醛固酮对肝星状细胞早期生长反应因子-1信号通路调控的体外研究

目的探讨醛固酮（Aldo）对肝星状细胞（HSC）早期生长反应因子-1（EGR1）信号传导通路的影响。方法采用HSC-T6细胞株，分别给予Aldo 1μmol／L处理10min、30min、1h、2h和3h，western blot检测磷酸化p42／44蛋白的表达。另外，观察细胞外信号调节激酶（ERK）1／2特异性阻断剂U0126、抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸（NAC）（均预先处理60min，再给予Aldo刺激）和肿瘤坏死因子α对磷酸化p42／44蛋白表达的影响。此外，给予Aldo、U0126和NAC处理后，用电泳迁移率分析（EMSA）检测EGR-1 DNA结合活性的变化；western blot检测血小板衍生生长因子-B（PDGF-B）蛋白的表达。免疫细胞化学检测Aldo对HSC PDGF-B蛋白表达的影响。结果Aldo可诱导磷酸化p42／44的表达，U0126可抑制磷酸化p42／44的表达。EMSA结果显示：Aldo干预HSC 30min后EGR-1 DNA结合活性开始增加，1h达到峰值，然后逐渐减低；U0126可显著抑制Aldo诱导的EGR-1活性增强；NAC对Aldo诱导的EGR-1活性无抑制作用。Aldo可诱导HSC PDGF-B蛋白表达；U0126和NAC对PDGF—B表达无抑制作用。结论Aldo可经ERK1／2通路诱导HSC EGR-1活性增强。Aldo可经EGR—1通路调控PDGF—B的表达。     

IL-1β诱导肝星状细胞IL-1Ⅰ型受体及AP-1表达的研究

目的探讨白细胞介素1β（IL-1β）对大鼠肝星状细胞（HSC）IL-1Ⅰ型受体（IL-1RⅠ）及激活蛋白-1（AP-1）表达的诱导作用。方法应用流式细胞技术检测IL-1RⅠ蛋白表达;应用凝胶电泳移动抑制法测定AP-1的活性。结果IL-1β刺激HSC 2min后即见IL-1RⅠ表达增强,10min时达到高峰（P〈0．01）,随后有所降低,60min时仍保持较高的活化状态（P〈0．01）,120min后则基本接近初始水平;IL—1β作用HSC1、2和4h后,AP-1活性均较对照组明显增高（P〈0．01）。结论IL-1β以时间依赖方式诱导HSCIL-1RI及AP-1的表达。     

IL-1β促肝星状细胞增殖与JNK/AP-1信号转导通路的关系

目的探讨JNK/AP-1信号转导通路在白细胞介素-1β（IL-1β）介导的促肝星状细胞（HSC）增殖中的作用。方法应用W estern印记检测JNK的活化程度。应用活细胞计数试剂盒-CCK-8检测HSC增殖并观察JNK特异性阻断剂SP600125对IL-1β促HSC增殖的影响。应用凝胶电泳移动抑制法测定AP-1的活性。结果IL-1β有明显促大鼠HSC增殖作用,JNK特异性阻断剂SP600125可抑制此作用。IL-1β刺激大鼠HSC首先引起JNK活化,并呈现出一定的时效变化。IL-1β作用HSC后可使AP-1活性增强,并呈现出一定的时效变化,而SP600125可抑制此作用。结论IL-1β可刺激HSC增殖,细胞内JNK/AP-1信号转导通路参与了IL-1β促HSC增殖作用。     

α-亚麻酸对转化生长因子β1诱导的肝星状细胞的影响

目的:探讨α-亚麻酸(α-linolenic acid,ALA)对转化生长因子1(transforming growth factor-β,TGF-β1)诱导的肝星状细胞(hepatic satellite cell,HSC)增殖及分泌功能的影响.方法:采用活化的HSC作为研究模型,将传代的细胞分为5组,以MTT比色法观察ALA对HSC的增殖效应,以ELASA检测细胞培养上清液中Ⅰ型及Ⅲ型胶原的含量,以Westernblot法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达.结果:TGF-β1能诱导HSC增殖并促进胶原的分泌,ALA可不同程度抑制TGF-β1所诱导的HSC增殖及Ⅰ、Ⅲ型胶原和α-SMA的表达(P<0.01),且呈剂量依赖性(P<0.05).结论:ALA在高浓度时对TGF-β1能诱导的HSC起抑制作用,可能对脂肪性肝纤维化及其引起的肝硬化有治疗作用.     

