利用Sm抗原模拟表位肽构建狼疮样鼠模型

目的利用Sm抗原模拟表位肽免疫BALB/C小鼠,构建狼疮样鼠模型。方法用鼠Sm单克隆抗体对噬菌体随机12肽库进行亲和筛选,将筛选的噬菌体阳性克隆行双抗体夹心ELISA检测、DNA序列测定并推导其氨基酸序列,初步确定Sm抗原模拟表位;进而用混合噬菌体阳性克隆皮下免疫BALB/C小鼠,ELISA法检测小鼠血清IgG型抗Sm抗体、抗双链DNA（dsDNA）抗体和抗核抗体（ANA）水平;直接免疫荧光检测小鼠肾脏IgG型免疫复合物的沉积以及HE染色观察小鼠肾脏组织病理损伤情况。结果免疫筛选获得的5个ELISA强阳性的噬菌体克隆的氨基酸序列IR、SQ、PP出现频率增加;实验组小鼠血清中第28天出现Sm抗体、dsDNA抗体、ANA抗体,且滴度不断升高;第33天出现蛋白尿;肾脏可以检测到IgG型免疫复合物沉积及明显的肾脏病理改变。对照组小鼠无明显自身抗体产生和肾脏病变。结论利用Sm抗原噬菌体模拟表位肽可成功构建狼疮样小鼠模型。     

直接在小鼠脾内注射免疫原免疫产生MCAb

用可溶性抗原直接注入小鼠脾脏免疫,第4天取脾与SP2/0融合,用ELISA和间接血凝法(PHA)检测杂交瘤上清,测到阳性克隆。利用双亲细胞杂交产生单克隆抗体(MCAb),其中之一的脾细胞要求有大量增殖状态的特异性B细胞,才能分泌特异性抗体,这与免疫的关系极大。常见的方法要福氏完全佐剂加可溶性抗原首次免疫,间隔2-4周加或不加不完全佐剂的抗原加强一次,隔合前应连续以50～500ug不加佐剂的抗原进行静脉或腹腔加强。Spitz用直接脾内免疫产生MCAb的方法获得比较高的分泌MCAb的杂交瘤我们应用此法免疫人IgG、马钤薯病毒,轮状病毒获得抗人IgG MCAb并在融合后的培养板杂交瘤上清测到了抗马铃薯病毒阳性克隆。现将实验报告如下:     

抗狂犬病疫苗单克隆抗体的制备和初步鉴定

用狂犬病疫苗为抗原,免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞株SP2/O融合,经过培养、克隆、ELISA鉴定,筛出3株分泌抗狂犬病疫苗单克隆抗体细胞株。双扩散结果证明:3株细胞均分泌IgG1。     

分泌抗人IgG重链单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

应用人IgG免疫的BALB/C小鼠脾细胞与NS-1鼠骨髓瘤细胞在聚乙二醇1000作用下融合,并经克隆后获得了4株抗人IgGMcAb的杂交瘤细胞(1B3,2D5,2A4,2B6)。用ELISA和被动血凝方法测定培养物上清,含有较高滴度的抗体含量。用琼脂免疫双扩散方法,证明它仅与人IgG发生反应,产生透明沉淀线。被动血凝抑制试验,抑制效价与所加的     

