PCR快速检测奶粉中阪崎肠杆菌研究

目的：针对当前国内外传统检测方法都存在时间长、检测结果假阳性突出等问题，建立阪崎肠杆菌快速检测法。方法：根据阪崎肠杆菌中寡-1，6-葡萄糖苷酶基因设计引物建立PCR方法，并进行PCR反应的灵敏度、特异性实验以及模拟实际样品的最低检出限测定。结果：纯菌检测灵敏度达10^2 cfu／ml，阪崎肠杆菌菌株PCR扩增均为阳性，阴性对照菌株未扩增出特异性条带；单独接种阪崎肠杆菌（3．5—4．5 cfu／100g）和混合接种大肠杆菌或沙门菌的人工模拟污染奶粉样品中分别在增菌26h和28h时，阪崎肠杆菌均可以检出。结论：该方法灵敏度高、快速、特异性强，可以很好地应用于奶粉以及其他食品中阪崎肠杆菌的检测与鉴定。     

LAMP法和PCR法快速检测阪崎肠杆菌的比较

[目的]建立阪崎肠杆菌环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)快速检测技术,并与PCR检测方法进行比较,为阪岐肠杆菌感染的快速诊断提供实验依据。[方法]根据阪崎肠杆菌外膜蛋白OmpA基因,设计特异性引物,建立LAMP和PCR检测技术体系,并对2种方法检测的灵敏度、特异性和实际样品的检测结果进行比较。[结果]建立了优化的LAMP和PCR检测体系,灵敏度检测结果显示,LAMP检测限为101cfu/ml,PCR检测限为102cfu/ml,LAMP检测灵敏度高于PCR;对36株近源菌进行特异性检测,结果显示,LAMP仅8株阪崎肠杆菌得到阳性结果,PCR产物则出现非特异性条带,LAMP特异性比PCR高。应用于46份奶粉样品的检测,LAMP和PCR均有清晰、特异的预期条带和结果产生,并与常规检测结果一致。[结论]LAMP检测技术作为一种快速检测阪崎肠杆菌的方法具有简便、灵敏快速,与PCR方法比较,特异性强、操作简便、检测成本低,耗时短,更有望发展成为快速检测阪岐肠杆菌的有效手段。     

阪崎肠杆菌环介导等温扩增检测方法建立

目的 针对当前国内外传统检测方法缺点,建立阪崎肠杆菌快速检测法.方法 根据阪崎肠杆菌外膜蛋白(OmpA)基因,设计4条特异性引物(内、外引物各2条),建立并优化环介导等温扩增(100p-mediattA isothermalamplification,LAMP)检测体系及反应条件,并进行LAMP反应的灵敏度、特异性实验及实际样品检测.结果 LAMP检测阪崎肠杆菌,优化后的条件选择为:Mg2+浓度6 mmoVL,dNTP浓度0.6 mmoVL,甜菜碱浓度0.8 moVL,外引物与内引物的浓度比1:4,扩增温度580C 60min;细菌纯培养检测灵敏度为101cfu/mL;对11种细菌共26株菌进行LAMP扩增,仅8株阪崎肠杆菌得到阳性扩增结果,证明引物具有很高的特异性;对实际样品进行增菌检测,采用试剂盒提取DNA,从样品处理到报告结果,耗时26 h;并采用传统检测方法验证,正确性为100%.结论 该方法检测阪岐肠杆菌特异性强、灵敏度高,并且操作简便、检测成本低、耗时短,有望成为快速检测阪岐肠杆菌的有效方法.     

免疫磁珠与荧光定量PCR联合检测乳制品中阪崎肠杆菌的实验研究

[目的]建立一种免疫磁珠吸附-荧光定量PCR(IMB-FPCR)快速检测阪崎肠杆菌的方法,探讨在乳制品污染监测及食物中毒快速诊断中的应用。[方法]根据阪崎肠杆菌rpsU-dnaG基因序列设计引物和探针,采用基因重组技术构建用于金黄色色葡萄球菌检测的定量标准品,建立阪崎肠杆菌IMB-FPCR检测方法。[结果]成功构建了阪崎肠杆菌重组质粒标准品和阪崎肠杆菌IMB-FPCR方法。阪崎肠杆菌的免疫磁珠吸附试验显示磁珠对奶粉中的阪崎肠杆菌吸附率达77.7%。通过特异性、敏感性、稳定性和重复性验证,结果表明具有较好的特异性,最低检测限为10cfu/ml的菌细胞,并具有良好的稳定性和重复性。整个检测仅需时1d。[结论]IMB-FPCR简便快速、灵敏度高及特异性强,为准确检测乳制品中阪崎肠杆菌提供了一个新的途径,可广泛应用于食品卫生监管、商品检验检疫以及临床诊断等。     