丹参酚酸B盐抑制大鼠肝星状细胞中内皮素-1激活的RhoA／ROCK Ⅱ信号通路

目的：探讨丹参酚酸B盐（Sal B）对大鼠肝星状细胞（HSC）中内皮素-1（ET-1）激活的RhoA/ROCK 信号通路的影响。方法采用肝脏原位灌流酶消化、Nycodenz密度梯度离心法分离大鼠 HSC。免疫蛋白印迹法检测肌球蛋白磷酸酶靶亚基1（MYPT1）磷酸化。特异性抗体沉淀ROCK,进行体外磷酸化反应,以磷酸化底物Thr696-MYPT1（654-880）的含量反映ROCK活性。GST下拉实验检测RhoA活性。结果在大鼠HSC中,ET-1刺激后,RhoA和ROCK II活性显著增加,ROCK I活性无明显变化,MYPT1 Thr696和Thr850磷酸化水平均显著增加。ET-1刺激1 min和10 min时,RhoA活性分别是基础状态下的1．95倍（P＜0．05）和5．84倍（P＜0．01）。ET-1刺激2．5 min和15 min时,ROCK II 活性分别是基础状态下的3．49倍和4．83倍,均P＜0．01,差异有统计学意义。ET-1刺激2．5 min时,MYPT1 Thr696磷酸化水平是基础状态下的3．86倍;刺激15 min 时,Thr696磷酸化达到高峰,是基础状态下的5．17倍。Thr850磷酸化亦在 ET-1刺激15 min达到高峰,是基础状态下的3．33倍,均P＜0．01,差异有统计学意义。在ET-1刺激前给予10-5mol/L Sal B预处理,则使ET-1诱导的RhoA和ROCK II活性分别下降66．84％和76．79％,ET-1诱导的MYPT1 Thr696磷酸化下降80．09％,对Thr850磷酸化水平无影响。结论 Sal B 能显著抑制大鼠 HSC 中 ET-1诱导的 RhoA 和 ROCK II 活化,抑制 MYPT1 Thr696磷酸化。     

蛋白激酶C及转化生长因子β1信号通路对肝星状细胞激活的影响

目的探讨蛋白激酶C（PKC）活性改变对HSC表达TGF β1的影响及在HSC激活中的作用。方法将肝星状细胞系rHSC-99分为3组：对照组（A组），PKC激动剂佛波酯0．5μmol／L组（B组），PKC抑制剂Calphostin C 100nmol／L组（C组）。加药后0、3、6、12h和24h分别检测各组细胞PKC活性的变化；作用24h后，采用Western blot和RT—PCR方法检测各组细胞TGF β1，Smad 4，Ⅰ、Ⅲ型胶原和α-平滑肌肌动蛋白的表达；采用MTT法检测细胞的增殖情况。结果 佛波酯作用后PKC的活性显著增强，而Calphostin C则抑制PKC的活性。PKC活性增强后，与对照组相比TGF β1及其下游信号分子Smad 4的表达分别升高了4．8倍和13．1倍（P〈0．01）；HSC的Ⅰ、Ⅲ型胶原和α-平滑肌肌动蛋白的表达分别升高了2．4倍、1．8倍和1．3倍（P〈0．01），并促进HSC的增殖；PKC活性被抑制后则能抑制以上作用。结论PKC活性的改变能调控HSC中TGF β1的表达，在HSC的激活中发挥调节作用。     

