骨髓间充质干细胞共培养对转化生长因子β1诱导的ARPE-19上皮间充质转化的影响

目的分析间充质干细胞(MSCs)共培养对转化生长因子(TGF)β1诱导的ARPE-19细胞上皮间充质转化(EMT)的影响。方法常规培养人视网膜色素上皮(RPE)细胞系ARPE-19细胞并进行分组处理:正常组(CON组)常规培养不作处理;TGFβ1组给予5 ng/ml浓度的重组人TGFβ1诱导EMT;共培养组(MSCs组)在MSCs与ARPE-19共培养的基础上诱导EMT。利用CCK8法检测细胞增殖活性;检测各组EMT指标α-平滑肌肌动蛋白(SMA)、Vimentin、闭锁连接蛋白(ZO)-1及E-cadherin表达变化;利用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测基质金属蛋白酶抑制因子(TIMP)-1和基质金属蛋白酶(MMP)-9水平。结果 TGFβ1组ARPE-19细胞的增殖活性显著低于CON组,而MSCs组细胞增殖能力显著高于TGFβ1组。TGFβ1刺激可引起细胞内α-SMA与Vimentin蛋白与mRNA表达显著增高,ZO-1与E-cadherin蛋白与mRNA表达水平显著降低(P0.05);MSCs共培养预处理能逆转TGFβ1诱导的EMT水平,降低α-SMA与Vimentin蛋白及mRNA表达,提高ZO-1与E-cadherin蛋白与mRNA表达水平。此外,TGFβ1组MMP-9、TIMP-1及MMP-9/TIMP-1水平均显著增加,而MSCs组能逆转TGFβ1刺激效应,显著降低MMP-9、TIMP-1及MMP-9/TIMP-1水平(P0.05)。结论 MSCs共培养能减轻TGFβ1诱导的ARPE-19细胞EMT水平,且对ARPE-19细胞增殖有一定影响。     

定喘汤对支气管哮喘小鼠肺组织STAT1、STAT6及外周血γ-干扰素的影响

目的 观察定喘汤对卵蛋白(OVA)致敏的支气管哮喘(哮喘)小鼠模型肺组织中信号转导和转录激活因子1(STAT1)、信号转导和转录激活因子6(STAT6)、外周血γ-干扰素(IFN-γ)的影响,并探讨其作用机制.方法 雄性BALB/c小鼠随机分为5组.OVA腹腔注射和雾化吸入诱发哮喘发作后予药物治疗(对照组除外).逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法半定量测定肺组织中STAT1、STAT6 mRNA的表达水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测外周血中IFN-γ的浓度,并常规做病理切片.结果 与哮喘组(1.71、1.67、141.40)对照,定喘汤治疗组STAT1(0.72)、STAT6(0.68)明显降低(P<0.01),IFN-γ(375.99)明显升高(P<0.01).结论 定喘汤通过抑制STAT1、STAT6的表达及刺激IFN-γ生成来减轻哮喘时的气道黏膜炎症.     

定喘汤对支气管哮喘小鼠肺组织STAT1、STAT6及外周血γ-干扰素的影响

目的观察定喘汤对卵蛋白（OVA）致敏的支气管哮喘（哮喘）小鼠模型肺组织中信号转导和转录激活因子1（STAT1）、信号转导和转录激活因子6（STAT6）、外周血γ-干扰素（IFN-γ）的影响,并探讨其作用机制。方法雄性BALB/c小鼠随机分为5组。OVA腹腔注射和雾化吸入诱发哮喘发作后予药物治疗（对照组除外）。逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法半定量测定肺组织中STAT1、STAT6 mRNA的表达水平,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测外周血中IFN-γ的浓度,并常规做病理切片。结果与哮喘组（1.71、1.67、141.40）对照,定喘汤治疗组STAT1（0.72）、STAT6（0.68）明显降低（P〈0.01）,IFN-γ（375.99）明显升高（P〈0.01）。结论定喘汤通过抑制STAT1、STAT6的表达及刺激IFN-γ生成来减轻哮喘时的气道黏膜炎症。     

