苦参碱诱导骨肉瘤细胞凋亡的实验研究

目的：探讨苦参碱对人骨肉瘤细胞的生长抑制和诱导凋亡作用。方法：将不同浓度的苦参碱作用于培养的OS732骨肉瘤细胞，通过MTT比色法、流式细胞仪和DNA凝胶电泳、电子显微镜技术观察检测细胞凋亡，研究分析其对骨肉瘤细胞的生长抑制和诱导凋亡作用。结果：苦参碱浓度为0．5、1．0、1．5g／l时，细胞毒性指数分别为12．1％、21．6％、39．5％；流式细胞术示骨肉瘤细胞的凋亡率分别为9．8％、16．9％、25．5％；DNA电泳见DNA“梯形”图谱；电镜显示细胞的凋亡形态。结论：苦参碱能显著抑制OS732细胞增殖、促进其凋亡。     

顺铂诱导人骨肉瘤细胞凋亡及其分子机制的初步研究

目的　研究顺铂 (c DDP)对人骨肉瘤细胞的生物学效应及其作用机制。方法　骨肉瘤细胞经 c DDP处理后 ,用台盼蓝技术法检测 c DDP的 IC50 ,采用流式细胞仪、DAPI荧光染色、TUNEL 及 DNA电泳检测细胞凋亡。结果　c DDP在一定浓度范围内以浓度依赖的方式抑制骨肉瘤细胞生长 ,其 IC50 为 1.0 5 μg/ ml± 0 .2 5 μg/ ml。 0 .5～ 2 .0 μg/ mlc DDP处理骨肉瘤细胞后 ,流式细胞仪检测出凋亡峰 ,流式细胞光度计下可见明显的凋亡细胞形态特征 ,琼脂糖凝胶电泳出现 DNA梯形条带。结论　c DDP在体外可诱导骨肉瘤细胞凋亡 ,这种诱导细胞凋亡的能力是 c DDP疗效的基础 ,在对骨肉瘤的治疗中有着巨大的潜力。     

微波治疗仪局部照射诱导胰腺炎大鼠胰腺细胞凋亡的实验研究

[目的]将微波引入急性胰腺炎治疗中并观察其诱导大鼠胰腺细胞凋亡的情况.[方法]皮下注射蛙皮素制成胰腺炎模型,微波照射组以微渡局部照射并调节功率使体表局部温度分别恒定于40℃、42℃、44℃、46℃、48℃,24 h后处死大鼠取胰腺组织标本,进行病理学观察,用Northern分子杂交方法测定Fas mRNA、TUNEL法检测细胞凋亡情况.[结果]对照组Fas mRNA变化百分率为100.O%±12.3%,而微波照射组(局部温度42℃)FasmRNA变化百分率为380.O%±58.5%,两组差异有统计学意义(P<0.001);对照组胰腺细胞的凋亡指数为15.8±0.9,而微波照射组(局部温度42℃)的凋亡指数为34.3±1.7,两组差异有统计学意义(P<0.001);Fas mRNA变化百分率与细胞凋亡指数的相关系数对照组为0.9364,微波照射组为0.9758.[结论]体表局部温度42℃是微波诱导细胞凋亡的最适宜温度,微波诱导胰腺细胞凋亡可能是微波用于急性胰腺炎治疗的机制之一.     