法舒地尔通过Rho/ROCK信号通路抑制肝星状细胞黏附、迁移和增殖

目的观察Rho／Rho激酶（ROCK）信号转导通路抑制剂——法舒地尔，对肝星状细胞（1ISC）黏附、迁移和增殖的影响。方法将培养的HSC分为以下5组：对照组；法舒地尔12.5μmol／L组；法舒地尔25μmol／L组；法舒地尔50μmol／L组；法舒地尔100μmol／L组。采用甲苯胺蓝染色法测定细胞黏附率，Boyden Chamber小室测定HSC跨膜迁移数量，用四甲基偶氮唑盐法检测细胞增殖，Western blot检测HSC RhoA、p-MLC（Thr18／Ser19）和α-平滑肌肌动蛋白的表达。结果法舒地尔对HSC的黏附、迁移和增殖均具有抑制作用，随着浓度增加，抑制作用加强；法舒地尔抑制HSC的α-平滑肌肌动蛋白表达，并且对Rho／ROCK信号转导通路关键信号分子P-MLC（Thr18／Ser19）的蛋白表达有抑制作用。结论法舒地尔通过抑制Rho／ROCK信号通路细胞骨架的调节作用抑制1ISC黏附、迁移和增殖。     

N-乙酰半胱氨酸对肝星状细胞核因子κB的影响

目的　阐明N乙酰半胱氨酸(NAC)对肝星状细胞(HSC)核因子κB(NF-κB)结合活性和环氧合酶 2(COX-2)表达的影响机制。方法　体外培养大鼠 HSC-T6 细胞株,MTT法检测 NAC对HSC增殖的抑制作用。分别予NAC(1 mmol/L)处理 1 h;NAC和肿瘤坏死因子(TNF)α联合干预(先予 NAC处理1 h,再予TNFα干预1 h);TNFα100 ng/ml处理1 h。凝胶电泳移动抑制实验检测NF κB的结合活性。免疫蛋白质印迹检测相应的胞质内NF-κB抑制蛋白(IκBα)表达。免疫组化观察 HSC-T6NF-κB表达的核转移。激光共聚焦检测NAC对 HSC-T6 中 COX-2 表达的影响。结果　NAC对 HSC具有明显的抑制作用。TNFα可诱导 NF-κB结合活性,而 NAC可显著抑制 TNFα诱导的 NF-κB结合活性。TNFα处理后 IκBα表达减弱,NAC处理后 IκBα表达增强。TNFα刺激 1 h后,NF κB表达从细胞质转移至细胞核内。NAC预处理后再予TNFα刺激,NF κB表达主要位于细胞质,很少发生核转移。HSC T6经TNFα处理后细胞内COX 2表达明显高于NAC和TNFα联合处理组以及正常对照组(P<0.05);NAC和TNFα联合处理组与正常对照组差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论　NAC可抑制HSC增殖,抑制HSC-NF κB结合活性和COX-2表达。     

复元胶囊对软骨细胞凋亡细胞外信号调节蛋白激酶1/2信号通路的作用研究

目的观察复元胶囊对体外原代培养软骨细胞凋亡的影响及对软骨细胞凋亡细胞外信号调节蛋白激酶（extracellular signal regulated kinase，包括ERKI和ERK2）信号通路的作用，探讨其治疗骨关节炎的作用机制。方法建立体外原代培养软骨细胞体系，制备复元胶囊血清，采用硝普钠（SNP）诱导软骨细胞凋亡，并用复元胶囊血清以及ERK1／2的特异阻断剂U0126干预。透射电镜观察软骨细胞凋亡的超微结构，流式细胞仪检测其对软骨细胞凋亡的影响，免疫印迹技术（Western印迹法）检测磷酸化ERK1／2、p53蛋白表达水平，比色法观察caspase-3活性变化。结果复元胶囊血清能降低SNP诱导的软骨细胞凋亡率，促进磷酸化ERK1／2蛋白表达，降低凋亡基因p53蛋白表达，抑制凋亡执行因子caspase-3的活性；使用U0126阻断ERK1／2信号通路后，复元胶囊血清也能降低SNP诱导的软骨细胞凋亡率，减少凋亡基因p53蛋白表达，抑制凋亡执行因子caspase-3的活性，但是对促进磷酸化ERK1／2蛋白表达作用不明显。结论复元胶囊血清通过促进磷酸化ERK1／2表达、调节ERK1/2信号通路下游p53和caspase-3因子而抑制SNP诱导的软骨细胞凋亡。     