上皮-间充质转化对消化系统肿瘤及纤维化作用的研究进展

上皮-间充质转化(EMT)是近年细胞生物学领域的重大发现;在生理学方面,EMT可引起胚胎形成、伤口愈合和组织再生.在病理学方面,能引起组织纤维化、肿瘤发生、发展、转移及耐药性的形成.目前对于EMT的相关研究正成为临床和基础研究领域十分活跃的课题,对于众多疾病的防治具有深远影响.近期一些研究阐明了EMT关于某些疾病的发病基础机制及其主要的调节因子.将EMT机制作为靶向治疗的药物治疗方案可被应用于预防组织纤维化及抑制肿瘤进展方面.在消化系统领域,有许多关于EMT在胃肠道肿瘤、肝脏肿瘤、胰腺肿瘤及肝纤维化方面起到关键性作用的证据.然而,EMT会在不同疾病中表现出不同的变化,而且在许多特殊疾病中EMT的调节因子尚待证实.本文将对目前关于EMT在消化系统领域肿瘤及纤维化方面作用的研究进展作一综述.     

肺间质纤维化小鼠肺内T细胞γ-干扰素和转化生长因子β1的表达

目的 探讨肺组织内T细胞及其转化生长因子β1(TGF-β1)/γ-干扰素(IFN-γ)表达与肺间质纤维化的关系.方法 C57BL/6小鼠30只,随机分为5组,即正常对照组和博莱霉素1、2、3、4周组.采用气管内注射博莱霉素(5 mg/kg)建立纤维化模型,分别于造模后1、2、3、4周断头处死,留取各组小鼠肺组织,观察肺泡炎和肺纤维化程度,流式细胞仪在单个细胞水平检测CD4+、CD8+、CD3+/CD8-/IFN-γ+和CD3+/CD8-/TGF-β1+细胞的频率.结果 博莱霉素组小鼠出现明显纤维化;与正常对照组相比,博莱霉素组肺组织CD4+明显增多,CD8+显著降低(P值均<0.01);博莱霉素组肺组织CD4+T细胞来源IFN-γ水平低于正常对照组,而CD4+T细胞来源TGF-β1水平显著增高于正常对照组(P值均<0.01);CD4+TGF-β1+/CD4+IFN-γ+比值进行性增高,与肺纤维化评分呈正相关(r=0.683,P<0.01).结论 CD4+T细胞来源IFN-γ与TGF-β1分别下调与上调,参与肺纤维化.     

ERK1/2蛋白在17β-雌二醇抑制睾酮诱导的心肌细胞肥大反应中的作用

目的 观察17β-雌二醇对睾酮诱导的心肌肥大反应的影响,探讨细胞外信号调节激酶(ERK1/2蛋白)在性激素对心肌肥大影响中的作用.方法 采用差速贴壁法分离、纯化培养新生SD大鼠心肌细胞,以Bradford法测定心肌细胞蛋白质含量,同位素法分析3H-亮氨酸(3H-Leu)掺入,以免疫印迹法检测心肌细胞ERK1/2蛋白表达水平的变化.结果 10-10 ～ 10-6 mol/L 17β-雌二醇可明显对抗睾酮诱导的心肌细胞蛋白质含量和3H-Leu掺入的增加,其中以10-8 mol/L 17β-雌二醇作用最为明显;预先给予10-6 mol/L雌激素受体拮抗剂他莫昔芬作用2h,可部分取消17β-雌二醇对睾酮诱导的心肌细胞蛋白质含量增加的抑制效应.用50μmol/L ERK1/2上游激酶MEK1/2的特异性抑制剂PD98059预处理2h不能增强17β-雌二醇对睾酮诱导的心肌细胞3H-Leu掺入的抑制作用;10-8 mol/L 17β-雌二醇可以对抗睾酮诱导的心肌细胞ERK1/2蛋白表达增加;10-6mol/L他莫昔芬预处理2 h可部分取消17β-雌二醇对睾酮诱导的心肌细胞ERK1/2蛋白表达增加的抑制作用.结论 17β-雌二醇经雌激素受体介导下调睾酮诱导的心肌细胞ERK1/2蛋白表达,从而抑制由睾酮诱导的心肌细胞肥大反应.     

