选择性COX-2抑制剂对非小细胞肺癌细胞株毒性及分子机制的研究

目的：探讨选择性环氧化酶-2（cyclooxy-genase-2,COX-2）抑制剂Celecoxib对非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）细胞株增殖与凋亡的作用以及相关分子机制。方法：对3种NSCLC细胞株A549（腺癌）、GLC82（腺癌）和SW1573（肺泡细胞癌）使用MTT法测定细胞生长抑制率;Hoechest33258荧光染色观察细胞凋亡;流式细胞仪分析细胞凋亡及细胞周期分布;West-ern blot法检测COX-2、磷酸化AKT（p-AKT）、总丝苏氨酸激酶（serine/threonine kinase,AKT）、磷酸化ERK（p-ERK）及总细胞外信号调节激酶（ex-tracellular signal-regulated kinase,ERK）蛋白的表达。结果：Celecoxib抑制A549、GLC82和SW1573细胞增殖的IC50值分别为14.7、10.6和18.6μmol/L;Celecoxib对3种NSCLC细胞株都有较明显的凋亡诱导作用,Celecoxib作用12h凋亡率增加,24～48h更明显,Celecoxib10～40μmol/L作用可见凋亡率明显增加;Celecoxib作用于GLC82细胞后检测到胞内p-AKT及p-ERK蛋白表达下调。结论：COX-2抑制剂Celecoxib在体外能抑制细胞信号传导AKT及ERK通路的活化,诱导NSCLC细胞发生凋亡,抑制细胞增殖。     

细胞外信号调节激酶在卵巢癌中的表达及临床意义

目的：研究细胞外信号调节激酶（ERK）在卵巢上皮癌中的表达及ERK激酶MEK1（丝裂原活化蛋白激酶激酶1）抑制剂PD98059对人卵巢癌细胞生长的抑制作用。方法：采用western blot技术和免疫组化方法．对50例上皮性卵巢癌组织中ERK．和ERK，蛋白的表达进行了研究，分别以不同浓度的PD98059作用于卵巢癌细胞不同时间．通过MTT比色法观察PD98059对细胞增殖的抑制作用：应用扫描、透射电镜、细胞DNA提取及电泳实验研究PD98059对卵巢癌细胞的诱导凋亡作用。结果：ERK1和ERK2在卵巢癌中有过度表达，与正常卵巢及卵巢良性肿瘤相比，其差异有显著性。Ⅲ～Ⅳ期表达高于Ⅰ～Ⅱ期．差异有显著性。PD98059使卵巢癌细胞增殖比明显下降．其下降程度随PD98059浓度增高和作用时间延长而增强：PD98059 100μM作用72h即可诱导卵巢癌细胞呈现典型的凋亡特征。结论：ERK的过度表达在卵巢癌的发生发展中起重要作用，PD98059具有抑制卵巢癌细胞生长和诱导凋亡作用     

氨基末端激酶信号通路在Apoptin基因诱导Hela细胞凋亡中的作用

目的:探讨肿瘤特异性凋亡基因(Apoptin gene)在诱导Hela细胞凋亡时,c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路在细胞发生凋亡中的作用.方法:用含有肿瘤特异性凋亡(Apoptin)基因的真核表达载体瞬间转染体外培养的Hela;采用流式细胞仪、免疫印迹法(Western blot)、苔盼蓝染色法及RT-PCR等方法研究其在不同时间条件下Hela细胞诱导凋亡的作用.结果:Apopin基因瞬间转染的Hela细胞可出现明显的细胞凋亡;而且凋亡细胞的数量与Apoptin的转染时间有关;凋亡细胞内磷酸化型JNK蛋白随凋亡细胞数量的增加而增多,而非磷酸化型JNK蛋白表达无明显变化.结论:Apoptin基因具有诱导Hela细胞凋亡的作用JNK信号通路的激活可能在Apoptin诱导肿瘤细胞凋亡过程中发挥作用.     

