槐耳清膏对人肺腺癌A549细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨槐耳清膏对人肺腺癌A549细胞增殖抑制及诱导凋亡的影响。方法制备不同浓度的槐耳清膏(0、3、6、9 mg/ml)和羟基喜树碱100μg/ml作用于A549细胞,分别于24、36和48 h后,采用流式细胞术检测细胞凋亡率。结果槐耳清膏与羟基喜树碱均可诱导A549细胞凋亡,槐耳清膏各浓度组与阴性对照组相比差异显著(P<0.05),且这种抑制存在浓度和时间依赖性,槐耳清膏浓度在3.0 mg/ml 36 h后抑制作用最强,羟基喜树碱组与之比较无显著差异(P>0.05),各浓度槐耳清膏组在与A549细胞作用36 h后达到抑制高峰。结论槐耳清膏在体外能抑制人肺腺癌细胞A549的增殖,诱导细胞凋亡作用。     

厄洛替尼联合Survivin siRNA对人肺腺癌细胞A549增殖的影响

目的探讨厄洛替尼联合Survivin siRNA对人肺腺癌细胞A549增殖的影响。方法选用Survivin siRNA转染和厄洛替尼单独或联合应用于人肺腺癌细胞A549,作用48 h后,应用四甲基偶氮唑蓝比色法检测其对细胞增殖的抑制作用,免疫组化法观察Survivin蛋白表达的变化。结果 Survivin siRNA转染和厄洛替尼两者单独或联合应用于人肺腺癌细胞A549作用48 h后,两种因素单独或联合应用都对细胞增殖有明显的抑制作用,其抑制率分别为（47.68±4.09）%、（60.28±3.23）%、（78.14±4.34）%,较对照组差别有统计学意义（P〈0.01）,并能明显降低细胞内Survivin蛋白的表达水平,联合应用较两者单独应用对细胞增殖的抑制作用更显著（P〈0.01）,对Survivin蛋白表达的抑制作用更强。结论应用siRNA沉默Survivin表达可以提高肺腺癌细胞对厄洛替尼的敏感性。     

白藜芦醇诱导肺腺癌A549细胞凋亡的机制

目的探讨白藜芦醇(Res)诱导肺腺癌A549细胞凋亡的机制。方法用不同浓度Res处理A549细胞24 h后,倒置显微镜观察细胞形态学变化,4,6-二氨基-2-苯基吲哚(DAPI)细胞核染色后荧光显微镜观察细胞凋亡特征,噻唑蓝(MTT)检测对于A549细胞的抑制生长作用,Western印迹法检测Res作用A549细胞后P53、Bax、Bcl-2、Cleaved-Caspase3蛋白的表达变化。结果 Res处理A549细胞后,细胞间隙变大,细胞核分裂,随着药物浓度的增加上述形态变化明显。25²00μmol/L浓度的Res可明显抑制A549细胞的增殖,具有剂量依赖性,24 h的IC50为100μmol/L,而且细胞内的P53、Bax、Cleaved-Caspase3蛋白表达量升高,Bcl-2蛋白被抑制,Bcl-2/Bax比值下降。结论 Res抑制A549细胞增殖,并通过P53途径诱导A549细胞凋亡,Bax、Bcl-2和Cleaved-Caspase3参与了凋亡过程。     

索拉非尼对人肺腺癌细胞株A549抑制作用的研究

目的探讨索拉非尼（Sorafenib）在体外对人肺腺痛细胞株A549增殖、凋亡的影响。方法采用MTT法检测Sor-afenib对A549细胞增殖抑制率,应用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果Sorafenib在1．5～12．20μmol／L浓度范围内能明显抑制A549细胞的增殖,此抑制作用呈时间-剂量依赖效应（P〈0．05）,而不同药物浓度的Sorafenib作用于A549细胞72h,显著增加其凋亡率,呈剂量依赖性,差异有显著性（P〈0．05）。结论Sorafenib能抑制人肺腺癌细胞株A549细胞增殖,呈时间-剂量依赖效应,还能促进A549细胞凋亡,亦呈剂量依赖性。     

