兔局灶性脑缺血模型研究

在局灶性脑缺血模型研究中，人们相继制作了灵长类、狗、猫、鼠等多种动物的局灶性脑缺血模型，但这些动物有的价格昂贵，有的太小，使研究工作受到一定限制。兔作为实验动物日渐受到重视，因其具有如下优点：（１）兔性情温驯，易于饲养，便于操作。其体重相对较大，复杂...     

在急性局灶性脑缺血早期VEGF、FLT-1、FLK-1 mRNA的表达及作用研究

目的 检测血管内皮生长因子（VEGF）及其受体（FLT-1，FLK-1）mRNA在急性局灶性脑缺血中的表达，并探讨血管内皮生长因子在急性局灶性脑缺血中的作用。方法 建立SD大鼠永久大脑中动脉闭塞（MCAO）模型。应用原位杂交技术检测血管内皮生长因子及其受体基因在局灶性脑缺血后不同时间点的表达。结果 原位杂交显示VEGF及FLT-1，FLK-1mRNA在局灶性脑缺血后3h即开始表达增强。VEGFmRNA和FLT-1，FLK-1mRNA于48h达高峰，后VEGFmRNA逐渐下降。至14d恢复到对照水平。而FLT-1，FLK-1mRNA在达高峰后，下降更加缓慢，约在21d时达对照水平，VEGFmRNA主要在缺血半影区神经元表达，同时在胶质细胞和血管内皮细胞表达，而FLT-1，FLK-1mRNA主要在缺血周边血管内皮细胞表达，但也在神经元表达。在缺血后48h半影区周边出现血管增生。并逐渐向中心区延伸，于缺血后7d达高峰，整个半影区可见明显敌国管增生。结论 急性半影区周边出现血管增生，并逐渐向中心区延伸，于缺血后7d达高峰，整个半影区可见明显血管增生。结论 急性局灶性脑缺血早期VEGFmRNA及FLT-1，FLK-1mRNA在神经细胞。胶质细胞，血管内皮细胞均有表达，可促进缺血半影区的血管增生。对改善急性局灶性脑缺血早期缺血半影区血供有重要作用。     

局灶性脑缺血大鼠脑内Angiogenin表达水平的变化

目的　脑梗死患者存活时间与脑内血管增生程度相关。血管生长素 ( angiogenin)具有促血管生成作用。本研究旨在观察大鼠脑缺血后血管生长素在脑内表达水平的变化。方法　大鼠大脑中动脉栓塞法 ( MCAO法 )制作局灶性脑缺血模型 ,脑切片免疫组织化学染色检测血管生长素蛋白表达。结果　血管生长素在正常大鼠脑中普遍弱阳性表达 ,脑膜、室管膜及血管染色较为明显。脑缺血后 6 h缺血脑区血管生长素表达水平明显增强 ( P<0 .0 1) ,缺血 2 4 h内血管生长素表达水平逐渐升高。结论　脑缺血可诱导缺血脑区血管生长素蛋白表达增强     

实验性局灶性脑缺血再灌注动物模型的改进及评价

参照Ｋｏｉｚｕｍｉ和Ｌｏｎｇａ腔内线栓法制作大鼠大脑中动脉阻断（ＭＣＡＯ）模型，并予以改进：（１）根据大鼠头颈部血管铸型标本测得颈内动脉（ＩＣＡ）、大脑前动脉（ＡＣＡ）、大脑中动脉（ＭＣＡ）的内径和颈总动脉（ＣＣＡ）分叉部至ＭＣＡ起始部的距离，选择３－０单尼龙线（直径０．２０～０．２４９ｍｍ）代替Ｋｏｉｚｕｍｉ法覆以硅胶的４－０单尼龙线（直径０．１５～０．１９ｍｍ）及Ｌｏｎｇａ法单４－０尼龙线，插入深度１８．５±０．５ｍｍ。（２）仅在线栓进入时暂时夹闭翼腭动脉（ＰＰＡ），并不结扎，以防止ＩＣＡ内血栓形成，致再灌注时血流受阻。该模型成功率高达９２％，稳定性强，是较理想的实验性局灶性脑缺血模型。本文阐述了制作方法及应用评价。     

TNF-α在实验性局灶性脑缺血中的表达

目的 探讨肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）在局灶脑损伤中因损伤中神经元的表达机制。方法 本研究应用逆转录一多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法检测大鼠局灶脑缺血模型中ＴＮＦ－ａｍＲＮＡ的表达。结果 实验发现缺血以皮层为主的ＴＮＦａｍＲＮＡ表达 时间变化。缺血１小时即可观察到ＴＮＦ－ａｍＲＮＡ的表达,３小时至５天明显增加,１２小时表达高峰。我们还观察到缺血区中心以底节为主的白质神经纤维、纹 本及海马中存在     