复方中药益肝康抑制肝星状细胞增殖的作用机制

目的:探讨活血化瘀复方中药益肝康抑制大鼠肝星状细胞(HSC)增殖的作用机制.方法:采用IL-1β激活HSC,应用Westernblot检测JNK的活化程度;应用活细胞计数试剂盒-CCK-8检测HSC增殖并观察JNK特异性阻断剂SP600125对IL-1β促HSC增殖的影响.应用凝胶电泳移动抑制法测定AP-1的活性.结果:IL-1β有明显促大鼠HSC增殖作用,IL-1β作用培养的HSC24h后,吸光值明显高于对照组(1.573±0.026vs1.339±0.073,P=0.000);经JNK特异性阻滞剂SP600125预处理后,IL-1β促HSC增殖作用受到抑制,SP600125浓度为10,20及40μmol/L时,吸光值分别为1.427±0.113,0.772±0.093,0.675±0.074,与对照组(1.560±0.110)相比其增殖反应均明显降低(P=0.03;P=0.000;P=0.000);IL-1β可激活大鼠HSCsJNK信号蛋白,并呈现出一定的时相变化.IL-1β作用HSCs后0,5,15,30,60及120min,JNK活性分别为0.982±0.299,1.501±0.720,2.133±0.882,3.360±0.452,2.181±0.789,1.385±0.368.与0(未加IL-1β)相比,15min,30min及60min均有显著差异(P=0.002,P=0.000,P=0.001).益肝康可抑制IL-1β诱导的HSCsJNK活性(1.610±0.242vs3.360±0.452,P=0.000);益肝康可抑制IL-1β诱导的HSCsAP-1活性,经益肝康预处理HSCs1h后,AP-1活性明显受到抑制(342.43±85.77vs597.70±83.96,P=0.005).结论:IL-1β可刺激HSC增殖,细胞内JNK信号转导通路参与了IL-1β促HSC增殖作用;益肝康可通过阻滞JNK/AP-1通路,抑制HSC增殖.     

丹参酚酸B对大鼠肝星状细胞中丝裂原激活的蛋白激酶通路的抑制作用

目的 探讨丹参酚酸B(SA-B)对活化的大鼠肝星状细胞(HSC)中丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)信号传导通路的抑制作用。方法 分离大鼠HSC，于无包被塑料培养皿中原代培养7d，继以10^-6mol／L浓度的SA-B孵育，再加10ng／ml的转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激。以蛋白印迹法观察SA-B对TGF-β1刺激的HSC内细胞外调节的蛋白激酶(ERK)表达及其磷酸化和对HSC表面TGF-β1 I型受体(TβRI)，Ⅱ型受体(TβRⅡ)表达的影响，观察由此改变致HSC合成Ⅰ型胶原蛋白的变化。ELISA法测定HSC培养液中Ⅰ型胶原的含量。酶谱法观察基质金属蛋白酶2，9、13(MMP-2、MMP-9、MMP-13)的活性。结果 10^-6mol／L浓度的SA-B可抑制原代正常培养9d的HSC及TGF-β1刺激的HSC中ERK1／2的磷酸化，对TβRⅠ和TβRⅡ的表达无影响。SA-B可抑制原代正常培养的HSC合成Ⅰ型胶原，抑制TGF-β1刺激的HSCⅠ型胶原的合成及分泌。SA-B对HSC培养液中MMP-2和MMP-13的活性无明显作用，对MMP-9活性则有明显的促进作用。结论 SA-B抑制了正常原代培养已活化的HSC和经TGF-β1刺激的HSC内ERK信号传导通路，这一抑制作用与HSC的TGF-β1受体表达无关。SA-B通过抑制TGF-β1的信号传导，减少了HSC对Ⅰ型胶原的合成与分泌，此种细胞功能的改变可能与基质金属蛋白酶的降解作用无关。     