姜黄素抗人肺腺癌A549/DDP细胞增殖及诱导凋亡的作用

目的 研究姜黄素对人肺腺癌A549/DDP细胞增殖的抑制作用及其对细胞凋亡的影响.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)测定细胞对顺铂的敏感性和姜黄素对细胞增殖的抑制作用;倒置相差显微镜和荧光显微镜下观察细胞形态学的变化;应用原位末端标记(TUNEL)染色及流式细胞仪检测细胞凋亡情况;以Western blot分析凋亡相关蛋白表达变化.结果 实验中所用的A549/DDP细胞对顺铂耐药,耐药指数为10.82.姜黄素对A549及A549/DDP细胞增殖均有抑制作用,并且呈时间、浓度依赖性(P＜0.05),对两细胞株的半数抑制浓度分别为16.28/μmol/L和18.06μmol/L,差异无统计学意义(P＞0.05).姜黄素处理A549/DDP细胞后,细胞变形、缩小、脱落.Hoechst染色显示A549/DDP细胞核缩小、变形,致密浓染,荧光成团块分布.TUNEL法以及流式细胞仪分析结果示细胞凋亡率呈明显剂量依赖关系(P＜0.05).Western blot结果显示,随姜黄素浓度的增加,天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶8(cysteinyl aspartate-specific protease-8,caspase-8)p10蛋白水平增加.结论 A549/DDP细胞对姜黄素无抗药性,姜黄素对人肺腺癌A549/DDP细胞增殖具有抑制作用,并能诱导细胞凋亡.caspase-8的活化是其中的机制之一.     

厄洛替尼联合RNAi对人肺腺癌A549细胞凋亡及survivin表达的影响

目的探讨厄洛替尼联合survivin siRNA转染对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响及对survivin基因的抑制作用。方法选用survivin siRNA转染和厄洛替尼二者单独或联合作用于人肺腺癌A549细胞,作用48 h后采用流式细胞技术检测其对各组细胞凋亡的影响,Western blot法检测其对survivin蛋白表达的影响。结果 survivinsiRNA转染和厄洛替尼二者单独或联合作用于人肺腺癌A549细胞48 h后细胞凋亡均明显增加（P〈0.05）,并且均能明显降低细胞内survivin蛋白的表达水平,联合应用较单独应用促进细胞凋亡作用更显著（P〈0.05）,对sur-vivin蛋白表达的抑制作用更强（P〈0.05）。结论应用siRNA沉默survivin表达可以提高肺腺癌细胞对厄洛替尼的敏感性。     

铁对人肺腺癌A549细胞凋亡的体外影响

目的了解加铁、去铁对体外培养人肺腺癌细胞株A549细胞凋亡的影响,探讨铁代谢与肺癌发生发展的关系。方法体外培养人肺腺癌细胞株A549细胞,采用不同浓度的去铁胺(DFO)及三氯化铁(FeCl3)以及生理盐水作用A549细胞,通过观察细胞形态学变化、流式细胞术(FCM)检测、TUNEL三种方法检测细胞凋亡的变化。结果①不同浓度的FeCl3作用于A549细胞后,在同一时间点随浓度升高细胞凋亡率(APO%)呈下降趋势;②不同浓度FeC l3作用于A549细胞后,仅150μmol/L组48 h出现凋亡梯带,其余浓度均无凋亡梯带出现。③流式细胞仪(FCM)检测各组APO%分别为:10μmol/L FeCl3组6.7%,50μmol/L FeCl3组4.7%,100μmol/L FeCl3组2.5%,150μmol/L FeC l3组12.6%。④浓度为100μmol/L DFO作用于A549细胞,6、12、24、48h FCM检测APO%为:5.2%、17.5%、42.9%、56.8%。浓度为10、50、100、150μmol/L 24hAPO%分别为10.4%,26.2%,42.9%,48.3%。结论三氯化铁可抑制A549细胞凋亡,去铁胺可诱导A549细胞凋亡,铁螯合剂可成为一种有效的抗肿瘤药物。     

