神经干细胞移植对大鼠慢性脊髓损伤的疗效及对EphA2的影响

目的 研究神经干细胞对于慢性脊髓损伤的治疗性作用及其机制.方法 用SD大鼠100只分为假手术组(10只),轻度模型组(10只),轻度治疗组(20只),中度模型组(10只),中度治疗组(20只),重度模型组(10只)和重度治疗组(20只),治疗组均进行神经干细胞注射治疗.使用大鼠后肢运动评分进行大鼠运动功能检测,所取脊髓标本进行原位杂交分析,对脊髓肝癌细胞株受体A2(EphA2)阳性细胞率进行统计分析.结果 和假手术组相比,脊髓损伤后,不论模型组还是治疗组,大鼠的后肢运动能力均出现了显著性的下降,治疗组的恢复速度要明显快于模型组.假手术组有几乎无EphA2阳性细胞,模型组EphA2阳性细胞明显升高(P＜0.01),中度压迫组及重度压迫组较轻度压迫组升高(P＜0.05),中度压迫组及重度压迫组间差异无统计学意义(P＞0.05).治疗组EphA2阳性细胞均高于对应模型组.结论 神经干细胞移植可升高EphA2水平,尤其对重度压迫患者,有助于行为学上的恢复.     

诱发电位改变与脊髓受压程度关系的实验研究

目的 :探索脊髓电生理的改变与大鼠脊髓慢性受压程度的相关关系。方法 :切除 T9椎板后置入慢性渐进性压迫装置 ,多次渐进旋入螺钉 ,在 3个月内造成大鼠胸段脊髓不同程度的慢性渐进性压迫 ,脊髓受压程度根据椎管侵占率分为轻度 ( <30 % )、中度 ( 30 %～ 60 % )、重度压迫 ( >60 % )三组 ,定期进行 CBS、MEP和 SEP等检查。结果 :重度压迫组后肢全瘫的 5只动物 MEP和 SEP均测不到 ;中度压迫组有 2只 SEP测不到。术后 90 d,实验组 SEP和 MEP的潜伏期明显高于对照组 ( P<0 .0 5 ) ;中度损伤组、轻度损伤组和对照组SEP和 MEP均存在显著差异 ( P<0 .0 5 )。实验组动物的 CBS与 MEP和 SEP改变呈显著正相关。结论 :神经诱发电位检查可以作为反映脊髓受压损伤程度的参考指标     

蛛网膜下隙局部应用GDNF对脊髓前角运动神经元的保护作用

目的 研究周围神经损伤后经蛛网膜下隙置管局部应用外源性胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neu-rotrophic factor,GDNF)对脊髓前角运动神经元的保护作用. 方法 成年SD大鼠随机分为2组:GDNF组(坐骨神经切断术后给予GDNF)和NS组(术后给予生理盐水).切断两组大鼠左侧坐骨神经致相应脊髓前角运动神经元部分损伤,行蛛网膜下隙置管,实验组注入外源性GDNF(10 μg/ml),对照组注入同等剂量的生理盐水,于2,4,8周行坐骨神经功能指数检测;取L4-6节段脊髓标本冰冻切片,行胆碱酯酶(ChE)和酸性磷酸酶(ACP)染色并进行图像分析. 结果 GDNF组脊髓前角运动神经元ChE阳性颗粒面积比NS组有明显提高(P<0.05),ACP阳性颗粒面积低于NS组(P<0.05);GDNF组坐骨神经功能指数亦优于NS组. 结论 周围神经损伤后通过蛛网膜下隙注入外源性GDNF对相应的脊髓运动神经元有保护作用.     

SCI大鼠脊髓前角细胞自噬相关蛋白Beclin-1表达的变化

目的：：观察脊髓全横断损伤对脊髓前角细胞Beclin-1表达的影响。方法：雄性Wistar大鼠随机分为模型组和假手术组,建立大鼠第2腰髓全横断损伤模型,分别于损伤后6h、1d、3d、7d、14d、21d取3-4腰髓,采用免疫荧光染色法观察大鼠脊髓前角细胞自噬相关蛋白Beclin-1的表达情况。结果：与假手术组相比,模型组损伤后各时间点大鼠脊髓前角Beclin-1免疫阳性细胞数明显升高(P＜0.01,P＜0.05）。脊髓损伤后3d脊髓前角细胞Beclin-1免疫阳性细胞数达到高峰,21d最低。结论：Beclin-1可能参与了神经元自噬状态的改变。     

