不同浓度醋酸铅对大鼠原代培养大脑皮层神经元的影响

目的　研究不同浓度铅对原代培养的皮层神经元生长及存活的影响。方法　建立新生大鼠皮层神经元原代培养技术 ,通过不同浓度醋酸铅染毒 ,观察神经细胞的生长和存活情况。结果　终浓度为 10 - 8mol L的醋酸铅即可抑制神经元突起生长 ,使细胞生长活力下降甚至死亡。随着醋酸铅的终浓度进一步加大 ,对神经元的损伤逐渐增强。结论　铅能够抑制原代培养皮层神经元生长和存活。     

锂的神经元保护作用及对铅神经毒性的拮抗效应

目的　探讨铅的神经毒性、锂的神经元保护作用以及锂对铅神经毒性的拮抗效应 ,研究不同浓度氯化锂和醋酸铅对原代培养皮层神经元生长及存活的影响。方法　建立新生大鼠皮层神经元原代培养技术 ,通过加入不同浓度氯化锂、醋酸铅及同时加入 5mmol L的氯化锂和不同浓度醋酸铅 ,显微镜下观察神经细胞的生长和存活情况 ,目镜测量神经元突起长度 ,噻唑蓝 (MTT)还原法检测细胞生长活力。结果　各浓度氯化锂均可促进神经元突起生长 (P <0 0 5 ) ,1 2 5mmol L以上浓度的氯化锂可使神经元生长活力降低 (P <0 0 5 ) ;醋酸铅 (≥ 10 - 7mol L)能抑制神经元生长 ,其神经元突起长度明显短于对照组 (P <0 0 1) ,各浓度的醋酸铅均可使神经元生长活力降低 (P <0 0 1) ;5mmol L浓度的锂对染铅神经元有明显的保护作用和促生长作用 ,表现为铅浓度为 10 - 6 mol L与 10 - 5mmol L组的神经元突起长度较单纯染铅组长 (P <0 0 1) ,使铅浓度为10 - 8～ 10 - 5mol L的神经元生长活力提高 (P <0 0 1)。结论　锂有神经元保护作用 ,而铅对神经元表现出毒性效应 ;锂对染铅神经元有一定的保护作用     

不同浓度牛磺酸对原代培养皮层神经元的影响

目的研究不同浓度牛磺酸对原代培养的皮层神经元生长及存活的影响。方法建立新生大鼠皮层神经元原代培养技术，加载不同浓度牛磺酸对培养皮层神经元进行干预，观察神经细胞的生长和存活情况。结果适当浓度的牛磺酸能够促进培养的皮层神经元存活，突起生长，促进神经元间网络的形成。结论牛磺酸能够促进原代培养皮层神经元生长。     

铅硒联合作用对原代培养海马神经元影响

目的观察铅、硒对原代培养的海马神经元生长及存活的影响，研究硒对铅的神经细胞生长抑制的拮抗作用。方法建立新生Wistar大鼠海马神经元原代无血清培养技术，通过PbCl2，Na2SeO3单独及联合作用，观察神经细胞的生长和存活情况。结果10^-5mol／L铅明显抑制了原代培养的海马神经元突起生长，引起神经元存活率下降；单独硒（2×10^-6mol／L）有明显促进海马神经元突起生长的作用．尤其在神经元突起生长早期；但对海马神经元存活率的影响不明显。铅和硒共同孵育时，培养早期硒能拮抗铅对神经元突起延伸的抑制．但随着培养时间延长，这种拮抗作用消失；从神经元存活率来看，在实验剂量下，未见硒能拮抗铅对神经元存活的抑制作用。结论铅具有抑制神经元生长和存活的毒性。本实验剂量下的硒在细胞培养早期有促进神经元突起生长和拈抗铅对神经元生长和存活的抑制作用。     

低剂量铅对原代培养的海马神经元的影响

目的 研究低剂量铅对原代培养的海马神经元生长及存活的影响。方法 建立新生大鼠海马神经元原代无血清培养技术，通过不同浓度PbCl2染毒后，于不同时间点观察神经细胞的生长和存活情况。结果 极低浓度的铅(10^-7mol／L)即可引起神经元出芽延迟，突起长度缩短，细胞存活率下降，随剂量增加和时间延长，毒效应越严重。结论 低剂量铅具有抑制神经元生长和存活的毒性。     

