反义寡核苷酸抑制柯萨奇病毒B_3致病作用的实验研究

目的 :观察在细胞培养系统和小鼠体内反义寡核苷酸 (AODN)抑制柯萨奇病毒B3(CVB3)致病作用。方法 :观察细胞病变效应 (CPE) ,常规微量法滴定病毒的50 %组织细胞感染量 (TCID50)以及观察感染小鼠心肌组织的病理改变。结果 :1 AODN可推迟和减轻CVB3 感染细胞CPE ,且随AODN浓度增高 ,对CPE的抑制作用增强 ;培养上清中病毒滴度随AODN浓度升高而降低。2 随AODN剂量增加 ,感染小鼠心肌组织病毒滴度逐渐降低 ;心肌细胞病变程度逐渐减轻 ;心肌炎发病率也逐渐降低。结论 :AODN可能通过抑制CVB3 复制来保护Vero细胞和小鼠心肌组织抵抗感染。     

反义硫代寡核苷酸对小鼠柯萨奇病毒B3性心肌炎影响的研究

目的；观察AODN对小鼠病毒性心肌炎的影响。方法：选取4-6周龄雄性Balb/C鼠（体重18-20g)48只，随机分为6组，8只/组，其中正常对照和病毒对照各1组，4个实验组，正常对照组小鼠腹腔内注射0.1mlRPMI1640。其它5组小鼠腹腔内接种0.1mlCVB3(200TCID50)。半小时后4个实验组小鼠腹腔内注射0.2ml不同剂量的AODN，正常对照组和病毒对照组分别注射0.2mlAODN媒体溶液，7天后测定血清LDH活性，并且进行心肌组织病理学检查，结果：随注射AODN剂量增加，血清LDH活性逐渐降低；心肌细胞变性，坏死及间质炎性细胞浸润程度逐渐减轻；心肌炎发病率也逐渐降低。结论：AODN可保护小鼠心肌组织抵抗CVB3感染。     

柯萨奇B3病毒抗体与心肌细胞结合的发病作用

目的 研究柯萨奇B3病毒单克隆抗体（CVB3－mAb0与心肌细胞结合，以探讨CVB3－mAb对心肌细胞的致病作用。方法 采用细胞副合技术制备CVB3-mAb，并应用各细胞株分泌的mAb与人、牛、大鼠心肌细胞进行免疫组化分析,比较各株分泌的CVB3－mAb与不同种动物心肌细胞间结合的差异。结果 利用细胞融合技术制备出26种CVB3-mAb。其部分CVB3－mAb可与心肌细胞膜或心肌细胞内的肌原纤维结合，呈棕黄色环状重叠或横纹，CVB3－mAb 2A4，2D4，1G6，1H9，1H10，1H11与人、牛、大鼠心肌细胞均呈阳性反应；CVB3－mAb 2A2仅与人的心肌细胞结合；CVB3－mAb 2B2，2H4，1C10，1G4与人及大鼠心肌细胞结合；CVB3－mAb 2A3与牛和大鼠心肌细胞结合；CVB3－mAb 2G12仅与大鼠心肌细胞结合；CVB3-mAb 1E8仅与牛的心肌细胞结合，且CVB3－mAb 2D4与人心肌的结合为心肌细胞膜，而与牛及大鼠心肌的结合为心肌细胞内的肌原纤维。结论 各CVB3－mAb与不同动物心肌细胞间的结合及结合形式不同；且同一动物的心肌细胞与CVB3－mAb结合有差异。部分柯萨奇B3病毒抗体与动物心肌细胞结合，可引起心肌炎。     

