基于DNA条形码和HRM技术建立紫草药材的RFLP-HRM鉴别方法

目的:基于DNA条形码技术和高分辨率熔解曲线(HRM)技术鉴别紫草市场样品的真伪并建立紫草药材的RFLP-HRM鉴别方法。方法:通过聚合酶链式反应(PCR)对紫草药材的ITS2序列进行扩增;利用MEGA 6.06软件对紫草药材的ITS2序列进行NJ树聚类分析和遗传距离分析;对市场中紫草非药典品进行基原确证;针对紫草药材的ITS2序列利用Primer Premier 5软件进行引物设计;对经设计、合成的引物通过HRM实验进行筛选;建立紫草药材的RFLP-HRM鉴定方法。结果:通过对紫草药材的ITS2序列进行NJ树聚类分析和遗传距离分析,可以有效区分新疆紫草、疏花软紫草、黄花软紫草及市场上非药典来源的紫草药材(紫草非药典品);经过Primer Premier 5软件进行引物设计共选出4对引物进行合成;通过HRM实验筛选出引物Zcf-1为最佳实验引物;确立了有效鉴别紫草市场药材的RFLP-HRM方法。结论:通过DNA条形码和HRM技术均能有效鉴别紫草市场药材真伪,且结果一致,起到互相验证的作用,建立了紫草市场药材的RFLP-HRM鉴定方法,为紫草及其他中药民族药品种的快速鉴定技术提供了可以参...     

不同种丹参药材的近红外漫反射光谱模式识别法鉴别

目的：建立近红外漫反射光谱（NIRDRS）鉴别不同种丹参药材的方法。方法：对9个产地的丹参药材和同属其他9种植物，采用模式识别法中的聚类分析和判断分别方法进行定性鉴别。结果：丹参药材的NIRDRS原谱及一，二阶导数光谱较为相似，无法直观鉴别，聚类分析发珊种不同产地的丹参较同属不同种药材具有更大的NIRDRS相似性，判别分析发现，特征向量投影法映射图可以直观鉴别不同种丹参药材，结果与化学成分测定相一致。结论：该方法简便，快速，可用于同属不同种药材的鉴别。     

应用荧光复合扩增技术对河南汉族群体9个STR基因座的多态性研究

目的：调查何南汉族群体的Ｄ３Ｓ１３５８、ｖＷＡ、ＦＧＡ、Ｄ８Ｓ１１７９、Ｄ２１Ｓ１１、Ｄ１８Ｓ５１、Ｄ５Ｓ８１８、Ｄ１３Ｓ３１７、Ｄ７Ｓ８２０等９个ＳＴＲ基因座的基因频率分布,获得群体遗传学数据,研究其法医学应用。方法：用ＰＣＲ复合扩增和四色荧光自动化检测技术分析９个ＳＴＲ位点的基因型,计算各等位基因的分布频率。结果：获得９个ＳＴＲ位点在河南汉族群体中的等位基因分布频率资料,共检出９８个等位基因;家系调查,证明上述位点遗传稳定,符合孟德尔遗传规律。９个ＳＴＲ基因座总鉴别机率（ＴＤＰ）达９９．９９９９９９６％。结论：上述９个位点是较理想的遗传标记,可用于法庭科学实践中生物物证的个人识别及亲子鉴定。     

蝙蝠葛碱抑制氯化铯诱发家兔在体心脏早后除极及心律失常

研究蝙蝠葛碱对氯化铯诱发有兔在体心脏早后除极及触发性心律失常的作用。方法;采用单向动作电位记录及触发性心律失常的作用。方法：采用单向动作电位技术记录家兔在体心脏单向动作电位,用氯化铯诱发家兔心脏早后除极及触发性心律失常。结果：静脉注射氯化铯１－２ｍｍｏｌ．ｋｇ＾－１后ＭＡＰＡ降低,ＭＡＰＤ９０,ＱＲＳ和Ｒ－Ｒ间期明显延长。     

