors in animals and epidemio- logical studies show a positive association between human lung cancer occurrence and inhalation expo- sure to AFB1-containminated grain dust. As most of environmental carcinogens, metabolic activation cat- alyzed by cytochrome P450 (C…     

细胞色素P450 2A5/2A6及其基因表达调控研究进展

细胞色素P450（cytochrome P450,CYP）超家族中,小鼠CYP2A5和人CYP2A6同源.二者均参与类固醇激素、胆红素、亚硝胺和黄曲霉素B1等众多内、外源物质的体内代谢.此外,CYP2A6存在广泛的基因多态性,使其对化合物的代谢存在个体差异.与其他CYP不同,CYP2A5/CYP2A6的表达在化学异物、肝炎和肝脏肿瘤等引起的肝损伤状态下呈病理性上调.本文对CYP2A5/CYP2A6的结构、分布、生物学特性及二者的基因表达调控机制作一介绍.     

细胞色素P4502E1基因多态性与胃癌的关系

目的 探讨人体代谢亚硝胺的重要同功酶细胞色素Ｐ４５０２Ｅ１（ＣＰＹ２Ｅ１）基因多态性与胃癌危险性的关系。方法 应用病例对照分子流动病学研究方法，采用聚合酶链和限制性片段长度多态性技术，对福建省胃癌主 长乐市９１例原发性胃癌病例和９４例人群对照的ＤＮＡ进行ＣＰＹ２Ｅ１基因型检测和分析。结果ＣＰＹ２Ｅ１的Ｃ１／Ｃ２和Ｃ２／Ｃ３基因型在胃癌病例和对照中分别为３６．２６％和２４．４７％，Ｆｉｓｈｅｒ‘ｓ精     

稳定表达犬转铁蛋白受体CHO细胞系的建立和鉴定

目的 构建犬转铁蛋白受体（transferrin receptor, TfR）的真核表达载体,转染中国仓鼠卵巢CHO细胞,建立稳定表达犬TfR的CHO-TfR 细胞系。方法 从犬腺细胞系（WRD）提取总RNA,逆转录合成 cDNA,采用PCR方法扩增TfR 基因,将其克隆至真核表达载体pCDNA3,酶切和测序鉴定;利用脂质体法转染CHO细胞,通过RT-PCR、Western blot 及免疫荧光法检测TfR的表达。结果 构建的pCDNA3-TfR 重组质粒经过酶切和测序鉴定,TfR 基因序列成功插入到pCDNA3载体,且无突变。转染CHO细胞后,RT-PCR、Western blot 及免疫荧光法检测TfR表达阳性,成功建立了稳定表达犬TfR的CHO-TfR 细胞系。HTH]结论 成功构建了真核表达载体pCDNA3-TfR ,并获得了稳定表达TfR的CHO-TfR 细胞系。     

人细胞色素P450 2E1 cDNA在鼻咽癌细胞系CNE—2的稳定表达

目的：为进一步研究人细胞色素P450E1（cytochrome P450 2E1,CYP2E1)蛋白对相关化学致癌物的体外代谢功能及其在化学物质鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma,NPC)变中的作用机制提供体外模型，方法：应用基因重组技术构建人CYP2E1，cDNA真核表达载体pcDNA3.1-2E1，并经脂质体介导转入CNE2细胞，通过G418筛选后挑选若干抗性细胞克隆扩大培养，结果：经Southern blot和Western blot对一系列抗性克隆细胞进行检测，获得2个具有外源CYP2E1 cDNA基因稳定整合和表达的细胞克隆CNE2－2E1－1及CNE2－2E1－2，结论：建立了可供CYP2E1代谢相关的化学致癌物筛选及CYP2E1在NPC癌变中作用机制的体外模型。     

