大鼠肾急性缺血再灌注损伤与氧化侵袭与细胞凋亡相关性研究

目的 探讨急性肾缺血再灌注损伤过程氧化侵袭与肾细胞凋亡在肾损伤发生机制中的作用。方法 采用摘除大鼠左肾，钳夹右侧肾蒂的方法，制成急性缺血再灌注肾损伤模型，测定GSH-Px、SOD活性和MDA含量及检测肾细胞凋亡率。结果 缺血再灌注不同时期肾组织SOD活力水平降低，与对照组相比差异显著（P〈0．05、P〈0．01），MDA含量高于对照组（P〈0．05），GSH-Px在再灌注早期活力减弱，明显低于对照组（P〈0．01），晚期活力基本恢复；肾细胞凋亡率与对照组相比差异显著（P〈0．05、P〈0．01）；抗氧化酶SOD活力与细胞凋亡率负相关，MDA含量与细胞凋亡率正相关。结论 缺血再灌注不同时期肾组织氧化侵袭在肾损伤病理过程中起重要作用；再灌注损伤与氧化侵袭和细胞凋亡有关。     

血必净注射液对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨血必净注射液对大鼠肾缺血再灌注损伤的影响。方法观察假手术对照组、缺血再灌注组和血必净治疗组大鼠肾脏缺血再灌注24h后血清及肾组织匀浆丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、血肌酐、血尿素氯和肾组织超微结构的改变。结果缺血再灌注组大鼠血清及肾组织匀浆的MDA、SOD、血肌酐和尿素氮与假手术对照组比较．差异均有统计意义（t分别=-79．21、-12．27、-61．37、-39．37、-33．17、-16．11,P均〈0．05）;血必净治疗组大鼠血清及肾组织匀浆的MDA、SOD、血肌酐和尿素氮与缺血再灌注组比较,差异均有统计意义（t分别=-41．52,-19．31、-58.31、-52．40、-12.39、4．07,P均〈0．05）。透射电镜观察发现,血必净注射液明显减轻肾组织超微结构的损伤。结论血必净注射液对大鼠肾缺血再灌注损伤有明显保护作用。     

草酸钙肾结石大鼠模型肾组织中Klotho的表达及其意义

目的:初步探究Klotho在草酸钙肾结石大鼠模型肾组织中的表达及其意义。方法:将30只6~8周龄雄性SD大鼠随机分为结石组和对照组,每组15只,结石组采用乙二醇和氯化铵诱导法构建草酸钙肾结石模型。28 d造模完成后采集大鼠24 h尿液、血清标本,比较两组血肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、血Ca~(2+)、24 h尿Ca~(2+)及草酸(Ox)指标;采集肾组织标本,HE染色比较各组肾脏病理改变及草酸钙结晶的沉积情况,荧光定量PCR、Western印迹及免疫组织化学染色检测两组肾组织中Klotho m RNA及蛋白表达,并对肾脏氧化应激相关指标总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、过氧化氢酶(catalase,CAT)进行测定。结果:结石组在光学显微镜观察下可见草酸钙结石晶体沉积并有伴肾小管病理性改变,血清Cr,BUN,24 h尿Ca~(2+)及Ox较对照组升高,差异有统计学意义(P0.01),血Ca~(2+)差异无统计学意义(P0.05);结石组Klotho mRNA及蛋白表达较对照组下降,差异有统计学意义(P0.01);肾脏氧化应激相关指标中,结石组T-AOC,CAT较对照组降低,MDA较对照组升高,差异均有统计学意义(P0.01)。结论:草酸钙肾结石的形成与Klotho表达异常及氧化应激反应有关;Klotho可能通过调控Ca~(2+)代谢和氧化应激反应参与草酸钙肾结石的发病过程。     

