血清白介素8固相放射免疫法的建立及应用

本方法将兔抗人白介素8(IL-8)特异性抗体IgG包被塑料试管内壁,建立了一种快速、简便、高灵敏、特异的固相竞争放射免疫分析法(RIA)测定人血清中的IL-8.标准曲线范围为0.2～9.6ng/mL,最小检出值和正常值分别为0.16 ng/mL和0.30±0.05ng/mL.批内CV%为6.8%,批间CV%为9.6%.本文所建的固相RIA法与液相RIA法平行测定58份样品的IL-8浓度(0.26～3.56 ng/mL),经统计学处理,两者之间具有良好的直线相关(r=0.954,P<0.001,Y=0.994X).表明本文建立的固相RIA法可以代替液相RIA法测定血清IL-8浓度,并适用于大批样品和自动化检测.     

HCGRIA在先兆流产过程中的应用

本文报道我院自1988年2月23日～1996年4月20日用血清HCG RIA对315例先兆流产孕妇进行390次检测,现将结果报告如下。 资料和方法 一、对象: (一)对照组:正常早孕妇女100例为对照组,停经后最短为36天,最长为85天,年龄22～28岁,均经B超、乳胶试验证实为早孕。 (二)先兆流产孕妇315例为本院妇产科住院病人,年龄21～38岁,为健康生育妇女,无并发症及其他疾病。 二、方法: (一)空腹抽晨血2ml离心分离血清待测。 (二)HCG RIA kit由上海放射免疫分析技术研究所及山东潍坊3V诊断技术公司提供,按说明书操作。 (三)采用核工业部北京核仪器厂产FT-613型自动计算~(125)I放免测量仪进行放射性测量。 结果 一、正常早期妊娠妇女血清HCG RIA值:本组100例除1例停经36天早早孕HCG RIA测定值为190ng/ml,其余均>300ng/ml,临床及B超、乳胶试验证实妊娠,HCG RIA;阳性率100％。测值范围1821.81±1520.45ng/ml((?)±SD)。血清HCG高峰期出现在停经后第7～8周之间,所以各时相的HCGRIA值波动范围较大。 二、先兆流产孕妇血清HCG RIA值,先兆流产315例,入院后均做血清HCG RIA测定,经临床治     

癌胚抗原时间分辨荧光免疫测定法

本文报告了癌胚抗原时间分辨荧光免疫测定法。采用McAb包被微量滴定条,以双功能基团螯合剂标记Eu~(3+)为示踪物。本法最小检出值为0.7ng/ml,标准曲线范围为2.5～500ng/ml,批内和批间CV平均为7.09％和10.56％,回收率为106.00％。测定方法简便快速,每天一个技术人员可完成300份样品。     

原发性肝癌AFP值正常或低度升高的原因分析和对策

甲胎蛋白(AFP)是原发性肝癌的特异标志物,阳性率在70～90％,以血清AFP>400ng/ml作为诊断标准,其特异性在95％以上。但有10～30％左右的原发性肝癌不分泌AFP或低度升高,这给临床诊断和鉴别诊断带来很大困难。为此,我们收集本院确诊的402例原发性肝癌中AFP正常或低度升高共79例,占19.7％。本文对其原因进行分析和提高确诊率的办法作初步探讨,以供参考。材料和方法一、资料来源:收集本院近5年确诊原发性肝癌402例,其中经病理或手术证实76例。二、检查方法:采用AFP-RIA(双抗法),部份病例作了动态测定,或与CEA、CA50、SF作联合测定。AFP正常值<25ng/ml,低度升高<100ng/ml,中度升高为100～400ng/ml,>400ng/ml为确诊阈值。     

Leptin固相放射免疫分析法的建立

目的：研究瘦素（Leptin）固相放射免疫分析法的建立。方法：将提取的兔抗人Leptin特异性抗体IgG,包被在活化的塑料试管内壁,建立了简便、快速、高灵敏、特异的固相竞争RIA,测定人血清Leptin。结果：标准曲线范围为（0.5～24）ng/ml;测定69例健康人血清正常值为（3.68±1.46）ng/ml;最小检出值为0.38ng/ml,批内CV%为5.6%,批间CV%为8.8%;回收率为92%。本文所建方法与液相RIA标准曲线具有良好的平行性;使用两种方法平行测定88份血清Leptin浓度（1.00～7.68）ng/ml,经统计学处理两者之间具有良好的直线相关（r=0.987,P〈0.001,Y=0.977X）。结论：所建立的Leptin固相放射免疫分析法为科研及临床病人血清Leptin浓度的测定提供了一种新的检测方法。     