大鼠局灶脑缺血中心区与边缘区VEGF表达及mRNA变化

目的 探讨VEGF、VEGFmRNA在局灶脑缺血中心区和边缘区的表达和动态变化。方法 SD大鼠54只。根据缺血时间和再灌时间分为9组，采用线栓并环扎的方法建立局灶脑缺血再灌模型。LSAB法免疫组化染色观察VEGF免疫阳性表达。RT—PCR法检测VEGFmRNA动态变化。结果 在缺血3～6h，缺血中心区与边缘区VEGF免疫阳性反应达高峰，VEGFmRNA转录水平明显升高，两者24h基本降至正常水平。结论 VEGF在缺血早期的高表达可能与神经细胞和内皮细胞的自身保护作用有关。     

血管内尼龙线栓塞大鼠大脑中动脉局灶性脑缺血模型的改进

目的 确立更规范统一的制作大鼠局灶性脑缺血模型方法，使脑梗死体积更加稳定。方法 对24只大鼠使用液态硅胶涂层尼龙线栓塞大脑中动脉，分别缺血l，2，6和24h后再灌注24h，监测缺血侧局部脑血流，测定脑梗死体积及脑水肿程度。结果 缺血后所有大鼠局部脑血流均降到缺血前基值的25％以下，TTC染色显示所有动物在缺血侧皮质和尾状核均有明显的梗死灶和缺血，缺血1h组梗死体积与缺血2h以上组有显性差异，缺血2h以上各组之间梗死体积无显性差异；各组脑水肿程度无显性差异。结论 应用硅胶涂层尼龙线结合局部脑血流监测，缺血2h以上同时予以血流监测，可制作梗死体积稳定的大鼠局灶性脑缺血模型。     

MRI评价改进的大鼠可逆性局灶性脑缺血模型

目的：通过ＭＲＩ来评价改进的线栓法大鼠可逆性大脑中动脉闭塞的局灶性脑缺血模型。方法：对栓线的制备及手术的操作进行改变,头端涂有石蜡的尼龙线作为栓线,从颈总动脉插入颈内动脉,阻塞ＭＣＡ,造成避灶性脑缺血。ＭＲＩ对缺血后的大鼠作间歇扫描,再灌注后作增强ＭＲＩ。     

大鼠局灶性脑缺血后脑内HO-2蛋白的表达

目的 :研究局灶性脑缺血时脑内血红素氧合酶 2 (HO 2 )的表达。方法 :在大鼠大脑中动脉阻塞致脑缺血的不同时间点应用免疫组化、病理学及图像分析检测HO 2的表达。结果 :正常大鼠及实验大鼠的梗死侧与非梗死侧皮质、丘脑基底节区和海马齿状回均有HO 2阳性神经元。梗死灶内无表达。梗死后各时间段 ,HO 2阳性神经元的数量无明显变化 (P >0 0 5) ,而图像分析显示1 2～ 2 4h时达最高峰 (P <0 0 1 )。结论 :脑缺血时脑内神经元有HO 2蛋白阳性表达 ,其对脑保护作用的机制有待进一步研究     

栓线法大鼠局灶性脑缺血模型的研究

采用颈部旁侧手术入路，结扎右侧颈总动脉、颈外动脉及其分支后颈内动脉栓线法制作大鼠大脑中动脉闭塞再灌流损伤模型。闭塞成功率９４．１％，动物偏瘫症状评分在缺血２ｈ再灌流３ｄ后趋于稳定，病理改变以尾壳核损害最重。再灌流７ｄ脑梗塞体积为９７．８±９．４ｍｍ３，动物死亡率５９．４％。缺血２ｈ后再灌流先出现过渡灌注，而后呈持续性低灌注。本文模型勿需开颅，缺血效果可靠，对局灶性脑缺血的研究具有实用价值。     

经鼻给予VEGF治疗脑缺血/再灌注大鼠的量效关系

目的探讨经鼻给予血管内皮生长因子(VEGF)治疗脑缺血/再灌注损伤大鼠的量效关系。方法48只SD大鼠随机分为四组:低剂量组(100μg/mL)、中剂量组(200μg/mL)、高剂量组(500μg/mL)及盐水对照组(n=12)。通过阻塞大脑中动脉制作大鼠局灶性脑缺血90 m in再灌注损伤模型。缺血后1d、7d和14 d行神经功能评价,14 d动物被麻醉,行组织学检查,应用图像分析系统计算梗死体积、评价血管形成。结果与对照组相比,经鼻给予中剂量VEGF,可明显降低梗死体积,改善神经功能(P<0.01);而低和高剂量组对比于对照组,不能降低脑缺血后大鼠脑梗死体积和改善神经功能(P>0.05)。与对照组相比,经鼻给予中和高剂量VEGF,可增加缺血后脑表面血管形成(P<0.01);而低剂量组对比于对照组,不能促进脑缺血后血管生成(P>0.05)。结论经鼻给予中剂量VEGF可有效降低脑缺血/再灌注损伤大鼠梗死体积,改善神经功能,增加血管密度。因此经鼻给予中等剂量(200μg/mL)VEGF是治疗脑缺血/再灌注损伤的最佳剂量,其可用于进一步评价VEGF作用的有效实验剂量。     