尿大分子物对草酸钙晶体表面Zeta电位的影响

目的：探讨尿大分子物对泌尿系结石形成的影响。方法：用过饱和结晶及溶晶、透析方法分别从10例草酸钙结石患者和11例正常人尿中提取与草酸钙晶体结合的尿大分子物,即晶体基质,并观测晶体基质和结晶前、后尿大分子物对人工尿中一水草酸钙晶体表面Zeta电位的影响。结果：晶体基质最能使Zeta电位负值增大,结晶前尿大分子物次之,结晶后大分子物作用最弱;结石患者尿大分子物及晶体基质的作用均小于相应正常对照。结论：在草酸钙结晶过程中,尿大分子物可选择性结合到草酸钙晶体表面,改变晶体表面特征,抑制晶体的聚集。结合患者尿大分子物抑制活性不足与尿石形成有关。     

尿常规检查在泌尿系结石患者中的应用

目的了解红细胞、草酸钙结晶在泌尿系结石患者尿中出现的情况。方法采集经B超诊断的176例泌尿系结石患者新鲜尿液，用干化学法检测红细胞，尿离心镜检红细胞和草酸钙结晶。结果干化学法红细胞阳性率92％，尿离心镜检红细胞阳性率82％，草酸钙结晶阳性率74％。结论尿常规检查主要是检查尿红细胞，但草酸钙结晶在泌尿系结石患者中也有较高的阳性检出率。     

卡托普利对老年大鼠肾缺血/再灌注损伤的影响

目的 探讨卡托普利（CAP）对老年大鼠急性缺血／再灌注损伤的保护机制。方法 将60只老年大鼠（20-22月龄）随机等分为假手术组（A组）、缺血／再灌注组（B组）和CAP治疗组（C组，预先两周喂服卡托普利）。检测各组在急性缺血1h、再灌注1h及24h，肾组织匀浆中的超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量变化，并观察肾组织形态学改变。结果 与A组对比，B、C组中肾组织的SOD活性显著下降，MDA的含量明显增高。C组在再灌注期肾皮质中的MDA浓度明显低于B组（P〈0.01），SOD活性明显高于B组（P〈0．01）。B组电镜可见明显急性肾小管损伤和坏死，而C组肾小管损伤轻微。结论 老年大鼠缺血／再灌注损伤中，氧自由基参与了肾脏的损伤过程。卡托普利可以降低MDA含量，增加SOD活性．通过抑制氧自由基的产生．减轻脂盾过氧化反应．对肾脏有保护作用。     

N-乙酰半胱氨酸对糖尿病大鼠肾脏氧化应激的影响

目的：研究N乙酰半胱氨酸（NAC）对糖尿病大鼠肾组织氧化应激的影响。方法：采用链脲佐菌素诱导糖尿病模型，以NAC（75mg·d^-1）干预8周后，测定血糖、肾重／体重、尿白蛋白排泄率，并检测肾组织中丙二醛（MDA）含量及肾组织超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—Px）的活性。结果：与正常对照纽比较，模型组肾组织MDA含量显著增加（P〈0．05），SOD、CAT和GSH—Px活性均显著降低（P〈0．05）；与模型组比较，NAC组血糖无显著差异（P〉0．05），但肾重/体重和尿白蛋白排泄率显著降低（P〈0．05），肾组织MDA含量显著降低（P〈0．05），SOD、CAT和GSH—Px活性显著增加（P〈0．05）。结论：糖尿病大鼠肾脏存在明显氧化应激反应，N—NAC能明显减弱肾脏氧化应激反应，进而起到保护肾脏和延缓糖尿病肾病发生、发展的作用。     

急性CO中毒患者血清SOD、GSH-Px活性及MDA水平的变化及其意义

目的：探讨急性一氧化碳中毒（ACOP）患者血清丙二醛（MDA）水平、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH－Px）及超氧化物歧化酶（SOD）活性的变化，了解ACOP时自由基氧化损伤在其病理机制中的作用。方法：选择不同中毒程度的ACOP患者70例，分别于入院即刻、12、24、48、72h抽血测定血清中MDA水平及SOD、GSH－Px的活性。结果：ACOP时，中度CO中毒组与轻度中毒组比较，血清MDA水平升高，但不具有显著性意义（P＞0．05）；重度中毒组与中度中毒组比较，MDA水平显著性升高（P＜0．05），且24,48h仍维持在较高水平。中度中毒组与轻度中毒组比较，血清SOD及GSH－Px在性水平降低，但不具有显著性意义（P＞0．05）；重度中毒组与中度中毒组比较，SOD及GSH－Px活性水平显著降低（P＜0．05）。结论：ACOP时血清MDA水平升高，SOD及GSH－Px活性降低，提示ACOP时存在着严重自由基氧化损伤的病理过程，为ACOP治疗过程中抗氧化治疗提供了依据，SOD及GSH－Px活性降低，提示ACOP时存在着严重自由基氧化损伤的病理过程，为ACOP治疗过程中抗氧化治疗提供了依据。同时，血清MDA水平和SOD及GSH－Px活性也可作为中毒损伤程度评估，预后判定的指标之一。     