甲基强的松龙对柯萨奇病毒B3m体外作用的研究

目的：探讨甲基强的松龙体外在无免疫因素影响下与柯萨奇病毒B3m(CVB3m)作用情况。方法：首先测定甲基强的松龙对Hela细胞的毒性，并以微量法及全量法从最大无毒浓度开始2倍系列稀释后作用于感染CVB3m的Hela细胞，并收集各稀释度上清液进行病毒半数感染量（TCID50）重新滴定。结果：（1）甲基强的松龙高浓度（＞1．25mg/ml)对Hela细胞有毒性作用，最大无毒浓度为1．25mg/ml；（2）低家度甲基强的松龙可促进细胞生长，且在1．25mg/ml,0.625mg/ml有限制病毒复制作用，其细胞病变及培养上清液的TCID50均低于病毒对照孔，抑制倍数分别为249和31．8倍。结论：甲基强的松龙本身无直接促进病毒增殖作用，低浓度反而保护细胞，并可借助体内免疫系统，发挥免疫抑制作用，在柯萨奇病毒感染时，适时、适量应用激素利于病情恢复。     

阿昔洛韦抗柯萨奇病毒B3作用的初步观察

目的观察阿昔洛韦抗柯萨奇病毒B3(CVB3)的作用.方法通过活细胞计数评价阿昔洛韦对Hep-2细胞的细胞毒作用;通过观察病毒感染后的细胞病变效应计算病毒抑制率,评价阿昔洛韦在Hep-2细胞培养中的抗CVB3作用.结果阿昔洛韦对Hep-2细胞的半数细胞毒性浓度(TC50)在0.2mg/mL以上;CVB3的半数抑制浓度TC50为25μg/mL,治疗指数为8.4.结论阿昔洛韦安全性较高并能有效地抑制柯萨奇病毒B3在Hep-2细胞中的增殖.     

柯萨奇病毒B致神经系统病变11例

探讨柯萨奇Ｂ组病毒引进的神经系统病变的临床特征。方法；采用酶联免疫吸附试验，用ＣＶ１－６Ｂ型抗原分别测定２４例患者血清中ＩｇＭ，ＩｇＧ抗体。结果：２４例患者中用ＣＶＢ感染者１１例，占４５．８％，其中脑膜炎５例，脑炎３例，痛性眼肌麻痹，病毒性肌无力，单纯性头痛各１例。     

大黄提取液抗柯萨奇病毒B3的实验研究

采用微量细胞培养法观察细胞病变效应 (Cytopathiceffect,CPE) ,测定经不同剂量大黄提取液作用后的病毒滴度 ,用逆转录—聚合酶链反应 (RT PCR)检测药物作用后细胞冻融液中的病毒核酸(CVB RNA) ,研究大黄提取液的抗柯萨奇病毒B组 (CVB)作用 ,探讨其抗病毒作用机制。结果 :不同剂量大黄提取液和病毒作用后 ,细胞均出现CPE ;不同剂量药物作用于细胞后 ,不能阻止CVB3感染 ;当CVB3感染细胞后 ,大黄提取液能阻止病毒增殖 ,并表现出一定的量效关系 ,其治疗指数(TI) =10。提示大黄提取液不能直接杀灭CVB3,不能阻止CVB3吸附、穿入易感细胞 ,而通过阻止CVB3核酸复制或 /和以后环节发挥抗病毒作用。     

栀子等中药抑制柯萨奇B3病毒的体外实验研究

目的探讨栀子、黄连、黄芩、大青叶及复方制剂在体外抗柯萨奇B3病毒(CVB3)的作用。方法用细胞培养技术比较栀子、黄连、黄芩、大青叶及复方制剂等药物对CVB3引起的细胞病变的抑制作用。结果黄芩抗病毒作用最强,治疗指数(TI)为35.09;黄连抑制病毒增殖的作用最强,TI为83;栀子抑制病毒吸附和增殖作用最强,TI为238.09。结论栀子、黄连、黄芩、大青叶及复方制剂等药物对CVB3增殖的不同环节均有抑制作用。     