AdIL-10对肝星状细胞α-SMA、TGF-β1及TNF-α表达的影响

目的应用携带大鼠白介素-10（IL-10）基因的重组缺陷型腺病毒（AdIL-10）感染原代培养的大鼠肝星状细胞（HSC），通过体外实验观察外源性大鼠IL-10基因对HSC中α-SMA、TGF-β1和TNF-α表达的影响。方法以胶原酶原位灌注、密度梯度离心法分离大鼠原代HSC，并用AdIL-10感染HSC（同时设AdGFP对照组及正常对照组），分别采用RT-PCR法和Western Blot法检测感染后HSC中IL-10 mRNA及蛋白水平的表达；Westem Blot法检测HSC中转化生长因子-β1（TGF-β1）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的表达；免疫组织化学法检测α-SMA在HSC中的表达。运用图像处理系统对结果加以分析。结果感染AdIL-10的HSC中IL-10的mRNA及蛋白水平均较对照组上调（P〈0．001）；而其表达的TGF-β1、TNF-α及α-SMA与对照组相比明显降低（P均〈0．001）；正常对照组和AdGFP对照组中上述指标的表达均无明显差异（P均〉0．05）。结论外源性大鼠IL-10基因导人大鼠HSC后可能通过影响TGF-β1及TNF-α的表达而抑制HSC的活化。     

化学缺氧对肝星状细胞基质金属蛋白酶-2表达及活性的影响

目的探讨化学缺氧对大鼠HSC MMP-2的表达和活性的影响及其调节机制。方法用不同浓度的氯化钴（CoCl2,0、50、100、200μmol/L）造成大鼠HSC化学缺氧,RT-PCR、酶图法分别检测MMP-2 mRNA表达及其酶活性;Western blot检测缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）表达;用荧光素酶报告基因分析技术测HIF-1α对MMP-2基因的激活作用。结果随CoCl2浓度从0μmol/L依次递增到200μmol/L,MMP-2 mRNA表达的量（用吸光度值表示）从0.53±0.12依次上调到1.57±0.11,4组间差异有统计学意义（F=34.21,P〈0.01）,其活性下降幅度（用吸光度值表示）从84.49±5.38逐渐下降至53.70±3.42,4组间差异有统计学意义（F=29.54,P〈0.01）,HIF-1α表达量依次增加;核蛋白提取物与MMP-2基因探针（含缺氧反应元件）共浴后,电泳迁移条带产生延迟现象,竞争性序列能部分拮抗其结合。结论化学缺氧能使HSC MMP- 2 mRNA表达上调,酶活性下降。HIF-1α可能参与了缺氧条件下MMP-2的表达调节。     

川芎嗪对内毒素刺激大鼠肝星状细胞增殖及瘦素和胶原表达的影响

目的观察川芎嗪对内毒素刺激肝星状细胞（HSC）增殖及瘦素表达的影响，并观察Ⅰ型胶原表达的变化。研究川芎嗪抗肝纤维化过程中的机制。方法内毒素刺激大鼠肝星状细胞的基础上，加川芎嗪分组培养。MTT法检测其吸光度，ELISA法检测其上清液瘦素水平和Ⅰ型胶原。结果内毒素刺激HSC增殖，川芎嗪抑制内毒素诱导的HSC增殖，并抑制Ⅰ型胶原表达和瘦素的表达。结论川芎嗪抑制内毒素诱导的HSC活化和Ⅰ型胶原表达。川芎嗪有可能通过抑制HSC增殖和抑制瘦素的分泌发挥抗纤维化作用。     