自愿呈报法与病历调查法联用对住院病人药品不良反应的调查分析

目的：探讨住院病人药物不良反应（ＡＤＲｓ）的发生率。方法：采用回顾性调查方法,结合自愿呈报ＡＤＲｓ报表方法,对１９９７年４月至１９９８年３月期间住院的１１３５４例病人进行了分析。结果：病历调查法所得到的ＡＤＲｓ数量明显多于自然呈报系统,与ＳＤＲｓ“真实”发生率较为接近;ＡＤＲｓ的临床表现以消化系统最多见;引起ＡＤＲｓ的药物分布以抗生素的样品数量多,而较为严重的ＡＤＲｓ以解热止痛药及器官移植药发生率     

薄层色谱法鉴别天花粉及其相似品的氨基酸类成分

目的采用薄层色谱法对天花粉及其相似品进行鉴别研究。方法薄层色谱展开剂为正丁醇-冰醋酸-水（8：3：1）,展开温度为6℃。结果正品天花粉在瓜氨酸和丙氨酸对照品色谱相应结果位置上显相同的紫红色斑点,大苞栝楼的根则在丙氨酸对照品色谱处无相应斑点。结论该方法简便,可作为天花粉的质控指标之一。     

中药天花粉及其类似品的鉴别研究

本文对天花粉的使用概况作了介绍。据本草考证,自古以来中药天花粉的原植物主要来源即为栝楼Trichosanthes kirilowii Maxim.,但约自南宋之后天花粉的来源有所发展,因此天花粉商品又是多来源的。据作者在21省、区的100余市、县调查,国内约有30种植物根部曾作天花粉入药(包括地区习惯用药及混淆品)。本文对较多见的17种真伪天花粉列表简介,并对其中10种主要商品或混淆品的鲜根外形、药材或干燥品性状及显微特征(包括横切面及解离组织)进行了描述比较,同时找出各种外形及组织上的鉴别特征;列表比较其间的异同点。此外我们已经对其他6种天花粉进行了鉴别研究,待拉丁学名确定后再行报道。     

中药天花粉及其类似品的鉴别研究

本文对天花粉的使用概况作了介绍。据本草考证,自古以来中药天花粉的原植物主要来源即为栝楼Trichosanthes kirilowii Maxim.,但约自南宋之后天花粉的来源有所发展,因此天花粉商品又是多来源的。 据作者在21省、区的100余市、县调查,国内约有30种植物根部曾作天花粉入药(包括地区习惯用药及混淆品)。本文对较多见的17种真伪天花粉列表简介,并对其中10种主要商品或混淆品的鲜根外形、药材或干燥品性状及显微特征(包括横切面及解离组织)进行了描述比较,同时找出各种外形及组织上的鉴别特征;列表比较其间的异同点。 此外我们已经对其他6种天花粉进行了鉴别研究,待拉丁学名确定后再行报道。     

66种HLA－DRB定型探针与56种等位基因杂交试验与分析

使用计算机模拟核酸杂交试验技术，对第十一届国际组织相容性会议提出的６６种ＨＬＡ－ＤＲＢ定型探针与１９９１年公布的５６种ＨＬＡ－ＤＲＢ等位基因杂交的特异性进行分析。实验结果揭示，使用６６种探针做ＨＬＡ－ＤＲ型别分析，可以区分绝大多数等位基因，仅有６种等位基因不能从杂交图谱区分。本研究可为国内使用ＰＣＲ－ＳＳＯＰ技术做ＨＬＡ－ＤＲ定型的工作及同行选用探针提供参考     

Artificial reconstituted pulmonary surfactant in prevention and treatment of respiratory distress syndrome in neonates

研制用于预治新生儿呼吸窘迫综合征（ＲＤＳ）的人工重组肺泡表面活性剂（ＡＰＳ）．方法：采用成膜法结合超声分散制备ＡＰＳ．脉冲气泡表面张力测定法用于评价ＡＰＳ与天然ＰＳ的表面性能．用气管滴注给药临床防治新产儿的ＲＤＳ．结果：制得ＡＰＳ粒径１０μｍ以下的在９９％以上．制剂体外可有效降低表面张力（从４４０ｍＮ／ｍ至１０ｍＮ／ｍ以下）．初步临床试验显示ＡＰＳ能有效预防ＲＤＳ发生（２０／２０）和治疗ＲＤＳ（２／２）．结论：ＡＰＳ制剂体外具有与天然ＰＳ相似的良好表面性能．     