汉防己甲素对大鼠急性脊髓损伤后 bcl-2 和 bax 表达的影响

目的 观察汉防己甲素(tetrandrine,Tet)对大鼠急性脊髓损伤后bcl-2和bax表达的影响,探讨其对脊髓损伤的作用机制. 方法 成年SD大鼠100只,分为4组:假手术组10只,损伤对照组、甲基强的松龙(methylprednisolone, MP)治疗组、Tet治疗组各30只.胸8、9椎板切除后,损伤对照组,MP、Tet治疗组用加速压迫型Allen's打击法制成脊髓损伤模型,后2组动物于制模前,伤后24、48 h尾静脉分别注射MP 90 mg/kg和1% Tet 22.5 mg/kg.各组大鼠于术后8 h,1、3、7、14 d行运动功能BBB评分,取损伤段脊髓行石蜡切片HE染色,观察脊髓组织的形态结构变化,免疫组织化学染色检测细胞凋亡因子bcl-2、bax表达. 结果 伤后7、14 d MP、Tet治疗组大鼠运动功能评分显著高于损伤对照组(P<0.05),各时间点MP、Tet治疗组评分无统计学意义(P>0.05);MP、Tet治疗组脊髓组织损害较损伤对照组轻,术后8 h至14 d动态观察,3～7 d损伤表现最为严重,达到损伤高峰期;假手术组中bax、bcl-2阳性细胞数较少,MP、Tet治疗组bax阳性细胞数少于损伤对照组(P<0.05),而bcl-2阳性细胞数多于损伤对照组(P<0.05). 结论 Tet可通过增加bcl-2表达和降低bax表达来抑制急性脊髓损伤后神经细胞的凋亡,有益于脊髓组织的保护,促进运动功能的恢复.     

慢性脑缺血大鼠EphA4表达变化的研究

目的 探讨大鼠海马区及皮层EphA4表达在慢性脑缺血的不同时间点的动态变化.方法 大鼠随机分为正常组、假手术组、15 d、30 d和60 d模型组.采用双侧颈总动脉永久结扎建立慢性脑缺血模型:Morris水迷宫试验检测行为学变化:免疫组化染色检测EphA4的表达变化.结果 EphA4免疫反应阳性细胞数模型组比假手术组均增多(P<0.05>,与行为学改善基本相符.结论 慢性脑缺血造成EphA4表达持续升高可能是成年哺乳动物损伤后神经再生障碍的重要原因之一.     

胶质源性神经营养因子对脊髓损伤后前角运动神经元的保护作用

目的 :探讨胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)对脊髓损伤后运动神经元的保护作用。 方法 :大鼠分为假手术组、生理盐水 (NS)组和 GDNF组 ,改良 Allen法撞击致伤 T1 2 脊髓 ,蛛网膜下腔分别给予 NS和 GDNF,分别取不同时间的伤段脊髓进行切片 ,应用酶组织化学染色方法显示脊髓前角外侧核运动神经元中胆碱酯酶 (Ch E)和酸性磷酸酶 (ACP)活性 ,并结合计算机进行图像分析。结果 :GDNF组较 NS组 Ch E活性显著增加 ,ACP活性显著降低 ;2 1d时 NS组的 ACP及 Ch E活性均高于及低于假手术组 ;GDNF组与假手术组 Ch E和 ACP活性差别不显著。 结论 :GDNF对脊髓损伤后的前角外侧核运动神经元有一定的保护作用     

慢性渐进性压迫对大鼠行为功能及脊髓运动神经递质表达的影响

目的：观察脊髓慢性受压后实验动物的行为功能与运动神经递质表达的变化情况。方法：采用大鼠后路渐进性脊髓压迫动物模型，观察联合行为评分（CBS），常规病理及免疫组化检测胆碱乙酰转移酶（ChAT）的变化。结果：免疫组织化学染色显示，在正常大鼠脊髓前角运动神经元及大小神经元ChAT均表达阳性，脊髓损伤后ChAT阳性细胞数减少，CBS升高，二者具有相关关系。结论：脊髓受压抑制大鼠脊髓神经元合成ChAT，从而影响实验动物的行为功能。     