分子信标-实时PCR法快速检测阪崎肠杆菌的研究

目的:建立分子信标-实时PCR检测婴幼儿乳粉中阪崎肠杆菌的快速方法。方法:根据GenBank公布的阪崎肠杆菌ATCC29544株ompA基因的保守序列,设计引物和分子信标探针,建立阪崎肠杆菌的分子信标-实时PCR技术快速检测,应用于食品检测。结果:检测方法特异性强,无非特异性扩增;分子信标-实时PCR反应体系DNA灵敏度为95fg/PCR反应体系,无交叉反应;以此反应体系检测23份样品,其中3份为阳性,余未检出,与传统检测方法结果一致。结论:分子信标-实时PCR检测体系快速、灵敏度高、特异性强,可用于婴幼儿乳粉中阪崎肠杆菌的快速检测。     

婴幼儿配方奶粉中阪崎肠杆菌分子检测方法探讨

目的：对婴幼儿配方奶粉中阪崎肠杆菌的分子检测方法进行探讨。方法：分别用常规PCR方法和实时荧光PCR方法对32份奶粉样品进行阪崎肠杆菌鉴定。结果：32份样品中检出2株阳性株,阳性率为6.25%,两种检测方法结果相符。结论：市售婴幼儿配方奶粉中存在阪崎肠杆菌污染,应尽快制订婴幼儿食品中阪崎肠杆菌的检测标准,分子检测方法可快速准确检测阪崎肠杆菌。     

阪崎肠杆菌和沙门菌多重PCR检测方法的建立

目的建立阪崎肠杆菌和沙门菌的多重PCR检测方法。方法针对阪崎肠杆菌外膜蛋白A(ompA)基因和沙门菌属侵袭性抗原保守基因(invA)基因设计引物,建立其多重PCR检测方法,并对反应条件进行优化。结果两对引物分别能扩增出469bp和284bp的目的条带,结果具有高度特异性,反应条件优化后,两菌可同时检出的浓度限度为106cfu/ml。结论该方法敏感、特异,为快速检测阪崎肠杆菌、沙门菌提供了新的有效手段。     

婴幼儿配方奶粉中阪崎肠杆菌的3种检测方法比较

[目的]比较和分析3种不同的阪崎肠杆菌定性检测方法的区别。[方法]分别采用美国FDA和ISO推荐阪崎肠杆菌检测方法,同时采用丙酮酸盐修复培养基作为奶粉预增菌液的检测方法,对48份市售婴幼儿配方奶粉进行阪崎肠杆菌定性检测。[结果]运用该3种方法分别检测到2个、3个和5个阳性样品。[结论]mLST-Vm选择性增菌肉汤和DFI显色平板可大大减少工作量,提高工作效率,整体操作简单省时。若同时采用丙酮酸钠修复,可减少漏检率,明显提高阪崎肠杆菌的检出率。     

批发市场销售国产配方奶粉及婴幼儿食品中阪崎肠杆菌污染情况调查

目的了解批发市场销售的国产配方奶粉及婴幼儿食品中阪崎肠杜菌污染情况。方法参照GB/T4789.40-2008规定的阪崎肠杆菌的检验方法对69份样品进行检测。对检出的阪崎肠杆菌进行药敏检测。结果 69份国产配方奶粉及婴幼儿食品中共检出16株阪崎肠杆菌。16株菌均对临床常用的针对G-菌的抗生素普遍敏感。结论批发市场销售的国产配方奶粉及婴幼儿食品中阪崎肠杆菌污染严重,应引起有关部门的重视。     

环介导等温扩增法检测进口宠物乳粉中阪崎肠杆菌

目的:建立并验证一种能够简单,准确和快速检测进口宠物乳粉中阪崎肠杆菌的方法。方法:应用环介导等温扩增技术(LAMP)建立宠物乳粉中阪崎肠杆菌检测方法,并通过常规方法对其结果进行验证。结果:LAMP方法从5种进口宠物乳粉中检出两份阪崎肠杆菌阳性,与VITEK 2生化鉴定结果一致。结论:该方法特异性好、灵敏度高,检测时间短,适用于奶粉及其他食品中阪崎肠杆菌检测。