中药材分子鉴别新方法:锚定引物扩增多态性DNA的研究

为了寻找稳定性好、可操作性强的分子鉴定新方法，在充分吸取RAPD优势的基础上，对其引物和退火温度进行了改进。本文以人参、西洋参为例进行了方法的探索和各种验证，并推广应用到天花粉以及白芷类药材的鉴别。结果显示引物Pg-q36F得到人参、西洋参及其9种伪品的多态性条带。对于人参、西洋参的鉴别结果与文献鉴别方法结果一致，并且具有更高的稳定性。引物TkS1-64F得到了天花粉及其11种伪品的多态性条带，引物AfS1-100F得到白芷及其3种伪品的多态性条带，均能准确鉴别各种药材。实验结果证明本方法具有简单易行、稳定性和重复性好、提供的信息量大等优点，是一种极具前途的中药材分子鉴定新方法，被命名为锚定引物扩增多态性DNA(anchored primer amplification polymorphism DNA，APAPD)。     

中药材蒲公英及其混淆品的DNA指纹鉴别研究

采用分子生物技术包括任意引物聚合酶链式反应（AP－PCR）和随意扩增多态性DNA（RAPD）方法扩增蒲公英及其六种土公英混淆品的基因组DNA，获得清晰可靠的DNA指纹图谱。根据琼脂糖胶上显示的DNA带型差异可鉴别蒲公英和土公英混淆品。     

Application of sequence characterized amplified region (SCAR) analysis to authenticate Panax species and their adulterants.

A 420-bp RAPD fragment from Panax quinquefolius was converted to a sequence characterized amplified region (SCAR) marker. The main difference between the SCAR of P. quinquefolius and its homolog in P. ginseng is the presence of a 25 bp insertion in the latter. Primers derived from this sequence were successfully used to authenticate six Panax species and two common adulterants.     

基于ITS序列鉴别特色民族药材土牛膝及其混伪品的研究

目的:利用DNA条形码对特色民族药材土牛膝(粗毛牛膝、野生牛膝和柳叶牛膝)及其混伪品进行分子鉴定.方法:利用DNA条形码方法,分别对土牛膝及其混伪品的ITS和MatK基因片段进行扩增并双向测序,使用Codon?Code?Aligner软件对扩增序列进行拼接,用MEGA软件对数据比对分析,并基于K2P模型进行遗传距离分析...     

小通草及其伪品的近红外一致性检验和聚类分析方法研究

目的 对小通草及其伪品（西南绣球）进行近红外分析,建立基于近红外漫反射光谱技术的快速、简便的鉴别方法。方法 采用近红外一致性检验和聚类分析方法进行分析,预处理方法为矢量归一加二阶导数、13点平滑、阈值3.6。结果 在6202.2-5199.4㎝-1、4701.8-4196.5㎝-1谱段内,小通草及其伪品一致性检验、聚类分析结果与性状鉴定结果一致,可以据此进行鉴别。结论 该方法可用于小通草与其伪品的鉴别,并对小通草的质量分析研究有一定意义。 关键词:小通草;旌节花;青荚叶;西南绣球;近红外漫反射光谱;一致性检验;聚类分析     