用单克隆抗体ELISA一步法检测人血清甲胎蛋白

<正> 检测人血清中甲胎蛋白(AFP)含量的方法,历经不断改进,其灵敏度已由 30000ng/ml提高到 0.1～10ng/ml,阳性率也从70％提高到90%以上。但目前所用抗体大多为异种动物免疫血清,生产工艺复杂,批间差异较大,难以标准化。单克隆抗体(McAb)的问世,为免疫学诊断提供了良好的工具。本文运用两种AFP McAb建成检测AFP的ELTSA一步法,以期开发新一代诊断试剂。     

时间分辨荧光免疫分析法测定人血清α-FP

本文报告应用时间分辨荧光免疫分析技术测定人血清α-FP浓度。研究结果表明,将BAS引入该技术,使方法学稳定性和灵敏度有明显提高。本法批内CV为3.8～5.2％。批间CV为4.80～12.3％,最小检出值<1ng/ml,平均回收率为102.8％。健康成人测定参考值为5.56±5.38ng/ml(±SD)。聚苯乙烯微量滴定孔条经戊二醛处理后可提高包被抗体含量。     

生物样品中普鲁托品的HPLC测定方法和普鲁托品在大鼠体内药代动力学

本文建立了反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定大鼠血浆、尿、粪、肝组织匀浆中药物浓度的方法。流动相为甲醇、水和10％冰醋酸,以C_(18)柱分离,紫外检测波长为285um,生物样品在碱性条件下经两次乙醚处理可获得良好分离。血浆样品最低检测浓度为50ng/ml,组织样品最低检测浓度为25ng/ml,日内精密度为2.08％～3.06％,日间精密度为1.04％～3.92％,平均方法回收率为96.00％～103.81％。为全面了解普鲁托品(protopine)在大鼠体内代谢过程,给大鼠尾静脉注射protopine 10mg/kg后,测定不同时间各组织和体液中protopine的含量。结果表明,protopine在大鼠     

超高效液相色谱法测定紫杉醇注射液中的有关物质

目的 建立测定紫杉醇注射液有关物质的超高效液相色谱法。方法 采用Thermo Hypersil GOLD C₍18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.9μm),以水和乙腈为流动相,流速为0.6 ml/min,检测波长227 nm,采用主成分自身对照法测定有关物质含量。结果 在15min内紫杉醇与相邻杂质以及各杂质间分离度均满足要求。检出限和定量限分别为0.053 ng和0.11 ng,质量浓度在1.21～4.85μg/ml范围内线性关系良好,加样回收率为99.84%,RSD为2.80%(n=9)。两批市售样品均检出杂质Ⅰ和杂质Ⅲ,杂质含量均符合Ch P2020规定。结论 本文建立的超高液相色谱法能够准确、快速完成紫杉醇注射液有关物质测定。     

45例原发性肝细胞肝癌患者血清AFP,SF,RIA的结果观察

我们对45例原发性肝细胞肝癌患者血清进行了AFP、SF的联合测定,并将结果进行分析,现报告如下。 对象和方法 一、对象: (一)正常对照组:系本院血库献血员及本院托儿所工作的健康人员50例。 (二)肝癌组:系本院门诊和住院患者45例,均为放射性核素扫描以及彩超证实肝内占位性病变,临床确诊的肝癌患者。 二、方法: (一)SF(双抗)试剂盒:由上海生物制品研究所供应。 (二)AFP(双抗)试剂盒:巾上海生物制品研究所供应。 (三)仪器:使用上海原子核研究所日环仪器厂生产的SN—682型放射免疫γ计数器。 结果 一、正常组:50例SF测定值为24～162ng/ml,均值为49.64±24.53ng/ml。 二、肝癌组:45例血清标本同时进行SF和AFP测定,其结果分别为200～500↑ng/ml,均值为438.40±80.26ng/ml与42～400↑ng/ml,均值为345.53±115.318ng/ml(表1)。 45例原发性肝细胞肝癌患者血清标本中测定结果,SF含量高于500ng/ml有20例(44.44％)(20/45),300～500ng/ml有21例(46.66％)(21/45),200～250ng/ml有4例(8.88％)(4/5)。且这45例肝癌血清标本同时进行AFP测定,>400ng/ml有34例(75.55％)(31/45),100～400ng/ml有7例(15.55     

测定尿激酶含量夹心法ELISA的建立

采用两种识别不同抗原决定簇的抗尿激酶(UK)单克隆抗体建立了测定人 UK 含量的夹心法ELISA.本法灵敏度为0.15ng/ml,批内 CV4.3%,批间 CV8.7%,平均回收率98%.应用本法测定了部分正常细胞和肿瘤细胞株培养上清中的 UK 含量,肿瘤细胞培养上清 UK 量明显高于正常细胞.测定82名正常人血浆中 UK 含量,其结果为1.31±0.6ng/ml.     