牛磺酸对染铅大鼠海马神经元型一氧化氮合酶阳性神经元的影响

目的:探讨牛磺酸拮抗铅损害学习记忆能力的作用。方法:采用ABC免疫组织化学方法,研究饮用含不同剂量醋酸铅(0.02、0.2g/L)饮水和含不同剂量牛磺酸(5、10g/kg)饲料喂养的大鼠海马神经元型一氧化氮合酶(nNOS)阳性神经元数量的变化。结果:牛磺酸能明显增加染铅大鼠海马nNOS阳性神经元的数量。结论:牛磺酸对铅损害学习记忆能力有较明显的拮抗作用。     

铅对原代培养海马神经细胞DNA损伤作用

目的 通过检测细胞生长抑制和凋亡相关的DNA损伤蛋白在大鼠原代培养海马细胞中的表达与原代培养海马细胞DNA损伤的相关性,探讨铅的神经毒理作用机制.方法 原代培养的海马神经细胞,于培养7 d全量更换培养液后加入不同浓度醋酸铅0.2、1.0、10 μmol/L,置于37℃、5%CO2培养箱继续培养24 h;蛋白免疫印迹(western blot)方法检测生长抑制DNA损伤诱导因子(GADD 153)表达;彗星实验检测大鼠海马原代培养神经细胞DNA损伤程度.结果 与对照组比较,随着染铅浓度增高,原代培养的海马神经细胞中的DNA的尾距(OTM)和彗尾值增大,0.2、1.0μmol/L染铅组GADD 153蛋白表达较弱,染铅浓度为10 μmol/L时,表达明显增加.结论 细胞DNA损伤与GADD 153蛋白表达呈一定相关性.     

醋酸铅对原代培养大鼠皮层神经元的毒性效应

目的探讨醋酸铅对体外培养大鼠皮层神经元的毒性效应。方法用不同浓度的醋酸铅(50、100和200μg/ml)染毒后,原代培养乳大鼠皮层神经元,通过中性红染色和PI-Hoechst 33342双染色法观察醋酸铅作用6、12、24和48h对细胞存活的影响;结果PI-Hoechst 33342双染色结果表明,各组醋酸铅染毒12h后,部分细胞出现核固缩,随着醋酸铅浓度的增加和培养时间的延长,出现核固缩细胞增多,呈红色荧光细胞比例增加,凋亡细胞增加。对照组细胞凋亡比例明显低与中浓度和高浓度醋酸铅组P0.05)。中性红染色结果表明,不同浓度醋酸铅作用皮层神经元不同时间后各染铅组细胞活性随时间的延长而降低,但除高醋酸铅染毒组在24和48h较6h差异有统计学意义(P0.05)外,其余差异均无统计学意义(P0.05)。各染铅组细胞活性随染铅剂量的增加而降低,尤其是高铅组与对照组及低铅组相比,差异有统计学意义(P0.05)。结论低、中、高浓度醋酸铅(50、100、200μg/ml)作用皮层神经元12h后细胞存活都明显低于正常对照组,并呈剂量和时间依赖关系。     

铅对体外培养大鼠海马神经细胞生长和Oct-2蛋白表达的影响

目的　探讨铅对海马神经细胞生长发育和对Ⅱ型POU域蛋白Oct 2表达的影响。方法　采用大鼠海马神经细胞体外培养建立细胞模型 ,醋酸铅的染毒浓度分别为 10 -1、10 0 、10 1、10 2 、10 3μmol/L ,对照组给予等量培养液。染毒后 2 4h用免疫组织化学法检测神经细胞和神经胶质细胞的标志物神经丝 (NF)和神经胶质原纤维酸性蛋白质 (GFAP)以及Oct 2蛋白的表达。结果 10 μmol/L及 以上浓度醋酸铅组海马神经细胞胞体减小、轴突突起长度和细胞间连接减少。GFAP免疫组化结果发现1μmol/L醋酸铅即可使GFAP阳性细胞数明显增加 ,与对照组相比差异具有统计学意义。此外 ,1μmol/L的醋酸铅可导致神经元和神经胶质细胞Oct 2表达阳性面积比与对照组相比差异具有统计学意义 ,10 μmol/L以上浓度醋酸铅作用下 ,Oct 2表达阳性面积比和吸光度均高于对照组 ,差异具有统计学意义。结论　醋酸铅在抑制神经元生长和分化的同时可刺激神经胶质细胞增生 ,铅对中枢神经系统的部分毒作用至少与其导致的Oct 2表达增加有关     