基于DNA条形码技术鉴定蒙药材刺柏叶及其混淆品

目的：基于DNA条形码技术鉴别蒙药材刺柏叶及其混淆品。方法：采用国际通用的条形码序列 ITS2、psbA-trnH、matK和rbcL,对刺柏叶及其混淆品圆柏叶共计11份样品进行DNA提取、扩增,采用CodonCode Aligner进行序列拼接,并用MEGA软件对拼接序列进行变异位点分析、邻接(NJ)聚类分析,并计算其平均种内、种间遗传距离。结果：4对引物的PCR扩增产物测序成功率分别为ITS2 100%、 psbA-trnH 100%、rbcL 100%、matK 0%;ITS2序列和psbA-trnH序列均可通过变异位点比较区分刺柏叶及其混淆品;NJ聚类分析的结果显示,psbA-trnH序列的NJ聚类树中刺柏叶与圆柏叶均能分别聚为一支,且psbA-trnH序列的平均种间遗传距离明显大于平均种内遗传距离。结论：psbA-trnH序列能有效区分圆柏叶与刺柏叶,可作为鉴别刺柏叶及其混淆品圆柏叶的条形码序列,为蒙药材刺柏叶及其混淆品的鉴别提供支持。     

Authentication of Panax notoginseng by 5S-rRNA spacer domain and random amplified polymorphic DNA (RAPD) analysis

The great majority of Panax species are well-known herbal medicines in the Orient, and many of them share a close resemblance in appearance and chemical composition. Among these Panax species, the root of P. notoginseng (Sanqi) is a unique herb that has distinct clinical usage. Here, the 5S-rRNA spacer domains were isolated from P. notoginseng, P. japonicus var. major, P. stipuleanatus, P. quinquefolius, P. ginseng, P. zingiberensis, and P. wangianus, and four common adulterants of P. notoginseng including Curcuma wenyujin, Curcuma longa, Bletilla striata and Gynura segetum. The spacer domains were sequenced and compared, which showed over 75 % DNA identity among all Panax species, but not for the adulterants. In addition, random amplification of polymorphic DNA (RAPD) analysis was used to distinguish different members of Panax genus as well as the morphological variants of P. notoginseng. These molecular methods could be used in the authentic identification of P. notoginseng from other Panax species.     

浙龟甲的PCR鉴别研究

目的 建立聚合酶链式反应（PCR）技术鉴别浙龟甲[来源为龟黄喉水龟Clemmys mutica（Cantor）的背甲及腹甲]真伪的方法。方法 提取浙龟甲及其混淆品的基因组DNA,从NCBI网站上检索黄喉水龟及其混淆品的线粒体基因,进行分析比对,根据黄喉水龟细胞色素b（cytochrome b gene,Cytb）基因上的特异位点应用Oligo软件设计引物,对浙龟甲及其混淆品样本进行PCR扩增。结果 所设计的引物能特异性扩增黄喉水龟,扩增片段长度为357 bp,能有效区分浙龟甲及其混淆品种。结论 建立的PCR技术鉴别浙龟甲方法,具有特异性高、方法简便快捷、实用性较强的特点,在快速准确鉴别浙龟甲方面具有良好的应用前景。     

RAPD方法在细辛类药材鉴别研究中的问题及其对策

以细辛类药材的鉴别为例,对RAPD方法在药材鉴别中所存在的问题进行了探讨,结果表明药材DNA模板浓度,降解程度及药材的产地均对RAPD产物有不同程度的影响,从而提出选择适宜的药材DNA模板浓度,筛选合适的引物和采用对照组聚类分析等方法来消除上述因素的影响,进而讨论了RAPD方法在药材鉴别上的适用范围。     

艾叶及其常见混伪品的分子鉴定

目的：对艾叶及其几种常见混伪品进行分子鉴定。方法：通过聚合酶链式反应（PCR）法直接测序,对艾及其8种混伪品进行核糖体DNA内转录间隔区片段2（ITS2）扩增并双向测序,所得序列经CodonCodeAligner拼接后,用系统发育软件MEGA4．0进行相关数据分析,同时利用邻接（NJ）法构建系统聚类树。结果：艾叶基原植物艾ITS2序列长度为225bp,种内平均Kimura．双参数（K2P）遗传距离（0．000）小于其与混伪品的种间平均K2P遗传距离（0．022）;由所构建的系统聚类树图可以看出,艾具有单系性,同时又与其他混伪品明显分开。结论：ITS2序列作为DNA条形码可以方便快捷地鉴别中药材艾叶及其混伪品,可为其质量评价及临床安全用药提供重要的分子鉴别依据。