荧光探针定量PCR技术

PCR技术是通过对基因的选择性片段进行体外高效扩增,实现目的基因的检测。荧光探针定量PCR(FQ-PCR)是一种新的基因定量检测技术,国外文献多用“实时定量PCR(real time quantitative PCR)”或“TaqMan PCR(以美国PE公司商标命名)”。该技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针,巧妙地把核酸扩增(PCR)、杂交及光谱技术结合在一起,从而实现了对目的基因的准确定量检测,正发展成为临床实验诊断的常规技术。     

原位PCR技术及其应用

目的：阐述原位PCR技术的基本原理，进展，应用及存在问题。方法：通过检索国内，外相关文献，归纳整理，结合实践操作经验，展开分析，结果：原位PCR技术是一种特异性，敏感性较高的靶序列检测定位技术，作为研究基因信息和细胞，染色体等的形态信息的有力工具，尤其是专用原位PCR仪在医学研究（医学检验，病理学领域）上的广泛应用，结论：原位PCR技术的应用推广及研究深入，也存在其技术应用不完善之处。     

含内标的荧光PCR—荧光定量PCR

1.前言 PCR技术应用于体外基因检测是临床诊断学上的一项重大突破,但由于传统的PCR检测易污染、假阳性率高等原因,被国家明令禁止使用于临床检验。为了克服传统PCR的上述缺点,发挥它早期、快速诊断的优点,近年来,发展了多种将传统PCR技术与其它技术结合起来的新型PCR技术,最成功的有PCR与ELISA结合的PCR-ELISA技术和PCR与荧光检测结合的荧光PCR技     

沙门菌PCR检测技术应用进展

沙门菌是引起食物中毒的主要致病菌之一,其传统检测方法包括选择性培养、生化鉴定等步骤,耗时长、灵敏性差,很难满足快速检测要求。聚合酶链反应（PCR）技术是近年来广泛应用于食品中沙门菌快速检测的方法之一,其检测目的基因多种多样,主要包括属特异性引物基因、血清群特异性引物基因与血清型特异性引物基因。本文主要概述PCR技术应用于沙门菌检测的各种目的基因,并简要介绍常规PCR、多重PCR及实时定量PCR等技术的应用。     

通用模板信号扩增技术（UT—FCR）

PCR是最常用的分子生物学诊断技术，但常用的PCR都存在种种不足，制约了其在临床的应用。通用模扳信号扩增技术(UT-PCR)解决了传统PCR核酸模扳质量容易引起的假阴性以及难以实现多基因／多位点同时检测两大难题。UR—PCR具有灵敏度高、特异性强、假阴性低，并能实现高通量检测，在临床诊断和科学研究中有广泛的应用空间。     

基因扩增分析(PCR)仪温控系统的研究与应用

分析了基因扩增分析(PCR)仪的工作原理及提高PCR仪温度控制精度的技术，详细讨论了温度控制系统的软硬件设计，研制了一种新颖的PCR温度控制系统。     

RD—PCR技术在酵母基因表达谱研究中的应用

目的 应用RD－PCR技术分离酵母基因。方法 首先提取酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)总RNA，纯化mRNA，然后，转录成双链cDNA，再用限制性内切酶Sau3AI酶切，在酶切片段上加上接头后，用通用引物U进行第一次PCR扩增，以这一产物为模板用选择性引物（在通用引物的3‘端延伸两个碱基）作第二次PCR扩增。5％PAGE胶分离基因片段，选择单带割胶回收，做第三次PCR扩增，与载体连接，最后进行测序分析。结果 采用这种方法分离得到的基因片段，经Blast检索分析，确为来自酿酒酵母基因的cDNA片段或表达序列标签（EST）。结论 RD－PCR技术可以有效地分离EST，可用于酵母基因表达调控的研究。     

基于PCR技术的现代分子生物学操作在中药鉴定中的应用

全文着重介绍了以聚合酶链式反应（PCR）技术为支撑的现代分子生物学技术,包括随机扩增多态性DNA（RAPD）技术、ISSR—PCR技术、PCR—RFLP技术、mRNA差异显示技术、基因测序技术及基因芯片技术在中药鉴定中的应用,指出现代分子生物学技术的蓬勃兴起将极大地推动中药鉴定的发展。     

触减PCR在扩增抗体重链和轻链可变区中的应用

目的探讨扩增人免疫球蛋白重链和轻链可变区基因的方法。方法提取经免疫的具有乙肝表面抗体的人外周血淋巴细胞总RNA,反转录合成cDNA,采用普通PCR和触减PCR两种方法扩增抗体重链和轻链可变区基因。结果利用触减PCR方法,扩增出抗体重链和轻链的可变区基因,基因片段分别约为340bp和325bp,而普通PCR没有得到预期的结果。结论触减PCR比普通PCR更容易扩增出抗体可变区基因片段。     

FQ-PCR技术在病毒性肝炎诊疗上的应用

FQ-PCR（fluorescence quantifive polymerase chain reaction，荧光定量聚合酶链式反应）是一种基于荧光能量传递技术的体外基因扩增技术。它与传统的对抗原抗体进行定性或半定量的检测方法相比，具有检出率高、工作效率高的优点，它还克服了传统PCR技术假阳性率高和无法确定初始模板浓度等问题。在病毒性肝炎的诊断和治疗中，该技术可用于监测病情，为预后和用药提供较为可靠的参考。本文在阐明FQ—PCR技术的基础上，对其常规和新兴的应用领域进行了介绍。     

