缺血再灌注对在体兔窦房结细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响

目的:探讨缺血再灌注对在体兔窦房结细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响。方法:取家兔90只随机分为对照组, 缺血10 min、30 min、60 min、120 min组及缺血10 min、30 min、60 min、120 min再灌注4h组, 每组10只。通过结扎及放松右冠状动脉起始部制作窦房结缺血再灌注损伤模型, 当达各预定时点后, 迅速切取窦房结组织固定, 用TUNEL法检测窦房结细胞凋亡, 用免疫组化法检测窦房结细胞Fas-L、Bax及Bcl-2表达。结果:①对照组、缺血10 min、30 min组均未观察到明显的窦房结细胞凋亡现象;缺血60 min、120 min组及缺血再灌注4组中共有68.3%(41/60)的兔窦房结细胞出现不同程度的凋亡现象, 其细胞凋亡率分别为8.6%、16.1%、23.5%、34.5%、44.7%与31.2%。②Fas-L、Bax表达量随缺血时间延长逐渐增加, 以缺血120 min组表达最强;而Bcl-2表达则以缺血60 min组最强。③缺血再灌注各组中, Fas-L、Bax表达均明显强于对照组, 并以缺血60 min再灌注4h组最强;Bcl-2表达以缺血30 min再灌注4h组最强。④缺血再灌注组窦房结细胞Fas-L、Bax表达明显高于相同时间缺血组(P＜0.01)。结论:缺血及缺血再灌注均可诱导在体兔窦房结细胞凋亡, 凋亡相关基因Fas-L、Bax、Bcl-2可能参与了细胞凋亡的调控过程, 缺血再灌注损伤对窦房结细胞凋亡的发生具有促进作用。     

大鼠提睾肌缺血再灌注损伤时血管平滑肌细胞和内皮细胞的增殖与凋亡

目的研究大鼠提睾肌缺血再灌注后血管平滑肌细胞和内皮细胞的增殖和凋亡。方法以免疫组织化学SP法和末端脱氧核苷酸转移酶介导生物素标记法 (TUNEL)对大鼠提睾肌缺血再灌注后的血管平滑肌细胞和内皮细胞的Bcl-2、Bax、P53和增殖细胞核抗原 (PCNA)的表达进行观察研究。结果缺血再灌注后 ,血管平滑肌细胞和内皮细胞均有Bcl-2、Bax、P53和PCNA的表达 ,在平滑肌细胞 ,Bcl-2阳性细胞数量明显高于Bax和P53。PCNA阳性细胞明显增多。在内皮细胞 ,Bax和P53的表达最强 ,TUNEL阳性细胞率最高。结论大鼠提睾肌缺血再灌注可造成平滑细胞的增殖和内皮细胞的凋亡 ,其结果可能与微循环障碍有关。     

单纯缺血和缺血再灌注损伤大鼠小肠粘膜细胞凋亡的比较研究

目的比较单纯缺血及缺血再灌注损伤时大鼠小肠粘膜细胞凋亡的变化,并分析其可能机制.方法采用大鼠小肠缺血及缺血再灌注模型,取回肠段作连续切片,分别作HE染色和TUNEL、Bcl_2、Caspase_3免疫组化染色,观察单纯缺血及缺血再灌注时小肠粘膜损伤情况、粘膜细胞凋亡的变化以及Bcl-2和Caspase-3表达之间的关系.结果(1)随缺血时间延长,小肠粘膜损伤程度逐渐加重,缺血再灌注组引起的损伤较单纯缺血1h及缺血3h都更为严重.(2)TUNEL染色显示,随缺血时间延长,凋亡细胞数量增加,缺血再灌注组凋亡阳性细胞最多.(3)随缺血时间延长,caspases_3阳性细胞增多,缺血再灌注组阳性细胞最多;Bcl_2阳性细胞则呈现相反的变化.单纯缺血3h组和缺血1h再灌注2h组Bcl_2与Caspase_3蛋白的表达呈直线负相关(r1=-0.827,PP<0.05;r2=－0.998,P<0．01）。结论大鼠小肠单纯缺血及缺血再灌注都可造成粘膜的损伤，共同的表现为细胞坏死和凋亡，所不同的是单纯缺血所致的损伤以坏死为主，而缺血再灌注所致的损伤则以凋亡为主，凋亡原因之一是由于Bcl_2蛋白表达减少使Caspase-3大量激活。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对缺血再灌注心肌细胞凋亡的作用