RNA干扰用于柯萨奇病毒B3感染治疗作用研究

目的研究观察自行构建的siRNA表达载体对柯萨奇病毒B3（CVB3）感染的潜在治疗作用。方法以CVB3聚合酶编码区基因序列为靶点,构建发夹型siRNA真核表达载体pGCsi—U6／GFP／P及与CVB基因组序列无关的阴性对照pGCsi—U6／GFP／N。利用脂质体转染进入Hela细胞后,用CVB3毒株进行攻击,观察感染后Hela细胞病变情况,并用RT—PCR法检测细胞培养上清中的CVB3负链RNA水平。结果构建的表达质粒pGCsi—U6／GFP／P在Hela细胞能够正确表达,其表达产物能够使CVB3基因沉默,并间接抑制了CVB3的复制。结论本实验成功构建了能够抑制CVB3的发夹状siRNA表达质粒,该质粒具有增强细胞抗CVB3感染的能力。     

维生素C对柯萨奇B3病毒的心肌细胞的保护作用研究

观察维生素Ｃ对柯萨奇Ｂ３病毒的复制和对病毒感染心肌细胞的影响，结果表明：维生素Ｃ对ＣＶＢ３感染的心肌细胞具有保护作用，加ＶｉｔＣ培养２４ｈ后，随时间延长，保护作用越来越明显（Ｐ〈０．０５）；实验结果还表明，ＶｉｔＣ在细胞外并无直接灭活病毒作用，而是作用于细胞，影响病毒的复制，从而使心肌细胞得到保护。     

柯萨奇病毒B3感染对心肌趋化因子表达谱的调控作用

目的　研究柯萨奇病毒 (CV)B3感染对心肌组织 /细胞趋化因子 (ChKs)表达谱的调控作用。方法　以CVB3感染BALB/c小鼠和体外培养的BALB/c乳鼠心脏细胞 ,建立体内、外CVB3感染模型 ;RT PCR定性和实时定量分析不同CVB3感染时间点和不同CVB3载量下 1 1种ChKs的表达。结果　在体内 ,CVB3感染后心肌组织中MIP 2和IP 1 0诱导性表达 ,组成性表达的SDF 1、MCP 1、MCP 2、MCP 3、MCP 5、MDC、FKN和Ltn中MCP 1、MCP 2、MCP 3、MCP 5、MDC和Ltn上调表达 ,分别是未感染对照的 1 8、1 9、3 7、1 7、1 3和 1 2倍 ,均差异有显著性 (P均小于 0 0 1 ) ,SDF 1和FKN与未感染对照相比 ,差异均无显著意义 (P >0 0 5)。Eot在感染和未感染心肌组织均未检出表达。在不同的感染时间点ChKs的表达不同 ,MIP 2在感染第 4天的表达量分别是第 7天和第 1 4天的 1 1和 1 5倍 ,均差异有显著性 (P <0 0 1 ) ;IP 1 0的表达在第 4天和第 7天未表现显著性区别 (P >0 0 5) ,但分别是第 9天的 2 47和 2 54倍 (P <0 0 1 ) ;MCP 1第 1 4天的表达量分别是第4、7和 9天的 1 3、1 2和 1 0倍 ,相差均有显著性意义。MCP 2第 4天的表达量是第 7、9和 1 4天的1 4、1 5和 2 2倍 ,差异有显著意义 (P <0 0 1 ) ,且 1 4d表达量低于基础表     

柯萨奇病毒B组3型疫苗研究进展

柯萨奇病毒B组3型（coxsackie virus B3,CVB3）属于小核糖核酸病毒科（picornaviridae）,肠道病毒属（enterovirus）,通常感染后会使人出现发热、打喷嚏、咳嗽等感冒症状,但也可导致新生儿、婴幼儿以及免疫缺陷的成人出现严重的心脏、胰腺及中枢神经系统症状[1]。根据美国疾病预防控制中心（CDC）统计数据发现,     

小儿柯萨奇B组病毒脑炎感染的实验研究

近年来国内外已证实柯萨奇B组病毒(CoxB)在世界各地感染较为广泛,我国成人感染的报道较多,但婴幼儿资料甚少。为探索本病毒在武汉地区的感染情况,笔者对疑似病毒性脑膜炎的患儿进行了CoxB-IgM、CoxB-IgG检测,并对CoxB1～6型特异性IgM进行了分型测定,现报告如下。     