雌激素膜快速效应对兔血管平滑肌细胞iNOS快速激活的影响

目的 探讨17β-雌二醇（17β-estradiol,E2）通过快速激活诱导型一氧化氮合成酶（iNOS）的活性,调节细胞外信号调节激酶（mitogen-activated protein kinase,p42/44 MAPK）表达抑制血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）增殖的机制。方法 在培养的VSMCs的基础上,采用放射免疫测定法(RIA)和Western blot检测E2预处理前后胎牛血清（fetal calf serum,FCS）对VSMCs中诱导型iNOS的活性及磷酸化p42/44 MAPK蛋白和p42/44 MAPK总蛋白表达的影响。采用比色法检测E2预处理后VSMCs中NO含量的变化。结果 E2预处理5 min,即可逆转FCS诱导的iNOS活性下降,此效应在E2预处理15 min时达到高峰,处理30 min后此效应减弱。基因转录抑制剂放线菌素D（actinomycin D,Act D）预处理后对此过程无影响,而三苯氧胺预处理可明显逆转E2诱导的iNOS活性增加。比色法检测上清液中NO的含量显示,E2预处理15 min,NO的含量明显增加。Western blot的结果显示,E2预处理15 min,可明显抑制磷酸化p42/44 MAPK蛋白的表达,而对总p42/44 MAPK蛋白的表达无影响。NO合酶(NOS)抑制剂L-硝基左旋精氨酸甲酯(L-NAME)预处理,可逆转E2诱导的磷酸化p42/44 MAPK的表达下降。结论 E2可通过快速激活iNOS增加NO释放,下调磷酸化p42/44 MAPK的活性,抑制VSMCs增殖。     

肝苏对人肝细胞和肝星状细胞增殖、氧应激以及细胞外基质表达的影响

背景：有研究显示肝苏对肝细胞具有保护、抗炎、抗氧化和抗肝纤维化的作用,但其作用机制未明。目的：探讨肝苏对人肝细胞和肝星状细胞（HSC）增殖、氧应激以及细胞外基质表达的影响。方法：分别用0．01～1．0mg／ml肝苏培养肝细胞和HSC,以M1丫r法检测肝苏对肝细胞和HSC增殖的影响：用次氮基三乙酸铁（Fe-NTa）和0．05—1．0mg／ml肝苏共同培养肝细胞和HSC,检测超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量;用1．5mg／ml和2．5mg／ml肝苏培养HSC,以酶联免疫吸附测定（ELISA）检测细胞外基质透明质酸（HA）、层黏连蛋白（LN）、I型胶原、Ⅲ型胶原和细胞因子转化生长因子（TGF）-β1含量。结果：在0．05。1．0mg／ml浓度范围内,肝苏可促进肝细胞增殖,但各浓度肝苏对HSC增殖无明显影响。肝苏可增高肝细胞SOD活性,降低肝细胞和HSCMDA含量,但对HSCSOD活性无明显影响。同时肝苏可抑制HSC细胞外基质HA、LN和细胞因子TGF-β1的表达,而I型胶原、Ⅲ型胶原无明显差异。结论：肝苏可促进肝细胞增殖,保护肝细胞和HSC免受氧应激损伤,抑制HSC分泌HA、LN和TGF-β1,提示其具有肝细胞保护、抗氧化和抗肝纤维化作用。     

血管紧张素Ⅱ诱导胰腺星状细胞炎性活化的分子机制研究

目的探讨血管紧张素Ⅱ对大鼠胰星状细胞（PSC）核因子κB（NF-κB）信号转导通路活化的影响.方法采用电泳迁移率改变分析（electrophoretic mobility shift assay,EMSA）检测细胞NF-κB的DNA结合活性,Western印迹方法检测NF-κB抑制蛋白（IκBs）降解.单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）基因和蛋白表达分别采用Northern印迹和ELISA方法检测.结果血管紧张素Ⅱ可诱导大鼠PSC内NF-κB发生双相活化,活化高峰分别出现在15 min和6 h后.NF-κB活化伴有IκBα和IκB β联合降解.抗氧化剂吡咯烷二硫基甲酸盐（PDTC）、二碘基苯（DPI）和N-乙酰丝氨酸可明显抑制血管紧张素Ⅱ诱导的NF-κB活化,提示氧化应激反应在NF-κB活化中发挥了重要作用.NF-κB抑制剂MG132和PDTC可显著下调血管紧张素诱导的MCP-1基因表达.结论血管紧张素Ⅱ可通过氧化应激机制活化PSC内NF-κB信号通路,诱导MCP-1表达,从而参与胰腺炎症和纤维化的发生.     