氧化苦参碱干预人体骨肉瘤细胞增殖周期 诱导其凋亡的作用

目的研究氧化苦参碱对人体骨肉瘤细胞（MG-63）凋亡的影响。方法在培养液体中加入不同浓度的氧化苦参碱（Oxymatrine,OM）进行不同时间长度的诱导,以流式细胞术法检测人体骨肉瘤细胞（MG-63）增殖、周期及凋亡情况。结果1～50μmol／L氧化苦参碱均能抑制骨肉瘤细胞增殖,同时能够阻滞MG-63细胞进入S和G2／M期,使细胞停滞于G0／G1期,与空白对照组比较,差异有统计学意义,且氧化苦参碱高剂量组最明显（P〈0．05）。5、10、50μmol／L氧化苦参碱作用细胞96h后的凋亡率分别为（10．96±0．41）％、（20．74±1．09）％、（27．05±2．00）％,与对照组（4．66±1．26）％比较,差异均有统计学意义（均P〈0．05）。氧化苦参碱浓度越高,抑制作用越明显,呈明显的剂量依赖效应。50¨mol／L氧化苦参碱作用于细胞48h、72h、96h后的凋亡率分别为（6．65±1．49）％、（14．82±5．79）％、（27．05±2．00）％,与对照组各时间点（4．01±0．86）％、（4．31±0．68）％、（4．66±1．26）％比较,差异均有统计学意义（均P〈0．05）。氧化苦参碱作用时间越长,抑制作用也越明显,呈明显的时间依赖效应。结论氧化苦参碱可通过时间依赖性和剂量依赖性方式,促使细胞G2／M期阻滞和抑制细胞有丝分裂,从而诱导人体骨肉瘤细胞凋亡。     

直结肠癌细胞线粒体超微结构与细胞凋亡的关系

目的：研究直结肠癌细胞线粒体的超微结构。方法：收集香港大学玛丽医院直结肠外科手术切除的直结肠癌大体病检标本共18例。用透射电镜观察线粒体，并取正常黏膜作对照组。结果：直结肠癌细胞线粒体肿胀，空泡化．脊稀少，排列紊乱。凋亡细胞的线粒体比非凋亡细胞的线粒体多，形态更接近正常。结论：线粒体超微结构的异常与肿瘤的代谢方式及细胞凋亡有密切关系。     

化疗药物对体外培养OS-732人成骨肉瘤细胞凋亡及细胞周期的影响

许多报道证实,抗癌药物可诱导敏感细胞凋亡[1]。这为肿瘤包括骨肉瘤治疗的研究提供了新的靶点[2]。迄今为止,有关化学激发剂诱导肿瘤细胞凋亡的研究报道,主要局限在上皮系统及激素依赖性肿瘤方面[3],而对骨肉瘤的研究未见报道。由于诱导凋亡对靶细胞具有选择性,因此,首要的问题是阐明化疗药物能否诱导骨肉瘤细胞凋亡。1　材料与方法11　主要试剂与药品Rnase,ThiazollBlue(MTT),AcridineOrange(AO),PropridiumIodide(PI)为美国sigma公司产品。阿霉素(DOX)由日本meiji公司生产,氨甲喋呤(MTX)为美国sigma公司产品。鬼臼乙叉甙(VP16)为…     

解毒化瘀方对成骨肉瘤细胞生长抑制作用的实验研究

骨肉瘤是原发于骨的恶性肿瘤，多发于青少年及儿童，约占儿童肿瘤的5％。由于术后化疗，特别是新辅助化疗的应用，过去20年内已使骨肉瘤患者的5年生存率提高到60％～70％。近年随着新辅助化疗的广泛开展，其保肢率和生成率均有明显提高，但临床上对多药耐药病例逐渐增多。解毒化瘀方是本院治疗骨肉瘤的经验方，临床应用能有效缓解疼痛，减轻局部肿胀，提高患者生活质量和生存率。作者观察了其对体外培养的成骨肉瘤细胞系U2-OS的生长影响。     