铅对海马神经元单环磷酸腺苷水平的影响

目的　通过放射免疫的方法 ,研究铅暴露对体外培养的海马神经元单环磷酸腺苷 (cyclicadenosinemonophosphatec,cAMP)水平的影响。 方法　在体外培养 3d的原代胚鼠海马神经元中 ,加入不同浓度的氯化铅 (分别为 10 -4mol/L、10 -6mol/L、10 -8mol/LPb2 + )暴露 2 1d ,收集海马细胞并超声粉碎后 ,用放射免疫的方法测海马细胞cAMP水平。结果　铅抑制体外培养的海马神经元腺苷酸环化酶活性 ,降低cAMP水平。 1× 10 -8mol/LPb2 + 暴露即能抑制海马细胞腺苷酸环化酶活性。铅暴露程度越高 ,cAMP降低越明显 ,两者成负相关。结论　铅暴露后海马神经元cAMP水平下降可能是铅影响学习记忆的机制之一。     

牛磺酸对铅染毒大鼠大脑皮层NOS和nNOS神经元数量的影响

目的 探讨牛磺酸拮抗铅损害中枢神经系统的作用,研究牛磺酸拮抗铅的剂量-效应关系。方法 采用黄递酶（NADPH-d）组织化学和神经元型一氧化氮合酶（nNOS）免疫组织化学方法,研究饮用含不同剂量醋酸铅（0．02,0．2g／L）饮水和饲喂含不同剂量牛磺酸（5,10g／kg）饲料的大鼠大脑皮层NOS和nNOS阳性神经元数量的变化。结果 牛磺酸能明显增加铅染毒大鼠大脑皮层NOS和nNOS阳性神经元的数量。结论 牛磺酸对铅损害中枢神经系统有较明显的拮抗作用,并且存在一定的剂量-效应关系。     

牛磺酸对海马神经细胞的营养和保护作用

目的 :　利用无血清培养的新生大鼠原代海马神经细胞 ,观察牛磺酸 ,谷氨酸和过氧化氢对神经细胞损伤的保护作用。方法 :　用含不同剂量牛磺酸的培养基培养神经元 ,动态观察神经细胞的生长情况以了解牛磺酸对神经细胞的营养作用 ;不同剂量牛磺酸与神经细胞预孵育 2 4 h后 ,分别加入损伤剂 (谷氨酸和过氧化氢 ) ,观察神经细胞存活数及乳酸脱氢酶的漏出率的变化 ;并且利用双波长荧光分光光度计观察谷氨酸对神经细胞内钙稳态的改变及牛磺酸的拮抗作用。结果 :　牛磺酸能促进体外培养的海马神经元的生长 ,并延长其存活时间 ;而且能剂量依赖性地拮抗过氧化氢和谷氨酸引起的神经细胞存活数下降及乳酸脱氢酶漏出率增高 ;牛磺酸还可抑制谷氨酸引起的升钙作用。结论 :　牛磺酸能促进神经细胞的生长 ,对谷氨酸和过氧化氢引起的细胞损伤均有明显的保护作用。     

牛磺酸对低水平铅暴露大鼠神经行为与功能的影响

目的　探讨牛磺酸对低水平铅暴露大鼠神经行为与功能的影响。方法　将成年Wistar大鼠随机分为对照 (Cont)组、铅 (Lead)对照组、Lead+0 .5 %牛磺酸 (Tau)组、Lead+1 .0 %Tau组和 Lead+1 .5 % Tau组 ,自孕 9d起 ,各 Tau补充组母鼠饲料中添加不同水平牛磺酸 ,于孕1 6 d至产后 2 5 d,染铅各组饮 0 .1 4%的醋酸铅蒸馏水。仔鼠于生后 2 5 d与母鼠分笼喂养 ,饮食同母鼠。自生后开始观察生长发育及行为发育情况 ,3 0 d开始做辨别学习能力试验。试验结束后 ,处死动物 ,测血铅 ,脑铅 ,单胺类神经递质 ,乙酰胆碱。结果　 1 .各 Tau补充组脑铅含量 (ng/g)低于Lead组 ,高于 Cont组 (P<0 .0 0 1 )。 2 .负向趋地、听觉惊愕、触须定位达标时间 (d)各 Tau补充组短于 Lead组 (P<0 .0 1 ) ,3 .辨别学习能力试验 ,达到学会标准所用时间 (d) ,各 Tau补充组短于 Lead组 (P<0 .0 0 1 )。4.各脑区去甲肾上腺素含量 Lead+1 .0 % Tau组高于 Lead组而与 Cont组无差别 ,各脑区多巴胺含量 Lead组低于 cont组 ,其中小脑、皮层含量低于 Lead+1 .0 % Tau组 (P<0 .0 5或0 .0 1 )。结论　补充适量牛磺酸对低剂量铅暴露大鼠神经系统发育具有保护作用。     

