周期性单轴压应力下大鼠髁突软骨细胞早期应答机制的蛋白质组学初探

目的探讨体外周期性单轴压应力对大鼠髁突软骨细胞蛋白质表达的早期影响，为阐明髁突软骨细胞的力学应答反应机制奠定基础。方法对第三代大鼠髁突软骨细胞进行周期性单轴压应力加载，分为2000μstrain加力组和对照组、4000μstrain加力组和对照组，加力时间为60min；采用双向凝胶电泳技术和质谱鉴定分析软骨细胞蛋白质表达的变化。结果与对照组相比，2000μstrain加力组细胞蛋白质表达变化无统计学意义（P〉0．05）；4000μstrain加力组细胞蛋白质表达改变，3个新蛋白点出现，5个蛋白点消失，22个蛋白点表达下调，7个蛋白点表达升高（P〈0．05）。质谱鉴定其中8个差异蛋白点分别为细胞骨架相关蛋白（丙种肌动蛋白和中间丝波形蛋白）、糖代谢相关蛋白（烯醇酶α和应激70糖调控蛋白）、信号传导相关蛋白（Raf激酶抑制蛋白），以及几种蛋白复合物。结论在体外4000μstrain周期性单轴压应力刺激下，大鼠髁突软骨细胞的蛋白表达谱明显改变，这些差异蛋白可能参与早期的力学应答反应。     

周期性单轴压应力对大鼠髁突软骨细胞Stress70/GRP75的早期影响

目的:探讨体外周期性单轴压应力对大鼠髁突软骨细胞糖调控蛋白Stress70/GRP75的早期动态变化影响。方法:利用四点弯曲细胞力学加载仪,对第3代大鼠髁突软骨细胞进行体外周期性单轴压应力加载,力值为4000μstrain,时间分别为0、15、30、60、120、240min;采用Western免疫印迹技术和图像分析技术,研究大鼠髁突软骨细胞糖调控蛋白Stress70/GRP75的动态变化,对结果进行单因素方差分析。结果:4000μstrain周期性单轴压应力作用下,大鼠髁突软骨细胞糖调控蛋白Stress70/GRP75的表达发生变化,0min条带灰度值为114.2±5.08;30min时降至最低,为86.1±5.09(P<0.001);60min后有所回升,至104.0±4.41(P<0.01),但仍表达下调;120min后表达开始增强,灰度值为134.5±3.74(P<0.001)。结论:4000μstrain压应力刺激,对大鼠髁突软骨细胞糖调控蛋白Stress70/GRP75存在时间效应性,初期表达下调;随着应力加载时间延长,其表达反馈增强。     

体外周期性单轴压应力下髁突软骨细胞Raf激酶抑制蛋白(RKIP)的动态变化研究

目的:探讨体外周期性单轴压应力对大鼠髁突软骨细胞的Raf激酶抑制蛋白(RKIP)及其mRNA变化的早期影响,以助于阐明力学引起细胞应答反应的分子机制。方法:利用四点弯曲细胞力学加载仪对第3代大鼠髁突软骨细胞进行体外周期性单轴压应力加载,力值为4000μstrain,时间为0、15、30、60、120、240min。采用实时荧光定量PCR技术和Western blot免疫印迹技术研究大鼠髁突软骨细胞在周期性单轴压应力作用下RKIP及其mRNA变化。结果:大鼠髁突软骨细胞RKIP mRNA和蛋白表达呈现几乎相反的趋势。RKIP mRNA的表达于30min上升(P<0.001),60min达到高峰后迅速回落,低于细胞的正常基态水平;而RKIP的蛋白表达30min开始下调(P<0.001),持续至120、240min时回升。结论:RKIP在髁突软骨细胞的早期力学应答机制中可能扮演着相当重要的作用,其蛋白和mRNA水平表达变化不同,转录水平的调控最终要影响蛋白水平的表达。     

