姜黄素对自发性高血压大鼠脑缺血再灌注时海马神经元凋亡及c-Jun氨基末端激酶3和突触后密度蛋白95表达的影响

目的 探讨姜黄素对自发性高血压(SH)大鼠脑缺血再灌注时海马神经元凋亡及c-Jun 氨基末端激酶3(JNK3)和突触后密度蛋白95(PSD95)表达的影响.方法 与雄性WKY同源的SH大鼠135只和雄性WKY大鼠90只,清洁级,体重275～325 g,采用随机数字表法,将WKY大鼠随机分为2组(n=45):假手术组(W-S组)及脑缺血再灌注组(W-I/R组),将SH大鼠随机分为3组(n=45):假手术组(S-S组)和脑缺血再灌注组(S-I/R组)及姜黄素组(S-C组).采用四血管阻断法制备全脑缺血再灌注模型.W-S组和S-S组仅分离双侧颈总动脉,W-I/R组和S-I/R组于再灌注30 min时腹腔注射玉米油10 ml/kg,S-C组于再灌注30 min时腹腔注射姜黄素100 mg/kg.于再灌注2 h,6 h、1 d、3 d和7d时进行海马凋亡神经元计数,并测定海马JNK3和PSD95蛋白的表达水平.结果 与W-S组比较,S-S组海马凋亡神经元计数增加(P<0.05),JNK3蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05);与S-S组比较,S-I/R组海马凋亡神经元计数增加,JNK3蛋白表达上调(P<0.05);与S-I/R组比较,S-C组海马凋亡神经元计数减少,JNK3蛋白表达下调(P<0.05).各组海马PSD95蛋白表达比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 姜黄素可抑制SH大鼠脑缺血再灌注时神经元凋亡,其机制与下调海马JNK3蛋白表达有关,姜黄素下调海马JNK3蛋白表达可能与PSD95途径无关.

Abstract：

Objective To investigate the effect of curcumin on apoptosis in hippocampal neurons and the expression of c-Jun N-terminal kinase 3 (JNK3) and postsynaptic density protein 95 (PSD95) in hippocampus during cerebral ischemia-reperfusion (I/R) in rats with spontaneous hypertension (SH) .Methods One hundred and thirty-five male rats (homologous with WKY) with SH and 90 male normotensive WKY rats, weighing 275-325 g,were used in this study. The WKY rats were randomized into 2 groups ( n = 45 each) : sham operation group (WS group) and cerebral I/R group (W-I/R group) . The rats with SH were randomly divided into 3 groups ( n = 45each) : sham operation group (S-S group), cerebral I/R group (S-I/R group) and curcumin group (S-C group) .Global cerebral ischemia was produced by 4 vessel-occlusion method. The bilateral common carotid arteries were only exposed but not ligated in W-S and S-S groups. Intraperitoneal corn oil 10 ml/kg was injected at 30 min of reperfusion in W-I/R and S-I/R groups. Intraperitoneal curcumin 100 mg/kg was injected at 30 min of reperfusion in S-C group. Three animals in each group were sacrificed at 2 h, 6 h, 1 d, 3 d and 7 d of reperfusion and their brains were harvested for determination of apoptosis in hippocampal neurons and the expression of JNK3 and PSD95in hippocampus. Results The number of apoptotic neurons was significantly increased in S-S group compared with W-S group ( P < 0.05) . The number of apoptotic neurons was significantly increased and the expression of JNK3was up-regulated in S-I/R group compared with S-S group ( P < 0.05) . The number of apoptotic neurons was significantly decreased and the expression of JNK3 was down-regulated in S-C group compared with S-I/R group (P <0.05) . There was no significant difference in the expression of PSD95 among all the groups ( P > 0.05) . Conclusion Curcumin can inhibit apoptosis in hippocampal neurons and the mechanism is related to down-regulation of the expression of JNK3 in hippocampus. The mechanism by which curcumin down-regulates the expression of JNK3in hippocampus may not be related to PSD95 pathway.     

