人羊膜上皮细胞原代培养及肝细胞特异性蛋白的表达

目的 完善人羊膜上皮细胞(AECs)的原代培养技术,检测肝细胞特异性蛋白在AECs中的表达.方法采用胶原酶胰蛋白酶联合消化法分离获取AECs并进行原代培养.分别向培养液中添加10、20、40 ng/mL表皮生长因子(EGF)和10 ng/mL的碱性成纤维细胞生长因子(bFGF),倒置显微镜观察细胞生长和增殖情况,从中选择最适宜AECs原代培养的细胞培养液.以培养液中未添加生长因子的原代培养细胞作为对照.将羊膜组织石蜡切片和AECs细胞爬片进行免疫组化染色,检测4种肝细胞特异性蛋白的表达,分别为白蛋白(Alb)、细胞角蛋白-18 (CK-18)、α-1-抗胰蛋白酶(AAT)和α-1-甲胎蛋白(AFP).结果 经胶原酶-胰蛋白酶联合消化法获得大量较纯的AECs,间杂少数间充质细胞.当细胞培养液中添加10 ng/mL EGF时,AECs生长和增殖速度显著加快,故最终选择添加10 ng/mL EGF配制细胞培养液.免疫化学染色显示,羊膜组织和体外传代培养的AECs中均有Alb、CK-18、AAT和AFP表达.结论 胶原酶-胰蛋白酶联合消化及培养液中添加10 ng/mL的EGF是AECs较为适宜的原代培养方法.人羊膜组织及体外培养AECs能表达肝细胞特异性蛋白,提示AECs具有肝细胞的部分生物学特性.     

人羊膜上皮细胞原代培养及肝细胞特异性蛋白的表达

目的 完善人羊膜上皮细胞(AECs)的原代培养技术,检测肝细胞特异性蛋白在AECs中的表达.方法采用胶原酶胰蛋白酶联合消化法分离获取AECs并进行原代培养.分别向培养液中添加10、20、40 ng/mL表皮生长因子(EGF)和10 ng/mL的碱性成纤维细胞生长因子(bFGF),倒置显微镜观察细胞生长和增殖情况,从中选择最适宜AECs原代培养的细胞培养液.以培养液中未添加生长因子的原代培养细胞作为对照.将羊膜组织石蜡切片和AECs细胞爬片进行免疫组化染色,检测4种肝细胞特异性蛋白的表达,分别为白蛋白(Alb)、细胞角蛋白-18 (CK-18)、α-1-抗胰蛋白酶(AAT)和α-1-甲胎蛋白(AFP).结果 经胶原酶-胰蛋白酶联合消化法获得大量较纯的AECs,间杂少数间充质细胞.当细胞培养液中添加10 ng/mL EGF时,AECs生长和增殖速度显著加快,故最终选择添加10 ng/mL EGF配制细胞培养液.免疫化学染色显示,羊膜组织和体外传代培养的AECs中均有Alb、CK-18、AAT和AFP表达.结论 胶原酶-胰蛋白酶联合消化及培养液中添加10 ng/mL的EGF是AECs较为适宜的原代培养方法.人羊膜组织及体外培养AECs能表达肝细胞特异性蛋白,提示AECs具有肝细胞的部分生物学特性.     

内皮素-1对原代培养的大鼠肾上腺皮质细胞增殖与分泌的影响

目的：探讨内皮素（ET）-1对原代培养的大鼠肾上腺皮质细胞增殖与分泌的影响,以期优化肾上腺皮质细胞体外培养方案,为肾上腺细胞移植提供最适宜的条件。方法：原代培养大鼠肾上腺皮质细胞,培养液中含不同浓度（10-6-15mol／L）ET-I,以MTT法检测细胞增殖;细胞爬片免疫组化检测各组细胞增殖因子（PCNA）阳性率;放射免疫法检测各组培养液中皮质酮浓度。结果：ET-1浓度为10-10-11mol／L时,MTT法吸光度值、PCNA阳性率、皮质酮浓度均高于对照组（P〈0．05）。结论：10-10-11mol／LET-1可有效促进大鼠皮质细胞的增殖及分泌功能,增加细胞活力,利于肾上腺细胞移植的进行。     