老年肺癌患者ERK1/2和GSK-3β蛋白表达特点及意义

目的 探讨老年肺癌患者细胞外调节蛋白激酶(ERK)1/2和糖原合成酶激酶(GSK)-3β蛋白表达特点及意义。方法 选取老年肺癌患者84例,均行胸腔镜下肺叶切除术治疗,术中取肺癌组织和癌旁组织(距离癌变组织>5 cm)。免疫组化法检测ERK1/2、p-ERK1/2、GSK-3β蛋白表达情况。收集患者性别、年龄、吸烟史、组织学类型、TNM分期、淋巴结转移情况、分化程度、肿瘤直径、被膜侵犯情况;术后进行3年随访,记录患者生存情况。结果 肺癌组织中ERK1/2、p-ERK1/2阳性表达率明显高于癌旁组织(P<0.01)。GSK-3β蛋白阳性表达于癌旁正常肺组织细胞膜和细胞质中,肺癌组织中GSK-3β蛋白阳性表达率明显低于癌旁组织(P<0.01)。ERK1/2、p-ERK1/2、GSK-3β表达阳性率在不同组织学类型、TNM分期、淋巴结转移、分化程度、被膜侵犯的老年肺癌患者间差异有统计学意义(P<0.01)。ERK1/2、p-ERK1/2阳性的老年肺癌患者3年生存率明显低于ERK1/2、p-ERK1/2阴性者(P<0.01);GSK-3β阴性的老年肺癌患者3年生存率...     

ERK1/2信号转导通路在宫颈癌发病中的作用

细胞外信号调节激酶（ERK）是丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）家族成员之一,该酶被激活后,在细胞生长、发育、分裂、死亡及恶性转化等过程中发挥作用。由E RK1/2介导的信号转导通路接受来自细胞内外的各种丝裂原刺激和应激,激活ERK1/2底物,调控细胞增殖、凋亡与侵袭。为了揭示宫颈癌发生发展的分子学机制，探讨宫颈癌的有效防治方法，研究者从ERK1／2信号转导通路途径对宫颈癌做了大量研究。     

细胞外信号调节激酶1/2在白介素-1β抑制胰岛β细胞葡萄糖刺激下胰岛素分泌中的作用

目的 探讨细胞外信号调节激酶1/2 (ERK1/2)信号转导通路在人IL-1β抑制小鼠胰岛素瘤胰岛β细胞(βTC-6)葡萄糖刺激下胰岛素分泌反应(GSIS)中的作用. 方法 (1)βTC-6细胞分别于含不同浓度(0、1.38、5.5 mmol/L)葡萄糖的KRBH缓冲液中孵育60 min,放射免疫法检测细胞上清液中胰岛素浓度;(2)βTC-6细胞分别于含不同浓度(0、1.38、5.5 mmol/L)葡萄糖的KRBH缓冲液中孵育5min,蛋白质免疫印迹法检测细胞蛋白中磷酸化ERK1/2及β-actin的水平;(3)βTC-6细胞加入IL-1β(0.15、1.5、15 ng/ml)培养24 h后于含1.38 mmol/L葡萄糖的KRBH缓冲液中孵育60 min,检测上清液中胰岛素浓度;(4)βTG-6细胞加入IL-1β(0.15、1.5、15 ng/ml)培养24 h后于含1.38 mmol/L葡萄糖的KRBH缓冲液中孵育5 min,检测细胞蛋白中磷酸化ERK1/2及β-actin的水平. 结果 (1)βTC-6细胞在1.38 mmol/L葡萄糖刺激时胰岛素分泌及ERK1/2磷酸化水平均达到高峰;(2)IL-1β可抑制βTC-6细胞葡萄糖刺激下的ERK1/2磷酸化及胰岛素分泌,作用与剂量呈正相关. 结论 ERK1/2信号转导通路可能在IL-1β抑制βTC-6细胞葡萄糖刺激下的胰岛素分泌反应中发挥重要作用.     