目的：观察表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡的影响。 方法： 采用结扎大鼠左冠状动脉前降支30 min，然后松开再灌注60 min的方法，复制大鼠心肌缺血再灌注损伤模型。实验分假手术组、缺血再灌注组（IR）、EGCG不同剂量治疗组和丹参（SM）组。用原位缺口末端标记法（TUNEL）检测心肌凋亡细胞，用链酶亲和素-生物素-酶复合物（SABC）免疫组化法检测凋亡相关基因Bcl-2和Bax蛋白表达。 结果： 在假手术组未发现凋亡细胞，IR组细胞凋亡明显，Bcl-2和Bax蛋白表达增加，但以Bax更明显，Bcl-2/Bax值显著低于假手术组（P<0.01）；EGCG组凋亡细胞明显少于IR组，Bcl-2表达显著大于而Bax表达显著少于IR组，Bcl-2/Bax值显著高于IR组（P<0.01）。 结论： EGCG能明显抑制IR引起的心肌细胞凋亡，其作用机制可能与下调Bax和上调Bcl-2蛋白表达，提高Bcl-2/Bax值有一定关系。     

犬小肠缺血再灌注后血中NO和SOD与小肠粘膜凋亡相关基因表达的改变

研究犬小肠缺血再灌注后氧自由基和c-fos、增殖性细胞核抗原（PCNA）及Bax的表达改变及其相关性。于阻断小肠动脉前及再灌注0、30、及60min采集伴行静脉血液标本及小肠组织进行各项指标检测。结果显示，再灌注0min，N烽SOD的血中浓度明显下降，c-fos、PCNA和Bax在小肠粘膜上皮及小肠腺的表达明显增强。再灌注30min，NO和SOD浓度降至最低、c-fos、PCNA和Bax的表达达最高峰。至再灌注60min，NO和SOD有所升高，而三种基因的表达则显著减少。NO和SOD的改变与三种基因表达的相关性分析显示出它们之间密切的相关关系。犬小肠缺血再灌注可造成氧自由基的增多和c-fos、PCNA和Bax的表达增加，可能与损伤后的修复重建等有关，氧自由基的增多与相关基因的表达有密切关系。     

促红细胞生成素干预肾缺血再灌注损伤后肾小管间质的纤维化

背景：促红细胞生成素能减轻炎症反应、抗凋亡以及对缺血再灌注肾损伤有保护性作用。 目的：分析促红细胞生成素对肾缺血再灌注损伤后细胞凋亡和肾小管间质纤维化的关系。 方法：通过单侧肾缺血再灌注损伤构建患侧肾小管间质纤维化模型。实验小鼠随机分为4组：假手术组、缺血再灌注组、促红细胞生成素低剂量组和促红细胞生成素高剂量组。苏木精-伊红、Masson染色观察肾脏病理改变,免疫组织化学检测肾组织中Bcl-2和Bax蛋白表达水平,Western blot检测Caspase-3的表达。 结果与结论：与缺血再灌注组相比,两促红细胞生成素干预组肾小管和间质病变减轻。缺血再灌注组和两促红细胞生成素干预组肾脏Bcl-2和Bax表达均较假手术组明显上调,但缺血再灌注组更明显;缺血再灌注组Bcl-2/Bax比值较假手术组低,而两促红细胞生成素干预组Bcl-2/Bax比值却较缺血再灌注组高;两促红细胞生成素干预组Caspase-3表达高于假手术组而低于缺血再灌注组。结果表明,肾缺血再灌注损伤后期肾小管间质纤维化进程与细胞凋亡相关,Bcl-2/Bax及Caspase-3起了重要作用;低剂量促红细胞生成素也能减轻小鼠肾缺血再灌注损伤后期肾小管间质纤维化程度。     