臂丛神经根损伤后aFGF基因在脊髓运动神经元的表达

目的：研究大鼠臂丛神经根损伤后酸性成纤维细胞生长因子（aFGF)在脊髓前角运动神经元的表达及表达的保护作用。方法：选用120只健康成年SD系大鼠，随机分为脊髓神经根损伤组、假手术组和正常对照组，每组再设1h组、6h组、24h组、48h组，实验组造成臂丛神经损伤，取大鼠脊髓标本，然后应用免疫组化技术（LSAB）染色，观察aFGF基因在脊髓前角运动神经元的表达。结果：在脊髓神经根损伤后的手术后不同时间组中，损伤脊髓神经元表达不同。在损伤1h表达高峰，持续至伤后6h，在脊髓神经损伤24h后恢复正常。在假手术组和正常对照组的手术后不同时间组中，表达结果无差异。结论：神经元损伤后，脊髓运动神经元aFGF基因表达增加，提示这与脊髓运动神经元修复机制有关，尤其是早期修复过程中aFGF基因表达增加具有很重要的抗损伤保护作用。     

大鼠脊髓损伤后不同时期轴突导向因子slit-2 mRNA表达及形态学变化

目的:研究脊髓损伤后轴突导向因子slit-2的表达变化,同时观察大鼠行为学及脊髓形态学的变化特点.方法:40只成年SD大鼠随机分为正常组,假手术组和手术1、3、7、14、21、28天组,制作脊髓右侧半横断损伤模型,BBB法进行右下肢功能评分,HE染色观察损伤脊髓不同时期的形态学变化,原位杂交法观察slit-2 mRNA的表达变化,计算阳性细胞灰度值,并进行统计学分析.结果:大鼠脊髓损伤后,肢体瘫痪从第7天开始明显恢复直至第28天;形态学显示了从局部血肿形成,到周围炎性细胞浸润再到损伤位点远端和近端的脊髓组织逐渐发生空泡变性的过程;原位杂交结果为正常组和假手术组脊髓前角运动细胞slit-2 mRNA的表达较低,脊髓损伤后第3天,损伤位点近端前角运动神经元中slit-2 mRNA的表达明显增加,第7天与第14天前角运动神经元中slit-2 mRNA的表达较前一时间组明显下降,并持续表达至28天,各组较假手术组表达明显增高,同时,第7天组损伤位点周围反应性增生的细胞中slit-2 mRNA的表达明显上升.结论:成年哺乳动物脊髓损伤是一个动态变化的复杂过程,轴突导向因子slit-2可能通过介导炎性细胞的迁移及与炎性细胞分泌的若干介质和因子相互作用排斥新生轴突的生长,阻止其穿过损伤部位与远端重建突触联系;损伤切口周围反应性增生的细胞中slit-2 mRNA的表达上升提示了其可能参与损伤后的胶质瘢痕及抑制性微分子环境的形成.     

大鼠脊髓损伤后局部线粒体呼吸功能的变化

目的:探讨甲基强的松龙对大鼠脊髓损伤后局部线粒体呼吸功能的影响。方法:54只SD大鼠,随机分组为:假手术(对照组)、脊髓损伤(SCI组)和甲基强的松龙治疗(MP组),每组又分为处理后6h、12h、24h三个时相组,每组6只,采用Allen's打击法造成脊髓损伤模型,在各时相提取伤段脊髓线粒体,测定线粒体呼吸Ⅲ态(R3)、Ⅳ态(R4)、呼吸控制率(RCR)、磷氧比(P/O)。结果:SCI组在伤后6h、12h和24h的R3、RCR和P/O显著低于对照组,R4显著高于对照组,有统计学意义(P<0.01);MP组伤后6h和12hR3、RCR和P/O高于SCI组,R4低于SCI组,有统计学意义(P<0.01);MP组R3、R4和RCR在6h和12h时相与对照组之间无明显差异,24h时相R3、RCR和P/O低于正常对照组,有显著差异(P<0.05)。结论:脊髓损伤后局部线粒体呼吸功能明显受到影响,线粒体内膜通透性增加,线粒体氧化磷酸化的偶联程度明显受到抑制。早期使用甲基强的松龙可明显改善线粒体的呼吸功能,保护伤段脊髓线粒体的稳定性。     

胚胎脊髓移植对脊髓内源性NGF影响的实验观察

目的：观察胚胎脊髓移植后，脊髓内源性神经生长因子（ＮＧＦ）ｍＲＮＡ的表达及ＮＧＦ多肽的合成。方法：采用分子生物学和免疫组化方法。结果：胚胎脊髓移植可以促进和在一定时间内增加损伤脊髓内ＮＧＦ ｍＲＮＡ的表达和ＮＧＦ多肽的合成；胚胎脊髓植入后早期能在宿主脊髓内表达和合成ＮＧＦ；损伤和移植条件下，ＮＧＦｍＲＮＡ的表达与合成主要在脊髓前角神经元。结论：内源性ＮＧＦ在移植后的损伤脊髓中可能对再生轴突起重要地     