结核分枝杆菌MPT64-ESAT6融合蛋白在小鼠体内诱导的免疫应答及其保护力

目的:测定MPT64与ESAT6融合蛋白在小鼠体内诱导的免疫应答及保护力. 方法:将MPT64与ESAT6的融合蛋白皮下免疫小鼠3次,每次间隔2 wk,ELISA测定免疫小鼠血清特异性抗体的滴度. 最后一次免疫完成后4 wk,分离部分免疫小鼠脾淋巴细胞,MTT法检测淋巴细胞刺激指数,ELISA检测悬液中IFN-γ水平. 另一部分免疫的BALB/c小鼠经尾静脉感染MTB毒株H37Rv,4 wk后计数脾脏细菌负荷数. 结果:MPT64-ESAT6融合蛋白免疫小鼠血清特异性抗体滴度1∶ 1500,免疫小鼠后淋巴细胞刺激增殖指数为2.23,而生理盐水免疫组只有0.88;脾淋巴细胞悬液中诱发的IFN-γ为(4.28±0.27)μg/L,显著高于生理盐水免疫组[(0.48±0.17) μg/L,P<0.05],但不及BCG免疫组[(5.18±0.31)μg/L]. 与生理盐水免疫组(细菌负荷6.45±0.17)相比较,融合蛋白免疫的小鼠,对攻击感染后抗MTB在脾脏中增殖有显著作用,细菌负荷为5.04±0.11,但与BCG免疫组相比脾脏细菌负荷减少甚微(细菌负荷4.38±0.22). 结论:MPT64与ESAT6融合蛋白可作为新型结核疫苗的候选组分.     

杂交瘤单克隆抗体技术中的脾内免疫法

<正> 杂交瘤单克隆抗体制备中的常规免疫方案是采用腹腔或皮下注射法进行基础免疫和末次尾静脉注射作为加强免疫。该方法不仅费时,而且要消耗较多的抗原。我们根据国外近几年报道的脾脏内直接注射抗原的免疫方法,并结合实际情况,用流行性出血热病毒(EHFV)B_5株对Balb/c小鼠进行脾内一次性免疫,三天后取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,筛选结果抗体阳性孔率为3％,通过克隆化建立两     

自体灭活T细胞免疫后诱导Treg下调的机制

目的 探讨自体灭活T细胞免疫注射后诱导体内调节性T细胞（Treg）下调的机制。方法 自体T细胞体外用刀豆蛋白(ConA)刺激活化,照射灭活T细胞给小鼠进行皮下和腹腔免疫（每只小鼠5×106/次）,每隔5 d免疫一次,免疫3次后检测小鼠体内Treg的数量及功能;对照组小鼠皮下注射PBS。ELISA法检测血清中抗鼠CD25抗体。免疫小鼠血清分离后经尾静脉注入未免疫小鼠体内,检测受体小鼠Treg的数量及功能变化。结果 免疫小鼠体内CD4+CD25+Foxp3+ Treg数量较对照组减少（P<0.01）,抑制功能也显著降低（P<0.01）,但血清中抗CD25的抗体增加（P<0.01）。正常小鼠接受免疫小鼠血清后,Treg的数量和抑制功能下调（P<0.01）。结论 采用ConA 活化的自体灭活T细胞免疫,可诱导抗CD25抗体增加,进而减少体内CD4+CD25+Foxp3+ Treg 细胞数量和功能。     

小鼠在柯萨奇病毒A组16型活病毒免疫原性评价中的应用

目的 评价小鼠在柯萨奇病毒A组16型(CA16)活病毒感染中免疫原性的应用,为减毒活疫苗研究提供实验数据.方法 以不同剂量的CA16活病毒通过皮下、腹腔和肌肉途径接种不同年龄的ICR和BALB/c小鼠,采集初次免疫7d、21d、28d以及加强免疫7d后的血样;通过微量细胞病变中和法检测中和抗体效价,细胞因子ELISA检测试剂盒检测6种细胞因子含量.结果 初次免疫后28 d,肌肉、腹腔和皮下途径免疫的小鼠血清抗体阳转率分别为83.33％、40.00％和0.00％,抗体几何平均效价(GMT)分别为1∶169、1∶32和0;加强免疫后,肌肉、腹腔和皮下途径免疫的小鼠血清抗体阳转率均达100％,抗体GMT分别为1∶813、1∶609和1∶32,肌肉和腹腔途径免疫的小鼠血清抗体GMT平均增长4.8倍和19.0倍;加强免疫7d的抗体阳转率达100％;明显高于初次免疫28 d和21 d;BALB/c小鼠与ICR小鼠相比,前者的中和抗体效价和抗体阳转率明显高于后者,而小鼠年龄对中和抗体效价和抗体阳转率的影响不显著(P＞0.05);免疫剂量对中和抗体效价和抗体阳转率的影响显著(P＜.05),高剂量病毒免疫小鼠后中和抗体效价和抗体阳转率明显比低剂量高(P＜0.05);细胞因子检测结果显示加强免疫7d后的白细胞介素10(IL-10)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量与初次免疫7d的相比显著增加.结论 BALB/c和ICR小鼠可做为CA16活病毒免疫原性评价的动物模型,以4～6周龄的BALB/c小鼠最为敏感.     