抑制PDK1经由ASK1/JNK/Bim通路诱导慢性粒细胞白血病细胞凋亡

背景与目的：3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1（3-phosphoinositide-dependent kinase-1,PDK1）在细胞的生长、增殖及存活中具有重要的生理作用,其功能异常参与多种肿瘤的发生。探讨PDK1在慢性粒细胞白血病（chronic myelogenous leukemia,CML）细胞中的表达及参与细胞凋亡的调节机制。方法：通过蛋白质印迹法（Western blot）检测蛋白水平;通过细胞计数试剂盒（cell counting kit-8,CCK-8）及克隆形成实验检测细胞增殖;通过流式细胞术检测细胞凋亡。结果：CML患者外周血白细胞中PDK1蛋白含量明显高于健康体检者（P<0.05）;在细胞株中,抑制PDK1能明显降低K562和KU812的增殖活力及克隆形成能力;同时,细胞凋亡明显（P<0.01）,凋亡执行分子caspase-3及底物多聚ADP核糖聚合酶［poly（ADP-ribose）polymerase,PARP］被切割活化。抑制剂GSK2334470降低PDK1的磷酸化水平（K562：P<0.05;KU812：P<0.01）,但并不影响其表达丰度。蛋白激酶B（protein kinase B,AKT）及下游糖原合成酶激酶-3β（glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β）磷酸化水平均明显下降,然而β-catenin及靶基因c-Myc表达均未受影响（P>0.05）。磷酸化凋亡信号调节激酶1（apoptosis signal-regulating kinase 1,ASK1）水平降低（P<0.001）,下游c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase,JNK）及Bcl-2相互作用细胞凋亡介导因子（Bcl-2 interacting mediator of cell death,Bim）磷酸化水平明显升高,同时,Bim表达量也有所增加。最后,抑制PDK1能够增加CML细胞对伊马替尼（imatinib）的敏感性,与imatinib单独作用相比,联合GSK2334470能够显著提高细胞凋亡水平（P<0.01）。结论：PDK1抑制剂GSK2334470通过调节ASK1/JNK/Bim信号通路磷酸化水平激活CML细胞凋亡。     

磷酸化JNK介导全反式维甲酸诱导视网膜母细胞瘤细胞凋亡

目的 探讨全反式维甲酸(ATRA)抑制视网膜母细胞瘤(Rb)细胞生长并诱导其凋亡的作用及信号转导机制。方法 应用^3H—胸腺嘧啶掺人分析法观察ATRA对细胞生长的抑制作用;用流式细胞仪分析ATRA对Y79细胞周期的影响;以DNA片段凝胶电泳分析细胞凋亡;用Western blot分析c—jun氨基末端激酶(JNK)的磷酸化。结果 ATRA可明显抑制Y79细胞的生长,1μmol/L处理36h时,^3H—胸腺嘧啶掺人率下降达40％,Y79细胞被阻滞于G0／G1期,并出现Sub—G1峰。ATRA可诱导Y79细胞凋亡,此凋亡过程可被JNK的阻断剂Curcumin阻断;在此过程中,JNK被激活并磷酸化。结论 ATRA可抑制Y79细胞生长并诱导其凋亡,其过程是由磷酸化的JNK介导,提示ATRA可能是一种潜在的抗Rb化疗药物。     