猪苓提取物对大鼠尿草酸钙结石形成的抑制作用

目的：观察猪苓不同溶剂的提取物对大鼠尿草酸钙结石形成的抑制作用。 方法：实验于2005—04—10／05—24在重庆医科大学药理宴验室进行。①分组：取Wistar雄性健康大鼠64只，单纯随机分为对照组、模型组、正丁醇浸膏0．5，1．0g组、乙酸乙酯浸膏0．5，1．0g组和水浸膏0．5，1．0g组8组，每组8只。②造模；除对照组以外，其他7组大鼠每天灌胃10g／L乙二醇和20g／L氯化铵2mL诱导大鼠肾草酸钙结石模型。③给药：正丁醇浸膏0．5，1．0g组每天灌胃猪苓正丁醇浸膏0．5，1．0g：乙酸乙酯浸膏0．5，1．0g组每天灌胃猪苓乙酸乙酯浸膏0．5，1．0g；水浸膏0．5，1．0g组每天灌胃猪苓水浸膏0．5，1．0g；其他2组灌胃等剂量生理盐水。均饲养5周。④检测指标：实验结束前1d收集24h尿，测定尿草酸盐结石、Ca^2＋和Mg^2＋含量；然后处死大鼠，取血测定血清肌酐和尿素氮水平；取肾观察肾组织病理变化．并检测肾组织Ca^2＋，Mg^2＋含量。 结果：64只大鼠进入结果分析。①对照组血清尿素氯和肌酐水平明显低于其他组（P〈0．05，0．01）；乙酸乙酯浸膏1．0g组血清尿素氨水平低于模型组[（8．12&;#177;1．32），（10．84&;#177;0．78）mmol／L，P〈0．01]；正丁醇浸膏0．5g组，乙酸乙酯浸膏0．5，1．0g组血肌酐水平低于模型组[（99．18&;#177;16．46），（97．58&;#177;15．16），（87．03&;#177;15．82），（112．11&;#177;10．16）μmol／L，P〈0．05，0．01]。②对照组24h尿草酸盐结石和Ca^2＋分泌量明显低于其他各组（P〈0．01）；正丁醇浸膏1．0g组和乙酸乙酯浸膏0．5，1．0g组24h尿Ca^2＋分泌量低于模型组[（53．06&;#177;11．21），（44．08&;#177;10．34），（39．84&;#177;13．01），（64．42&;#177;15．32）μmol／24h，P〈0．05，0．01]，乙酸乙酯浸膏0．5，1．0g组低于正丁醇浸膏和水浸膏组（P〈0．01）。③肾Ca^2＋含量：对照组明显低于其他各组（P〈0．01）；正丁醇浸膏1．0g组和乙酸乙酯浸膏0．5，1．0g组低于模型组[（8．52&;#177;2．41），（8．13&;#177;2．18），（6．21&;#177;0．73），（12．01&;#177;0．87）μmol／g，P〈0．05，0．01]，乙酸乙酯浸膏0．5，1．0g组低于正丁醇浸膏和水浸膏组（P〈0．01）。④乙酸乙酯浸膏组肾草酸钙结晶明显少于模型组，肾组织病理变化也轻于模型组。 结论：猪苓乙酸乙酯浸膏能抑制实验性高草酸尿症大鼠尿草酸钙晶体的形成，明显降低血清尿素氮和肌酐的浓度，对肾功能具有明显的保护作用。     