弓形虫有效抗原表位的筛选及其对小鼠免疫保护性的研究

目的:利用噬菌体随机肽库技术筛选弓形虫抗原的有效表位，并探讨其免疫保护效果。方法：用纯化的弓形虫免疫兔血清IgC对噬菌体12肽库进行三轮筛选，对获得的日的噬菌体用间接ELISA和Dot—ELISA检测其特异性，并对其中的某些克隆进行Western—blot分析和序列测定；用混和噬菌体克隆及强阳性表位克隆免疫BABL／c小鼠．间接ELISA法测定其特异性抗体滴度，攻击感染后观察小鼠存活情况。结果：经三轮筛选，特异性噬菌体得到富集，随机挑取18个克隆经间接ELISA和Dot—ELISA鉴定，有16个克隆能与弓形虫免疫兔血清IgG呈特异性反应。Western—blot分析显示P2克隆能被免抗弓形虫血清所识别，具有类似于弓形虫抗原的免疫原性，其序列为5’-CTTCAGTTGGATCGGGCTCGGTTTTGGAAT CAGGGT-3’，与GenBank的弓形虫已知序列无一级结构的同源性；与原肽库对照组相比，P2实验组和P总实验组免疫小鼠均能诱导出较高滴度的IgG抗体，抗攻击感染后小鼠的存活率及存活时间也均高于对照组。结论：利用噬菌体随机肽库技术获得了弓形虫抗原的有效模拟睥位，这些表位能诱导对弓形虫的部分保护作用。     

树突状细胞/结肠转移癌细胞融合疫苗治疗转移性结肠癌的动物实验研究

目的通过建立人免疫重建荷人结肠癌皮下种植瘤严重联合免疫缺陷（SCID）小鼠模型,研究DC/结肠癌融合疫苗对人转移性结肠癌的发展及预后的影响。方法应用腹腔注射法对严重联合免疫缺陷SCID小鼠注射人外周血淋巴细胞（hu_PBL）免疫重建后,皮下注射法建立荷人结肠癌皮下种植瘤模型。应用聚乙二醇（PEG）制备DC/SW620融合疫苗。将DC/SW620融合疫苗于左、右后足底、尾根部皮下三点注射在人免疫重建的SCID小鼠结肠癌皮下移植瘤模型。酶联免疫吸附试验（ELISA）检测小鼠血清中人IgG含量;通过直接测量法观察人结肠癌皮下种植瘤成瘤性和小鼠生存期。结果融合疫苗治疗组的皮下肿瘤体积生长速度慢于其他各对照组;融合疫苗治疗组生存期为（109.00±17.17）d,明显长于单纯制模组（55.67±12.03,P〈0.001）、免疫重建组（81.83±9.06,P〈0.001）、肿瘤细胞疫苗组（87.33±12.85,P〈0.01）。结论 DC/SW620融合疫苗可抑制肿瘤生长,改善预后,DC/SW620融合疫苗比肿瘤细胞冻融物免疫治疗效果更佳。     