抑制Src酪氨酸激酶对非小细胞肺癌细胞外信号调节激酶影响的研究

目的:探讨抑制Src酪氨酸激酶活化对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞外信号调节激酶的影响及其作用。方法:采用NSCLC细胞株进行细胞培养,分别给予不同浓度的Src酪氨酸激酶抑制剂。蛋白质印迹检测NSCLC细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)磷酸化以及抑制Src酪氨酸激酶活化对NSCLC细胞ERK1/2磷酸化的影响。MTT法检测抑制Src酪氨酸激酶活化对NSCLC细胞体外增殖的影响。软琼脂糖集落形成实验检测抑制Src酪氨酸激酶对NSCLC细胞克隆形成的影响。结果:选用的NSCLC细胞都存在ERK1/2磷酸化。抑制Src酪氨酸激酶对PC-9和A549细胞ERK1/2磷酸化呈现浓度依赖性抑制作用,亚微摩尔水平Src酪氨酸激酶抑制剂几乎完全抑制PC-9和A549细胞ERK1/2磷酸化。Src酪氨酸激酶抑制剂对PC-9和A549细胞体外增殖表现出明显的浓度依赖性抑制作用(F=5.072,P=0.004;F=4.368,P=0.008)。0.1、0.3和1.0μmol/L的Src酪氨酸激酶抑制剂对PC-9和A549细胞增殖的抑制率分别为14.7%、47.1%、61.3%和19.8%、24.2%、30.6%。而其余3种NSCLC细胞ERK1/2磷酸化以及体外增殖对Src酪氨酸激酶抑制剂反应不敏感。Src酪氨酸激酶抑制剂明显抑制PC-9和A549细胞的克隆形成(t=11.746,P<0.001;t=5.237,P<0.001)。结论:抑制Src酪氨酸激酶能够抑制PC-9和A549细胞ERK1/2磷酸化,从而抑制PC-9和A549细胞体外增殖。     

细胞外信号调节激酶1/2参与三氧化二砷诱导的胶质瘤细胞凋亡

目的:探讨细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)信号通路在三氧化二砷诱导的胶质瘤细胞U251凋亡中的作用,为应用三氧化二砷治疗胶质瘤奠定基础。方法:50μmol/L三氧化二砷作用U251细胞,不同时间检测胶质瘤细胞增殖活性,半定量PCR检测ERK1/2mRNA表达,Western blot检测ERK1/2蛋白表达;Ho-echst33258染色及流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡;转染ERK1/2上游激酶MEK1,应用ERK1/2激酶抑制剂U0126观察ERK1/2通路在肿瘤凋亡及增殖中的作用;比色分析法检测Caspase-3活性的变化。结果:三氧化二砷诱导胶质瘤细胞发生明显凋亡,抑制肿瘤细胞增殖;增加ERK1/2蛋白的表达,呈时间依赖性;阻断ERK1/2信号通路后胶质瘤细胞凋亡受到抑制,Caspase-3活性下降。结论:ERK1/2信号通路在三氧化二砷诱导的胶质瘤细胞凋亡中起重要作用。     

沉默ERK增强A375黑素瘤细胞对TRAIL诱导细胞凋亡的敏感性

目的:探讨直接抑制细胞外信号调节激酶(extra cellular signal-regulated kinase,ERK)表达后,对肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TNF related apoptosis inducing ligand,TRAIL)对黑素瘤细胞杀伤作用的影响及其作用机制.方法:用携带ERK特异或对照shRNA的慢病毒感染A375黑素瘤细胞,48 h后加入终浓度为100 μg/ml基因重组TRAIL蛋白继续培养6h,收获细胞,碘化丙啶染色,用流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡和TRAIL受体的表达;Western blotting检测相关蛋白的表达水平.结果:亚型特异的ERK shRNA分别沉默ERK1或ERK2,导致A375细胞出现G1期阻滞(对照shRNA组的G1期细胞比例为71％,ERK1、ERK2、ERK1 +2 shRNA组分别增加到85％、90％和81％,P＜0.01);S期细胞从对照组的11％减少到2％左右(P＜0.001)、G2/M期细胞也从对照组的17％减少到3％(P＜0.01).细胞周期改变伴有P21、P27蛋白上调和Cyclin D1蛋白降低,但未见明显的细胞凋亡.经对照shRNA和TRAIL处理的细胞,仅有15％的凋亡率,而ERK shRNA和TRAIL联合处理则使凋亡率达到40％ ～60％ (P＜0.01).抑制ERK蛋白表达能显著上调细胞表面TRAIL受体DR4的表达(从对照组32％增加到75％～80％,P＜0.01),但DR5变化不明显.ERK抑制还明显降低A375细胞的葡萄糖转运受体1(Glut 1)和己糖激酶Ⅱ(HK-Ⅱ)的蛋白表达水平.结论:直接抑制ERK不仅可以抑制肿瘤细胞周期的进展,而且可以增强TRAIL对A375黑素瘤细胞的杀伤作用,其机制与上调细胞表面DR4的表达和干扰肿瘤细胞糖代谢有关.     