改良的降落PCR扩增中国地鼠目的基因

目的优化PCR程序，尝试用降落PCR扩增中国地鼠目的基因。方法设计了4对引物，用普通PCR和改良的降落PCR扩增中国地鼠COX1、COX2、NADH5、NADH6部分基因。结果普通PCR只有1对引物扩增出特异性条带，而降落PCR4对引物都扩增出特异性条带，并与中国地鼠目的基因大小一致。结论降落PCR省略了常规PCR中摸索最适退火温度的过程，对中国地鼠一些Tm值相近的基因可以使用降落PCR温度程序扩增，是一种行之有效的PCR方法。     

PCR技术与PCR生物芯片

聚合酶链式反应(polymerase chain reaction，PCR)技术已在分子生物学和医学诊断等方面得到广泛的应用，形成了一种新的技术体系。PCR生物芯片作为实现PCR技术的一种重要工具有广阔的应用前景。本论述了PCR技术的原理、特点及应用和PCR生物芯片的研究进展。     

基因分型技术首次应用于类孟买型家系ABO基因的研究

目的 探计将基因分型技术用于解决临床输注中血型血清学难题。方法 报告首次在国内用基因分型技术用于一个类孟买型家系5口人ABO基因多态性的研究。在吸收放散试验、唾液血型物质凝集抑制等血清学试验基础上，采用快速盐析法提取外周血中的DNA，用PCR—SSP法扩增ABO血型等位基因。结果 一家5人中，兄弟3人均为类孟买型，ABO基因分型分别为A102B、A102B、Al20O1，而其父母血型基因与血清学血型相符合。结论 ABO PCR—SSP基因分型是一种方便、快速、可靠的技术，与血型血清学相比有着显优势。     

PCR技术在检验医学中的应用

聚合酶链反应（Polymerase chaim rection，PCR）作为一项较新的科学技术检测方法，在检验医学领域中的发展及临床应用是有广阔前景的。为适应不同项目研究开发目的、不同的临床诊断对象需求，通过改变组成和反应条件及与其它先进技术相结合，PCR技术越来越被临床所重视。目前已有多种PCR技术，如多重PCR、不对称PCR、莹光标记PCR、[第一段]     

应用PCR技术检测假肥大型肌营养不良

目的：应用PCR技术检测假肥大型肌营养不良（DMD／BMD）基因缺失和杂合子，方法：根据DMD／BMD外显子缺失的多发位点，建立一个多重PCR体系，在不同的PCR条件下对23例DMD／BMD的患者及其家系57名可疑女性携带者进行多重缺失的筛选，单链构象多态性（SSCP）／异源双链分析，连锁标记分析，限制性片段长度多态性（RFLPs)分析及微卫星分析。结果；23例先证者中有14例为基因缺失，2例为基因重复，40例家系中女性亲属为杂合剂，结论：利用此PCR体系，可准确地检测出DMD／BMD的基因突变，可靠地筛选携带者并 对其家系进行正确的分析。     

PCR技术及其在生物医学中的应用

PCR技术是1985年建立的一种核酸片段体外酶扩增技术,它经变性、退火、延伸的循环,使核酸片段指数式增加。PCR技术可应用于分子生物学的许多领域,如基因缺失测定、复杂基因的分析、核酸片断的定量测定、DNA诱变、基因克隆以及核酸序列分析等。在临床医学中,PCR也有越来越广泛的应用,如遗传病、传染病及肿瘤的诊断和基因治疗等。与传统的DNA杂交及克隆方法相比,PCR技术具有快速、简便、灵敏度高和稳定性好等优点。本文简介PCR技术的原理及其在分子生物学和临床医学中的主要应用。     

免疫印迹法检测ENA多肽抗体谱的临床应用

免疫印迹法（Immunoblotting)也称免疫转印技术(IBT)，是一项新的生化技术，它对研究工作的影响与内切酶的发现及PCR的基因扩增技术等量齐观。     

实时荧光PCR技术在快速检测植物及其加工产品中转基因成份中的应用

本报道了利用实时荧光PCR技术对若干植物及其加工产品中的转基因成分进行检测、鉴定的结果。首先用一套转基因植物荧光PCR定性试剂盒对这些样品中可能存在的7个目标基因(35S、nog、nptⅡ、pat、bar、FMT、cry3A)进行筛查。对15份已知的样品的检测结果与样品的标准记录完全吻合；在113份未知样品中，检出21份阳性样品。井对其中的5份阳性大豆样品和3份玉米阳性样品进一步进行定量分析，确定了这些样品中转基因成分(GMO)的含量。本同时讨论了实时荧光PCR技术在快速检测植物及其加工产品中转基因成份中的应用，认为荧光PCR技术是适合植物转基因检测、鉴定的一种快速、灵敏、准确的方法。     

应用双重PCR技术检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的：探讨双重聚合酶链反应(PCR)技术检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的临床价值。方法：临床分离得葡萄球菌，挑取单个菌落，用碱煮沸法制备DNA模板，进行双重PCR反应，即在同一反应管内同时扩增femA基因和mecA基因。结果：100株葡萄球菌中，38株凝固酶阳性的葡萄球菌，其femA基因均为阳性，而mecA基因阳性者为30株，占78．9％(30／38)，mecA基因阴性8株，占21．1％(8／38)。62株凝固酶阴性的葡萄球菌femA基因均为阴性，mecA基因阳性48株，占77．4％(48／62)，mecA基因阴性14株，占22．6％(14／62)。另外，药敏法中有4株临界水平MSSA经PCR法鉴定为MRSA。结论：应用双重PCR技术检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌是一种敏感、快速、特异的实验诊断方法，可防止药敏法临界水平MRSA漏检为MSSA。     

PCR技术的优化与应用

在分子生物学短暂的历史中．免疫转印、分子克隆、脉冲区带凝胶电泳及单克隆抗体等新技术的相继出现，使我们对探索生命科学的思路有了新的突破。新近发展起来的PCR技术对我们深化、更新有关生命科学的认识将有突出贡献。