姜黄素对自发性高血压大鼠脑缺血再灌注时海马神经元凋亡及c-Jun氨基末端激酶3和突触后密度蛋白95表达的影响

目的 探讨姜黄素对自发性高血压(SH)大鼠脑缺血再灌注时海马神经元凋亡及c-Jun 氨基末端激酶3(JNK3)和突触后密度蛋白95(PSD95)表达的影响.方法 与雄性WKY同源的SH大鼠135只和雄性WKY大鼠90只,清洁级,体重275～325 g,采用随机数字表法,将WKY大鼠随机分为2组(n=45):假手术组(W-S组)及脑缺血再灌注组(W-I/R组),将SH大鼠随机分为3组(n=45):假手术组(S-S组)和脑缺血再灌注组(S-I/R组)及姜黄素组(S-C组).采用四血管阻断法制备全脑缺血再灌注模型.W-S组和S-S组仅分离双侧颈总动脉,W-I/R组和S-I/R组于再灌注30 min时腹腔注射玉米油10 ml/kg,S-C组于再灌注30 min时腹腔注射姜黄素100 mg/kg.于再灌注2 h,6 h、1 d、3 d和7d时进行海马凋亡神经元计数,并测定海马JNK3和PSD95蛋白的表达水平.结果 与W-S组比较,S-S组海马凋亡神经元计数增加(P<0.05),JNK3蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05);与S-S组比较,S-I/R组海马凋亡神经元计数增加,JNK3蛋白表达上调(P<0.05);与S-I/R组比较,S-C组海马凋亡神经元计数减少,JNK3蛋白表达下调(P<0.05).各组海马PSD95蛋白表达比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 姜黄素可抑制SH大鼠脑缺血再灌注时神经元凋亡,其机制与下调海马JNK3蛋白表达有关,姜黄素下调海马JNK3蛋白表达可能与PSD95途径无关.     

c-Jun氨基末端激酶在全脑缺血再灌注大鼠海马神经元DNA修复中的作用

目的 探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)在全脑缺血再灌注大鼠海马神经元DNA修复中的作用.方法 健康清洁级雄性SD大鼠108只,4月龄,体重290-310 g,随机分为3组(n=36):假手术组(SH组)、缺血再灌注组(IR组)和JNK抑制剂SP600125组(SP组).采用四血管结扎法建立大鼠全脑缺血再灌注模型,在夹闭双侧颈总动脉前30 min,IR组侧脑室注射1%二甲基亚砜(DMSO)10 μl,SP组给予SP600125(溶于1%DMSO,30 g/L)10 μl.SH组仅游离、暴露双侧颈总动脉,于上述相应时点给予1%DMSO 10 μl.分别于再灌注2、6、12、24、48和72 h处死6只大鼠,测定海马CA1区中1/3段磷酸化JNK(p-JNK)和 DNA修复蛋白 X 线修复交叉互补蛋白1(XRCC1)表达水平,观察神经元病理学结果及神经元凋亡情况.结果 与sH组比较,IR组和SP组神经元凋亡指数升高,XRCCl表达下调,IR组p-JNK表达上调(P＜0.05或0.01),SP组差异无统计学意义(P＞0.05);与IR组比较,SP组神经元凋亡指数降低,p-JNK表达下调,XRCC1表达上调(P＜0.01).结论 JNK 可使全脑缺血再灌注大鼠海马神经元DNA修复功能受损,导致细胞凋亡,其机制可能与下调DNA修复蛋白XRCC1的表达有关.     