磁性分离酶免疫法在唐氏综合征产前筛查中的应用

目的 :探讨磁性分离酶免疫分析技术 (magnetic -separatedenzymeimmunoassay ,MEIA)在唐氏综合征产前筛查中的实用性。方法 :对MEIA方法测定孕中期母血清甲胎蛋白 (AFP)和游离 β -绒毛促性腺激素 (β -HCG)含量进行方法学检测 ,同时与酶联免疫吸附法 (ELISA)和放射免疫法 (RIA)相比较。并通过检测及随访 1745例孕产妇建立了青岛地区孕中期母血清各孕周AFP、β-HGC中位数值。结果 :MEIA -AFP方法的灵敏度 <0 .2 1IU/ml,批内平均变异系数 (CV)为 4.7% ,批间平均CV为 6 .8% ,平均回收率为 97.4% ,与ELISA、IRMA法高度相关 (r=0 .90 0和 0 .986 )。MEIA - β -HCG方法的灵敏度为 1mIU/ml,批内平均CV为 2 .4% ,批间平均CV为 2 .4% ,平均回收率为 99.6 % ,与ELISA、IRMA法高度相关 (r=0 .942和 0 .976 )。建立了青岛地区孕中期产前筛查各孕周中位数值 ,其随孕周变化趋势与文献报道一致。筛查中暂未发现漏检病例。结论 :MEIA方法适用于测定孕中期母血清AFP和 β -HCG含量 ,进行唐氏综合征和开放性神经管畸形的产前筛查。     

磁微粒化学发光法的肝纤四项检测限与功能灵敏度研究

目的 评价磁微粒化学发光法检测肝纤维化血清学标志物(透明质酸、层粘连蛋白、Ⅲ型前胶原N端肽、Ⅳ型胶原)的空白限、检出限和功能灵敏度.方法 参照美国临床和实验室标准化协会(Clinical and Laboratory Standards Institute, CLSI)文件,利用空白样品及系列梯度稀释样品在AutoLumo A2000全自动化学发光测定系统上进行检测,确定该方法配套试剂的空白限、检出限及功能灵敏度.结果 透明质酸的空白限为7.59ng/mL、检出限为16.17ng/mL、20％变异系数(coefficient of variation,CV)功能灵敏度为18.72ng/mL;层粘连蛋白的空白限为1.38ng/mL、检出限为3.53ng/mL、20％ CV功能灵敏度为4.16ng/mL;Ⅲ型前胶原N端肽的空白限为0.89ng/mL、检出限为2.40ng/mL、20％ CV功能灵敏度为2.48ng/mL;Ⅳ型胶原的空白限为2.42ng/mL、检出限为6.49ng/mL、20％ CV功能灵敏度为9.21ng/mL.结论 全自动化学发光测定肝纤四项的空白限、检出限和功能灵敏度的建立为临床诊断和治疗提供了更有价值的信息.     

合肥地区正常人血清CEA、AFP RIA含量

我们对291人(男228人,女63人)健康人进行了血清CEA、AFP RIA检测。CEA、AFP RIA药盒由上海放射免疫分析技术研究所供应,按说明书操作。仪器使用上海技术监督局实验工厂生产的FMJ-Ⅱ型γ计数器。CEA正常值文献报道各有不同。苏州医学院杨永青报告正常值>7ng/ml为阳性;Trovillas报道,正常人血清中CEA为2.4ng/ml;全国临床检     

纤维素固相放射免疫测定甲胎蛋白

本文在国内首次报道了纤维素固相RIA法测定甲胎蛋白。本法简便灵敏,快迅稳定,平均回收率95.7±8.08％,批间变异系数r=7.8±1.7％,批内变异系数r=5.8±2.6％,线性关系较好(r=0.999),灵敏度比液相RIA提高6倍,32份血样品用双位点夹心法和试剂盒的液相RIA进行比较,结果经统计学处理,相关系数分别为r=0.82,r=0.80,均具有显著相关性。     

人IGF-Ⅱ RIA的建立及初步应用

目的:建立高特异性和高灵敏度的人胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)放射免疫分析方法,用于测定人血清以及培养液中IGF-Ⅱ水平。方法:用人工合成的IGF-Ⅱ多肽连接甲状腺球蛋白,多次免疫兔子获取高效价、高特异的人IGF-Ⅱ抗体。用氯氨T法制备125I标记的IGF-Ⅱ,经交联葡聚糖凝胶(Sephadex G-25)纯化。抗原抗体反应采用平衡一步法,4℃温浴24h后经PR试剂分离结合和游离的标记抗原。用该法测定正常献血员150例和肝癌患者180例,并比较了肝癌患者介入治疗前后IGF-Ⅱ水平的变化。结果:该法测定范围为(0.1～24.3)ng/ml,最低检出值<0.1ng/ml,批内和批间误差<6.3%和10.0%。正常献血员血清IGF-Ⅱ水平(1.266±0.298)ng/ml明显低于肝癌各组患者(P<0.05);肝癌患者进行介入治疗3d后IGF-Ⅱ水平(4.263±1.411)ng/ml明显低于治疗前(4.916±1.24)ng/ml(P<0.05);介入治疗后3d与治疗后1个月(4.796±1.647)ng/ml水平相比无明显差异。结论:该法稳定、简便、特异、灵敏,适于检出人血清中的IGF-Ⅱ水平。     