益肺解毒方联合顺铂对肺腺癌A549细胞增殖的影响

目的探讨益肺解毒方联合顺铂对人肺腺癌A549细胞增殖的影响。方法 (1)应用血清药理学方法制备益肺解毒方药物血清。60只SD大鼠,分为低、中、高剂量组及空白血清组,每组15只。给予低、中、高剂量益肺解毒方煎剂及等体积生理盐水灌胃3 d,然后腹主动脉取血,制备益肺解毒方药物血清。(2)应用噻唑蓝(MTT)法检测益肺解毒方含药血清、顺铂及将两者协同后对人肺腺癌A549细胞增殖的抑制作用。益肺解毒方药物血清组分为3个剂量组(低、中、高剂量组)、空白血清组、顺铂组;联合组(低、中、高剂量益肺解毒方与空白血清联合顺铂)。将顺铂设为5个浓度梯度(1、2、4、8、16 mg/L)。另设空白对照组、空白调零组。每组设6个复孔,实验重复3次。计算各组对人肺腺癌A549细胞增殖抑制率。结果低、中、高剂量益肺解毒方药物血清对人肺腺癌A549细胞增殖均具有抑制作用(P<0.05),且剂量与抑制率呈一定量效关系。顺铂对人肺腺癌A549细胞增殖亦具有抑制作用,且随着浓度的增高,抑制率逐渐增高,作用呈现浓度依赖效应。中、高剂量益肺解毒方药物血清与顺铂协同,协同指数>1.15,数据结果提示益肺解毒方可以协同顺铂增加其疗效。而应用低剂量益肺解毒方则与顺铂协同效应为单纯相加。结论益肺解毒方联合顺铂对肺腺癌A549细胞具有协同增效作用。     

重楼皂苷Ⅶ对耐顺铂人肺腺癌A549/DDP细胞增殖的抑制作用

目的探讨重楼皂苷Ⅶ对耐顺铂人肺腺癌A549/DDP细胞增殖的抑制作用。方法 MTT法测定重楼皂苷Ⅶ对A549/DDP细胞的增殖抑制率;流式细胞术检测重楼皂苷Ⅶ对A549/DDP细胞的细胞凋亡率及细胞周期时相分布的影响。结果重楼皂苷Ⅶ对A549/DDP细胞的增殖有明显抑制作用,抑制率随药物浓度增加而增高,具有明显的量-效关系(P<0.05)。同时发现,重楼皂苷Ⅶ对A549/DDP细胞作用48 h及72 h组与24 h组比较细胞增殖抑制率均明显提高(P<0.05),但72 h组与48 h组比较,无统计学意义(P>0.05)。流式细胞仪分析显示,浓度为50μmol/L及100μmol/L的重楼皂苷Ⅶ作用A549/DDP细胞24 h后,与阴性对照组比较早期凋亡细胞比例明显增高;且对细胞周期时相分布影响明显,细胞阻滞G2期。结论重楼皂苷Ⅶ对人肺腺癌A549/DDP细胞的增殖具有明显抑制作用,并呈明显的浓度依赖性,与时间有一定相关性。重楼皂苷Ⅶ可引起早期凋亡细胞比例明显增加,并明显影响A549/DDP细胞周期时相分布。     

黄芩苷对A549肺腺癌细胞增殖的抑制作用及机制

目的探讨黄芩苷对A549肺腺癌细胞株增殖的抑制作用及其相关机制。方法将浓度为0、25、50、100、200、400μmol/L的黄芩苷作用于经体外培养的A549人肺腺癌细胞株24、48、72 h,采用噻唑蓝(MTT)法检测黄芩苷对A549肺腺癌细胞的抑制率;收集30μmol/L黄芩苷孵育24 h后的A549肺腺癌细胞,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定细胞周期蛋白(Cyclin)D1、增殖细胞核抗原(PCNA)及p21 mRNA的表达水平,采用Western印迹法检测Cyclin D1、PCNA及p21蛋白的表达水平。结果不同浓度的黄芩苷对A549肺腺癌细胞的增殖均具有不同程度的抑制作用,并且呈剂量效应、时间效应关系。30μmol/L黄芩苷(实验组)作用于A459肺腺癌细胞24 h后,Cyclin D1、PCNA及其蛋白表达水平低于对照组,p21及其蛋白表达水平高于对照组(P<0.05)。结论通过抑制Cyclin D1、PCNA的表达以及促进p21的表达,黄芩苷抑制A549肺腺癌细胞增殖。     