牛磺酸对家兔肾上腹主动脉阻断所致急性肾缺血/再灌注损伤保护作用的实验研究

目的 探讨牛磺酸对家兔肾上腹主动脉阻断所致急性肾缺血／再灌注损伤（ARIRI）的保护作用及可能机制。方法 将24只家兔随机等分为3组（每组n＝8）：假手术组（I组）、缺血再灌注组（Ⅱ组）和牛磺酸治疗组（Ⅲ组）。Ⅱ、Ⅲ两组建立肾上腹主动脉阻断所致ARIRI的动物模型，I组不阻断主动脉血流。Ⅲ组于阻断主动脉前5min静注牛磺酸150mg/kg。Ⅰ、Ⅱ组以等容积生理盐水取代牛磺酸。动态检测中BUN、Cr、SOD、MDA、AT－Ⅱ、尿β2－MG的变化，以及肾皮质中SOD、MDA的浓度。结果 Ⅲ组在灌注期血BUN、Cr、AT－Ⅱ及尿中β2－MG含量明显低于Ⅱ组（P＜0．05或P＜0．01），血和肾皮质MDA浓度明显低于Ⅱ组（P＜0．01），SOD活性显著高于Ⅱ组（P＜0．01）。Ⅱ组电镜下见明显肾小管损伤及坏死，而Ⅲ组肾小管损伤轻微。结论 牛磺酸对家兔肾上腹主动脉所致ARIRI具有良好的保护作用，作用机制与其抗氧化作用及抑制AT－Ⅱ的生成有关。     

Determination of plasma oxalate with oxalate oxidase

A method for the determination of plasma oxalate using oxalate oxidase (EC 1.2.3.4) and deproteinised plasma is described. Reference values are 1.2-6.4 mumol/l (n = 24, mean +/- SD 3.3 +/- 1.5 mumol/l). The sensitivity is 6-7 nmol, the accuracy 3-5 nmol, and the coefficient of variation 10.4% (at a level of 23 nmol). The recovery from plasma spiked with oxalate was 105 +/- 8% (n = 8). Allowing blood to stand for 4 h at room temperature had no effect on plasma oxalate levels; inhibitors of glyoxylate converting enzymes interfered with oxalate oxidase.     

Quantification of urinary oxalate with oxalate oxidase from beet stems

We describe an automated (ABA-100) enzymic method for determination of urinary oxalate by use of oxalate oxidase (EC 1.2.3.4) isolated from beet stems. The H2O2 produced by the oxidation of oxalate by oxalate oxidase is measured by coupling with oxidation and conjugation of 3-methyl-3-benzothiazolinone hydrazone with N,N-dimethylaniline with catalysis by horseradish peroxidase. The resulting indamine dye is measured spectrophotometrically by the difference in absorption at 500 and 600 nm. Interfering substances are removed by oxidation with acidic ferric chloride and by cation-exchange chromatography. The assay is sensitive to 5 mg of urinary oxalate per liter, the standard curve is linear to 70 mg/L, and the procedure requires less than 3 h for completion. The within-run CV was less than 1.6%, the between-day CV less than 5.6%. The oxalate oxidase method results in a mean and reference interval for oxalate excretion that are comparable with those by isotope dilution, gas-chromatographic, colorimetric, and other enzymic procedures.     

Urinary oxalate estimation

A method of estimating urinary oxalate is described. Impurities which might otherwise interfere with the estimation are removed by means of an ion-exchange resin. The oxalate is then reduced to glycolic acid, which forms a coloured compound with chromotropic acid. It can then be estimated colorimetrically. No special equipment is required, oxalate recovery is good, and the method is reproducible and precise.     

Sensitivity of the direct oxalate oxidase assay of urinary oxalate improved

The direct colorimetric method for urinary oxalate has been modified to improve its sensitivity. Oxalate is precipitated overnight with calcium chloride and ethanol, the precipitate is redissolved, and the oxalate is measured by use of oxalate oxidase (EC 1.2.3.4), methylbenzothiazolinone hydrazone, and dimethylaniline. The color developed is more intense, analytical recovery averages 102%, and the overall imprecision is less than 5%. To assess the accuracy of the method, we used a gas-chromatography comparison method and control sera. Interference from ascorbate is negligible. The modified method retains its simplicity and is less expensive.