干扰素-γ诱导的单核因子、单核细胞趋化蛋白-1和转化生长因子-β1在变应性鼻炎的表达及其意义

目的探讨干扰素-γ诱导的单核因子(monokine induced by IFN-γ,Mig)、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)、转化生长因子-β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)在变应性鼻炎发病中的作用及变应性鼻炎患者Th1/Th2/Th3亚群的功能状态。方法抽取变应性鼻炎患者和健康对照者外周血,用ELISA法检测血清Mig、MCP-1及TGF-β1的含量。结果健康对照组血清Mig为(90.99±21.92)pg/ml,高于变应性鼻炎组的(-4.91±28.01)pg/ml及变应性鼻炎合并哮喘组的(-8.33±8.34)pg/ml(P=0.000)。变应性鼻炎患者血清MCP-1浓度为(81.16±1.40)pg/ml,明显高于健康对照组的(51.56±2.91)pg/ml(P=0.000);变应性鼻炎合并支气管哮喘患者血清MCP-1浓度为(103.31±11.32)pg/ml,较单纯变应性鼻炎患者高(P=0.003);MCP-1与速发相反应的相关典型症状,如鼻塞(r=0.380,P=0.001)、喷嚏(r=0.314,P=0.006)、流涕(r=0.417,P=0.000)、体征(r=0.455,P=0.000)呈正相关。变应性鼻炎及变应性鼻炎合并哮喘患者血清TGF-β1分别为(51.66±5.42)和(54.43±5.10)ng/ml,高于健康对照组的(44.17±7.33)ng/ml(P=0.000),TGF-β1与鼻塞(r=0.882,P=0.000)、流涕(r=0.288,P=0.013)、体征(r=0.559,P=0.000)呈正相关。健康对照组、变应性鼻炎组、变应性鼻炎合并哮喘组血清MCP-1及TGF-β1表达不存在因年龄、性别引起的统计学差异。结论变应性鼻炎和支气管哮喘存在Th2亚群强势,变应性鼻炎患者体内出现保护性(或调节性)Th3功能增强,不同年龄、性别不影响血清MCP-1及TGF-β1表达。     

iNOS及ERK1/2信号转导通路在17β-雌二醇抑制血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的: 观察诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）及细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）信号转导通路在17β-雌二醇（17β-estradiol,E2）抑制血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）增殖中的作用。方法: 采用MTT比色法和Western blot技术,检测E2预处理前后胎牛血清（fetal calf serum,FCS）对VSMCs中DNA合成、iNOS表达及磷酸化的ERK1/2蛋白表达的影响。结果: E2作用24 h,可明显抑制FCS诱导的VSMCs增殖。Western blot的结果显示,FCS孵育VSMCs后,iNOS蛋白的表达下降,磷酸化的ERK1/2蛋白表达增加。E2预处理后,可增加iNOS蛋白的表达,抑制磷酸化ERK1/2蛋白表达。若提前应用iNOS阻断剂L-精氨酸甲酯（L-NAME）孵育VSMCs,可部分逆转E2诱导的磷酸化的ERK1/2蛋白表达下降的效应。结论: E2可抑制FCS诱导的VSMCs增殖,其作用可能与增加iNOS蛋白的表达,抑制磷酸化的ERK1/2表达有关。     

鱼藤酮诱导多巴胺能细胞α-突触核蛋白聚集和ERK1/2通路活化的研究

目的探讨鱼藤酮对多巴胺能细胞α-突触核蛋白聚集和细胞外信号调节激酶-1／2（ERK1／2）通路活化的影响。方法用鱼藤酮处理神经元样分化的PCI2细胞,四甲基偶氮唑盐法检测细胞活力,免疫荧光法检测α-突触核蛋白聚集,免疫细胞化学法检测ERK1／2通路活化情况。结果鱼藤酮处理后细胞活力呈时间依赖性下降;磷酸化ERK1／2水平逐渐升高（P均〈0．01）;处理16h后细胞内出现α-突触核蛋白聚集体,24h后进一步增多。结论鱼藤酮可诱导α-突触核蛋白聚集和ERK1／2通路活化,参与多巴胺能神经元损伤。     