周期性单轴压应力对大鼠髁突软骨细胞早期增殖活性的影响

目的 探讨不同力值、不同时段体外周期性单轴压应力对大鼠髁突软骨细胞早期增殖活性及功能状态的影响。方法 分离培养大鼠髁突软骨细胞至第三代，利用四点弯曲细胞力学加栽仪进行体外周期性单轴压应力加裁，力值为2000和4000μ strain，时间0、15、30、60、120和240min；采用流式细胞计量术和MTT四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法研究大鼠髁突软骨细胞在周期性单轴压应力作用下增殖活性的变化。结果 2000μ strain周期性单轴压应力作用120min后，细胞增殖活性逐步增强，SPF增加（P〈0．001）；4000μstrain周期性单轴压应力作用60min后，髁突软骨细胞SPF出现了一明显下降，相反G2期细胞比例增高（P〈0．001）；120min后S期、G2细胞比例开始恢复，240minSPF增加（P〈0．001）。加力后1、2、3天，实验组细胞的增殖活性与对照组相比无统计学差异。结论 2000ttstrain周期性单轴压应力刺激能促进大鼠髁突软骨细胞增殖活性逐步增强；而4000μ strain周期性单轴压应力能引起细胞增殖活性早期发生变化，表现为先抑制后促进。两组细胞增殖活性变化均为暂时性、可恢复的。     

周期性单轴压力对大鼠髁突软骨细胞结缔组织生长因子表达的影响

目的 探讨在髁突软骨细胞受到周期性单轴压力后,结缔组织生长因子(connective tissuegrowth factor, CTGF)表达的影响,为正畸治疗中髁突软骨受力后的改建提供生物学依据。方法 选取1周龄SD大鼠,提取并培养髁突软骨细胞,免疫组化鉴定。利用四点弯曲细胞力学加载仪对第3代细胞进行力值为2000u strain、0.5Hz的体外周期性单轴压力加载,分别在加力0min、30min、60min和120min后继续培养24h,应用蛋白印迹法检测在不同加力时间CTGF蛋白表达的变化。应用SPSS18.0软件对数据进行统计学分析。结果 CTGF的相对蛋白量在加力0min、30min、60min和120min后,分别为0、1.59、2.34和3.16,随着加载时间的增加,表达呈逐渐上升趋势。且组间差异具有统计学意义(P<0.05) 结论 周期性单轴压力可刺激大鼠髁突软骨细胞CTGF的表达。     

动态张、压应力刺激下人牙周膜成纤维细胞细胞骨架变化

目的:观察不同动态张、压应力刺激下人牙周膜成纤维细胞细胞骨架的变化.方法:用Forcel四点弯曲加载装置对体外培养的人牙周膜成纤维细胞分别施加不同动态的张、压应力(强度为1 000、2 000、4 000 μstrain,加力时间为0、1、2、4、8、12 h),经荧光倒置显微镜观察施加不同动态张、压应力后细胞形态变化,细胞骨架荧光染色强度测定分析细胞骨架F-actin表达量的变化.结果:加力后细胞骨架形态和微丝蛋白发生规律性变化;细胞F-actin荧光染色强度正常→下降→正常;细胞骨架对张、压应力作用的反应敏感程度无明显差异.结论:在一定的张、压应力范围内人牙周膜成纤维细胞细胞骨架的形态结构具有一定的稳定性.     

体内压应力刺激下大鼠髁突软骨细胞的分离、体外培养以及差异蛋白质组学观察

目的：观察体内压应力刺激下大鼠髁突软骨细胞的生物学活性和蛋白质表达谱。方法：对大鼠进行III类矫形力应力加载2周,观察髁状突大体形态和组织形态学;体外培养实验鼠和对照鼠软骨细胞,计数细胞收获数和细胞存活率,检测总蛋白质组学水平上差异。结果：压力刺激后的大鼠髁突软骨明显变薄,表面无光泽,缺乏弹性,重量降低（P＜0．01）;力学刺激后髁突软骨细胞收获率和存活率均下降（P＜0．01）,形态更加狭长;蛋白质组学结果主要为应激蛋白上调,信号转导蛋白活化,细胞骨架蛋白和细胞增殖代谢相关蛋白的下降。结论：经体内力学加载后,体外分离培养的关节软骨细胞形态、生物学活性以及在蛋白质水平均发生了明显的变化。     