人细胞色素P450 2E1 cDNA在鼻咽癌细胞系CNE-2的稳定表达

目的 :为进一步研究人细胞色素P45 0E1 (cytochromeP45 0 2E1 ,CYP2E1 )蛋白对相关化学致癌物的体外代谢功能及其在化学物质鼻咽癌 (nasopharyngealcarcinoma ,NPC)变中的作用机制提供体外模型。方法 :应用基因重组技术构建人CYP2E1cDNA真核表达载体pcDNA3 .1 - 2E1 ,并经脂质体介导转入CNE2细胞 ,通过G41 8筛选后挑选若干抗性细胞克隆扩大培养。结果 :经Southernblot和Westernblot对一系列抗性克隆细胞进行检测 ,获得 2个具有外源CYP2E1cDNA基因稳定整合和表达的细胞克隆CNE2 - 2E1 - 1及CNE2 - 2E1 - 2。结论 :建立了可供CYP2E1代谢相关的化学致癌物筛选及CYP2E1在NPC癌变中作用机制研究的体外模型。     

细胞色素P4502E1与乙醇代谢相关的肝损伤研究进展

近年细胞色素P450酶系中的2E1亚家族与乙醇相关的肝损伤研究结果进一步验证了CYP2E1酶在乙醇代谢中的关键作用。CYP2E1酶的多态性对乙醇导致肝损伤的影响包含该酶的代谢效率差异(C2/C2)>(C1/C2)>(C1/C1)造成不同程度的肝脏细胞损伤以及不同等位基因造成饮酒倾向的差异越来越受到关注。研究证实,多种物质尤其是中药材饮片及提取物可影响该酶含量及活性,从而保护肝细胞以及对乙醇损伤后肝脏细胞的修复。本文就近年来细胞色素P4502E1及其基因与乙醇相关的肝损伤研究进展做一综述。     

二亚硝基哌嗪(DNP)对人细胞色素P4502E1体外表达的影响(英文)

目的　建立人细胞色素P4 5 0 2E1(CYP2E1)cDNA体外异源表达模型 ,观察化学致癌物二亚硝基哌嗪 (N ,N’ dinitrosopiperazine ,DNP)对CYPWE1表达的影响。方法　脂质体介导转染法将外源人CYP2E1cDNA导入NIH3T3细胞 ,PCR和Southernblot鉴定外源基因的整合 ,RT PCR检测其表达 ;用不同浓度乙醇和DNP处理转化细胞 ,RT PCR和westernbloting检测CYP2E1表达的改变。结果　获得二个具外源基因CYP2E1cDNA整合及稳定表达的细胞克隆NIH3T3 2E1 A1和NIH3T3 2E1 A8;经乙醇和DNP处理的细胞克隆CYP2E1mRNA和蛋白质水平的表达增强。结论　DNP与乙醇对CYP2E1表达的诱导可能与其mRNA转录增强有关 ,DNP致癌可能与CYP2E1对其原位代谢活化相关     

人细胞色素P450 2A13基因在舌癌中的表达

目的:比较分析细胞色素P4502A13(cytochrome P450 2A13,CYP2A13)分别在舌癌组织及其对应癌旁组织中的表达水平,探讨CYP2A13与舌癌的相关性。方法:采用实时定量PCR和Western blot技术分别检测26例舌癌组织及其对应癌旁组织中CYP2A13mRNA及蛋白表达。结果:CYP2A13 mRNA及蛋白在舌癌组织中表达量均低于对应的癌旁组织(P<0.05)。结论:CYP2A13在舌癌组织中表达降低,结合CYP2A13的功能,提示CYP2A13在癌组织中的表达降低可能是舌癌发生发展过程中的自我保护效应。     

细胞色素P4502D6基因多态性与难治性精神分裂症关联研究

目的 探讨难治性精神分裂症与细胞色素P4502D6(CYP2D6)基因多态性的关系.方法 用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术分析92例难治性精神分裂症患者的CYP2D6基因多态性,并以92例非难治性精神分裂症患者作为对照.结果 难治性分裂症组CYP2D6基因型C/T(OR=0.47,P=0.043)和等位基因C(OR=0.50,P=0.002)频率显著性低于非难治分裂症组,而其基因型T/T(OR=1.94,P=0.032)和等位基因T(OR=2.00,P=0.002)则显著高于非难治性分裂症组.结论 本组样本中CYP2D6C188T基因多态性与难治性精神分裂症关联,CYP2D6C188T突变可能是难治性精神分裂症发病因素之一,本组中国汉族人中22号染色体长臂(22q13.1)可能存在难治性精神分裂症易感性基因.     