靶向柯萨奇病毒B3 siRNA的设计与筛选

目的针对柯萨奇病毒B3(CVB3)基因筛选抑制效率较高的siRNA新序列,同时探究顺式作用复制元件(CRE)以外的2C区是否是设计siRNA序列的有效靶点。方法在CVB3的基因组中以3D、3C、2C、2A、VP3、VP2和VP1区为靶点设计新的siRNA序列,在He La细胞中转染siRNA序列,转染12h后,进行CVB3感染。感染病毒36h后收毒,用TCID50、MTT、Western blot和real-time RT-PCR 4种方法从不同水平上检测本研究设计筛选的siRNA序列在CVB3复制方面的抑制效果。结果设计的siRNA序列共11条,其中5条对CVB3的复制在细胞的死亡率、病毒的相关致病性、RNA分子水平和蛋白表达水平4个方面均表现出了较好抑制效果。其中siRNA-5对CVB3复制的抑制率达到了84%,本序列是针对2C区CRE以外的部分设计的。结论本文发现了5条新的抑制率较高的siRNA靶序列,同时首次证明CRE以外2C区也是设计siRNA序列的有效靶点。     

草苁蓉提取物对感染柯萨奇B3病毒的大鼠心肌细胞抗氧化作用的影响

[目的]探讨草苁蓉提取物对柯萨奇B3病毒感染的大鼠心肌细胞的抗氧化作用。[方法]取新生SD大鼠的乳鼠心室肌制备搏动心肌细胞,培养48h后接种10^3TCID50柯萨奇B3病毒做为实验性病毒性心肌炎模型。[结果]草苁蓉提取物明显减轻感染柯萨奇B3病毒的心肌细胞病变,使细胞搏动增强,明显降低心肌细胞内的丙二醛含量,显升高超氧化物歧化酶活性。[结论]草苁蓉提取物对感染柯萨奇B3病毒的SD大鼠培养心肌细胞具有显的抗氧化作用。     

柯萨奇病毒B3与病毒性心脏病发病机制的研究进展

病毒性心脏病(VHD)是与病毒感染有关的一组心血管疾病,最常见的感染原是柯萨奇病毒B组3型(CVB3)。CVB3感染的疾病发病机制是一个极复杂的过程,不仅涉及到病毒的侵害,同时还涉及到机体通过免疫介导的自身损伤。少数由CVB3感染导致的病毒性心肌炎(VMC)患者可能发展为扩张型心肌病(DCM)。由于CVB3病毒致VHD发生的复杂机制可导致VHD治疗中的特殊性,因此研究者们仍需对CVB3与VHD发病机制之间的关系保持密切关注。     

槐果碱体外抗柯萨奇病毒B3m的作用

目的 以HeLa细胞为模型,观察从苦参中提取的槐果碱在体外抗柯萨奇病毒B3m(CVB3m)的作用.方法 ①用微量细胞培养法观察槐果碱对HeLa细胞的毒性.②用细胞病变效应(CPE)抑制法观察槐果碱体外抗CVB3m作用.③用MTT法和结晶紫染色法观察槐果碱对CVB3m感染的HeLa细胞的保护作用:在96孔板上种植HeLa细胞并予CVB3m吸附1 h,加入不同浓度的槐果碱,并设立病毒、细胞、槐果碱对照,培养15 h后以MTT法和结晶紫染色法测定比较各组细胞能量代谢率和细胞存活数.结果 ①槐果碱稀释到＜391 μg/mL,对HeLa细胞无毒性;≥783 μg/mL引起HeLa细胞CPE.②槐果碱6.25 ～ 50 μg/mL有直接抗病毒作用,减轻CPE;＞100 μg/mL反而会加重、加快CPE.③槐果碱1.56 ～ 25 μg/mL对感染CVB3m的HeLa细胞有保护作用,用MTT法和结晶紫染色法测得细胞能量合成代谢、细胞存活数较病毒对照组增加(P＜0.05);槐果碱在50、100 μg/mL时反而加重病毒对细胞的抑制,使细胞存活数、细胞代谢率较病毒对照组下降(P＜0.05).结论 一定浓度的槐果碱在体外有抗CVB3m作用,对感染CVB3m的HeLa细胞有保护作用.     