c-Jun氨基末端激酶在瑞芬太尼预处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用

目的 评价c-Jun氨基末端激酶(JNK)在瑞芬太尼预处理(RPC)减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用.方法 成年雄性SD大鼠126只,体重300-350 g,随机分为5组:缺血再灌注组(I/R组)(n=38)、缺血预处理组(IPC组)(m=38)、RPC组(n=38)、SP+IPC组(n=6)和SP+RPC组(n=6).采用结扎左冠状动脉30 min再灌注120 min的方法制备心肌缺血再灌注模型.IPC组在缺血前30min行IPC:缺血5 min,再灌注5 min,重复3次;RPC组在缺血前30 min 行RPC:静脉输注瑞芬太尼6 ug·kg-1·min-1 5 min,停止5 min,重复3次;SP+RPC组和SP+IPC组分别于RPC或IPC前5 min腹腔注射JNK选择性阻滞剂SP600125 6 mg/kg.I/R组、IPC组和RPC组于缺血前即刻、缺血5.30 min和再灌注5、30、60 min时随机处死5只大鼠,测定左心室磷酸化JNK(p-JNK)的表达.于再灌注末处死其余大鼠,取心肌,计算左心室(LV)与右心室(RV)体积之和(LV+RV)、梗死区(IS)面积占缺血危险区(AAR)面积的百分比(IS/AAR).结果 与I/R组相比,IPC组和RPC组IS/AAR降低(P＜0.01),SP+PRC组和SP+IPC组IS/AAR差异无统计学意义(P＞0.05);缺血前即刻IPC组心肌p-JNK表达增加,缺血5min时RPC组和IPC组心肌p-JNK表达均降低,再灌注期间RPC组和IPC组心肌p-JNK表达均增加(P＜0.01).结论 JNK参与了瑞芬太尼预处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤.     

七氟醚麻醉对幼鼠海马c-Jun氨基末端激酶表达和神经细胞凋亡的影响

目的 评价七氟醚麻醉对幼鼠海马c-Jun氨基末端激酶(JNK)表达和神经细胞凋亡的影响.方法 健康雄性SD大鼠40只,日龄30～35 d,体重100～110 g,采用随机数字表法,将其随机分为2组(n=20):对照组(C组):吸入含有30%氧气的空氧混合气体5 h;七氟醚组(s组):吸入3%七氟醚5 h,并维持麻醉箱氧浓度为30%.苏醒后1 h时,每组随机处死10只大鼠,取两侧海马组织,分别采用免疫组化法和Western blot法测定磷酸化JNK(p-JNK)的表达水平,采用TUNEL法检测神经细胞凋亡情况.苏醒后24 h时,每组随机取10只大鼠,采用Morris水迷宫测试认知功能.结果 与C组比较,S组海马组织p-JNK表达上调,凋亡细胞计数升高,潜伏期延长和平台象限停留时间缩短(P＜0.05或0.01).结论 吸入3.0%七氟醚可能通过激活JNK信号通路,诱发海马神经细胞凋亡,从而导致幼鼠认知功能降低.

Abstract：

Objective To investigate the effects of sevoflurane anesthesia on the expression of c-Jun N-terminal kinase (JNK) and neuronal apoptosis in hippocampus in juvenile rats.Methods Forty healthy male SD rats, aged 30-35 days, weighing 100-110 g, were randomly divided into 2 groups (n = 20 each): control group (group C) and sevoflurane group (group S) . Group C inhaled a gas mixture of oxygen and air for 5 h and group S 3% sevoflurane for 5 h. The concentration of oxygen in both groups was maintained at 30% . Ten rats in each group were scarified at 1 h after regaining consciousness and the hippocampi removed for determination of phospho-JNK expression (by immuno-histochemistry and Western blot) and neuronal apoptosis (by TUNEL) . Another 10 rats were selected at 24 h after regaining consciousness to assess the cognitive function using Morris water maze. Results Compared with group C, phospho-JNK expression was significantly up-regulated, the number of apoptotic neurons increased, the latency prolonged and the duration of staying at the original platform quadrant shortened in group C ( P ＜ 0.05 or 0.01) . Conclusion Inhalation of 3.0% sevoflurane can induce neuronal apoptosis in hippocampus by activating JNK signaling pathway, thus leading to cognitive decline in juvenile rats.     