小鼠抗KLH多克隆抗体的制备及TDAR实验间接ELISA定量检测方法的建立北大核心CSCD

目的:通过制备小鼠抗KLH多克隆抗体,优化反应条件建立KLH特异性抗体ELISA定量分析方法,以期提供一种特异性好、灵敏度高及误差低的TDAR实验检测方法。方法:利用盐析沉淀和亲和层析纯化技术分离和纯化小鼠抗KLH特异性多克隆IgG抗体;以纯化后的抗体作为标准品,建立TDAR实验间接ELISA定量检测方法,并对该方法进行线性范围、特异性、变异系数(CV)及检测限验证。结果:以KLH包被浓度为80μg/ml,山羊抗小鼠IgG/HRP酶标二抗的稀释倍率为1∶20000条件进行间接ELISA定量分析的方法学验证,检测线性范围为390.63~25000 ng/ml,R^(2)=0.9848,线性良好;批内和批间CV均<10%;检测限为194.83 ng/ml。结论:通过制备抗KLH多克隆抗体,并优化实验反应条件来建立间接ELISA定量分析方法,其线性范围、特异性及批内、批间CV均满足实验要求,是一种高灵敏度的TDAR实验检测方法。     

HCG放射免疫分析与电化学发光分析的比较

2 2　重复性测定　分别用两种方法对各自的质控 1、质控 2浓度样本进行 10个批次以上的HCG测定。RIA法批内变异系数分别为 8 6 2 %、8 73% ;批间变异系数分别为14 38%、9 0 9%。ECLIA法批内变异系数分别为 3 84 %、3 2 9% ;批间变异系数分别为 5 90 %、5 31%。3　讨论83份受检者用两种方法测出血清HCG结果的相关分析表明 ,放射免疫分析和电化学发光分析测定重复性均在允许范围内 ,重复性测定结果表明ECLIA法明显优于RIA法可达到批内CV <4 % ,批间CV <6 %。其原因可能为ECLIA法为全自动操作 ,保证各次实验条件一致 ,且方法学本身和试剂盒质量均优于RIA所致。RIA法系手工操作 ,易受操作者情绪、熟练程度等多方面的影响。两方法所测结果呈显著正相关 ,r =0 .84 9。ECLIA法未孕健康妇女HCG测值低于RIA法 ,而孕妇及患者则明显高于RIA法 ,ECLIA法最低可测值为 0 1U/L ,显示其灵敏度明显高于RIA法。两方法均能满足临床需要。ECLIA法灵敏、准确但价格昂贵。RIA法成熟、便宜、易于开展。     

尿微量白蛋白ELISA测定法及其临床应用

定期监测糖尿病患者的尿微量白蛋白,对尚处于可逆性阶段糖尿病性肾病的早期诊断具有重要价值。尿白蛋白也是高血压病引起血管损伤及肾血管早期病变的敏感指标。我们自制高效价抗人Alb血清、抗(人Alb)IgG-HRP酶标记结合物和抗(人Alb)IgG包被微孔滴定板,建立了一种灵敏、简便的尿微量白蛋白酶联免疫测定法,测定范围为5～500ng/ml;灵敏度0.76ng;批内CV％ 6.4％;批间CV％ 16.4％。24小时尿白蛋白排泌量,正常人为8.86(SD 9.23)mg/24h(n=80);糖尿病患者为40.4(SD 40.4)mg/24h(n=16);Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期高血压病患者分别为15.17(SD 14.42)mg/24h、21.46(SD 24.34)mg/24h和24.6(SD 18.9)mg/24h。     

铁蛋白时间分辨荧光免疫层析法的建立及临床应用

建立铁蛋白(FER)时间分辨荧光免疫层析检测法(TRFIA-POCT)并进行临床应用。将FER抗体和兔IgG包被在硝酸纤维素膜(NC膜)上,以荧光微球标记抗FER单克隆抗体及兔IgG分别作为检测线和质控线制备荧光免疫层析试纸条。FER-TRFIA-POCT的灵敏度为0.5ng/ml;批内CV为3.2%~4.6%,批间CV为3.8%~5.2%;平均回收率为100.5%;热稳定性好;与电化学发光分析技术(ECLIA)比对,相关系数达0.8898。正常参考值范围男性为90~350ng/ml,女性为30~260ng/ml。本法建立的FER-TRFIA-POCT是一个快速高灵敏和可靠的检测。