流式细胞仪快速优化大鼠原代培养肝细胞基因转染

【目的】用流式细胞仪(FCM)快速检测外源性血管内皮生长因子基因(VEGF基因)在大鼠原代培养肝细胞转染表达，根据结果优化其转染表达条件。【方法】以加强型黄色荧光素蛋白(EYFP)为标记，用FCM快速检测重组质粒pIRES-EYFP／VEGF121在大鼠原代培养肝细胞中转染表达，根据结果优化pIRES-EYFP／VEGF121转染表达条件。【结果】pIRES-EYFP／VEGF121得以成功构建，并转染大鼠原代培养肝细胞；优化的转染表达条件：在细胞数密度O．1xl0^6／mL，质粒孵育时间30min，质粒与脂质体混合物孵育时间15min，质粒与脂质体比例为1：1O，转染时间2h，NAIR-1作转染培养液时，转染效率达17．5％。【结论】以EYFP为标记，FCM可简便快捷地检测并优化外源性VEGF基因在大鼠原代培养肝细胞转染表达，可为研究VEGF基因修饰大鼠原代培养肝细胞移植和肝基因治疗打基础。     

胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞分离、原代培养与鉴定

 【目的】探讨胎鼠肺泡Ⅱ型细胞原代培养及鉴定方法，建立肺泡Ⅱ型细胞培养模型，为体外研究肺泡Ⅱ型细胞及胎儿肺发育提供实验手段。【方法】采用低浓度胰酶消化20d胎鼠肺组织，经差速离心和特异性免疫吸附后，分离、纯化胎鼠肺泡Ⅱ型细胞，进行原代培养；根据细胞生长特点、形态特征、细胞表型和肺表面活性特异蛋白A的分泌，用免疫细胞化学染色、透射电镜及酶联免疫吸附法对分离的细胞进行形态学和功能鉴定。【结果】原代培养的肺Ⅱ型细胞12h开始贴壁，外观呈多边形，岛状生长。培养的24～48h，细胞连接成单层，胞浆内颗粒明显，培养的6～7d细胞内颗粒大量减少；免疫细胞化学鉴定细胞肺表面活性特异蛋白A（surfactant pmtein A，SP-A）染色阳性，透射电镜可见观察到细胞内板层小体，培养液中SP-A含量随培养时间延长逐渐增多，于培养36h达峰值，为80ng／mL；细胞纯度达（92±2）％，产量为（18．6±7）×10^6。【结论】差速离心和免疫黏附法是一种高效的分离和纯化胎肺Ⅱ型细胞的方法，所得细胞产量大、纯度高，可以用于体外研究肺泡Ⅱ型细胞和晚期胎肺发育的研究.     

hCG调节原代培养小鼠睾丸Leydig细胞Atrn mRNA和Atrn蛋白的表达及与睾酮分泌的相关性

目的探讨hCG刺激的Leydig细胞睾酮分泌与Atrn mRNA和Atrn蛋白表达的关系。方法将原代培养的Leydig细胞分为5组,分别在培养液中加入0、0．1、1、10、100ng／mLhCG,培养24h后吸取培养液用于测定睾酮分泌量。同时提取细胞mRNA和总蛋白,用实时定量RT—PCR和Westernblot方法分别检测Leydig细胞中AtrnmRNA和Atrn蛋白表达量。结果刺激24h后,与0ng／mLhCG剂量组相比较,0．1,1,10,100ng／mLhCG剂量组睾酮生成量都明显增加,统计学差异较大（P〈0．01）。Leydig细胞AtrnmRNA表达量增加（0．1ng／mLhCG组P〈0．05,其余剂量组P〈0．01）。睾酮生成量与Atrn蛋白表达量（r=0．987,P〈0．01）和AtrnmRNA表达量（r=0．982,P〈0．01）呈正相关。结论原代培养的Leydig细胞在hCG刺激下,睾酮生成量、AtrnmRNA和Atm蛋白表达量都呈现hCG剂量依赖性的增加。     