脑缺血再灌注对自发性高血压大鼠认知功能及海马神经元凋亡的影响

目的 探讨脑缺血再灌注对自发性高血压(SH)大鼠认知功能及海马神经元凋亡的影响.方法 雄性Wistar-Kyoto(WKY)大鼠及SH大鼠各36只,两种大鼠各随机分为假手术组(S组,n=6)和全脑缺血再灌注组(I/R组,n=30).I/R采用4-VO法建立大鼠全脑缺血再灌注模型,分别于再灌注2 h、6 h、24 h、3 d时处死6只大鼠,取海马组织,采用TUNEL法检测海马CAI区神经元的凋亡情况,采用免疫组化法测定海马CAI区p-JNK的表达水平;取其余的6只大鼠,于再灌注7 d时测定学习和记忆能力,然后处死,测定海马CAI区神经元的凋亡情况及p-JNK的表达水平.结果 与S组相比,两种大鼠的I/R组学习能力和记忆能力下降,海马CAI区神经元凋亡计数及p-JNK表达增加(P＜0.05).与WKY大鼠相比,SH大鼠的I/R组学习能力和记忆能力下降,海马CAI区神经元凋亡计数及p-JNK表达增加(P＜0.05).结论 脑缺血再灌注通过激活JNK导致WKY大鼠和SH大鼠认知功能减退及海马神经元凋亡,SH大鼠更敏感.     

二氮嗪预处理对大鼠海马神经细胞缺氧复氧时c-Jun氨基末端激酶表达的影响

目的 评价二氮嗪预处理对大鼠海马神经细胞缺氧复氧时c-Jun氨基末端激酶(JNK)表达的影响.方法 SD大鼠100只,出生<24 h,体重5～6 g,断头取海马组织,制备海马神经细胞悬液,海马神经细胞接种于96孔板或直径35 mm培养皿中,培养9～10 d后,随机分为4组,每组36孔或8皿:对照组(C组)、缺氧复氧组(A/R组)、二氮嗪30 μmol/L组(D1组)和二氮嗪100 μmol/L组(D2组).C组不行任何处理;A/R组置于特制的无菌密闭容器,容器中通人95%N2-5%CO2混合气体,流速0.2 L/min,4 h后放回原培养箱继续培养24 h;D1组和D2组在培养液中加入二氮嗪,终浓度分别为30、100 μmol/L,孵育1 h后用全量培养液洗脱,1次/d,连续3 d,随后处理同A/R组.于培养24 h时行免疫组化染色,观察神经细胞病理学结果 ,四甲基偶氮唑蓝比色法测定海马神经细胞活力,Westernblot法测定海马神经细胞Bcl-2、Bax和JNK的表达.结果 与C组比较,其余3组海马神经细胞Bcl-2、Bax和JNK表达均上调,活力降低(P<0.05或0.01);与A/R组比较,D2组海马神经细胞Bcl-2表达上调,Bax和JNK表达下调,活力升高(P<0.05或0.01),D1组上述指标差异无统计学意义(P>0.05).结论 二氮嗪预处理可能通过下调JNK的表达,抑制JNK信号通路,维持Bcl-2与Bax的平衡,减轻大鼠海马神经细胞缺氧复氧损伤.     

异丙酚对大鼠窒息性心脏停搏复苏后海马c-JUN氨基末端激酶活化的影响

目的 探讨异丙酚对大鼠窒息性心脏停搏复苏后海马c-JUN氨基末端激酶(JNK)活化的影响.方法 雄性SD大鼠40只,6月龄,体重350 ～ 380 g,采用随机数字表法,将其分为4组(n=10),假手术组(S组)仅动静脉置管和气管插管而不制备窒息性心脏停搏;窒息性心脏停搏复苏组(CA-CPR组)采用窒息法建立CA-CPR模型;异丙酚组(P组)于窒息前30 min静脉注射异丙酚20mg/kg,继之以40 mg·kg-1 ·h-1的速率静脉输注至复苏开始;生理盐水组(NS组)以等容量生理盐水替代异丙酚,余处理同P组.成功复苏后12 h时,处死大鼠,取脑组织,测定湿/干重(W/D)比;采用免疫组化法和Western blot法测定海马磷酸化JNK(p-JNK)的表达水平,并观察海马病理学结果.结果 与S组比较,CA-CPR组、P组和NS组脑W/D比升高,海马p-JNK表达水平上调(P＜0.05或0.01);与CA-CPR组比较,P组脑W/D比降低,海马p-JNK表达水平下调(P＜0.05或0.01),NS组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).P组海马病理学损伤较CA-CPR组减轻.结论 异丙酚可抑制大鼠窒息性心脏停搏复苏后脑组织JNK的活化,从而减轻脑损伤.     