大鼠急性脑梗死静脉溶栓后脑内VEGF的表达变化

目的研究大鼠急性脑梗死静脉溶栓后早期脑内血管内皮细胞生长因子（VEGF）的表达变化。方法用80只SD大鼠建立大鼠自体血栓脑梗死模型,按随机数字表法随机分为溶栓组（n=40）和对照组（n=40）。造模成功后2 h,溶栓组给予静脉注射重组组织型纤溶酶原激活剂处理,对照组给予等体积生理盐水。脑梗死后6、9、12、24、30 h采用Western Bloting方法测定缺血半暗带脑组织中VEGF表达。结果溶栓组和对照组VEGF表达水平在脑梗死后不同时间点均显著升高（P〈0.05）,脑梗死后24 h达高峰;而且,除脑梗死后9 h之外,溶栓组在脑梗死后其它时间点VEGF表达水平均显著高于对照组（P〈0.05）。结论大鼠自体血栓脑梗死后静脉溶栓治疗有促进缺血半暗带脑组织VEGF表达的趋势。     

丁苯酞对实验性大鼠脑心缺血的保护作用

目的研究丁苯酞(NBP)对脑心缺血损伤模型大鼠的保护作用。方法取大鼠分别建立脑梗死和心肌梗死模型,将两种模型大鼠分别分为假手术(0.9%氯化钠注射液)组、模型(0.9%氯化钠注射液)组和NBP低、高剂量(20~40mg·kg~(-1))组。通过脑梗死面积和神经功能评分评价NBP的脑保护功能;通过心肌梗死面积和左室射血分数(LVEF)评价NBP的心脏保护功能。应用ELISA的方法检测大鼠血清中血管内皮生长因子(VEGF)的含量。结果与模型组比较,NBP低、高剂量组大鼠脑梗死面积明显减小,神经功能评分均明显减少(P0.05),心肌梗死的面积也减小,左室射血分数(LVEF)增加(P0.05)。血清中VEGF水平在NBP低、高剂量组较模型组均明显升高(P0.05)。结论 NBP对大鼠的脑心缺血具有改善作用,可能与上调VEGF有关。     

人参皂苷F组对急性脑缺血大鼠细胞凋亡及VEGF表达的影响

目的研究F组人参皂苷对急性脑缺血大鼠脑细胞凋亡及VEGF表达的影响。方法参照ZeaLonga线栓法制作右侧大脑中动脉栓塞模型。选用健康雄性Wistar大鼠70只,随机分为5组:假手术组、盐水对照组、小剂量给药组、中剂量给药组、大剂量给药组。给药组分别于术前30m in及术后30m in、3h给予不同剂量的F组人参皂苷腹腔内注射。应用TTC染色及图像分析系统测定脑缺血24h后的梗死体积、TUNEL染色观察各组间细胞凋亡的差异及免疫组化染色检测VEGF表达的变化。结果与盐水对照组相比,药物干预组局部脑缺血后在相同时间内梗死灶体积减小(P<0.05);神经细胞凋亡减少(P<0.05),且随剂量的增加凋亡细胞减少更加明显(P<0.01);VEGF表达明显增加(P<0.01),且在实验剂量范围内其表达随药物剂量的增加而增多(P<0.01)。结论F组人参皂苷对脑缺血损伤具有保护作用,其机制为减少细胞凋亡及增加VEGF表达。     

丰富环境对脑梗死大鼠缺血侧海马区血管内皮生长因子受体的影响

目的 研究丰富环境对大鼠局灶性脑梗死后缺血侧海马区血管内皮生长因子(VEGF)受体的影响.方法 采用开颅电凝法制作SD大鼠右侧大脑中动脉缺血(MCAO)模型.术后24h随机分为丰富环境(EE)组和标准环境(SE)组.以免疫组织化学法检测缺血侧海马区VEGF受体Flt-1及Flk-1的表达.结果 大鼠大脑中动脉闭塞后,Flt-1和Flk-1在缺血侧海马区表达明显增加,经丰富环境干预后,Flt-1和Flk-1表达大量增加,与SE组相比有显著性意义.结论 丰富环境可促使海马区VEGF受体表达上调.进而促进该区微血管新生,有利于脑损伤修复.