体外培养及成纤维细胞生长因子对骨髓基质细胞生长的 …

目的 研究体外培养及成纤维细胞生长因子对骨髓基质细胞生长的影响。方法 抽取兔骨髓基质细胞体外培养,倒置显微镜动态观察,从原代培养（Ｐ０）中观察到细胞集落的形态有明显差异,提示骨髓基质细胞是一个由多样细胞组成的混合体。在培养液中加入碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ,５ｎｇ／ｍｌ）。结果 第一代细胞（Ｐ１）的生长速度增至对照组的１．５倍。而未经ｂＦＧＦ处理的细胞活跃增殖能力只能保持４～５代,随后即发生     

成人视网膜前体细胞的体外分离培养和鉴定

 【目的】对成人视网膜前体细胞进行体外分离、培养和鉴定。【方法】成人眼球12只，“机械分离联合酶消化法”分离出睫状上皮层的色素性细胞。10ng／mL碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）＋10ng／mL表皮生长因子（EGF）的无血清DMEM／F12培养液中培养，并从三方面鉴定其神经干细胞特性：A．免疫荧光染色检测神经干细胞特异性抗原神经巢蛋白Nestin的表达；B．自我更新能力：原代神经球消化传代后，继续培养观察新神经球的形成；C．多向分化潜能：原代细胞培养4～5d，改用含10mL／L胎牛血清的DMEM/F12培养液。继续培养7～10d，分别用抗神经丝蛋白（NF）抗体、抗微管相关蛋白-2（MAP2）抗体、抗胶质纤维酸性蛋白（GFAP）抗体、抗视紫质蛋白抗体、抗β-微管蛋白抗体以及抗无长突细胞特异性抗体作免疫荧光细胞染色。【结果】0．48％±0．08％（1：208）原代细胞在含bFGF＋EGF无血清培养条件下能保持增殖未分化状态。形成神经球样结构，消化传代后90．1％±8．3％的第二代细胞能重新形成新的神经球样结构，具有自我更新能力：原代及传代后的神经球均表达神经干细胞特异性抗原nestin；在含10mL／L胎牛血清的促分化培养液中。细胞分别分化为可表达神经细胞、星形神经胶质细胞和感光细胞等特异性抗原的细胞，表明具有多向分化潜能。【结论】在成人眼睫状体扁平部分离得到具有干细胞特性的视网膜前体细胞，并在体外成功进行培养鉴定。     

EGF与bFGF对体外大鼠巩膜成纤维细胞增殖的影响

目的研究表皮生长因子（EGF）和碱性成纤维生长因子（bFGF）在体外对大鼠巩膜成纤维细胞生长的影响。为进一步了解近视发生的分子机制提供依据。方法采用植块法培养大鼠巩膜成纤维细胞。细胞经传代纯化鉴定后,取第3～4代细胞加入不同浓度的EGF（0．1～200ng／mL）、bFGF（0．1～50ng／mL）。分别培养24、48、72h用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞的增殖密度。观察不同浓度、时间下细胞增殖情况。结果发现0．1～100ng／mL的EGF和0．1～50ng／mL的bFGF对大鼠巩膜成纤维细胞均有明显的促增殖作用,且呈剂量相关性。结论一定浓度的EGF、bFGF对体外培养的大鼠巩膜成纤维细胞的生长具有促进作用。     

体外培养及成纤维细胞生长因子对骨髓基质细胞生长的影响

目的　研究体外培养及成纤维细胞生长因子对骨髓基质细胞生长的影响。方法　抽取兔骨髓基质细胞体外培养 ,倒置显微镜动态观察 ,从原代培养 (P0 )中观察到细胞集落的形态有明显差异 ,提示骨髓基质细胞是一个由多种细胞组成的混合体。在培养液中加入碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF ,5ng/ml)。 结果　第一代细胞(P1)的生长速度增至对照组的 1.5倍。而未经bFGF处理的细胞活跃增殖能力只能保持 4～ 5代 ,随后即发生退化 ;而经bFGF处理的细胞 ,传 10代以上仍能保持活跃的增殖能力。结论　bFGF能促进骨髓基质细胞增殖并长期保持其生物活性。     

兔膀胱上皮细胞的分离、培养及鉴定

目的 建立一种有效、简便的兔膀胱上皮细胞体外原代培养方法。方法 以DMEM／F12（1：1）为基础培养基，添加10％FCS、EGF等营养成分，在37℃、5％CO2的孵箱内培养，并行细胞形态学、免疫组化检测。结果 细胞在10－14d融合形成单层，细胞形态呈多角形，经HE染色、免疫组化、透射电镜证实为移行上皮细胞。结论 此培养方法能在短时间内大量获得移行上皮细胞，具有细胞纯度高、成功率高、适用范围广的特点。     