人参皂苷Rb1对过敏性哮喘大鼠炎症反应、免疫功能及JAK2/STAT3信号通路的影响

目的 探讨人参皂苷Rb1对过敏性哮喘大鼠炎症反应、免疫功能、Janus激酶(JAK)2/信号转导和转录激活因子(STAT)3信号通路的影响。方法 卵清蛋白致敏建立过敏性哮喘大鼠模型,造模成功的SD大鼠随机分成模型组、地塞米松组(0.5 mg/kg)、人参皂苷Rb1低剂量组(25 mg/kg)、人参皂苷Rb1高剂量组(50 mg/kg),每组14只。取14只健康大鼠设为对照组,各组腹腔注射相应药物处理14 d。酶联免疫吸附试验检测大鼠血清白细胞介素(IL)-4、肿瘤坏死因子(TNF)-α、干扰素(IFN)-γ、免疫球蛋白(Ig)E水平,苏木素-伊红染色观察肺组织病理变化并进行肺损伤评分,分别采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)法和Western印迹法测定大鼠肺组织JAK2、STAT3 mRNA和蛋白表达水平。结果 对照组肺组织结构正常,未观察到病理学改变;模型组肺组织出现肺泡壁充血和炎性细胞浸润的明显病理变化;地塞米松组、人参皂苷Rb1高剂量组肺组织损伤的严重程度明显减轻,炎性细胞浸润明显被抑制;人参皂苷Rb1低剂量组肺组织仍可见炎症反应,但较模型组程度轻。与对照组比较,模型组血清IL-4...     

促进PPAR-γ表达对TGF-β1诱导人胰腺癌BxPc-3细胞上皮-间质转化的影响

目的 通过促进过氧化物酶体增殖物激活受体 γ(peroxisome proliferator activated receptor-γ,PPAR-γ)的表达,分析其对TGF-β1诱导人胰腺癌BxPc-3细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程的影响.方法 培养...     

ERK1/2信号通路在内皮微粒诱导人脐静脉内皮细胞ICAM-1表达中的作用

目的:探讨细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）信号通路在内皮微粒（EMPs）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）表达细胞间黏附分子-1（ICAM-1）中的作用。方法:体外培养HUVECs,选取生长良好的第4～5代细胞,分为EMPs不同浓度作用组、EMPs不同时间作用组及ERKl/2特异性抑制剂组。应用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测ICAM-1和磷酸化ERK1/2蛋白的表达。用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测ICAM-1 mRNA的表达。结果:EMPs作用HUVECs后,ICAM-1 mRNA和其蛋白以及磷酸化ERK1/2蛋白的表达显著高于对照组,且呈浓度和时间依赖性的关系（均P<0.01）;而ERKl/2特异性抑制剂PD98059对ICAM-1 mRNA和其蛋白以及磷酸化ERK1/2蛋白的表达,均有明显的抑制作用（均P<0.01）。结论:EMPs可诱导HUVECs中ICAM-1表达,其机制可能与激活ERK1/2信号通路有关。     

基于JAK2/STAT3通路探究七氟醚对心肌缺血再灌注大鼠血管内皮损伤的改善作用

目的 探讨七氟醚是否能通过调节蛋白酪氨酸激酶2(JAK2)/转录激活因子3(STAT3信号通路减轻心肌缺血再灌注损伤（MIRI）大鼠血管内皮损伤。方法 将60只大鼠随机分为假手术组、模型组、七氟醚组、抑制剂组和抑制剂+七氟醚组五组,每组各12只,除假手术组外,其余组通过冠状动脉（冠脉）左前降支结扎法建立MIRI模型。模型组和假手术组大鼠实验前2 h尾静脉注射生理盐水1 ml,缺血末再灌注开始时吸入纯氧3 min。七氟醚组大鼠实验前2 h尾静脉注射生理盐水1 ml,缺血末再灌注开始时吸入2%七氟醚3 min;抑制剂组大鼠实验前2 h尾静脉注射3 mg/kg JAK2/STAT3信号通路抑制剂AG490;抑制剂+七氟醚组大鼠实验前2 h尾静脉注射3 mg/kg AG490,缺血末再灌注开始时吸入2%七氟醚3 min。超声心动图检测各组大鼠左心室射血分数（LVEF）、左心室短轴缩短率（LVFS）,左心室收缩末期内径（LVESD）和左心室舒张末期内径（LVEDD）,TTC染色检测各组大鼠心肌梗死面积,ELISA检测各组大鼠血清中内皮素-1(ET-1)、血栓素A2(TXA2)和前列环素（PGI2...     