微波治疗仪局部照射诱导胰腺炎大鼠胰腺细胞凋亡的实验研究

[目的]将微渡引入急性胰腺炎治疗中并观察其诱导大鼠胰腺细胞凋亡的情况。[方法]皮下注射蛙皮素制成胰腺炎模型,微波照射组以微波局部照射并调节功率使体表局部温度分别恒定于40℃、42℃、44℃、46℃、48℃,24h后处死大鼠取胰腺组织标本,进行病理学观察,用Northern分子杂交方法测定FasmRNA、TUNEL法检测细胞凋亡情况。[结果]对照组FasmRNA变化百分率为100．O％&#177;12．3％,而微波照射组（局部温度42℃）FasmRNA变化百分率为380．0％&#177;58．5％,两组差异有统计学意义（P〈0．001）;对照组胰腺细胞的凋亡指数为15．8&#177;0．9,而微波照射组（局部温度42℃）的凋亡指数为34．3&#177;1．7,两组差异有统计学意义（P〈0．001）;FasmRNA变化百分率与细胞凋亡指数的相关系数对照组为0．9364,微波照射组为0．9758。[结论]体表局部温度42℃是微波诱导细胞凋亡的最适宜温度,微波诱导胰腺细胞凋亡可能是微波用于急性胰腺炎治疗的机制之一。     

解毒化瘀方对成骨肉瘤细胞生长抑制作用的实验研究

骨肉瘤是原发于骨的恶性肿瘤,多发于青少年及儿童,约占儿童肿瘤的5%。由于术后化疗,特别是新辅助化疗的应用,过去20年内已使骨肉瘤患者的5年生存率提高到60%~70%。近年随着新辅助化疗的广泛开展,其保肢率和生成率均有明显提高,但临床上对多药耐药病例逐渐增多[1]。解毒化瘀方是     

激光特征与其诱导骨肉瘤多药耐药细胞凋亡的生物学效应

目的:探讨激光诱导骨肉瘤多药耐药细胞凋亡的分子机制。资料来源:应用计算机检索Pubmed1996/2006的相关文章,检索词为“laser,osteosarcoma,apoptosis”并限定语种为“English”,应用计算机检索“中国期刊网CNKI数字图书馆”1996/2006的中文文章,检索词为“激光,骨肉瘤,凋亡”。资料选择:对资料进行初审,查找全文的文献。纳入标准为:与激光诱导肿瘤凋亡的机制有关。排除标准为较陈旧和重复研究的文章。资料提炼:共收集到72篇文章,其中31篇文献符合纳入标准,其中关于氧自由基方面的文章5篇,关于细胞内钙离子浓度的文章5篇,关于蛋白激酶C的文章6篇,关于Bcl-2的文章5篇,关于P53的文章8篇。资料综合:激光诱导肿瘤细胞凋亡的机制主要包括以活性氧簇为主的自由基、细胞内Ca2 浓度、蛋白激酶C家族、Bcl-2家族、p53基因等。目前的报道多侧重于低强度激光对正常细胞的促增殖作用,而对肿瘤细胞,特别是多药耐药骨肉瘤细胞及其动物模型生物效应的研究很少,推测也可能与以上机制有关。结论:激光诱导骨肉瘤凋亡的分子机制还不清楚,可能与细胞内活性氧自由基、钙离子浓度、蛋白激酶C、bcl-2和p53基因等相关。     

黄芩素与顺铂联合用药对人骨肉瘤MG63细胞株细胞凋亡的影响

【目的】研究黄芩素与顺铂联合用药对人骨肉瘤MG63细胞增殖和凋亡的影响。【方法】在骨肉瘤MG63细胞株中,分别采用MTT法检测黄芩素单独用药,与顺铂合用后细胞活性的变化情况;Hochest染色、TuNEL法检测药物单用及合用时细胞凋亡的变化情况。【结果】黄芩素30μM对细胞活性没有明显影响,但在100pM可时间依赖的降低细胞活性。黄芩素（100gM）与顺铂（3肛M）舍用后,能明显抑制细胞活性,具呈时效关系。黄芩素（100μM）可诱导细胞发生凋亡,黄芩素（30～100肛M）与顺铂（3μM）两者合用具有协同诱导细胞凋亡的作用。【结论】黄苓素可抑制MG63细胞活性,诱导凋亡;与顺铂合用具有协同效应。     