一个遗传性耳聋伴前庭功能障碍家系的分子病因学研究

目的:对1个遗传性耳聋伴前庭功能障碍家系进行遗传方式?表型特征及致病基因的分析,以研究其分子病因?方法:对门诊1例遗传性聋伴眩晕患者进行家系调查?病史收集及相应的听力学和前庭功能检查?利用目标基因捕获和大规模平行测序技术,对家系先证者进行可能致病突变筛查,包括靶向104种与遗传性听力损失相关的基因和3个microRNA分子?进一步对获得的候选突变基因进行编码区序列验证分析?结果:目标基因捕获测序结果发现先证者COCH基因第11外显子上存在c.1458C>G(p.T352S)的杂合突变?进一步对家系中所有患者和有血缘关系的正常个体进行了遗传共分离分析,发现该杂合突变在该家系中仅有Ⅰ2?Ⅱ1?Ⅱ5?Ⅱ9?Ⅱ13和Ⅳ1存在相同的杂合突变,而Ⅱ11和Ⅲ1表现为该突变的纯合子,表明该杂合突变不存在共分离现象,因此可以排除其为该家系致病突变的可能性?对先证者Ⅲ14 COCH基因全部12个外显子的序列测定结果未发现其他突变?结论:此家系为常染色体显性遗传性非综合征型耳聋伴前庭功能障碍,但初步筛查结果未发现已知耳聋相关基因,包括COCH基因的可疑致病突变?因此,该家系的分子病因可能存在一新基因的突变?     

pEGFP-N1-Fcy::Fur重组质粒的构建及其在卵巢癌细胞中的表达

目的:构建携带融合型自杀基因Fcy::Fur的荧光真核表达质粒pEGFP-N1-Fcy::Fur,并观察其在卵巢癌细胞中的表达.方法:应用基因重组技术,将pORF-Fcy::Fur中的Fcy::Fur目的基因亚克隆到荧光真核表达载体pEGFP-N1,以酶切1和测序鉴定重组质粒的正确性.应用脂质体介导的转染技术将该质粒导入SKOV3细胞,24 h后观察绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)瞬时表达情况,用Western blot方法检测Fcy::Fur表达.结果:酶切和测序鉴定证实插入片段正确.细胞转染24 h后,荧光显微镜下观察到GFP表达.60%转染细胞发出绿色荧光.Western-blot检测到Fcy::Fur表达.结论:成功构建pEGFP-N1-Fcy::Fur荧光真核表达质粒,并可在卵巢癌细胞中有效表达,为卵巢癌基因治疗提供实验基础.     

视路诱发电位联合检测及临床应用

采用南京医科大学开发的视诱发电位检测系统，联合检测模式翻转机诱发电位、模式翻转视网膜电图和闪光视网膜电图。建立了本室选定的物理参数下的正常值，并对眼科常见疾病青光眼、白内障、黄斑区病变等进行检测，结果证明本检测法对上述疾病的诊断具有重要参考作用。     

逆转录病毒介导Fcy::Fur融合基因联合5-FC治疗裸鼠体内胶质瘤实验研究

目的:构建含融合自杀基因Fcy::Fur重组逆转录病毒,用自杀基因治疗系统Fcy::Fur/5-氟胞嘧啶(5-FC)对裸鼠胶质瘤进行体内抑瘤作用的实验研究.方法:扩增Fcy::Fur基因并构建Fcy::Fur基因重组逆转录病毒载体:载体转染包装细胞获得高滴度病毒并转染鼠胶质瘤细胞C6,筛选并鉴定阳性转基因克隆;构建稞鼠荷胶质瘤动物模型,腹腔注射5-FC,观察裸鼠肿瘤重量变化及电镜、流式细胞仪(FCM)检测肿瘤的凋亡.结果:PCR法扩增出全长Fcy::Pur基因,经测序证实序列正确;构建了PLXSN-Fcy::Fur逆转录病毒载体,裁体转染包装细胞PT67,获得滴度为3.5×106 CFU/ml的逆转录病毒:转染C6获转基因阳性克隆C6-Fcy::Fur,检测C6-Fcy::Fur有Fcy::Fur基因的mRNA表达;裸鼠前肢背部接种转基因细胞,成瘤后腹腔注射5-FC,转基因肿瘤的生长较对照组明显抑制.FCM法检测到凋亡峰,电镜观察到转基因肿瘤细胞有凋亡小体.结论:AdE1CMVCD与5-FC联合在体内对胶质瘤有明显的抑制作用,为临床胶质瘤基因治疗提供了可靠的理论及应用依据.     