人肝细胞生长因子在CHO细胞的表达和生物学活性

将人肝细胞生长因子（ＨＧＦ）ｃＤＮＡ（２．２ｋｂ）经ＤＮＡ连接酶插入到ｐＥＥ１４质粒的多克隆位点上，构建了ＰＥＥ１４／人ＨＧＦ（１１．４５ｋｂ）真核细胞表达质粒。用Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ将ｐＥＥ１４／ＨＧＦ质粒转导至ＣＨＯ细胞表达，表达ＰＥＥ１４人／人ＨＧＦ的ＣＨＯ细胞的培养液能促进原代培养大鼠细胞的ＤＮＡ合成。ＣＨＯ细胞表达和合成的人ＨＧＦ的水平高于２９３和ＮＳＯ细胞。     

转移生长因子—β对骨髓基质细胞生长影响的实验研究

目的 研究体外培养及转移生长因子-β（TGF-β）对骨髓基质细胞生长的影响。方法 抽取兔骨髓基质细胞体外培养，倒置显微镜动态观察，并在培养液中加入TGF-β结果 从原代培养细胞（P0）中观察到细胞集落的形态有明显差异。提示骨髓基质细胞是一个由多种细胞组成的混合体，经TGF-β处理的细胞，生长速度明显增快，传30代以上仍能保持较活跃的增殖能力，而未经TGF-β处理的细胞，活跃增殖能力约只能保持10-15代，随后那发生退化。结论 TGF-β能促进骨髓基质细胞增殖并较长期保持其生物活性。     

胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白-1抑制视网膜血管新生的机制研究

目的 探讨胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白-1（IGFBP-rP1）抑制血管内皮细胞生长因子（VEGF）体外诱导视网膜新生血管形成的机制。方法 猕猴视网膜/脉络膜血管内皮细胞株（RF/6A）扩增培养、血清饥饿培养24 h后,分为对照组及50、100、200 ng/mL IGFBP-rP1干预组进行干预,流式细胞术检测细胞凋亡率的变化;分为对照组,10 ng/mL VEGF干预组,50、100、200 ng/mL IGFBP-rP1+10 ng/mL VEGF干预组进行干预,免疫细胞化学染色检测细胞中B-Raf蛋白表达,分光光度法检测细胞中Caspase 3活性的变化。结果 流式细胞仪检测显示,50、100、200 ng/mL IGFBP-rP1干预组RF/6A细胞凋亡率与对照组比较差异无统计学意义（P>0.05）。免疫细胞化学染色检测与Caspase 3活性检测显示,与对照组比较,10 ng/mL VEGF干预组RF/6A细胞细胞质平均吸光度显著升高、D405值显著降低（均P<0.05）;与10 ng/mL VEGF干预组比较,50、100、200 ng/mL IGFBP rP1+10 ng/mL VEGF干预组RF/6A细胞细胞质平均吸光度显著降低、D405值显著升高（均P<0.05）,且各组间比较差异均有统计学意义（均P<0.05）。结论 IGFBP-rP1通过干预B-Raf蛋白表达,上调细胞Caspase 3活性,对抗VEGF的促视网膜血管新生效应,发挥抑血管新生因子的负向调节作用。     