口腔组织病理学

犬脱钙骨基质复合骨髓间充质干细胞的体外培养;Hsp27在大鼠磨牙及其发育中的分布研究;周期性单轴压应力对大鼠髁突软骨细胞早期增殖活性的影响;大鼠牙髓干细胞与牙乳头间充质细胞成牙能力的比较研究;米诺环素对体外培养的成年大鼠牙槽骨成骨细胞生物活性的影响;     

压应力对体外培养兔髁突软骨细胞CTGF基因表达的影响

目的:观察不同压应力状态下,兔髁突软骨细胞结缔组织生长因子(CTGF)mRNA表达水平的变化.方法:半定量RT-PCR方法检测兔髁突软骨细胞在压应力作用下CTGF mRNA的表达变化.结果:在一定压应力范围内,兔髁突软骨细胞CTGF的表达,随着压应力增大而显著增强(P相似文献   

口腔正畸学

体外培养人牙周膜成纤维细胞雌激素受体表达的实验研究；周期性单轴压应力下大鼠髁突软骨细胞早期应答机制的蛋白质组学初探；镍钛圆丝弯曲变形后的力学性能分析；磁力Twin-block矫治器对骨性Ⅱ类错[牙合]矫治效果的研究；种植钉与口外力作为正畸强支抗的临床比较研究     

不同加载频率拉应力对髁突软骨细胞增殖分化的影响

目的:探讨不同加载频率的拉应力对髁突软骨细胞增殖、分化的影响。方法:体外分离2周龄新西兰兔髁突软骨细胞,对细胞施加2 h/d,为期3 d的不同频率(0 Hz、0.1 Hz、0.5 Hz、1 Hz)的拉应力。采用CCK8检测细胞增殖水平,实时荧光定量RT-PCR检测Sox9、Runx2、VEGF的表达。结果:细胞增殖水平在静止性(0 Hz)组显著高于周期性加力(0.1~1 Hz)组和对照组;Sox9、Runx2、VEGF表达在0.5 Hz组和1 Hz组显著高于静止性(0 Hz)组和对照组。结论:不同加载频率拉应力对髁突软骨细胞增殖分化有差异性影响。     

咬合干扰对大鼠髁突软骨细胞内质网应激及凋亡的影响

目的:探讨咬合干扰致大鼠髁突软骨退变过程中内质网应激及凋亡相关分子的表达情况。方法:30只8周龄SD大鼠,采用大鼠上颌第一磨牙粘接不良修复体造成咬合干扰大鼠模型,4、8、12周后取颞下颌关节,甲苯胺蓝染色、苏木精-伊红染色观察组织形态学变化,透射电镜观察超微结构,免疫组织化学染色检测GRP78、Caspase-12的表达情况。结果:实验组髁突软骨基质降解、细胞密度降低,内质网膨胀、断裂;GRP78阳性细胞率较对照组显著增多(P<0.05),Caspase-12阳性细胞率在8、12周时明显增加(P<0.05)。结论:咬合干扰后大鼠髁突软骨细胞发生内质网应激及内质网凋亡,可能是髁突软骨退变的重要机制之一。     

Indian hedgehog: a mechanotransduction mediator in condylar cartilage

Indian hedgehog (Ihh) is a critical mediator transducing mechanical signals to stimulate chondrocyte proliferation. To clarify the cellular signal transduction pathway that senses and converts mechanical signals into tissue growth in mandibular condyle, we evaluated Ihh expression and its relation to the kinetics of replicating mesenchymal cells in condylar cartilage during natural growth and mandibular advancement. Thirty-five-day-old Sprague-Dawley rats were fitted with functional appliances. Experimental animals with matched controls were doubly labeled with iododeoxyuridine and bromodeoxyuridine so that we could evaluate the cycles of the proliferative mesenchymal cells. Mandibular advancement triggered Ihh expression in condylar cartilage. A higher level of Ihh expression coincided with the increase of the replicating mesenchymal cells' population and the shortening of the turnover time. These findings suggested that Ihh acts as a mediator of mechanotransduction that converts mechanical signals resulting from anterior mandibular displacement to stimulate cellular proliferation in condylar cartilage.     