牛磺酸拮抗锰诱导体外培养的皮层神经细胞凋亡

目的观察牛磺酸对锰诱导体外培养的皮层神经细胞凋亡的拮抗作用。方法体外皮层神经细胞至最佳生长状态时进行实验。细胞随机分7组,即对照组、染锰组(低、中、高剂量0.2,0.6,1.0mmol/L)、干预组(染低、中、高浓度锰同时分别给予1.5mmol/L牛磺酸干预)。各组处理24h后终止培养,用末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)及流式细胞术(FCM)定性、定量检测神经细胞凋亡的变化。结果1.TUNEL显示染锰后神经细胞呈现典型的凋亡形态学变化,牛磺酸对中浓度锰有一定的拮抗作用;2.FCM结果表明牛磺酸能拮抗锰诱导的神经细胞凋亡。结论牛磺酸对锰所致体外培养的皮层神经细胞的凋亡有保护作用。     

牛磺酸对染铅大鼠海马一氧化氮合酶活力的影响

目的　探讨牛磺酸拮抗铅损害学习记忆能力的作用。方法　采用NADPH d组织化学法 ,研究饮用含不同剂量铅 (0 .0 11、0 .110g L)的水和含不同剂量牛磺酸 (5、10g kg)的饲料喂养的大鼠海马一氧化氮合酶 (NOS)阳性神经元数量的变化。结果　 10g kg的牛磺酸饲料能明显增加染铅大鼠海马CA1区和齿状回NOS阳性神经元的数量。低铅水高牛磺酸饲料组NADPH d阳性神经数量在CA1区为 5 1.80± 4 .6 8,在齿状回为 4 7.4 0± 4 .2 0 ,较低铅水普通饲料组的CA1区 (4 1.2 0± 5 .32 )和齿状回 (39.87± 3.81)明显增多 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论　牛磺酸对铅损害学习记忆能力有较明显的拮抗作用。     

三羟异黄酮对丙烯酰胺致大鼠小脑颗粒神经元凋亡的影响

目的探讨不同浓度三羟异黄酮(GEN)对丙烯酰胺(ACR)诱导大鼠小脑颗粒神经元(CGNs)凋亡的影响。方法取新生5-7 d SD大鼠小脑皮质细胞培养,采用神经元特异性烯醇化酶免疫细胞荧光技术鉴定神经元,将培养8 d的神经元进行随机分组,正常对照组、ACR染毒组(浓度为10 mmol/L)、GEN预处理组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ(浓度为10、25、50、100μmol/L的GEN预先处理细胞12 h,再予ACR作用24 h)。甲基噻唑基四唑(MTT)法检测神经元活性;相差显微镜及Hoechst33342染色分别观察细胞及其核形态学变化;原位细胞凋亡检测法(TUNEL)观察神经元凋亡细胞数。结果 10μmol/L组及25μmol/L组GEN可拮抗ACR所致的大鼠CGNs凋亡,提高神经元活性,降低TUNEL阳性细胞数,减少ACR所致的神经元胞体皱缩、细胞核固缩等特征;而50μmol/L组及100μmol/L组对ACR引起的神经元凋亡没有保护作用。结论一定浓度范围的三羟异黄酮可以保护丙烯酰胺所致的大鼠CGNs凋亡。     

Antioxidant effect of taurine against lead-induced oxidative stress

Oxidative stress is proposed as a molecular mechanism in lead toxicity, which suggests that antioxidants might play a role in the treatment of lead poisoning. The present study was designed to investigate whether taurine has a beneficial effect both on Chinese hamster ovary (CHO) cells and on Fisher 344 (F344) rats following lead exposure. Therefore, oxidative stress parameters (glutathione, malondialdehyde levels, catalase, and glucose-6-phosphate dehydrogenase [G6PD] activities) of lead-exposed CHO cells and F344 rats were determined following taurine treatment. Taurine was found to be effective in (1) increasing glutathione levels that had been diminished by lead; (2) reducing malondialdehyde levels, an end-product of lipid peroxidation; (3) decreasing catalase and erythrocyte G6PD activity, which had been increased by lead exposure; and (4) improving cell survival of CHO cells. However, taurine had no effect on blood and tissue lead levels when 1.1 g/kg/day taurine was administered to F344 rats for 7 days, following 5 weeks of lead exposure (2,000 ppm lead acetate). As a result, taurine seems to be capable of fortifying cells against lead-induced oxidative attack without decreasing lead levels. Therefore, administration of taurine, accompanied by a chelating agent, might increase its effectiveness in the treatment of lead poisoning. Received: 30 January 2001/Accepted: 11 May 2001