芪灵益肝煎对小鼠H22肝癌细胞CDK4表达的影响

目的:观察芪灵益肝煎对小鼠肝癌的抑制作用及其对CDK4表达的影响,以明确其对细胞周期调控的影响.方法:将腹水型H22细胞株接种于小鼠右前腋窝皮下,造成实体瘤模型,将30只小鼠随机分为3组,芪灵益肝煎组、灵芝煎剂组和盐水对照组,每组10只.从荷瘤次日起,芪灵益肝煎组、灵芝煎剂组分别以芪灵益肝煎、灵芝煎剂0.4 mL(约含生药0.4 g)灌胃,盐水对照组以0.9％生理盐水0.4mL灌胃,连续给药20d后取瘤称重,计算抑瘤率,采用免疫组化技术检测CDK4的表达.结果:芪灵益肝煎、灵芝煎剂对小鼠H22肝癌细胞的生长均有明显的抑制作用,抑瘤率分别为36.33％、24.18％,与盐水对照组比较有显著性差异(P＜0.05),且芪灵益肝煎抑瘤作用优于灵芝煎剂；CDK4在3组均呈阳性表达,芪灵益肝煎组CDK4表达减弱,与盐水对照组比较有显著性差异(P＜0.05),灵芝煎剂组CDK4表达无明显变化,与盐水对照组比较无显著性差异(P＞0.05),芪灵益肝煎组与灵芝煎剂组比较CDK4表达有显著性差异(P＜0.05).结论:芪灵益肝煎对小鼠H22肝癌细胞的增殖具有明显的抑制作用,其作用机制可能与降低肝癌细胞内CDK4的表达有关.     

芪灵益肝煎对小鼠肝癌腹水型细胞系Hca-F25/CL-16A3 cyclinD1表达的影响

目的：研究芪灵益肝煎对小鼠肝癌的抑制作用及其对cyclinD1表达的影响。方法：小鼠右腋皮下肿瘤造成实体瘤模型，用药21天后取瘤称重计算抑瘤率，采用免疫组化技术检测cyclinD1的表达，结果：芪灵益肝益对小鼠肝癌细胞的生长抑制率为36．32％，免疫组化技术分析表明，cyclinD1在两组中均呈阳性表达，但经秩和检验，芪灵肝煎组cyclinD1表达下调。结论：芪灵益肝煎对肝癌Hca-F25/CL-16A3细胞的增殖有明显的抑制作用，可使细胞中cyclinD1表达下调。     

化积益肝煎对小鼠肝癌H22细胞β-catenin和cyclin D1表达的影响

目的:观察化积益肝煎对小鼠肝癌H22细胞抑制作用,并探讨其对肝癌WNT 信号传导通路上β-catenin和cyclin D1表达的影响.方法:将接种肝癌H22细胞的小鼠随机分为对照组、化积益肝煎(中药组)、环磷酰胺(西药组)、化积益肝煎+环磷酰胺(中西药组),连续给药15d后处死,剥离瘤组织称重;用免疫组化方法检测β-catenin和cyclin D1表达.结果:中药、西药、中西药合用可明显抑制小鼠肝癌的生长,抑瘤率分别为38.35%、55.48%、70.93%,具有统计学差异(P<0.05);中西药组抑瘤率(70.93%)高于西药组抑瘤率(55.48%),具有统计学差异(P<0.05);各用药组β-catenin和cyclin D1表达与对照组相比下降(P<0.05).结论:化积益肝煎对小鼠肝癌有抑制作用,并对化疗药物有一定的协同增效作用;化积益肝煎可通过影响小鼠肝癌细胞 WNT 传导通路信号的传导,从而抑制小鼠肝癌细胞的增殖.     