大鼠肝细胞对肝星状细胞增殖与活化的影响及其机制探讨

目的观察肝细胞对原代肝星状细胞（HSC）增殖、表型、胶原表达等生物学特性的影响，并为探讨其作用机制提供线索。方法原位灌流分离大鼠HSC，与大鼠肝细胞系BRL共培养48h。在相差显微镜下观察HSC的表型变化，用Westernblot方法检测其α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Ⅰ型前胶原的表达，TUNEL方法检测其凋亡。取BRL细胞的培养上清液培养原代HSC，用MTT法检测其增殖。采用抗体芯片投水碌示BRL细胞的培养上清液与对照培养基之间细胞凶子的表达差异。结果BRL细胞的培养上清液明显促进HSC增殖（P〈0．01）。与BRL细胞共培养的原代HSC胞体收缩性增强，Ⅰ型前胶原及α-SMA的表达上调，凋亡增加（P〈0．01）。较对照培养基，BRL细胞的培养上清液中帆管内皮生长因子（VEGF）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、金属蛋白酶组织抑制剂（TIMP-1）等三种细胞因子显著上调。结论肝细胞可促进原代HSC的增殖与活化，其机制可能与肝细胞分泌VEGF、MCP-1、TIMP-1等细胞因子有关。     

内毒素刺激Kupffer细胞对肝星状细胞前胶原基因表达的影响

背景：肠源性内毒素血症对肝纤维化具有启动作用,肝星状细胞（HSC）活化是肝纤维化发生、发展的中心环节。目的：探讨内毒素刺激Kupffer细胞对HSC前胶原基因表达的影响及其可能机制。方法：改良链酶蛋白酶、胶原酶原位灌流和密度梯度离心分离大鼠肝脏Kupffer细胞和HSC。以RNA斑点杂交检测脂多糖（LPS）、Kupffer细胞、LPS与Kupffer细胞共培养和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）对HSC前胶原mRNA表达的影响,放射免疫法检测LPS对Kupffer细胞和HSC产生TNF-α的影响,RNA印迹法检测LPS和TNF-α对Kupffer细胞和HSC转化生长因子-β（TGF-β）mRNA表达的影响结果：经低浓度（0.5、1、5μg/ml）LPS处理的Kupffer细胞培养上清可增加HSCⅠ、Ⅲ、Ⅳ型前胶原mRNA表达,经高浓度（10、15、20μg/ml）LPS处理的Kupffer细胞培养上清、单独LPS、未经处理的Kupffer细胞培养上清、单独TN-α均无此作用。Kupffer细胞培养上清中的TNF-α含量随LPS浓度梯度的增加而递增,HSC培养上清中的TNF-α含量则无明显变化。TNF-α不能增加HSC TGF-βmRNA表达,但能增加Kupffer细胞TGF-βmRNA表达;经LPS或TNF-α处理的Kupffer细胞培养上清能增加HSC TGF-βmRNA表达。结论：低浓度内毒素能上调HSC前胶原基因表达,该作用有赖于内毒素激活Kupffer细胞所产生的活性介质的参与。     

转化生长因子β1对大鼠肝星状细胞表达β-连环蛋白的影响

目的研究转化生长因子β1（TGF—β1）对大鼠肝星状细胞（HSC）表达β-连环蛋白（β-catenin）的影响。方法采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）比较经不同浓度的TGF-β1刺激不同时间后HSC表达β-catenin、smad3和α-SMA mRNA的变化,并比较三者之间的关系。结果1ng／ml TGF—β1刺激2h后,HSC表达β—catenin mRNA、smad3 mRNA和α—SMA mRNA量最大,β—catenin mRNA表达与两者均具有明显的相关关系（r=0．947,P〈0．01;r=0．950,P〈0．01）。结论β—catenin在TGF—β1活化HSC的过程中发挥重要作用。