不同静压力对新生SD大鼠髁突软骨细胞增殖与凋亡的影响

目的：探讨不同静压力对髁突软骨细胞增殖与凋亡的影响。方法：对培养到第3代新生SD大鼠髁突软骨细胞加载0、12、24、36kPa静压力1h后立即收集样本，用流式细胞仪检测细胞凋亡与增殖指数的变化。结果：随着压力的增加（0、12、24、36kPa），除24kPa外，细胞增殖指数和凋亡指数在加力结束时（0h）均减少（P〈0．05），其中，细胞增殖指数在36kPa加力结束时减幅最大，细胞凋亡指数则在12kPa加力结束时减幅最大。结论：在0、12、24、36kPa力值范围内，软骨细胞增殖、凋亡与应力值存在一定的关系，但这并非是简单的线性关系。     

透明质酸、TGF-β1对下颌骨髁突软骨增殖分化的影响

目的:研究透明质酸(HA)、TGF-β1因子对下颌骨髁突软骨增殖分化的影响.方法:取新生小鼠的下颌骨髁突软骨体外进行组织培养,按培养液内添加因子不同分为对照组、HA(0.5 mg/ml)、TGF-31(5 ng/ml)组,于培养1、2、4、6、8周后进行形态学观察、软骨面积测量、茜素红染色以及碱性磷酸酶染色研究.结果:对照组中髁突软骨在培养4周后软骨内开始出现高密度光阻射区,茜素红染色、碱性磷酸酶染色提示软骨基质出现了钙化、软骨内成骨的过程;HA组中髁突软骨内未出现高密度光阻射区,而髁突软骨面积却显著增大(P ＜0.05);TGF-β1组中髁突软骨在培养2周后提前出现了高密度光阻射区,然软骨面积无显著改变(P＞0.05).结论:在体外培养下,HA可以促进髁突软骨的增殖,对软骨细胞的肥大分化有一定的抑制作用,TGF-31在早期可显著促进髁突软骨细胞的肥大分化.     

导下颌向前对生长期大鼠髁突软骨结缔组织生长因子表达的影响

目的:通过建立导下颌向前的Sprague-Dawley (SD)大鼠的动物模型进行免疫组化实验,观察结缔组织生长因子(CTGF)在髁突软骨中分布的变化,探讨CTGF对前伸下颌后的髁突软骨的影响。方法:建立SD大鼠动物模型,选取45只5周龄SD 雌性大鼠,体重约100 g,随机分为对照组(20只)和实验组(25)只,组内再随机平均分为5组(3、7、14、21 和30 d)。实验组动物24 h佩戴改良可摘式上颌斜面导板矫治器,对照组动物不做处理。免疫组化染色标记CTGF,观察髁突软骨各层CTGF的表达变化。对CTGF的阳性表达量进行半定量分析。结果:对照组和实验组中髁突软骨组织中均有CTGF的表达,主要分布于肥大层和增殖层。实验组不同时间点髁突肥大层和增殖层中CTGF的平均光密度值分别高于对照组的平均光密度值(P<0.05 ) 。与对照组相比,实验组7 d后髁突肥大层和增殖层中CTGF的表达开始上升,到第14天达到最高,之后CTGF表达回落,但仍高于对照组(P<0.05 )。实验3 d、30 d,肥大层和增殖层中CTGF实验组与对照组相比无统计学差异。结论:CTGF可能参与了功能负荷改变所导致的髁突软骨适应性改建活动。