扶正抑瘤颗粒含药血清对小鼠肝癌H22细胞 p53和Caspases-3蛋白表达的影响

目的检测扶正抑瘤颗粒(FYK)含药血清诱导小鼠肝癌H22细胞凋亡过程中对其野生型p53和caspases-3蛋白表达的影响.方法选用小鼠肝癌H22细胞作为实验的细胞株,应用血清药理学方法制备FYK低、中、高剂量实验组含药血清和对照组天仙胶囊含药血清,用上述含药血清与H22细胞在体外共同孵育24h、48h、72h后,应用MTT法检测细胞生长抑制率,TUNEL法检测细胞凋亡,用免疫细胞化学技术检测H22细胞野生型p53和caspases-3蛋白表达水平.结果FYK含药血清可诱导H22细胞凋亡,处理48h和72h凋亡率明显高于对照组(P＜0.05),并有大量野生型p53和caspases-3蛋白表达,天仙胶囊含药血清处理后caspases-3蛋白表达上调,而野生型p53蛋白表达水平没有增强.结论FYK含药血清在诱导H22细胞发生凋亡过程中野生型p53和caspases-3蛋白表达水平均增强,这可能是其抗肿瘤作用的分子机制之一,而天仙胶囊含药血清仅上调caspases-3蛋白表达,二者诱导细胞凋亡的机制有所不同.     

扶正抑瘤颗粒对小鼠肝癌H22细胞凋亡及Fas和FasL表达的影响

目的：观察扶正抑瘤颗粒含药血清诱导小鼠肝癌H22细胞凋亡的作用和对细胞Fas、FasL表达的影响．方法：应用血清药理学方法，用不同剂量的含药血清与小氟肝癌细胞在体外共同孵育后，应用相差显微镜，流式细胞仪、电子显微镜对肿瘤细胞的生长和凋亡进行观察，用SABC法检测H22细胞Fas和FasL的表达结果：小鼠肝癌H22细胞经含药血清作用后，发生明显的形态学改变，相差显微镜下可见细胞体积缩小，折光性增强，染色质浓缩，核浆比例增大，密度增高，胞浆出现颗粒样物质。电镜下可见明显的凋亡形态变化，流式细胞仪可测到凋亡峰；SABC法显示，扶正抑瘤含药血清可上调小鼠H22细胞Fas的表达，而对FasL表达的影响不明显结论：扶正抑瘤颗粒能诱导H2：细胞发生凋亡，其机制可能与其上调H22细胞Fas的表达有关，     

芪薏益肝煎对小鼠H22移植瘤PTEN表达的影响

目的:探讨芪薏益肝煎对小鼠H22移植瘤的抑瘤作用及作用机制。方法:小鼠右腋下皮下种瘤造成实体瘤模型,将30只小鼠分为三组,即对照组、芪薏益肝煎组和5-Fu组,每组各10只,连续用药15 d。第16天处死小鼠,计算胸腺指数、脾指数;剥离瘤块秤重并计算抑瘤率;采用免疫组化技术检测抑癌基因(PTEN)的表达。结果:芪薏益肝煎组小鼠皮下肿瘤重量低于生理盐水组,PTEN表达高于生理盐水组,有非常显著性差异(P<0.01),并且其抑瘤率为37.00%。结论:芪薏益肝煎对小鼠肝癌细胞具有明显抑制作用,其作用机制与PTEN表达有关。     

蒲葵子的含药血清体外抗肿瘤作用的实验研究

目的:观察蒲葵子的含药血清体外抗肿瘤作用。方法:采用MTT法,观察蒲葵子提取物的含药血清对肉瘤细胞(S180)和肝癌细胞(H22)增殖的抑制作用。结果:蒲葵子提取物的20%含药血清在体外对S180细胞和H22细胞有明显的抑制作用,抑制率分别为41.15%、47.43%。结论:蒲葵子含药血清能抑制S180肉瘤细胞和H22肝癌细胞的增殖。     

扶正抑瘤颗粒含药血清对小鼠肝癌细胞H22凋亡及细胞内Ca2+浓度的影响

目的:观察扶正抑瘤颗粒(FYK)含药血清诱导小鼠肝癌细胞H22凋亡的作用及其对细胞内钙离子浓度的影响,探讨其抗肿瘤机制。方法:FYK含药血清孵育体外培养的小鼠肝癌H22细胞,电子显微镜观察FYK含药血清诱导H22细胞凋亡的形态学变化,流式细胞术检测细胞凋亡率,激光共聚焦显微镜测细胞内钙离子浓度的变化。结果:FYK含药血清能诱导小鼠肝癌H22细胞发生凋亡,同时使细胞内游离钙离子浓度升高,并与剂量和时间存在依赖性关系,细胞内钙离子浓度与相同时间点凋亡率呈正相关。结论:FYK含药血清可通过改变细胞内钙离子浓度诱导细胞发生凋亡,这可能是其抗肿瘤作用的机制之一。     

芪灵扶正清解颗粒对人HepG2肝癌细胞ras基因蛋白表达的影响

目的探讨芪灵扶正清解颗粒含药血清对人Hep G2肝癌细胞增殖及对ras基因和蛋白表达的影响。方法制备含药血清和空白血清,体外干预Hep G2细胞24 h。流式细胞术检测细胞周期,荧光定量PCR检测h-ras、n-ras和k-ras基因表达量,免疫细胞化学染色检测P21ras蛋白表达情况。结果芪灵扶正清解颗粒含药血清干预人Hep G2细胞后,G0/G1期细胞的百分含量明显升高,S期细胞的百分含量和增殖指数明显降低。中剂量组k-ras、h-ras和n-ras m RNA的基因表达量和蛋白表达均明显低于空白血清组。结论芪灵扶正清解颗粒抑制Hep G2细胞ras基因和蛋白的表达,影响G1/S转换的进程,进而抑制Hep G2的增殖。     

灵芪胶囊对H_（22）荷瘤小鼠细胞形态的影响

目的：研究灵芪胶囊（LQC）对H22肿瘤形态学的影响。方法：采用血清药理学方法,通过Annex-inV/PI双染法、琼脂糖凝胶电泳法观察LQC含药血清对肿瘤细胞形态学变化的影响,研究LQC含药血清在体外对H22肿瘤细胞的抑瘤和诱导细胞凋亡作用。结果：LQC含药血清作用于人红白血病细胞系H22细胞72h,可见细胞凋亡和坏死特有的形态学特征。结论：LQC对肿瘤细胞具有诱导凋亡作用。     

荷瘤小鼠扶正抑瘤颗粒含药血清对H22细胞的凋亡、自由基含量和线粒体膜电位的影响

目的观察荷瘤小鼠扶正抑瘤颗粒（FYG）含药血清对H22细胞的凋亡、自由基含量和线粒体膜电位的影响。方法应用流式细胞仪检测FYG含药血清对H22细胞凋亡情况的影响;应用激光共聚焦显微镜检测H22细胞DNARNA、自由基含量和线粒体膜电位的变化。结果FYG含药血清可引起H22细胞的凋亡,细胞DNARNA和线粒体膜电位降低,自由基含量升高。结论FYK含药血清引起H22细胞的凋亡可能与其影响H22细胞自由基含量和线粒体膜电位变化有关。     

益气解毒方对体外培养小鼠肝癌H22细胞生长的抑制作用

目的 MTT法观察益气解毒中药复方含药血清对小鼠肝癌H22细胞生长的抑制作用。方法大鼠灌胃制备益气解毒复方中药含药血清,作用于体外培养的小鼠肝癌H22细胞,采用MTT法观察益气解毒中药复方含药血清对细胞生长的抑制作用。结果高剂量血清组与对照血清组之间的吸光度差异有显著统计学意义(P<0.001),随着作用时间的延长,其吸光度逐渐降低,抑制率逐渐增高。结论益气解毒中药复方含药血清对小鼠肝癌H22细胞生长具有较好的抑制作用。     

藤茶双氢杨梅树皮素抗肝癌H22的实验研究

目的:探讨双氢杨梅树皮素(Ampelopsin,APS)的抗肿瘤作用。方法:以MTT法观察APS及其含药血清体外对肝癌H22细胞及对小鼠肝癌H22实体瘤的抑瘤作用。结果:APS及其含药血清均能明显抑制体外培养的H22细胞的生长,APS的IC50为18.65μg/mL,20%、10%含药血清的抑瘤率分别为35.04%、30.91%;APS灌胃给药对荷瘤H22小鼠的肿瘤生长有明显的抑制作用,600mg/kg剂量组的抑瘤率为27.38%。结论:APS对体外H22细胞和体内肝癌H22实体瘤均有抑制作用。     

鳖甲煎丸含药血清对SMMC-7721肝癌细胞凋亡的影响

目的研究鳖甲煎丸含药血清对SMMC-7721肝癌细胞凋亡的影响。方法采用MTT法检测鳖甲煎丸不同浓度含药血清(0%、2%、4%、6%、8%、10%、12%、14%、16%)对肝癌细胞增殖抑制作用;流式细胞术检测鳖甲煎丸含药血清对SMMC-7721细胞凋亡的影响;实时荧光定量PCR检测鳖甲煎丸含药血清对SMMC-7721细胞BAX、Bcl-2、STAT3 mRNA表达;Western blot法检测细胞BAX、Bcl-2、STAT3、p-STAT3蛋白表达。结果分别处理SMMC-7721细胞24、28 h,鳖甲煎丸含药血清能明显抑制肝癌细胞的增殖,具有浓度依赖性。鳖甲煎丸含药血清(5%、10%、15%)作用肝癌细胞24 h后,细胞总凋亡率显著增高(P0.01),随浓度增加而增高。与空白对照组比较,鳖甲煎丸含药血清(10%、15%)上调BAX mRNA表达(P0.05),而BAX蛋白表达不明显;除5%含药血清鳖甲煎丸组Bcl-2 mRNA外,鳖甲煎丸含药血清(5%、10%、15%)下调Bcl-2、STAT3 mRNA和蛋白表达,并能抑制STAT3磷酸化,升高BAX/Bcl-2比值(P0.05,P0.01)。结论鳖甲煎丸含药血清诱导SMMC-7721肝癌细胞发生凋亡可能与影响STAT信号通路有关。     

扶正抑瘤颗粒对小鼠移植性肿瘤细胞间通讯的影响

目的:观察扶正抑瘤颗粒(红芪、当归、墓头回、莪术)含药血清对荷瘤小鼠H22细胞的凋亡和肿瘤细胞间通讯的影响.方法:Annexin V/PI双染法检测FYK含药血清对H22细胞凋亡情况的影响;应用共聚焦激光显微镜检测H22细胞RNA、DNA、[Ca2 ]、细胞间通讯状况.结果:扶正抑瘤颗粒含药血清可引起H22细胞的凋亡,细胞RNA、DNA含量降低,[Ca2 ]升高,细胞间通讯状况得到改善.结论:扶正抑瘤颗粒含药血清抑制H22细胞的增殖,并提高肿瘤细胞[Ca2 ],阻止肿瘤细胞分裂.     

扶正抑瘤颗粒对小鼠肝癌细胞H22凋亡的影响

目的:研究中药复方扶正抑瘤颗粒药物血清对小鼠肝癌H22细胞凋亡的影响.方法:扶正抑瘤颗粒含药血清温育体外培养的小鼠肝癌H22细胞,利用光镜、电镜、流式细胞仪、原位末端标记(TUNEL)等方法观察其诱导小鼠肝癌H22细胞的凋亡作用.结果:扶正抑瘤颗粒含药血清可明显诱导小鼠肝癌H22细胞凋亡,随着培养时间的延长和用药剂量的增加,细胞凋亡率随之增加,与空白对照组比较P＜0.01或0.05.结论:扶正抑瘤颗粒药物血清可诱导肝癌H22细胞凋亡.     