大黄对大鼠脊髓损伤后血-脊髓屏障的保护作用

目的 观察不同浓度大黄对大鼠脊髓损伤(SCI)后血-脊髓屏障(BSCB)的影响,筛选大黄煎药灌服的最佳浓度,拟为临床治疗SCI提供一定的依据.方法 成年健康SD大鼠125只,随机分为假手术组(Sham组)、模型组及大黄低、中、高剂量组.大黄各剂量组用大黄水溶液灌胃,其余两组用等量生理盐水.记录大鼠SCI后双后肢运动功能(BBB)评分、脊髓含水量以及荧光显微镜观察注入伊文思蓝(EB)后的BSCB情况.结果 (1)BBB评分:模型组和大黄低、中、高剂量组与Sham组比较差异均有统计学意义(P<0.05).(2)脊髓含水量的测定:模型组和大黄低、中、高剂量组与Sham组比较差异均有统计学意义(P<0.05).(3)荧光显微镜下观察到Sham组没有EB染出,模型组EB大量染出,以3 d时染出最多,大黄各剂量组EB染出较模型组有不同程度减少,以大黄中剂量组EB染出最少.结论 中剂量组大黄有效地降低了大鼠SCI后BSCB的通透性,对其保护作用最为明显.     

脊髓的发育与脊髓畸变及脊髓损伤

脊髓畸变和脊髓损伤是中枢系统常见病变,它们与脊髓的发生发育关系密切。本文试图对它们的关系进行探讨,为脊髓畸变和脊髓损伤的诊治提供依据。     

吴茱萸碱刺激的负载脊髓匀浆蛋白DCs促进小鼠脊髓损伤的修复

目的探讨吴茱萸碱(evodiamine,EVO)刺激的负载脊髓匀浆蛋白(homogenate protein of spinal cord,hp)树突状细胞(hpDCevo)对小鼠脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)的促修复作用及其机制。方法SCI后24 h给予治疗,随机分6组:分别腹腔注射PBS、EVO、未成熟DC(DCs)、经EVO刺激的DCs(DCevo)、负载hp的DC(hpDC)、hpDCevo。利用BMS功能评分及组织病理学方法,观察hpDCevo对小鼠脊髓损伤神经功能恢复和局部瘢痕等病理学改变的影响。ELISA法测定SCI损伤局部组织和T细胞培养上清中的脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)、神经营养因子-3(Neurotrophin-3,NT-3)、白介素-12(interleukin-12,IL-12)、粒-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colonystimulating factor,GM-CSF)的含量。结果注射后第84天,hpDCevo组BMS评分明显高于hpDC组和其...     

大鼠脊髓半横断损伤后硫酸软骨素蛋白多糖Aggrecan的变化

目的观察硫酸软骨素蛋白多糖Aggrecan在大鼠脊髓半横断损伤(HSCI)后的表达变化。方法 20只成年SD大鼠随机分为假手术对照组和HSCI 3、7和14 d组,建立成年大鼠HSCI(胸9～10)模型;取损伤位点头尾段胸9、胸10节段制作石蜡切片,用免疫组织化学ABC法和图像分析技术检测脊髓内Aggrecan的表达。结果 Aggrecan阳性产物主要分布于细胞外基质中,神经元和神经胶质细胞中也有分布;损伤后脊髓内Aggrecan表达较对照组明显增加。结论 HSCI后Aggrecan表达明显增加,可能参与损伤后轴突生长被抑制这一过程。     

脊髓伤后脊髓组织一氧化氮合酶活性的动态变化及其意义

目的探讨脊髓损伤后早期伤段脊髓组织一氧化氮合酶（NOS）活性的动态变化规律。方法通过伤段脊髓组织催化［3H］标记的精氨酸转化生成［3H］标记的瓜氨酸的量,测定脊髓压迫伤后0～60min伤段脊髓组织NOS的活性。结果脊髓压迫伤后,NOS活性明显增加,伤后5min达最高点;然后又迅速下降．于伤后1h恢复至正常水平。结论在脊髓伤后1h内,伤段脊髓组织NOS活性迅速而短暂升高。