铂掺杂对氧化锡超微粒子薄膜表面结构及气敏特性的影响

用直流气体放电活化反应蒸发法制备了氧化锡超微粒子薄膜（Ｉ），再用直流平面磁控溅射法掺杂Ｐｔ。Ｐｔ的掺入使Ｉ的晶粒增多，电导下降，还使薄膜的气敏特性到显著改善，讨论了Ｐｔ掺杂对薄膜灵敏度影响的机理。     

舒巴哌酮钠与头孢噻肟钠随机对照治疗细菌性感染的临床评价

舒巴哌酮钠为头孢哌酮与舒巴坦以１：１配制的联合制剂。我们以头孢噻肟钠作为对照药,进行随机对照及开放临床试验,共治疗细菌性感染４３例,以评价其安全性及有效性。实验结果表明：试验药与对照药总的痊愈率、有效率及细菌清除率分别为８０％．９６％．１００％,５５．６％．８８．９％．９３．５％,两组对比无显著差异（Ｐ＞０．０５）。临床分离３５株致病菌药敏试验结果表明：１００％对试验药高度敏感,７１．４％对对照药高度敏感,有统计学显著差异（Ｐ＜０．０１）。试验药与对照药不良反应发生率分别为４％和５．６％,无统计学显著差异（Ｐ＞０．０５）。     

介入栓塞治疗难治性头颈部出血的疗效研究

目的:分析难治性头颈部出血的造影特征并评价介入栓塞治疗的安全性及有效性?方法:2009年1月—2015年3月,48例难治性头颈部出血患者在本院接受介入栓塞治疗?回顾性分析其临床资料,根据良恶性病因?造影的阳性和阴性结果等指标,分类评价介入栓塞治疗难治性头颈部出血的有效性及并发症情况?结果:48例患者中恶性病变15例,良性病变33例;造影阳性36例,造影阴性12例,恶性病变与良性病变造影阳性率无统计学差异(P=0.106)?12例造影阴性患者中特发性鼻出血占8例,其余病因者4例,特发性鼻出血造影阴性率高于其余病因(P=0.001)?46例患者成功止血,1例术后出现视野缺损并发症,5例复发,恶性病变组与良性病变组或造影阳性组与阴性组之间出血复发率无统计学差异(P=0.339和P=0.785)?结论:介入栓塞治疗难治性头颈部出血安全有效;特发性鼻出血患者造影阴性率高,进行双侧蝶腭动脉经验性栓塞同样有较好的止血效果?     

Diagnosis and treatment of pancreatic somatostatinoma:a case report

Pancreatic somatostatinoma represents a rare group of neuroendocrine tumors,which was first reported by Ganda and Larsson in 1977.Less than 50 cases have been reported to the present.We treated a case of pancreatic somatostatinoma at our hospital.     

福寿威片对肾虚衰老患者血脂的影响

课题组对７２例肾虚衰老高脂血症患者，采用纯中药复方制剂福寿威片治疗，疗程二月。治疗期间停服其它对评价本品可能产生影响的一切中西药物。治疗结果表明，ＨＤＬ－Ｃ水平明显增高，ＴＣ、ＴＧ及ＬＤＬ－Ｃ水平显著下降，提示本品对肾虚衰老高脂血症患者有治疗作用。     

鼻腔胚胎型横纹肌肉瘤6例并文献复习

<正>横纹肌肉瘤(rhabdomyosarcoma,RMS)是最常见的软组织恶性肿瘤之一,好发于儿童和青少年,主要发生于头颈部、腹膜后和泌尿生殖系统。成人横纹肌肉瘤很少见[1],而胚胎型横纹肌肉瘤(embryonalrhab-domyosarcoma,ERMS)是最常见的亚型,占横纹肌肉瘤的50豫~60豫,而成人鼻腔ERMS临床上更为罕