鳖甲煎丸含药大鼠血清对人肝癌HEPG2细胞Mg2+-ATP酶、G-6-P酶活性影响的实验研究

[目的]研究鳖甲煎丸含药大鼠血清对人肝癌HEPG2细胞端粒酶活性的影响.[方法]将实验大鼠随机分为4组:生理盐水灌胃组、鳖甲煎丸煎剂灌胃组、西药组、中西医联合用药组.待人肝癌HEPG2细胞贴壁生长状态良好,加入含药大鼠血清及对照组大鼠血清,培养后取材制作标本.利用原位杂交染色法对标本进行含药血清作用后显微镜图像分析.[结果]光镜下,鳖甲煎丸煎剂灌胃组、西药组、中西医联合用药组端粒酶数量减少、密度降低,与灌服生理盐水组相比较有明显差异,差别有统计学意义(P＜0.05).鳖甲煎丸煎剂灌胃组、西药组、中西医联合用药组无明显差异(P＞0.05).[结论]鳖甲煎丸含药大鼠血清对人肝癌HEPG2细胞端粒酶活性的影响有减弱作用.     

藤茶双氢杨梅树皮素抗肝癌H22的实验研究

目的：探讨双氢杨梅树皮素（Ampelopsin，APS）的抗肿瘤作用。方法：以MTT法观察APS及其含药血清体外对肝癌H22细胞及对小鼠肝癌H22实体瘤的抑瘤作用。结果：APS及其含药血清均能明显抑制体外培养的H22细胞的生长，APS的IC50为18．65μg／mL，20％、10％含药血清的抑瘤率分别为35、04％、30．91％；APS灌胃给药对荷瘤H2：小鼠的肿瘤生长有明显的抑制作用，600mg／kg剂量组的抑瘤率为27．38％。结论：APS对体外H22细胞和体内肝癌H22实体瘤均有抑制作用。     

化积益肝煎对H22荷瘤小鼠抑瘤作用的实验研究

目的:研究化积益肝煎对小鼠肝癌腹水瘤细胞系H22治疗的作用机制。方法:小鼠右腋下皮下种瘤造成实体瘤模型,将24只小鼠分为三组,生理盐水组、化积益肝煎组(中药组)和5-氟脲嘧啶组(西药组)各8只,用药14天后取瘤,称重计算抑瘤率,采用免疫组化技术检测C–erb B-2及Fasl的表达。结果:中药组、西药组大鼠瘤重显著低于对照组(P0.05);中药组、西药组的抑瘤率分别为32.11%、38.61%;C–erb B-2及Fasl在三组中表达结果经秩和检验,与对照组比较,中药组C–erb B-2、Fasl表达减弱,差异均有统计学意义(P0.05),而与西药组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:化积益肝煎对肝癌H22细胞的增殖有明显的抑制作用,其作用机制与C–erb B-2、Fasl表达有关。     

鳖甲煎丸含药大鼠血清对人肝癌HEPG2细胞增殖影响的实验研究

[目的]研究鳖甲煎丸含药大鼠血清对人肝癌HEPG2细胞增殖的影响。[方法]将实验大鼠随机分为四组,生理盐水灌胃组、鳖甲煎丸煎剂灌胃组、西药组、中西医联合用药组。无菌条件下从大鼠后腔静脉采血,分离血清。将同组大鼠血清混匀,冷藏备用。待人肝癌HEPG2细胞贴壁生长状态良好,加入含药大鼠血清及对照组大鼠血清,培养后取材制作标本。对标本进行0D值测定,计算细胞增殖抑制率。[结果]鳖甲煎丸煎剂灌胃组、西药组、中西医联合用药组血清作用人肝癌HEPG2细胞48H后与灌服生理盐水组相比较细胞增殖抑制率有明显差异,差别有统计学意义(P<0.05)。鳖甲煎丸煎剂灌胃组、西药组、中西医联合用药组细胞增殖抑制率三者无明显差异(P>0.05)。[结论]鳖甲煎丸含药大鼠血清对人肝癌HEPG2细胞增殖有抑制作用。