血清转化生长因子-β1和干扰素-γ在肝硬化及肝癌中的表达及其临床意义

目的探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)和干扰素-γ(IFN-γ)在肝硬化和肝癌患者中的表达及其临床意义.方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定48例肝硬化、40例原发性肝癌、6例转移性肝癌及20例对照组血清中TGF-β1和IFN-γ含量.结果原发性肝癌患者血清TGF-β1水平显著高于肝硬化组和对照组,血清IFN-γ水平明显低于肝硬化组和对照组(P值均<0.05).原发性肝癌组的血清TGF-β1水平显著高于转移性肝癌组(P<0.05), 而两组IFN-γ水平比较差异无显著性(P>0.05).肝硬化及转移性肝癌患者血清TGF-β1和IFN-γ水平比较差异无显著性(P值均>0.05).肿块数目≥3个、直径≥3cm、AFP≤20ng/ml的原发性肝癌患者血清TGF-β1水平明显增高,血清IFN-γ水平显著降低(P值均<0.05).20例原发性肝癌患者经介入或手术治疗后血清TGF-β1水平明显下降,IFN-γ水平明显上升(P<0.05).结论血清TGF-β1和IFN-γ可作为新的血清学标志应用于原发性肝癌的鉴别诊断及近期疗效的判断.     

丹参酮ⅡA对心肌缺血再灌注损伤的保护作用及对JAK2/STAT3通路的影响

目的探讨丹参酮ⅡA(TA)对心肌缺血-再灌注损伤(MIRI)的影响及其对Janus激酶2(JAK2)/信号转导和转录激活因子3(STAT3)通路的影响。方法建立老年大鼠MIRI模型和心肌细胞缺氧/复氧损伤(HRI)模型,分别从体内和体外水平进行研究。采用超声心动图测定心功能,应用全自动生化检测仪检测大鼠血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)。四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测细胞活力,TUNEL法检测细胞凋亡,DCFH-DA荧光探针检测活性氧(ROS)含量,全自动生化检测仪检测细胞上清液丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平,免疫印迹法(Western Blotting)检测相关蛋白表达水平。应用JAK2/STAT3抑制剂AG490干预心肌细胞,观察各项指标变化。结果TA可改善MIRI大鼠心肌梗死面积、心脏射血分数和缩短分数、血清CK和LDH水平(P<0.05),改善HRI心肌细胞活力和凋亡水平(P<0.05),提高HRI心肌细胞抗氧化能力,改善ROS、MDA和SOD水平(P<0.05)。Western Blotting检测结果显示,TA可改善p-JAK2、p-STAT3、Bcl-2/Bax比值、cleaved Caspase-3水平(P<0.05),AG490干预可逆转上述指标变化(P<0.05)。结论TA对MIRI具有一定保护作用,可能通过激活JAK2/STAT3通路减少心肌细胞凋亡从而改善MIRI。     

白细胞介素-2/Janus激酶3/信号转导和转录激活因子5在强直性脊柱炎患者外周血中的表达及临床意义

目的:检测IL-2/Janus激酶3（JAK3）/信号转导和转录激活因子（STAT）5信号通路在AS患者外周血中的表达并探讨其在AS发生发展中的作用机制。方法:收集30例AS活动期患者（ASA）、30例AS稳定期患者（ASS）和50名健康体检者（HC）的临床资料、外周血标本及实验室检查指标。采用实时荧光定量PCR（RT...