重构型天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3表达载体诱导人肺腺癌细胞凋亡的意义

目的构建天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(Caspase3)表达载体,观察Caspase3表达载体对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响。方法应用基因重组方法,建立重构型Caspase3基因的真核表达系统pcDNA3.1revCaspase3质粒和野生型pcDNA3.1Caspase3质粒。将实验细胞分为3组转染pcDNA3.1revCaspase3质粒组,转染pcDNA3.1Caspase3质粒组,转染pcDNA3.1质粒空白对照组。前2组用Caspase3抑制剂DEVDfmk干预。应用Caspase3酶活性分析、流式细胞仪及甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测A549细胞Caspase3酶活性变化及细胞凋亡和增殖情况。结果(1)pcDNA3.1revCaspase3质粒组、pcDNA3.1Caspase3质粒组的A549细胞Caspase3酶活性分别是(11.87±0.92)%、(5.34±0.38)%(t=16.02,P<0.01);用Caspase3抑制剂DEVDfmk干预后,pcDNA3.1revCaspase3质粒组酶活性为(7.04±0.48)%,仍明显高于野生型pcDNA3.1Caspase3质粒组的(4.51±0.20)%(t=11.86,P<0.01)。(2)流式细胞分析结果显示,pcDNA3.1revCaspase3质粒组、pcDNA3.1Caspase3质粒组和pcDNA3.1质粒组的A549细胞凋亡率分别是(20.1±3.5)%、(7.8±2.8)%、(1.4±0.3)%,3组差异有统计学意义(F=44.01,P<0.01)。(3)MTT比色检测显示pcDNA3.1revCaspase3质粒组、pcDNA3.1Caspase3质粒组和pcDNA3.1质粒组的A549细胞生存率分别是(35.7±1.1)%、(72.8±2.9)%、(85.4±4.8)%,转染pcDNA3.1revCaspase3质粒组生存率明显低于其他两组(F=375.07,P<0.01)。结论pcDNA3.1revCaspase3在A549细胞内有较强的自身活化能力,对Caspase3抑制剂抵抗作用较强,可明显诱导A549细胞凋亡并抑制A549细胞生长。     

人肺腺癌A549细胞系培美曲塞耐药细胞株模型的建立

目的建立人肺腺癌A549细胞培美曲塞耐药细胞株模型。方法以人肺腺癌A549细胞为亲本株,应用高浓度反复间歇法模拟临床给药模式建立人肺腺癌A549细胞培美曲塞耐药细胞株。MTT法绘制生长曲线、计算倍增时间,同时检测耐药株细胞对顺铂、依托泊苷、紫杉醇、长春新碱的药物敏感性。结果亲本株IC_50为(181.75±12.56)ng/ml,耐药株IC_50为(4930.40±129.71)ng/ml,最终获得耐药指数为27.18±1.16的人肺腺癌A549细胞培美曲塞耐药细胞株,命名为A549/PEM。A549和A549/PEM增殖速度接近,倍增时间分别为(62.78±1.06)h和(62.35±0.89)h(P=0.773)。A549/PEM同时对顺铂、依托泊苷耐药,耐药指数分别为(1.93±0.02)、(8.26±1.55);对紫杉醇、长春新碱敏感,耐药指数分别为(0.89±0.10)、(0.95±0.11)。结论本研究成功建立的人肺腺癌A549细胞培美曲塞耐药细胞株模型。     

HPS-1对人肺腺癌A549细胞凋亡诱导作用的机制研究

目的 评价HPS-1对人肺腺癌A549细胞凋亡蛋白Caspase 3、8、9以及Bax、Bcl-2mRNA表达的影响,探究HPS-1抗肺肿瘤可能机制.方法 人肺腺癌A549细胞经低、中、高剂量HPS-1处理不同时间后,噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞的增殖情况,流式细胞术(FCM)法检测各组细胞凋亡率及细胞周期比例,比色法检测各组细胞凋亡蛋白Caspase-3、8、9的表达,RT-PCR法检测各组细胞Bax、Bcl-2 mRNA的表达.结果 MTT结果显示,低、中、高剂量HPS-1对人肺腺癌A549细胞的增殖具有明显抑制作用,且具有时间、剂量依赖性;FCM法检测发现,低、中、高剂量HPS-1对人肺腺癌A549细胞的凋亡具有促进作用,且与剂量呈正相关;比色法检测各组细胞发现,HPS-1促进凋亡蛋白Caspase-3、8、9的上调,且HPS-1高剂量组凋亡蛋白上调更明显.结论 HPS-1具有抑制人肺腺癌A549细胞增殖、诱导其凋亡作用,且该作用可能与HPS-1阻滞细胞周期G1期,上调凋亡蛋白Caspase-3、8、9及Bax mRNA表达,下调Bcl-2 mRNA表达有关.     