1，25-二羟基维生素D3对喉癌细胞增殖的抑制作用及其可能机制

背景与目的：1,25-二羟基维生素D,[1,25-dihydroxy-vitamin D3,1,25（OH）2D3]是维生素D的活性形式,体内外实验均已证明它能抑制多种肿瘤细胞的生长。本研究观察其对人喉癌细胞株Hep-2增殖的抑制作用并探讨其可能作用机制。方法：体外培养Hep-2细胞,培养时添加100、10和1nmol／L1,25（OH）2D3,分别作用24、48、72和96h后,用四唑蓝比色实验（MTT）检测细胞的增殖;用流式细胞仪检测细胞凋亡;用Western blot检测MAPK信号转导通路中ERK、P38、JNK蛋白及其磷酸化蛋白的表达。结果：1,25（OH）2D3可以显著抑制Hep-2细胞的增殖,10nmol／L1,25（OH）2D3作用96h可以诱导Hep-2细胞凋亡,凋亡率为（34．08±1．75）％;p38MAPK的磷酸化水平随1,25（OH）2D3浓度的增加而增强,而丝裂原活化蛋白激酶ERK和JNK的磷酸化程度没有明显改变：应用p38MAPK通路特异性抑制剂SB2035080作用后,1,25（OH）2D3诱导的Hep-2细胞凋亡率减少。结论：1,25（OH）2D3可诱导喉癌细胞Hep-2发生凋亡,其作用机制可能与p38MAPK信号转导通路有关。     

力达霉素联合硼替佐米的抗骨髓瘤作用及对MAPKs表达的影响

目的 研究力达霉素(lidamycin, LDM)联合硼替佐米(bortezomib, BZM)的抗骨髓瘤作用及对丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinases, MAPKs)的影响,并探讨MAPKs在两药联合抗骨髓瘤中的作用。方法 选取适当的药物浓度和通路抑制剂浓度,MTS法检测细胞增殖情况;Westernblot 检测相关蛋白及蛋白磷酸化水平。结果 BZM能增强LDM对骨髓瘤细胞的增殖抑制作用,LDM激活c-Jun氨基末端激酶(c-Jun NH2-terminal kinase, JNK)、p38 MAPK的表达和细胞外信号调节激酶(Extracellular signal regulated rotein kinase, ERK),两药联合后可使JNK和p38 MAPK的激活显著增强,而ERK的激活显著下降。JNK抑制剂(SP600125)、p38抑制剂(SB203580)和MEK抑制剂(U0126) 3种抑制剂单独作用对细胞的增殖抑制作用均不明显,但SP600125或SB203580分别与LDM联合BZM合用后均降低了两药联合对细胞的增殖抑制作用,而U0126与LDM联合BZM合用后提高了两药联合对细胞的增殖抑制作用。结论 LDM通过进一步激活JNK、p38 MAPK和降低ERK的激活来增强BZM抗骨髓瘤敏感度。     

补骨脂酚通过MAPK途径诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的研究

目的:研究补骨脂酚对人肝癌细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:应用噻唑蓝法（MTT法）和倒置显微镜技术考察补骨脂酚对HepG2细胞生长的影响;采用荧光显微镜观察补骨脂酚处理后细胞凋亡;利用蛋白免疫印迹法检测补骨脂酚对HepG2细胞中凋亡相关蛋白及MAPK家族蛋白表达的影响;引入MAPK家族蛋白抑制剂考察生长抑制率和凋亡相关蛋白表达的变化。结果:补骨脂酚可以剂量依赖性地抑制人肝癌HepG2细胞增殖,其生长抑制作用明显强于临床上常用的抗肿瘤药5-氟尿嘧啶,并且补骨脂酚对人正常肝L02细胞具有较低的毒性。进一步研究发现,补骨脂酚可以诱导HepG2细胞发生凋亡。此外,MAPK家族参与到补骨脂酚诱导的HepG2细胞凋亡过程中,补骨脂酚可以剂量依赖性激活JNK的表达发挥促凋亡的作用,同时抑制了ERK促存活通路,然而对p38无明显影响。结论:本研究首次阐明了补骨脂酚诱导人肝癌HepG2细胞生长抑制作用机制,为进一步的临床应用提供了理论依据。     