亚低温对前脑缺血再灌注损伤沙土鼠海马p-ERK、p-JNK水平的影响

目的 研究亚低温对前脑缺血再灌注损伤沙土鼠海马磷酸化胞外信号调节激酶（p-ERK）及磷酸化c-Jun氨基末端蛋白激酶（p-JNK）水平的影响。方法 蒙古沙土鼠120只，随机分为4组（n=30）：常温假手术组（SH组）、常温缺血再灌注组（IR组）、低温假手术组（HSH组）、常温缺血低温再灌注组（HIR组）。腹腔注射1％戊巴比妥钠40mg／kg麻醉后，分离出双侧颈总动脉，IR组、HIR组分别夹闭双侧颈总动脉，5min后恢复脑血流灌注，IR组再灌注时维持正常体温（36．5—37．5℃），HIR组再灌注即刻开始降温，10min内降至32．5—33．5℃，并维持4h；SH组、HSH组只分离双侧颈总动脉不夹闭，SH组维持正常体温，HSH组分离双侧颈总动脉后5min开始降温，10min内降至32．5—33．5℃，并维持4h。每组于再灌注2h,4h、1d、3d、5d分别随机取6只动物，采用开阔法观察沙土鼠的行为学，行为学观察完毕立即处死大鼠，取脑组织，采用TUNEL法检测海马CA1区、CA3区细胞凋亡情况，免疫组化法测定海马CA1区、CA3区、DG区p-ERK、p-JNK的水平。结果HIR组再灌注1—5d沙土鼠行为学异常及海马凋亡细胞计数较IR组降低（P〈0．01）；与SH组或HSH组比较，IR组及HIR组再灌注期间海马CA3区及DG区p-ERK水平增加（P〈0．05），但IR组与HIR组比较差异无统计学意义；4组海马CA1区均无p-ERK表达。与sH组比较，IR组再灌注2h-5d海马CA1区、CA3区p-JNK水平增加，且HIR组再灌注2h-1d海马CA1区、CA3区p-JNK水平低于IR组（P〈0．05）。结论 亚低温（32．5-33．5℃）4h可减轻沙土鼠脑缺血再灌注损伤，其机制与抑制再灌注早期p-JNK的激活有关，而与p-ERK水平无关。     

c-Jun氨基末端激酶信号通路在高氧诱导A549细胞凋亡中的作用

目的 探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路在高氧诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞A549细胞凋亡中的作用.方法 培养A549细胞,以1×105/ml密度接种于6孔板(1 ml/孔)或10 cm培养皿(5ml/皿),采用随机数字表法,将其随机分为4组(n=12):空气对照组(C组)和空气+JNK抑制剂组(C+S组)、高氧组(O2组)和高氧+JNK抑制剂组(O2+S组).C+S组和O2+S组均加入终浓度为5μmol/L的JNK抑制剂SP600125.将细胞分别放入空气或95％O2中进行培养,培养24h时测定细胞存活率、细胞裂解液中Fas-L和裂解caspase-3表达水平.结果 与C组比较,C+S组细胞存活率、Fas-L和裂解caspase-3表达差异无统计学意义(P＞0.05),O2组细胞存活率降低,Fas-L和裂解caspase-3表达上调(P＜0.05);与O2组比较,O2+S组细胞存活率升高,Fas-L及裂解caspase-3表达下调(P＜0.05).结论 JNK信号通路参与了高氧诱导A549细胞凋亡.     