Abstract：

Objective To evaluate the effect of enriched environment on vascular endothelial growth factor receptor (VEGFR)expression in hippocampus of rats after unilateral local cerebral infarction.Methods The,4sat middle cerebral artery occlusion (MCAO)wag performed with electric coagulation in SD rata,then the animals were randomly divided into a enriched environment stimulation group(EE group)and a control group(standard environment stimulation group,SE group).The expression of VEGFR-1(Flt-1)and VEGFR-2(Flk-1)in hippocampus gone of brain infarction were measured at 1,3,7,14,28d after operation.Results After MCAO operation,the expression of Flt-1 and Flk-1 in hippocampus of rats in EE group was significantly hisher than that in SE group at all time points.Conclusions Enriched environment stimulation can increase the expression of VEGFR in hippocampus of rats.It can promote the blood vessel proliferation and reeovery in hippocampus of rats after unilateral local cerebral infarction.     

VEGF和诱导型一氧化氮合酶在脑AVM中的表达

目的研究诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和血管内皮生长因子(VEGF)在脑动静脉畸形(AVM)中的表达;探讨一氧化氮(NO)在脑AVM发生发展中的作用。方法应用免疫组化的方法对36例脑AVM及其周围脑组织,8例正常脑血管及脑组织中的VEGF、iNOS的表达进行检测,并采用医学图像分析系统对其进行图像分析。结果①在脑AVM及其周围脑组织标本中VEGF、iNOS均呈阳性表达,与其在正常脑血管标本及脑组织中的低表达相比相差显著(P<0.01)。②VEGF和iNOS在脑AVM中表达呈正相关(P<0.01)。结论NO在VEGF介导的血管生成中起作用,iNOS可能和VEGF一起参与了AVM的发生、发展。     

VEGF对缺血脑组织微血管再生作用的实验研究

目的 本文讨论外源性VEGF对兔局灶脑缺血后缺血脑组织血管再生的作用。方法缺血后1hVEGF(165)右侧侧脑室注射(0.5μg／kg体重)，CD34免疫组化测脑组织微血管密度(MVD)，脑组织含水率评价脑水肿情况。结果 缺血5d后，VEGF组MVD明显高于对照组，脑组织含水率则对照组高于VEGF组。结论 VEGF可能有直接的促进缺血脑组织血管再生作用。     

VEGF和Ang-1在急性脑缺血中的实验研究进展

动物实验和临床患者的研究均表明,急性脑缺血能诱导缺血区血管保护性增生,新生血管能够增加缺血半暗区氧气和营养物质的供应,因此急性脑缺血的治疗性血管增生是很有前景的治疗方法[1,2].     

不同注射VEGF途径对局灶性脑缺血再灌注大鼠侧支循环形成的影响

目的 探讨鞘内注射、静脉注射与颅内注射3种不同的血管内皮生长因子(VEGF)给药途径对局灶性脑缺血再灌注大鼠侧支循环形成的影响. 方法 健康雄性SD大鼠60只采用随机数字表法分为鞘内注射组、颅内注射组、静脉注射组、手术组和假手术组,每组12只.前4组大鼠采用改进的线栓法制作局灶性脑缺血再灌注损伤模型,其中前3组大鼠造模后即刻、24 h、48 h分别于鞘内、颅内、静脉注射10 ng VEGF.造模后12h、3d对大鼠进行神经功能评分,模型后3、7、14d免疫组化染色检测各组大鼠脑梗死半影区血管内皮细胞VEGF及F8因子的表达. 结果 免疫组化染色显示鞘内注射组、颅内注射组、静脉注射组、手术组大鼠脑梗死半影区VEGF在再灌注后3d、7d、14d依次增多,差异有统计学意义(P＜0.05);造模后3、7、14d鞘内注射组、颅内注射组大鼠血管内皮细胞VEGF表达水平高于静脉注射组、手术组,而静脉注射组高于手术组,差异均有统计学意义(P＜0.05).鞘内注射组、颅内注射组、静脉注射、手术组大鼠梗死半影区F8因子在再灌注后3d、7d、14d依次增多,差异有统计学意义(P＜0.05);造模后3d、7d鞘内注射、颅内注射组、静脉注射组、手术组大鼠脑梗死半影区F8因子的表达差异无统计学意义(P＞0.05);造模后14d鞘内注射组、颅内注射组大鼠F8因子的表达高于静脉注射组、手术组,而静脉注射组高于手术组,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 3种不同VEGF给药途径都可以促进局灶性脑缺血再灌注大鼠侧支循环形成,但鞘内注射与颅内注射这两种途径的干预效果优于静脉注射.