诺帝对人肺腺癌细胞A549及其耐药株A549DDP体外生长的影响及机制

目的探讨诺帝对肺腺癌细胞系A549及耐顺铂株A549DDP的作用及机制,为诺帝的临床应用提供理论依据。方法 MTT法检测诺帝对A549及A549DDP细胞增殖的抑制作用,流式细胞术（FCM）分析细胞周期,免疫细胞化学SP法及原位杂交法分别检测细胞质内P糖蛋白及血管内皮生长因子（VEGF）mRNA表达。结果诺帝干预后A549及A549DDP细胞增殖明显受抑,细胞周期阻滞于G0/G1期,S期细胞减少;A549及A549DDP细胞质内P糖蛋白及VEGF mRNA表达均明显降低。结论诺帝对A549及A549DDP细胞生长均有抑制作用,其机制可能是抑制肿瘤血管生成及降低P糖蛋白表达。     

GRHL2沉默对肺癌A549细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨GRHL2沉默对肺癌A549细胞的增殖、凋亡的影响。方法利用RNA干扰技术,构建GRHL2沉默慢病毒表达载体,将肺癌A549细胞分为3个组,实验组:GRHL2沉默慢病毒感染的A549细胞系;阴性对照组:空载慢病毒感染的A549细胞系;空白对照组:不给予任何处理的A549细胞系。采用倒置荧光显微镜观察细胞绿色荧光蛋白的强度,通过实时定量聚合酶链式反应和蛋白质印迹法检测肺癌A549细胞中GRHL2 mRNA和蛋白质表达水平。采用细胞计数试剂盒检测GRHL2沉默对A549细胞增殖的影响。采用Annexin V-APC/PI细胞凋亡检测试剂盒及流式细胞术分析GRHL2沉默对A549细胞凋亡的影响。结果实验组中GRHL2 mRNA及蛋白质表达水平均较空白对照组及阴性对照组显著降低(F=48.13、42.57,P值均<0.05),A549细胞的增殖能力明显下降(F=65.64,P<0.05),凋亡显著增强(F=56.76,P<0.05)。结论靶向沉默GRHL2能显著抑制肺癌A549细胞的增殖并促进其凋亡,GRHL2有望成为临床肺癌靶向治疗的新靶点。     

肺癌平药物血清对A549人肺癌细胞凋亡及基因表达的影响

目的探讨肺癌平治疗肺癌的作用机制。方法采用血清药理学方法孵育A549人肺癌细胞，通过电镜、流式细胞术、免疫细胞化学方法检测肺癌平药物血清作用后对细胞凋亡及相关基因bcl-2、p53表达的影响。结果肺癌平药物血清作用后电镜下可见凋亡小体形成，流式细胞仪检测可见亚二倍体核型峰的特征，免疫细胞化学法显示抑癌基因p53主要定位在细胞核，部分细胞浆也有淡染。癌基因bcl-2主要表现为胞浆着色，流式细胞仪分析药物血清作用后，p53表达增强，bcl-2表达降低，随着作用时间延长，两种基因表达明显增强。结论肺癌平治疗肺癌的作用机制是通过诱导肺癌细胞凋亡及影响相关基因bcl-2、p53表达实现的。     

脆性组胺酸三联体基因对人肺腺癌A549细胞恶性表型的影响

目的研究外源性脆性组胺酸三联体(FHIT)基因在体内外对人肺腺癌A549细胞恶性表型的影响。方法用脂质体介导外源FHIT基因转染A549细胞,建立单克隆细胞系FHITA-549和PEGFP-A549。逆转录聚合酶链反应(RTPCR)、免疫组化方法检测外源FHIT基因在A549细胞的表达状况。采用细胞生长曲线、集落形成试验、流式细胞仪及裸鼠移植瘤试验研究外源FHIT基因对A549细胞体外增殖、凋亡、细胞周期和体内成瘤性的影响。结果RTPCR试验证实FHIT-A549中有FHITmRNA表达,免疫组织化学染色显示FHIT-A549细胞FHIT蛋白表达强阳性,而A549细胞和转空载体的PEGFPA549细胞FHIT基因和蛋白表达均阴性。FHIT-A549细胞的集落形成率为2.6%,显著低于A549细胞的50.1%和转染空载体PEGFPA549细胞的53.6%,三者相比差异有统计学意义(P<0.01)。流式细胞仪分析显示FHIT-A549细胞95.8%阻滞在G2期。FHITA549细胞移植瘤的瘤重为(0.04±0.03)g,显著低于A549细胞的(0.24±0.11)g和转染空载体PEGFPA549细胞的(0.25±0.07)g,三者差异有统计学意义(P<0.01)。结论A549细胞内外源FHIT基因的转导并表达能显著抑制其恶性增殖和分裂,诱导其凋亡,调节其细胞周期、抑制成瘤性。