外泌体环状RNA 30741在小鼠血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的 探讨环状RNA在血管平滑肌细胞增殖过程中的作用。方法 在体外原代培养小鼠血管平滑肌细胞,采用不同浓度（10~50 ng/mL）的血小板源性生长因子-BB（PDGF-BB）诱导血管平滑肌细胞（VSMC）增殖。在给予PDGF-BB诱导48 h后,采用细胞计数和BrdU法检测血管平滑肌细胞增殖;同时采用高速离心法分离培养液中外泌体,提取外泌体中总RNA,利用Real-time PCR法检测外泌体中6种环状RNA（环状RNA 30741、1853、723、3069、1776、1092）的表达情况,在Circbase等数据库对环状RNA的靶小分子RNA进行生物信息学分析。结果 与对照组（Vehicle）相比,给予10 ng/mL PDGF-BB刺激后血管平滑肌细胞的数目和BrdU OD值没有明显变化（vs Vehicle, P>0.05）,20~50 ng/mL的PDGF-BB刺激后血管平滑肌细胞数目和BrdU OD值呈浓度依赖性增加（vs Vehicle, P<0.05）。在血管平滑肌细胞增殖过程中,环状RNA 1853、723、3069、1776、1092的表达水平无明显变化（P>0.05）,环状RNA30741的表达水平上调（P<0.05）,且环状RNA 30741的mRNA水平与VSMC的细胞数呈显著正相关性 (P<0.05)。生物信息学分析提示环状RNA 30741的靶小分子RNA包括小分子RNA-21等。结论 环状RNA 30741可能参与了血管平滑肌细胞的增殖过程。     

FSH和IGF-1对大鼠卵巢细胞微囊化前后的影响

目的：观察微囊化卵巢细胞的形态变化及卵泡刺激素（FSH）和胰岛素样生长因子-1（IGF-1）对其增殖功能的影响,探讨微囊化卵巢细胞作为内源性雌激素来源的可行性。方法：分离21 d龄雌性SD大鼠卵巢细胞,将培养至第一代的卵巢细胞微囊化包裹后接种于96孔板,加入含不同浓度的FSH和IGF-1（浓度分别为0、6.3、12.5、25、50、100 ng/mL）的无血清培养液;另将正常培养的卵巢细胞培养24 h后换无血清培养液进行相同的处理,培养44 h后,加入WST-1试剂,继续孵育4 h。全自动酶标仪测定光密度。结果：卵巢细胞在微囊内呈圆形均匀分布,48 h后形态无显著变化。FSH对培养的卵巢细胞和微囊化的卵巢细胞的增殖刺激作用均呈剂量依赖性,卵巢细胞的增殖刺激作用在FSH 50 ng/mL时,达到最高峰（P〈0.05）;对微囊化卵巢细胞的刺激作用在FSH 100 ng/mL时,细胞的增殖活性达到最高峰（P〈0.05）;IGF-1对卵巢细胞的刺激增殖作用在低剂量组不显著（6.3、12.5、25 ng/mL,P〉0.05）,在高剂量组（50、100ng/mL）对卵巢细胞的刺激作用与对照组相比差异有统计学意义（P〈0.05,P〈0.01）。IGF-1对微囊化卵巢细胞的刺激增殖作用呈剂量依赖性（P〈0.05）,在IGF-1 50 ng/mL和100 ng/mL组,微囊化卵巢细胞的OD值与对照组相比,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论：卵巢细胞在微囊化后,可以在微囊内存活并保持其生物学活性,并且可以对外源性的FSH和IGF-1的刺激产生反应。     

TGF-β1对小鼠子宫内膜基质细胞 MMP-9表达的影响

目的探讨转化生长因子-β1（TGF-β1）对小鼠子宫内膜基质细胞基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达的影响。方法分离和纯化小鼠子宫内膜基质细胞,在此细胞培养体系中加入不同浓度的 TGF-β1,终浓度为0．1、2．5、5．0、10．0、20．0 ng／mL ,培养48 h 后通过 ELISA 法检测培养液中 MMP-9的含量。结果与对照组比较,实验组随 TGF-β1浓度的增加,小鼠子宫内膜基质细胞 MMP-9表达上升,差异有统计学意义（P＜0．01）。结论小鼠子宫内膜基质细胞体系中,TGF-β1可能通过调控 MMP-9的表达,参与调节细胞外基质代谢。     

川芎嗪对TGF-β1诱导人胚肾近端小管上皮细胞转分化影响的实验研究

目的利用原代培养的人胚肾近端小管上皮细胞作为研究对象,探讨川芎嗪(TMP)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人胚肾近端小管上皮细胞转分化的影响。方法采用胶原酶消化后系列网筛过滤,再用密度梯度离心分离纯化细胞的方法,进行人胚肾近端小管上皮细胞的原代培养。原代培养的人胚肾近端小管上皮细胞传至第2代后分为5组,空白对照组、10ng/mL TGF-β1刺激组、5ng/mLTMP+10ng/mL TGF-β1刺激组、10ng/mLTMP+10ng/mL TGF-β1刺激组及20ng/mLTMP+10ng/mL TGF-β1刺激组。刺激48h后,采用倒置相差显微镜、透射电子显微镜、酶化学染色和免疫细胞化学方法检测细胞的转分化情况。结果 TGF-β1刺激人胚肾近端小管上皮细胞后细胞拉长呈梭形,细胞间隙加大;电子显微镜下细胞失去极性,微绒毛减少直至消失;碱性磷酸酶染色阴性;细胞角蛋白18(CK-18)表达减弱,波形蛋白(Vimentin)表达增强,并表达α平滑肌肌动蛋白抗体(α-SMA)。各浓度TMP+10ng/mL TGF-β1刺激组细胞的上述变化均有不同程度的减弱,减弱程度与TMP浓度呈正比。结论 TMP能以浓度依赖方式阻止TGF-β1诱导的人胚肾近端小管上皮细胞的转分化。     

人表皮生长因子对牛角膜内皮细胞增殖和细胞周期的影响

目的 观察表皮生长因子(EGF)对牛角膜内皮细胞增殖和细胞周期的影响.方法 采用体外培养的牛角膜内皮细胞,在培养液中分别添加不同浓度的人表皮生长因子(hEGF),加药后第3、7天采用MTT法,在酶标仪492 nm波长处测定吸光度值观测细胞增殖,并记录细胞形态变化.将体外培养的牛角膜内皮细胞分为二组,常规DMEM培养液组和含50 ng/mL EGF的DMEM培养液组,培养3、7天后,应用流式细胞仪检测细胞周期各阶段G1、S、G2期分布.结果 与对照组相比,不同浓度EGF组对牛角膜内皮细胞增殖有促进作用且与浓度相关,其中10 ng/mL和100 ng/mL组作用强于1 ng/mL组.EGF加入后3 d,对照组S期细胞24.5%,G2-M期细胞0.08%,加药组S期细胞24.6%,G2-M期细胞0.06%.与对照组相比较,各期细胞分布大致相等,无显著差异.加入7 d后对照组S期细胞20.8%,G2-M期细胞0.41%,加药组S期细胞18.2%,G2-M期细胞1.55%,细胞分布发生明显变化.结论 EGF促进体外培养的牛角膜内皮细胞增殖,并使体外培养的牛角膜内皮细胞的细胞周期发生变化,S期细胞比例下降.     

引起成人腹泻的新轮状病毒在原代人胚肾细胞上的培养和传代

目的 探讨用细胞培养系统在体外培养新轮状病毒（RV）。方法 含新RV的病人粪便标本经高浓度胰蛋白酶（100μg/ml)37℃作用1h,接种于原代人胚肾（PHEK）细胞,37℃吸附1h后,补加无血清含胰蛋白酶（100μg/ml）的DMEM,37℃转鼓培养3d,收获细胞培养液,冻融1次,作为下一代培养的接种物,培养传代。用聚丙烯酰胺凝胶电泳、免疫荧光（IF）、电镜（EM）、免疫电镜（IEM）等方法对细胞培养液进行病毒核酸、抗原及形态检查。结果 从10份粪便标本中培养分离到1株病毒,定名为J19。该病毒在PHEK细胞上稳定培养传代（28代）,其病毒核酸（dsRNA）电泳图型与初始用于接种细胞的粪便标本中的dsRNA电泳图形完全一致,而与A、B、C组RV dsRNA电泳图型明显不同。J19株感染的细胞与病人恢复期血清呈IF阳性反应,与成人腹泻轮状病毒（ADRTV）腹泻病人恢复期血清、兔抗A组RV和兔抗ADRV血清均为IF阻性;EM和IEM在该病毒的细胞培养液中观察到,在形态上与初始接种物中病毒一样的轮状病毒颗粒,而且可被新RV腹泻病人恢复期血清凝集,结论 成功地从含新RV的成人腹泻粪便标本上分离培养出1株轮状病毒－－J19,并能在细胞稳定传代。J19株不属于A、B、C组RV,而是一种新RV。关于新RV在细胞上培养传代,本文是第一次报告。