Apoptotic effects of signal transduction inhibitors on human tumor cells with different PTEN expression

An important mechanism of antitumoral targeted therapies is the induction of apoptosis in tumor cells. Tamoxifen and trastuzumab (Herceptin), respectively, are able to trigger apoptosis in human breast cancer cells. But, frequently altered apoptotic signal cascades, for instance through PTEN mutations, help tumor cells to escape antitumoral therapy. We studied to what extent the apoptotic effect of signal-transduction inhibitors is dependent on PTEN expression. PTEN expression was analysed by Western blot analysis in tumor cell lines of the breast (BT-474, MCF-7, MDA-MB-231), ovary (BG-1, SK-OV-3) and endometrium (Ishikawa, HEC-1A). Apoptotic effects of tamoxifen, trastuzumab, ZD1839 (Iressa) and different mitogen-activated protein kinase (MAP) inhibitors were measured after 24 h of treatment. Cellular apoptosis was determined by the detection of cytoplasmic histone-DNA complexes. The tested tumor cell lines exhibited a different PTEN expression, ranging from a high expression (ovarian cancer cell line BG-1 and BT-474 breast cancer cells) to a total absence of PTEN expression (endometrial Ishikawa cells). The apoptotic effect of receptor-targeting drugs (tamoxifen, trastuzumab, ZD1839) was dependent both on receptor expression and PTEN expression. When cells were treated with MAPK inhibitors, no correlation between PTEN expression and the apoptosis rate was observed. Our data underline the importance of PTEN expression regarding the induction of apoptosis through various targeted therapies.     

青藤碱诱导肺癌NCI-H460细胞凋亡及其机制的实验研究

目的:探究青藤碱(SIN)诱导肺癌NCI-H460细胞凋亡的作用机制。方法:四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定SIN对肺癌NCI-H460细胞生长的影响;Western blot测定Bcl-2,Bax蛋白的表达;用SIN、PI3K/Akt和MAPK/ERK信号通路抑制剂干预NCI-H460细胞,流式细胞术检测细胞的凋亡率。结果:SIN对肺癌NCI-H460细胞生长有抑制作用,呈时间、浓度依赖性;SIN可以使NCI-H460细胞Bcl-2表达减低,Bax增强;SIN与PI3K/Akt和MAPK/ERK信号通路抑制剂联用后可协同增加NCI-H460细胞凋亡(P<0.05)。结论:SIN可以抑制肺癌NCI-H460细胞的生长,能改变其Bax,Bcl-2蛋白的表达,与PI3K/Akt和MAPK/ERK信号通路抑制剂联用可协同发挥促进肺癌细胞凋亡作用,可望成为新的肺癌治疗药物。     

Roles of JNK, p38 and ERK mitogen-activated protein kinases in the growth inhibition and apoptosis induced by cadmium

Cadmium (Cd), a human carcinogen, can induce apoptosis in various cell types. Three major mitogen-activated protein kinases (MAPKs), c-JUN N-terminal kinase (JNK), p38 and extracellular signal-regulated kinase (ERK), have been shown to regulate apoptosis. In this study we explore the ability of Cd to activate JNK, p38 and ERK, including their effects on Cd-mediated growth inhibition and apoptosis in a human non-small cell lung carcinoma cell line, CL3. The kinase activity of JNK was induced dose-dependently by 30-160 microM CdCl(2). High cytotoxic doses of Cd (130-160 microM) markedly activated p38, but low Cd doses did not. Conversely, the activities of ERK1 and ERK2 were decreased by low cytotoxic doses of Cd (相似文献   