槐果碱体外抗柯萨奇病毒B3m的作用

目的以HeLa细胞为模型,观察从苦参中提取的槐果碱在体外抗柯萨奇病毒B3m(CVB3m)的作用。方法①用微量细胞培养法观察槐果碱对HeLa细胞的毒性。②用细胞病变效应(CPE)抑制法观察槐果碱体外抗CVB3m作用。③用MTT法和结晶紫染色法观察槐果碱对CVB3m感染的HeLa细胞的保护作用:在96孔板上种植HeLa细胞并予CVB3m吸附1h,加入不同浓度的槐果碱,并设立病毒、细胞、槐果碱对照,培养15h后以MTT法和结晶紫染色法测定比较各组细胞能量代谢率和细胞存活数。结果①槐果碱稀释到<391μg/mL,对HeLa细胞无毒性;≥783μg/mL引起HeLa细胞CPE。②槐果碱6.25~50μg/mL有直接抗病毒作用,减轻CPE;>100μg/mL反而会加重、加快CPE。③槐果碱1.56~25μg/mL对感染CVB3m的HeLa细胞有保护作用,用MTT法和结晶紫染色法测得细胞能量合成代谢、细胞存活数较病毒对照组增加(P<0.05);槐果碱在50、100μg/mL时反而加重病毒对细胞的抑制,使细胞存活数、细胞代谢率较病毒对照组下降(P<0.05)。结论一定浓度的槐果碱在体外有抗CVB3m作用,对感染CVB3m的HeLa细胞有保护作用。     

反义硫代脱氧寡核苷酸体外抑制CVB持续感染的研究

目的：了解21聚体反义硫代脱氧寡核苷酸（AODN）体外对CVB3、CVB5持续感染的抑制作用。方法：人工合成AODN,进行脂质体包埋,并按不同浓度分别加入CVB3-ECV304、CVB5-ECV304持续感染细胞模型。对药物作用后持续感染细胞模型,观察其培养上清液致Vero细胞病变能力的改变;ELISA法检测CVB3、CVB5抗原产生的抑制率：RT—PCR检测细胞内病毒RNA表达情况;ELISA检测培养上清液分泌TNF—α浓度。同时进行正义和随机寡核苷酸（SODN、RODN）抗病毒能力检测,并与AODN结果比较。结果：AODN可抑制持续感染CVB3、CVB5抗原合成,随药物浓度的增高,抗原抑制率也升高;经AODN作用后,持续感染细胞培养上清液致Vero细胞病变能力下降．上清液中病毒滴度减少;RT-PCR在经AODN作用的CVB3-ECV304、CVB5-ECV304组中未检测到病毒RNA;经AODN作用后．持续感染的CVB3-ECV304、CVB5-ECV304细胞产生TNF-α浓度升高：针对CVB3 5＇端非编码区基因组序列合成的AODN对CVB5持续感染也有较强的抑制作用;AODN对持续感染病毒的抑制作用强于SODN和RODN组。结论：AODN能体外抑制CVB3、CVB5持续感染,刺激细胞合成TNF-α。这种作用有序列特异性。但同组间病毒有交叉抑制作用,这种作用可能与CVB3、CVB5基因序列同源有关。     

柯萨奇B组病毒所致面神经麻痹及神经系统病变

目的：报道５１例由柯萨奇Ｂ组病毒（ＣＯＸＳＡＣＫＩＲＥ Ｂ ＶＩＲＵＳ ＣＶＢ）所致面神经麻痹及神经系统病变;方法：采用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）技术。静脉取血１ｍｌ分离血清,检查血清中的ＣＶＢ抗体Ｉ￣Ⅵ型;结果：病毒性脑膜炎２９例,面神经麻痹８例,双肢或四肢肌无力８例,癫痫４例,带状疱疹２例。最小年龄３岁,最大年龄７２岁。临床均给予抗病毒治疗,效果显著;结论：人是柯萨奇病毒唯一的天然宿主,接