枸杞多糖对酒精性脂肪肝大鼠肝细胞色素P4502E1基因及蛋白表达的影响

目的：通过观察枸杞多糖（LBP）对酒精性脂肪肝（AFL）大鼠肝细胞色素P4502E1基因和蛋白的影响,揭示其治疗机制。方法：用乙醇灌胃10周造成大鼠慢性AFL模型,再用5％、10％LBP和10％阿托莫兰（GSH）治疗10周,戒酒组为阳性对照．作治疗前后比较：肝脏病理形态,肝匀浆还原型谷光甘肽GSH、丙二醛MDA含量,肝细胞色素P4502E1（CYP2E1）基因及蛋白表达水平。结果：LBP能明显改善酒精所致大鼠肝脏脂肪性病理变化,增加GSH含量,减少MDA产生,抑制CYP2E1基因及蛋白表达水平,与阿托莫兰组无显著差异,优于单纯戒酒组。结论：LBP抑制CYP2E1基因及蛋白表达,减轻脂质过氧化作用,有效的治疗AFL。     

长春花中对细胞色素P4502D6有抑制作用的化合物

细胞色素P450(CYP)酶的失活是药物相互作用的主要原因之一。作者研究了长春花Catharanthusroseus中对CYP3A4和CYP2D6介导的代谢具抑制活性的成分,以及这些成分的作用机制。将长春花地上部分的水提取物过滤,滤液减压浓缩后冻干。取一部分用甲醇提取,甲醇溶部位进行硅胶柱色谱分离,醋酸乙酯-己烷洗脱得7个部位。活性跟踪发现第5部位对CYP有明显抑制作用,该部位经硅胶柱色谱分离和制备TLC精制等,分离出熊果酸(1)和齐墩果酸(2)。同样具有活性的第7部位经柱色谱法和制备TLC分离得到长春多灵(3)、阿吗碱(4)和蛇根碱(5)。研究了化合物1~5…     

蒙古族人群细胞色素P4501A1基因MSPI多态性的研究

目的:探讨内蒙古地区蒙古族人群细胞色素P4501A1(cytochrome P4501A1,CYP1A1)基因MSPI多态性.方法: 用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术,分析了526名蒙古族正常健康成人CYP1A1基因3ˊ端限制内切酶MSPI位点的3种基因型(A、B、C)的分布频率.结果:MSPI基因型A占32.7%,基因型B占53.2%,基因型C占14.1%,等位基因m1、m2分别为59.3%、40.7%.结论:内蒙古地区蒙古族人群CYP1A1基因存在MSPI多态性,此人群CYP1A1基因MSPI多态位点的等位基因和基因型的分布与中国北方汉族人无显著性差异.     

细胞色素P4501A1在子宫颈鳞状细胞癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨细胞色素P4501A1(cytochrome P4501A1,CYP1A1)在子宫颈鳞状细胞癌(SCC)中的表达及其临床意义。方法:采用免疫组织化学法检测18例正常子宫颈组织、33例子宫颈上皮内瘤变(CIN)组织和124例SCC组织中CYP1A1的表达。分析其表达与SCC的临床病理学参数及预后的关系。结果:CYP1A1在SCC组织中的阳性率(59.7%)高于正常子宫颈组织(11.1%)(P<0.05);在SCC病理分级细胞分化Ⅲ级中CYP1A1的阳性率(69.8%)高于SCC细胞分化Ⅰ级者(34.8%)(P<0.05)。在有淋巴结转移SCC组织中CYP1A1的阳性率(73.6%)高于无淋巴结转移者(49.3%)(P<0.01),CYP1A1表达在SCC的年龄、浸润程度、临床分期和肿瘤大小间差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:CYP1A1的高表达可能与SCC的发生、发展等生物学行为有关。     