PA法检测精索静脉曲张大鼠生精细胞的早期凋亡

目的:采用Annexin-FITC和PI标记法(PA)法检测外科所致的精索静脉曲张(VC)大鼠生精细胞的早期凋亡。方法:以成年雄性SD大鼠复制左VC模型,应用流式细胞术(flow cvtometry,FCM)PA法(Annexin-FITC和PI标记法)检测睾丸生精细胞的早期凋亡。结果:实验组大鼠睾丸生精细胞的凋亡率显著高于假手术对照组(P<0.01),且左右侧睾丸凋亡率相同,1 n与4 n细胞群凋亡率显著高于2n细胞群。结论:PA法可检测VC大鼠生精细胞的早期凋亡,并可较准确分析各期生精细胞凋亡。     

超声诱导K562细胞凋亡机制的研究

目的本实验探讨超声体外诱导K562细胞凋亡的影响及其机制。 方法频率为1．8MHz的超声波辐照正常外周血单核细胞和体外培养的K562细胞，辐照后用光学显微镜观察凋亡细胞形态学改变、流式细胞仪检测原位末端脱氧核苷酸转移酶（TUNEL）和p53、bcl-2、caspase-3、Fas、FasL蛋白表达水平。 结果电压为10mV超声辐照细胞10min后12h和24h，光学显微镜下可见凋亡小体形成等典型形态学改变，K562细胞凋亡率及p53、caspase-3、Fas、FasL蛋白表达水平分别显著高于对照组（P〈0．001）；而bcl-2蛋白表达水平明显低于对照组（P〈0．001）。 结论超声可以诱导K562细胞凋亡，其机制可能与p53、caspase-3、Fas、FasL蛋白表达增高及bcl-2蛋白表达降低有关。     

不同频率诊断超声对小鼠早孕胚胎组织细胞凋亡影响的对比研究

目的 检测诊断超声不同频率，相同时间照射后对早孕小鼠胚胎组织细胞凋亡影响的差别。方法 应用频率3．5MHz和频率6．5MHz的探头固定持续照射孕鼠腹部，不同频率的照射组又分为0min组，5min组，15min组，30min组，24小时后取出标本，琼脂糖凝胶电泳观察不同频率照射后DNA片段情况。结果 频率为3．5MHz探头照射组，均出现凋亡梯形，且随时间的延长，梯形越明显；频率为6．5MHz照射组，15min照射组开始出现凋亡梯形，30min照射组凋亡梯形更趋明显。结论 不同频率诊断超声持续照射小鼠胚胎可引起不同程度的胚胎组织细胞凋亡，预测使用经阴道高频超声探头检查在诊断中相对更安全。     

MMP-9和TIMP-1在骨肉瘤中的表达和临床意义

目的研究骨肉瘤组织中基质金属蛋白酶及其抑制剂(MMP-9、TIMP-1)的表达情况、探讨它们与骨肉瘤侵袭的关系和临床意义,为临床上寻找判断骨肉瘤侵袭性的可靠指标。方法对36例骨肉瘤和15例正常骨组织行免疫组化染色。观察并分析1MMP-9及TIMP-1在骨肉瘤与正常骨组织中的表达;2MMP-9及TIMP-1与骨肉瘤组织学类型及临床分期的关系;3MMP-9及TIMP-1在骨肉瘤中的表达及其相关性。结果MMP-9和TIMP-1在骨肉瘤中的表达率为86.11%和75.00%,二者表达呈正相关(P<0.05);MMP-9和TIMP-1在骨肉瘤中的表达明显高于正常骨组织(P<0.05);MMP-9及TIMP-1与骨肉瘤组织学类型及临床分期无显著相关(P>0.05);骨肉瘤组织中MMP-9阳性表达者肿瘤浸润软组织的比率明显高于阴性表达者(P<0.05)。结论1MMP-9在正常骨组织中呈低表达,而在骨肉瘤中的表达明显上调;2MMP-9可作为骨肿瘤恶性表型的标志,可作为骨肉瘤诊断的辅助指标;3MMP-9是骨肉瘤细胞增殖、侵袭的标志;4MMP-9和TIMP-1在骨肉瘤中二者表达呈正相关。     

槐耳浸膏诱导肝癌细胞凋亡的实验研究

目的:探索槐耳浸膏抑制肝癌细胞增殖的机理,为槐耳浸膏在临床上治疗肝肿瘤提供理论依据。方法:将MHCC97H肝癌细胞株分别与DMEM,槐耳浸膏(1 mg／ml,3 mg／ml,5 mg／ml,10 mg／ml)及5-FU(10μg／ml)作用24 h、48 h、72 h,在流式细胞仪上分别测定其细胞凋亡率。结果:不同浓度槐耳浸膏组在每一时段上诱导肝癌细胞凋亡率明显高于对照组。其凋亡率的升高有明显的剂量相关性。槐耳浸膏高浓度10mg／ml组的凋亡率与5-FU组相当。槐耳浸膏诱导肝癌细胞凋亡的作用随时间的延长而增加。结论: 槐耳浸膏能明显诱导肝癌细胞的凋亡,从而抑制肝癌细胞的增殖,为临床治疗肝肿瘤提供了依据。     

氯氧甲苯咪唑诱导白血病细胞凋亡的实验研究

为了研究氯氧甲苯咪唑(econazole)诱导鼠粒单核白血病细胞WEHI-3凋亡的机制，利用Annexin-V／PI双染实验测定细胞凋亡，Fura-2荧光负荷技术检测细胞内游离钙离子浓度([Ca^2 ]i)，并抽取WEHI-3细胞内质网部分蛋白，利用Western blot测定caspase-7、caspase-12的蛋白表达。结果显示ieconazole作用后WEHI-3出现典型的凋亡改变，细胞内游离[Ca^2 ]i较对照明显升高，caspase-12和caspase-7表达随着细胞内钙离子浓度的提高而逐渐增加。结论：econazole能诱导WEHI-3细胞凋亡，caspase-12在此过程中起重要作用。     

细胞色素C对阿糖胞苷诱导白血病细胞凋亡的影响

【目的】探讨细胞色素C（CytC）对小剂量阿糖胞苷（LD-Ara—C）诱导白血病细胞凋亡的影响。【方法】用HL-60白血病细胞株进行传代培养,MTT试验检测Ara—c和Cyt C不同药物浓度对白血病细胞增殖的影响,流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡。【结果】12μg／ml浓度以下的CytC具有促进HL-60细胞增殖的作用,不同浓度的CytC干预后HL-60细胞凋亡率均低于干预前（P〈0．01）。联合应用CytC和LD-Ara—C,HL-60细胞凋亡率明显高于单用LD-Ara—C组（P〈0．01）。【结论】外源性CytC在12μg／ml浓度以下时仅能促进白血病细胞增殖,联合应用CytC和LD-Ara—C可增强LD-Ara—C诱导白血病细胞凋亡的作用。     

丙泊酚抑制H_2O_2诱导的肝L02细胞凋亡

目的：探讨丙泊酚在H2O2诱导的人肝L02细胞凋亡中的作用。方法：人肝L02细胞经丙泊酚预处理后再用H2O2进行处理,采用TUNEL法及caspase-3切割程度来检测细胞的凋亡。通过real-time PCR检测Bcl-2（B-cell lymphoma 2）,BclxL（B-cell lymphoma-extra large）,Bad（Bcl-2-associated death promoter）和Bax（Bcl-2-associated X protein）mRNA表达量。结果：在H2O2诱导的凋亡过程中,经丙泊酚预处理的L02细胞凋亡数量及caspase-3切割量均明显减少。并且这种减少与丙泊酚的剂量成正相关：当丙泊酚剂量用至300μmol/L时,细胞的凋亡程度被降至最低。丙泊酚预处理减少了促凋亡基因Bad和Bax的mRNA表达。结论：丙泊酚对H2O2诱导的人肝细胞L02凋亡具有抑制作用,可能部分是通过抑制Bad和Bax的表达发挥作用的。