乳化异氟醚预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注时脑组织突触后致密物质95活化的影响

目的 探讨乳化异氟醚预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注时脑组织突触后致密物质95(PSD95)活化的影响.方法 雄性清洁级SD大鼠32只,体重280 ～ 300 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为4组(n=8):假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)、乳化异氟醚组(EI组)和脂肪乳剂组(LE组).采用大脑中动脉阻塞法制备局灶性脑缺血再灌注模型.EI组和LE组分别腹腔注射8％乳化异氟醚10.5 ml/mg或30％脂肪乳10.5 ml/mg,24h后制备模型.再灌注6h时行神经功能缺陷评分,随机取4只大鼠,处死后取缺血侧海马和皮层组织,采用Western blot法检测磷酸化的PSD95( pPSD95)的表达水平.再灌注24 h时,随机取4只大鼠,处死后取脑组织,计算脑梗死体积百分比.结果 S组未见神经功能缺陷和脑梗死发生.与S组比较,I/R组、EI组和LE组神经功能缺陷评分、脑梗死体积百分比、海马和皮质pPSD95表达水平升高(P＜0.01);与I/R组比较,EI组神经功能缺陷评分、脑梗死体积百分比、海马和皮质pPSD95表达水平降低(P＜0.05),LE组差异无统计学意义(P＞0.05).结论乳化异氟醚可通过抑制脑组织PSD95的活化,减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤.     

异氟醚后处理对局灶性脑缺血-再灌注大鼠海马神经损伤的影响

目的观察异氟醚后处理是否通过Wnt/β-catenin信号通路减轻局灶性脑缺血-再灌注损伤(cerebral ischemia-reperfusion injury,CIRI)大鼠海马神经元损伤。方法 60只雄性SD大鼠随机分为五组,每组12只。采用大脑中动脉栓塞法(middle cerebral artery occlusion,MCAO)缺血90min、再灌注24h制备大鼠局灶性CIRI模型:假手术组(S组)、模型组(M组)、异氟醚后处理+模型组(MI组)、Wnt/β-catenin拮抗剂Dicckkopf-1(DKK-1)+异氟醚后处理+模型组(MDI组)、DKK-1+模型组(MD组)。S组仅分离暴露一侧颈内动脉,不插入线栓。MI和MDI组于再灌注即刻行1.5%异氟醚后处理60min。MDI组和MD组于建立模型前30min行侧脑室注射DKK-1(5μg/kg)。所有模型组大鼠在再灌注24h后,采用Longa评分法进行神经行为学评分,HE染色观察神经细胞形态学变化,免疫组化检测大鼠海马CA1区β-catenin的表达,Tunel荧光检测大鼠海马CA1区神经细胞凋亡情况,Western Blot检测Bcl-2、Bax、β-catenin及GSK-3β蛋白含量,并计算Bcl-2/Bax比值。结果与S组比较,M组大鼠神经行为学评分、神经细胞损伤及凋亡数目、Bax以及GSK-3β蛋白含量均明显增加(P0.05),而β-catenin蛋白含量及Bcl-2/Bax比值明显减少(P0.05)。与M组比较,MI组大鼠神经行为学评分、神经细胞损伤及凋亡数目以及Bax蛋白含量明显减少(P0.05),Bcl-2和β-catenin蛋白含量以及Bcl-2/Bax比值明显增加(P0.05)。与MI组比较,MDI组大鼠神经行为学评分、神经细胞损伤及凋亡数目及Bax、GSK-3β蛋白含量明显增加(P0.05),而Bcl-2、β-catenin蛋白含量及Bcl-2/Bax比值明显减小(P0.05)。结论异氟醚后处理可能是通过影响Wnt/β-catenin信号通路,调控Bcl-2及Bax的表达,从而减轻局灶性CIRI大鼠海马神经元损伤。     

缺血预处理对脑缺血再灌注损伤沙土鼠海马细胞外信号调节激酶和c-jun氨基末端激酶表达的影响

目的 探讨缺血预处理(IP)对脑缺血再灌注损伤沙土鼠海马细胞外信号调节激酶(ERK)和c-jun氨基末端激酶(JNK)表达的影响。方法 蒙古沙土鼠,雌雄不拘,随机分为假手术组、预处理对照组(IC组)、预处理缺血组(IP组)及脑缺血再灌注组(IR组),各组根据再灌注15 min、2 h、4h、6 h、1 d、3 d、5 d及7 d又分8个亚组,每亚组6只动物。建立沙土鼠前脑缺血再灌注损伤模型。在预定时间点行开阔法行为学检查、组织形态学检查、TUNEL法海马CA1及CA3区凋亡细胞检测、免疫组织化学SP法测定p-ERK、p-JNK在海马区的变化。结果 与IR组比较,IP组沙土鼠探索活动减弱,海马CA1、CA3区凋亡锥体细胞数量减少,存活神经元数量增加(P<0.01)。各组CA1区p-ERK无表达,IR组海马CA1区p-JNK的表达增强,IP组CA1区p-JNK的表达减弱(P<0.01),CA3区p-ERK的表达增强(P<0.05或0.01)。结论 通过抑制CA1区p-JNK表达和加强CA3区p-ERK表达,IP保护脑缺血再灌注损伤的脑神经元。     