稳定表达人细胞色素P450 1A2的HepG2细胞的建立及其代谢效应

目的：建立稳定表达人细胞的色素P450 1A2(CYP1A2)的HepG2细胞。方法：将所克隆的野生型CYP1A2 cDNA从重组质粒pGEM-CYP1A2中用Kpn Ⅰ／BamHⅠ双酶切，并亚克隆到哺乳动物细胞表达栽体pREP9中。再将重组质粒转化感受态大肠杆菌Top10，用氨苄青霉素抗性筛选和限制酶谱鉴定。改良的磷酸钙介导的细胞转染法将重组质粒pREP9-CYP1A2转染肝癌细胞HepG2，用RT-PCR技术对转基因细胞的CYP1A2mRNA表达作了分析，并用MTT法比较转基因细胞对黄曲霉素B1(AFB1)细胞毒敏感试验。结果：与HepG2细胞相比，HepG2-CYP1A2转基因细胞表达CYP1A2 mRNA，能增强AFB1的细胞毒作用。结论：建立了稳定表达CYP1A2的转基因细胞系，可用于由CYP1A2参与的毒理学与药物代谢研究。     

原花青素B2及黄曲霉毒素B1对人胚胎肝细胞细胞色素P450亚酶1A2、3A4活力及基因表达的影响

目的 探讨原花青素B2(PC-B2)与黄曲霉毒素B1(AFB1)对人胚胎肝细胞L-02细胞色素P450 (CYP)亚酶1A2、3A4活力及其基因表达的影响.方法 L-02细胞体外培养后分空白对照、溶剂对照、AFB1染毒、PC-B2处理和PC-B2干预共5组,其中PC-B2处理分为3个亚组,分别采用3、10、30 μg/ml PC-B2干预,PC-B2干预分为3各亚组,分别采用3、10、30 μg/ml PC-B2预处理12 h后,再加不同浓度PC-B2与AFB1干预24 h.测定各组细胞的CYP1 A2、CYP3A4酶活力以及CYP1 A2、CYP3A4基因的mRNA表达水平;测定细胞存活率,倒置荧光显微镜观察细胞形态.结果 与空白对照组相比,AFB1染毒组细胞存活率降低(P＜0.05),胞膜结构不清,漂浮细胞增多,CYP1 A2、CYP3A4酶活力及其mRNA表达水平明显升高(P＜0.05).与空白对照组相比,3、10μg/ml PC-B2处理组细胞相关指标无明显变化,但30 μg/ml PC-B2处理组的细胞存活率升高,CYP1A2、CYP3A4酶活力下降(P＜0.05).与AFB1染毒比较,30 μg/ml PC-B2干预组的细胞存活率升高(P＜0.05),各浓度PC-B2干预组的细胞CYP1A2、CYP3A4酶活力及基因表达均降低(P＜0.05),且干预浓度越高,CYP1A2、CYP3A4酶活力及基因表达越低(P＜0.05).结论 AFB1能明显诱导肝细胞CYP1A2、CYP3A4酶活力及其mRNA表达,促使肝细胞凋亡,PC-B2干预可促进肝细胞生长并抑制上述CYP二个亚酶的活力及其基因表达,提示PC-B2可能通过抑制Ⅰ相代谢酶CYP对AFB1的活化而对肝细胞有良好保护作用.     

多环芳烃类物质对细胞色素P450 1A1的诱导表达

目的探讨多环芳香烃类化合物(polycyclic aromatic hydrocarbons,PAHs)对细胞色素P450 1A1(CYP 1A1)的诱导表达情况。方法以人肺癌细胞系A549为研究对象,选取16种含量较多的典型的PAHs暴露给药。MTT方法检测不同药物浓度下细胞的存活率以选择合适的给药浓度;在该浓度药物处理24 h后,收集各组细胞的总RNA及蛋白,用实时荧光定量(Real-Time)PCR及Western印迹法检测CYP1A mRNA和蛋白的表达。结果 MTT结果显示,PAHs浓度在0.2 mol/L时,细胞存活率为50%～60%,选用此浓度作为后续实验的给药浓度。与正常对照组相比,fluorene、2,3-benzanthracene、perylene、acenaphthylene和benzo[a]pyrene能显著诱导CYP1A1 mRNA和蛋白的表达(P<0.05)。结论 fluorene、2,3-benzanthracene、perylene、acenaphthylene和benzo[a]pyrene等烟草烟气内存在的化合物对细胞色素酶CYP1A1具有诱导表达作用。