MEK/ERK抑制剂影响胃癌细胞对5-FU敏感性及其机制的探讨

目的:探讨MEK/ERK特异性抑制剂PD98059在5-氟尿嘧啶(5-FU)抗胃癌细胞增殖中的作用。方法:应用5-FU与MEK/ERK抑制剂(PD98059)处理胃癌细胞,MTT法检测细胞增殖状态,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测ERK和p-ERK的表达。结果:随着5-FU浓度的增加,5-FU对3种胃癌细胞系的增殖抑制率逐渐增大。5-FU作用MGC803细胞72 h的抑制率显著高于48和24 h,t值分别为16.477和25.349,P值分别为0.002和0.001。与对照相比,5-FU作用MGC803细胞48和72 h可引起显著的凋亡,t值分别为-20.576和-40.389,P值分别为0.015和0.001。5-FU处理胃癌MGC803细胞48 h,与对照相比pERK表达一过性下降然后升高。20μmol/L的PD98059联合5-FU作用48 h,可明显抑制pERK的表达,抑制率为22%;同时可明显增加细胞凋亡,增加率为20%。结论:MEK/ERK信号传导通路在5-FU作用胃癌细胞的过程中被激活,联合应用MEK/ERK信号通路抑制剂可部分逆转ERK的活化,增加胃癌细胞凋亡,从而增加胃癌细胞对5-FU的敏感性。     

Effector mechanisms of norcantharidin-induced mitotic arrest and apoptosis in human hepatoma cells

NCTD is a demethylated form of cantharidin with antitumor properties, which is now in use as a routine anticancer drug against hepatoma. However, there is limited information on the effect of NCTD on human cancer cells. In the present study, NCTD inhibited proliferation, caused mitotic arrest, then progressed to apoptosis within 96 hr in 3 human hepatoma cell lines: HepG2, Hep3B and Huh-7. NCTD treatment (5 microg/ml) enhanced the expression of Cdc25C and p21(Cip1/Waf1), increasing the phosphorylation of these 2 proteins. In addition, NCTD treatment induced an earlier increase in cyclin B1-associated histone H1 kinase activity within 48 hr, but an approximately 70% reduction of both protein level and kinase activity of cyclin B1 was observed at 72 hr. Treatment with NCTD significantly decreased the expression of p53 protein but did not affect the expression of Cdk1 and p27(Kip1). Moreover, NCTD treatment also increased the phosphorylation of Bcl-2 and Bcl-X(L) but did not affect the expression of Bax or Bad. Bcl-2 phosphorylation appears to inhibit its binding to Bax since less Bax was detected in immunocomplex with Bcl-2 in NCTD-treated HepG2 cells. In addition, NCTD treatment caused activation of caspase-9 and caspase-3, preceding DNA fragmentation and morphologic features of apoptosis. Pretreatment with the broad-spectrum caspase inhibitor z-VAD-fmk markedly inhibited NCTD-induced caspase-3 activity and cell death. These results suggest that phosphorylation of p21(Cip1/Waf1) and Cdc25C and biphasic regulation of cyclin B1-associated kinase activity may contribute to NCTD-induced M-phase cell-cycle arrest. Furthermore, the increase of p21(Cip1/Waf1), phosphorylation of Bcl-2 and Bcl-X(L), activation of caspase-9 and caspase-3 may be the molecular mechanism through which NCTD induces apoptosis.     

Sulforaphane sensitizes tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand-mediated apoptosis through downregulation of ERK and Akt in lung adenocarcinoma A549 cells

The cytotoxic effect of the tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL) is limited in some cancer cells, including A549 lung adenocarcinoma cells. However, treatment with TRAIL in combination with subtoxic concentrations of sulforaphane (SFN) sensitizes TRAIL-resistant A549 cells to TRAIL-mediated apoptosis. Combined treatment with SFN and TRAIL induced chromatin condensation, DNA fragmentation, annexin V staining and sub-G(1) phase DNA content. These indicators of apoptosis correlate with the induction of caspase-3 activity that results in the cleavage of poly(ADP-ribose) polymerase and the release of lactate dehydrogenase. Both the cytotoxic effect and apoptotic characteristics induced by combined treatment were significantly inhibited by z-DEVD-fmk, a caspase-3 inhibitor, demonstrating the important role of caspase-3 in the observed cytotoxic effect. Combined treatment also triggered the activation of p38 MAPK and JNK, and downregulation of ERK and Akt. Inhibitors of ERK (PD98059) or Akt (LY294002), but not p38 MAPK, resulted in significantly decreased cell viability. Although the activation of JNK was increased in response to combined treatment, inhibition of the JNK pathway significantly attenuated cell viability. These results indicate that caspase-3 is a key regulator of apoptosis in response to combined SFN and TRAIL in human lung adenocarcinoma A549 cells through downregulation of ERK and Akt.     

丁酸钠增强U937细胞凋亡敏感性的分子机制研究

目的 探讨丁酸钠（NaBu)对细胞周期检测点效应及对U937细胞凋亡的敏感性。方法 以U937-ASPI3K（ATM阴性）,U937-pZeosv2( )（野生型ATM基因）两种U937的变异细胞系作为细胞模型。用免疫沉淀及激酶活性测定p38MAPK,ERK1的激酶活性。用免疫印迹分析Bad磷酸化灭活。结果 经NaBu预处理的U937-pZeosv2( )细胞经^137Gs照射后。细胞凋亡敏感性呈NaBu剂量依赖性增强,这种增强效应可被p38MAPK阻滞剂OLM阻断,但不能被p34cdc2激酶的特异性抑制剂ALP及CDK2阻滞剂CDK-2-Ⅰ阻断,经NaBu预处理的U937-ASPI3K细胞经^137Cs照射后,细胞凋亡敏感性进一步增强,这种增强效应可被OLM阻断,放射线可显著增强p38MAPK激酶活性,抑制ERK1激酶活性;NaBu预处理与放射线联用后,对p38MAPK激酶活性的增强有极其显著的协同效应,放射线诱导U937-ASPI3K细胞Bad蛋白磷酸化灭活,在NaBu协同作用下,Bad蛋白磷酸化灭活效应进一步增强。结论 NaBu通过p38MAPK激酶活性,增强细胞凋亡敏感性,该效应与ATM基因是否缺失无关,与ATM失活增强的细胞凋亡敏感性各为独立通路。     

PD98059抑制MAPK/ERK信号通路对胃癌细胞生物学功能的影响

目的：研究MAPK/ERK信号通路中关键信号分子MEK和ERK在胃癌SGC-7901细胞中的表达及PD98059抑制MAPK/ERK通路对胃癌细胞生物学功能的影响。方法：体外培养胃癌细胞株SGC-7901,不同浓度（0、25、50、100、200、300和400 mmol/L）PD98059处理24 h后CCK-8法检测细胞增殖率变化;再用0、25、50和100 μmol/L PD98059处理24 h后采用实时荧光定量PCR（qPCR）检测MEK和ERK mRNA的表达量;Western blot检测MEK和ERK蛋白的表达;流式细胞术检测细胞周期和凋亡变化。同时设正常胃黏膜上皮GES-1细胞为对照。结果：与正常胃黏膜上皮GES-1细胞相比,胃癌SGC-7901细胞中MEK和ERK mRNA的表达升高,差异具有统计学意义（P < 0.05）;p-MEK、p-ERK蛋白的表达亦显著升高,差异具有统计学意义（P < 0.05）。0~200 μmol/L PD98059处理SGC-7901细胞后,细胞增殖率随着抑制剂浓度的升高而降低（P < 0.05）。当PD98059浓度处于200~400 μmol/L时抑制作用逐渐趋于平稳。0~100 μmol/L PD98059作用后MEK、ERK mRNA的表达量低于对照组（P < 0.05）,随着PD98059浓度升高,ERK mRNA表达量逐渐降低（P < 0.05）。Western blot检测结果显示50和100 μmol/L PD98059作用后p-MEK1/2、p-ERK1/2蛋白表达降低（P < 0.05）。且抑制剂PD98059使胃癌SGC-7901细胞发生G0/G1期阻滞,可诱导细胞凋亡。结论：MAPK/ERK信号通路在胃癌细胞中激活,PD98059通过抑制MAPK/ERK信号通路的活性可影响胃癌细胞的生物学功能。