亚低温对短暂性脑缺血再灌注老龄大鼠海马葡萄糖调节蛋白78表达的影响

目的 探讨亚低温对短暂性脑缺血再灌注老龄大鼠海马葡萄糖调节蛋白78(GRP78)表达的影响.方法 健康雄性老龄SD大鼠144只,体重450～550 g,采用随机数字表法,将其随机分为3组(n=48):假手术组(S组)、脑缺血再灌注组(I/R组)、全身亚低温组(H组).采用四血管阻断法建立全脑缺血再灌注模型,脑缺血5 min再灌注.H组于再灌注即刻向大鼠全身喷洒酒精行体表降温,维持直肠温32～34℃3h.分别于再灌注6、12、24、48 h时,采用免疫组织化学方法和Western blot法测定海马GRP78的表达;HE染色法计数海马存活神经元数目.结果 与S组相比,I/R组再灌注各时点海马存活神经元计数降低,再灌注6、12、24 h时海马GRP78表达上调,再灌注48 h时表达下调,H组再灌注各时点海马存活神经元计数降低,海马GRP78表达上调(P＜0.05);与I/R组相比,H组再灌注12、24和48 h时海马存活神经元计数升高,再灌注各时点GRP78表达上调(P＜0.05).结论 亚低温可进一步上调老龄大鼠短暂性脑缺血再灌注时海马GRP78的表达,从而减轻内质网应激反应,减轻脑损伤.     

丹酚酸A复合右美托咪定对脑缺血-再灌注损伤大鼠海马神经元凋亡的影响

目的探讨丹酚酸A复合右美托咪定对脑缺血-再灌注损伤大鼠海马神经元凋亡及Sirt1-p53通路的影响。方法选择SD大鼠90只,体重160~230 g,随机分为五组:假手术组(S组)、缺血-再灌注组(IR组)、丹酚酸A干预组(A组)、右美托咪定干预组(D组)、丹酚酸A复合右美托咪定干预组(AD组),每组18只。采用线栓法建立大脑中动脉缺血-再灌注损伤模型。脑缺血-再灌注24 h后,检测大鼠血流动力学情况,Morris水迷宫实验观察第1、2、3、4、5天逃避潜伏期、穿越平台次数,评估神经功能缺损评分。采用TUNEL法检测海马神经细胞凋亡,黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性,硫化巴比妥酸法测定MDA含量,免疫组织化学法检测海马组织Bcl-2和Bax蛋白含量,Western blot法检测海马组织Sirt1和乙酰化p53蛋白含量。结果与S组比较,IR组、A组、D组和AD组第1、2、3、4、5天逃避潜伏期明显延长(P<0.05),穿越平台次数明显减少(P<0.05),HR明显减慢(P<0.05),MAP、CO明显降低(P<0.05),神经功能缺损评分明显升高(P<0.05),海马组织凋亡细胞百分比、MDA含量、Bax和乙酰化p53蛋白含量明显升高(P<0.05),海马组织SOD活力、Bcl-2和Sirt1蛋白含量明显降低(P<0.05)。与IR组比较,A组、D组和AD组第1、2、3、4、5天逃避潜伏期明显缩短(P<0.05),穿越平台次数明显增多(P<0.05),HR明显增快(P<0.05),MAP、CO明显升高(P<0.05),神经功能缺损评分明显降低(P<0.05),海马组织凋亡细胞百分比、MDA含量、Bax和乙酰化p53蛋白含量明显降低(P<0.05),海马组织SOD活力、Bcl-2和Sirt1蛋白含量明显升高(P<0.05)。与A组、D组比较,AD组第1、2、3、4、5天逃避潜伏期明显缩短(P<0.05),穿越平台次数明显增多(P<0.05),HR明显增快(P<0.05),MAP、CO明显升高(P<0.05),神经功能缺损评分明显降低(P<0.05),海马组织细胞凋亡百分比、MDA含量、Bax和乙酰化p53蛋白含量明显降低(P<0.05),海马组织SOD活力、Bcl-2和Sirt1蛋白含量明显升高(P<0.05)。结论丹酚酸A复合右美托咪定可显著降低脑缺血-再灌注损伤大鼠海马神经元凋亡,其作用可能与Sirt1-p53通路有关。     