半胱氨酸蛋白酶抑制剂C对脑缺血再灌注大鼠Bcl-2、Bax和Beclin-1的表达及细胞凋亡的影响

目的:应用不同浓度的半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(cystatin C,Cys C)干预脑缺血再灌注大鼠,检测Bcl-2、Bax、Beclin-1阳性细胞的表达,探讨自噬蛋白Beclin-1与凋亡之间的关系。方法:成年雄性SD大鼠随机分成假手术组(Sham组),缺血再灌注组(I/R组),Cys C低、中、高浓度组。用线栓法制备大鼠右侧大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,缺血2 h再灌注24 h。采用免疫印迹半定量检测损伤中心脑皮质组织凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Beclin-1的表达;免疫组织化学检测Bcl-2、Bax和Beclin-1阳性细胞数;TUNEL染色法检测脑组织细胞凋亡。结果:与I/R组相比,Cys C低、中浓度组Bcl-2的表达有不同程度的升高,Bax的表达降低,细胞凋亡减少;而Cys C高浓度组Bcl-2的表达明显降低,Bax的表达显著上升,细胞凋亡增加;Cys C各浓度组Beclin-1的表达都有不同程度的升高。凋亡细胞与Beclin-1表达的相关性分析显示,Cys低、中浓度组细胞的自噬和凋亡呈负相关;Cys C高浓度组细胞的自噬和凋亡呈正相关。结论:Cys C在一定浓度范围内,随自噬蛋白Beclin-1表达的升高可抑制细胞的凋亡,对缺血再灌注损伤脑组织具有保护作用。其作用机制和Bcl-2的表达上调,Bax的表达下调有关;而Cys C较高浓度则无上述作用。     

人硫氧还蛋白对肺缺血再灌注损伤时细胞凋亡及Bcl-2/Bax的影响

目的:探讨细胞凋亡与肺缺血再灌注损伤的关系以及人硫氧还蛋白对凋亡及其相关基因的影响。方法:健康清洁级Wistar大鼠84只,随机分为对照组、肺缺血再灌注1h、3h、5h组和人硫氧还蛋白干预1h、3h和5h组。复制肺缺血再灌注损伤模型。采用电子显微镜和原位缺口末端标记法观测肺组织细胞凋亡的变化和凋亡指数,免疫组化技术检测肺组织细胞Bcl-2、Bax及凋亡信号调节激酶1(ASK1)蛋白表达的变化。结果:肺缺血再灌注组肺组织细胞凋亡指数、ASK1、Bcl-2和Bax蛋白表达均显著高于对照组(均P0.01),超微结构呈严重损伤性改变。人硫氧还蛋白干预组ASK1、Bax的表达显著下降(均P0.01),Bcl-2的表达及Bcl-2/Bax比值显著上调(P0.05或P0.01),肺组织细胞凋亡指数也显著低于缺血再灌注组(P0.01)。肺组织细胞凋亡指数分别与ASK1、Bax蛋白之间均呈显著正相关(分别r=0.775、r=0.814;均P0.01);与Bcl-2/Bax蛋白呈显著负相关关系(r=-0.275,P0.05)。结论:Bcl-2/Bax比值下调启动的肺组织细胞凋亡可能参与了肺缺血再灌注损伤的发生。人硫氧还蛋白可能通过下调ASK1的表达,提高Bcl-2/Bax的比值减少肺组织细胞凋亡,从而减轻肺缺血再灌注损伤。     

脑缺血再灌注后神经元和内皮细胞凋亡的差异与Bcl—2和P53表达的意义

目的：探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞和血管内皮细胞凋亡的差异及其与Bcl-2和p53蛋白表达的关系。方法：应用原位末端标记技术和免疫组化方法,检测神经细胞和血管内细胞凋亡及Bcl-2和p53蛋白表达,结果：在缺血周围区,缺血再灌注2h神经细胞和内皮细胞凋亡开始增多,12－24h达高峰,之后逐渐减少,7－14d降至假手术组水平;血管内皮细胞凋亡迟于神经元凋亡12－24h,Bcl-2蛋白表达于缺血再灌注2h开始增强,12－24h达高峰,之后逐渐下降,至7－14d接近假手术组水平,p53蛋白表达于缺血再灌注6h开始增高,24－48h达高峰,之后逐渐下降,至14d与假手术组已无显著性差异。结论：脑缺血再灌注损伤后血管内皮细胞凋亡迟于神经元凋亡,Bcl-2和p53蛋白参与细胞凋亡的调节。     

全脑缺血再灌流后Bcl-2基因家族的表达及氟桂嗪的影响

目的:观察全脑缺血再灌流后Bcl-2基因家族表达变化规律及氟桂嗪的影响.方法:采用免疫组织化学染色法和原位杂交法观察大鼠4血管结扎全脑缺血30min再灌流后, 不同时相点Bcl-2基因家族在大脑皮质和海马等部位的动态变化.结果:全脑缺血再灌流后12h开始在皮质和海马等部位抑制凋亡基因Bcl-2 mRNA转录增加 ,蛋白有轻度表达,Bcl-xl蛋白表达降低;而促进凋亡基因Bcl则表达升高;Bcl-xl、Bcl -2/Bax的比值明显降低.这种变化以缺血再灌注后24～48h最明显,变化最显著的区域是缺血敏感的大脑皮质和海马CA1区.氟桂嗪(ip)10mg/kg和20mg/kg能促进Bcl-2基因转录, 但对Bcl-2和Bcl-xl的蛋白表达无显著影响;同时氟桂嗪能抑制Bax蛋白的表达,使Bcl-x l、Bcl-2/Bax的比值升高.结论:脑缺血再灌流可以诱导Bcl-2基因家族在脑内表达发生变化,使Bcl-xl、Bcl-2/Ba x的比值明显降低,促进脑细胞凋亡发生.氟桂嗪可通过抑制Bax表达,升高Bcl-xl、Bcl- 2/Bax比率产生抗脑细胞凋亡作用. 　　……     

热休克蛋白70在大鼠心肌缺血再灌注过程中的表达及其意义

目的 :探讨热休克蛋白 70 (HSP70 )在心肌缺血再灌注损伤中的表达及其意义。方法 :结扎 /松解SD大鼠左冠状动脉前降支 ,建立大鼠缺血 0min、3 0min ,再灌注 60min、12 0min动物模型。免疫组化技术和图像分析技术检测心肌细胞内HSP70、Bcl 2 /Bax基因的蛋白表达 ,硫代巴比妥酸 (thiobarbituricacid ,TBA)法测心肌组织丙二醛 (MDA)含量 ,优化紫外分光光度法测血清肌酸激酶 (CK)活性。结果 :( 1)HSP70于缺血 0min即有表达 ,再灌注 60min达高峰 ,之后下降。 ( 2 )Bcl 2蛋白再灌注组表达较缺血组明显降低 (P <0 .0 5 )。( 3 )Bax蛋白表达、MDA含量、CK活性于缺血 3 0min开始升高直至再灌注 12 0min。结论 :HSP70的异常表达与心肌缺血再灌注损伤的发生有关 ,且可能是缺血再灌注损伤细胞发展、恶化的重要标志。     

粉防己碱对缺血-再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响

目的探讨粉防己碱对缺血-再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响。方法结扎大鼠左冠状动脉前降支（LAD）30min后松开,再灌注24h建立心肌缺血-再灌注损伤模型。将48只雄性SD大鼠随机分为：假手术组（Sham组）,缺血-再灌注损伤组（IRI组）,粉防己碱预处理组（Tet组）。再灌注结束后检测血清肌酸激酶同工酶MB（CK-MB）和心肌梗死范围（IS/AAR,%）。应用原位末端标记法（TUNEL法）检测各组凋亡细胞,计算凋亡指数（AI）,应用免疫组化法检测心肌Bcl-2、Bax蛋白表达,计算Bcl-2/Bax值,进行组间比较。结果与IRI组相比,Tet可明显降低CK-MB值（976.57±160.69）vs（1910.38±221.10）U/L,P〈0.01,减小心肌IS/AAR%,（23.28±4.38）%vs（43.76±6.30）%,P〈0.01。与IRI组比较,粉防己碱预处理可显著减少心肌细胞凋亡,AI显著降低（8.62±2.45%vs19.36±5.28%,P〈0.01）。粉防己碱预处理使Bcl-2表达增加,Bax表达下降,Bcl-2/Bax值显著升高（P〈0.01）。结论粉防己碱能明显抑制缺血-再灌注损伤引起的心肌细胞凋亡,其作用机制可能与促进Bcl-2蛋白表达,减少Bax蛋白表达、升高Bcl-2/Bax比值有关。     

甘草酸二铵对大鼠心肌缺血再灌注损伤后细胞凋亡的影响

目的 :观察甘草酸二铵 (DG)对大鼠心肌缺血再灌注 (IR)损伤后心肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响。方法 :雄性wistar大鼠2 4只 ,随机分为假手术组 ;IR组 ;DG组 ( 2 0mg/kg)。每组 8只。采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的带荧光的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法、westernblot法和免疫组化法检测大鼠心肌缺血 3 0min再灌注 6h心肌凋亡细胞及凋亡相关基因Bcl 2、Bax蛋白表达的变化。结果 :与假手术组比较 ,IR组心肌细胞凋亡指数 (AI)、Bax蛋白的阳性表达明显增加 (P均 <0 .0 1) ;与IR组比较 ,DG治疗后AI和Bax蛋白的阳性表达明显下降 (P <0 .0 1) ,而Bcl 2蛋白的阳性表达明显上调 (P <0 .0 1)。结论 :DG具有保护大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用 ,其作用机制可能与其下调Bax蛋白表达 ,上调Bcl 2蛋白表达抑制心肌细胞凋亡有关     

阿魏酸川芎嗪对缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响

 目的：观察阿魏酸川芎嗪对缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡的影响,并探讨其可能机制。方法：将60只雄性SD大鼠随机分成5组：（1）假手术组;（2）缺血再灌注组;（3）川芎嗪(4 mg/kg)组;（4）阿魏酸川芎嗪低剂量(4 mg/kg)组;（5）阿魏酸川芎嗪高剂量(8 mg/kg)组。采用结扎左冠状动脉前降支30 min、再灌注120 min的方法复制大鼠心肌缺血再灌注模型;各组大鼠于再灌注前10 min分别颈静脉注射给药,于再灌注结束后,进行血清生化及心肌组织学检测。结果：阿魏酸川芎嗪能显著降低心肌缺血再灌注损伤大鼠血清中肌酸激酶同功酶、乳酸脱氢酶、心肌钙蛋白I和丙二醛的水平,提高总超氧化物歧化酶活性,增加心肌Bcl-2蛋白的表达,减少心肌Bax蛋白的表达, 提高Bcl-2/Bax 的比值和降低心肌细胞凋亡指数,与缺血再灌注组比较,差异有统计学意义（P＜0.01）。阿魏酸川芎嗪各项指标优于川芎嗪（P＜0.05或P＜0.01）。结论：阿魏酸川芎嗪能减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤;其抗缺血再灌注诱导的心肌细胞凋亡的机制可能与其上调Bcl-2蛋白和下调Bax蛋白表达有关。     

Emulsified isoflurane postconditioning produces cardioprotection against myocardial ischemia–reperfusion injury in rats

Emulsified isoflurane (EIso) preconditioning can induce cardioprotection. We investigated whether EIso application after ischemia protects hearts against reperfusion injury and whether it is mediated by the inhibition of apoptosis. Rats were subjected to 30-min coronary occlusion followed by 180-min reperfusion. At the onset of reperfusion, rats were intravenously administered saline (sham, control group), 30 % intralipid (IL group) or 2 ml kg^?1 EIso (EIso group) for 30 min. After reperfusion, infarct sizes, myocardial apoptosis and expression of Bcl-2, Bax and caspase-3 proteins were determined. Hemodynamic parameters were not different among groups. Compared with control and intralipid group, EIso limited infarct size, inhibited apoptosis, increased the expression of Bcl-2, decreased the expression of Bax, cleaved caspase-3, and enhanced Bcl-2/Bax ratio. EIso protects hearts against reperfusion injury when administered at the onset of reperfusion, which may be mediated by the inhibition of apoptosis via modulation of the expression of pro- and anti-apoptotic proteins.     

依达拉奉对脑缺血再灌注损伤大鼠Bcl-2和Bax表达的作用研究

为了研究依达拉奉抗细胞凋亡的脑保护作用机制,本实验采用依达拉奉对脑缺血再灌注损伤大鼠进行治疗干预,观察大鼠脑组织Bcl-2和Bax的表达。将36只SD大鼠随机分为假手术组、再灌注组、依达拉奉治疗组,再灌注术后24h断头取脑,免疫组织化学和RT-PCR法观察脑组织Bcl-2和Bax表达水平的变化。结果表明,大鼠脑缺血再灌注损伤后,Bcl-2和Bax含量显著增多;与再灌注组相比,依达拉奉治疗组Bcl-2的表达显著上调,Bax表达显著下调,Bcl-2/Bax比值显著升高。上述结果提示,依达拉奉的脑缺血保护作用可能与上调Bcl-2表达及下调Bax的表达有关。     

大鼠活体心肌缺血再灌注损伤模型的建立与综合评估

目的: 构建并评估大鼠活体心肌缺血再灌注损伤(I/R)的实验动物模型。 方法: 将清洁级成年SD雄性大鼠72只,随机分为正常组、假结扎组和I/R模型组, 手术的两组全麻下开胸暴露心脏,假结扎组只过线不结扎,模型组使用"U形金属管"进行冠状动脉左前降支结扎,持续心电图监测,并于再灌注2 h与4 h后进行血浆生化﹑心肌组织学的检测。结果: 与正常组和假结扎组比较,I/R模型组心电图有明显ST-T改变和再灌注后病理性Q波,再灌注2 h和4 h时存在比较明显的ST-T改变;血标本检测示心肌型肌酸激酶同功酶(CK-MB)、心肌钙蛋白I(cTnI)、一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平显著升高(P<0.05或P<0.01),T-SOD水平在2 h和4 h也应激性升高(P<0.05);心肌组织病理学检测显示模型组左心室心肌损伤疤痕明显,且2 h模型组左室心肌存在间隔性梗死区域,4 h模型组心肌组织区域性梗死和梗死面积明显增加;TUNEL法与Bcl-2﹑Bax蛋白实验显示2 h和4 h心肌细胞凋亡数量明显增加;Bcl-2/Bax蛋白表达阳性细胞比值下降显著(P<0.01)。 结论: 成功建立大鼠活体心肌I/R模型,模型大鼠的心电图、血清学、心梗面积﹑心肌细胞凋亡和心肌组织病理学等发生显著改变。