川芎嗪预先给药对胎鼠海马神经细胞缺氧/复氧时c-fos和HSP70表达的影响

目的 探讨川芎嗪预先给药对胎鼠海马神经细胞缺氧/复氧时c-fos和热休克蛋白70(HSP70)表达的影响.方法 胎鼠海马神经细胞培养鉴定后,随机分为5组(n=24):正常对照组(C组)、缺氧/复氧损伤组(A/R组)、不同浓度川芎嗪预先给药组(L组、M组和H组).C组不制备缺氧/复氧模型;A/R组、L组、M组和H组制备缺氧/复氧模型;L组、M组和H组加入川芎嗪,终浓度分别为60、200和800μg/ml,孵育1 h后制备缺氧/复氧模型.缺氧/复氧模型制备方法:海马神经细胞置入90%N2-10%CO2培养箱中孵育2 h诱导缺氧,然后放入37 ℃、5%CO2培养箱中复氧24 h.处理结束后测定海马神经细胞凋率、细胞活力、c-fos和HSP70的表达水平.结果 与C组比较,A/R组、L组和H组海马神经细胞活力降低,细胞凋亡率升高(P＜0.01);与A/R组比较,L组、M组和H组海马神经细胞活力升高,细胞凋亡率降低,c-fos表达下调,HSP70表达上调(P＜0.05);与L组比较,M组和H组海马神经细胞活力升高,细胞凋亡率降低,c-fos表达下调,HSP70表达上调(P＜0.05);与M组比较,H组细胞活力下降,细胞凋亡率升高,c-fos表达上调,HSP70表达下调(P＜0.01).结论川芎嗪预先给药抑制胎鼠海马神经细胞缺氧/复氧时细胞凋亡的机制可能与下调c-fos表达,上调HSP70表达有关.     

异丙酚预先给药对大鼠局灶性脑缺血再灌注时脑组织p-JNK、MMP-9和AQP-4表达的影响

目的 评价异丙酚预先给药对大鼠局灶性缺血再灌注时脑组织磷酸化c-Jun氨基末端蛋白激酶(p-JNK)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和水通道蛋白-4(AQP-4)表达的影响.方法 健康成年雄性SD大鼠72只,体重250～280g,随机分成4组(n=18):假手术组(S组);脑缺血再灌注组(IR组)于缺血前30 min腹腔注射生理盐水10ml/kg;不同浓度异丙酚预先给药组(P1组和P2组)于缺血前30 min分别腹腔注射0.5%或1%异丙酚10 ml/kg.IR组、P1组和P2组采用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,缺血2 h,再灌注24 h.大鼠清醒后,进行神经功能缺陷评分.再灌注24 h时处死大鼠,处死前1 h股静脉注射2%伊文氏蓝(EB)溶液3 ml/kg,处死后取脑组织,测定含水量、EB含量、p-JNK、MMP-9和AQP-4的表达水平.结果 与S组比较,IR组、P1组和P2组神经功能缺陷评分、脑组织含水量和EB含量升高,p-JNK、MMP-9和AQP-4的表达上调(P＜0.05);与IR组比较,P1组和P2组神经功能缺陷评分、脑组织含水量和EB含量降低,p-JNK、MMP-9和AQP-4的表达下调(P＜0.05);与P1组比较,P2组脑组织p-JNK和MMP-9的表达下调(P＜0.05),神经功能缺陷评分、脑组织含水量、EB含量和AQP-4表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 异丙酚预先给药可通过抑制JNK信号通路的激活,抑制脑组织MMP-9和AQP-4的表达上调,减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤.