毛钩藤和无柄果钩藤的ITS序列分析研究

目的以核糖体转录间隔区(rDNA ITS)序列为分子标记,对钩藤属的2种常用中药材毛钩藤Uncariahirsute和无柄果钩藤U.sessilifructus进行遗传分析,阐明钩藤属内不同种间的分子系统发育关系。方法通过改良CTAB法对毛钩藤和无柄果钩藤进行总DNA提取,利用通用引物对rDNA ITS序列进行PCR扩增,RFLP分析和序列测定,用PAUP软件进行系统发育分析,构建最大简约树。结果获得毛钩藤和无柄果钩藤的限制性内切酶(MspⅠHaeⅢ)酶切图谱以及rDNA ITS区的完整序列,其序列长度均为718 bp。结论通过基于rDNAITS序列进行RFLP分析、序列测定和系统发育树构建的分子生物学方法,能够对钩藤属植物进行准确的分子鉴定,为钩藤属中药材的种类鉴定和种间的分类地位提供分子生物学依据。     

阳春砂的ITS序列分析

目的：用ITS全序列鉴别各地产阳春砂及常见伪品。方法：从各地产阳春砂及常见伪品绿壳砂和海南砂中提取总DNA，以核基因组通用引物ITS为引物进行扩增，扩增产物经纯化后，用PCR产物直接法进行测序。结果：各样品的ITS序列总长度均为626bp，其中ITS－1序列长度为248bp,5.8S序列长度为155bp，ITS－2序列长度为223bp；6个阳春砂和绿壳砂的ITS－2序列完全一致，各样品的5．8S序列完全一致，在ITS-1可各样品却有不同的碱基位点。结论：ITS－1序列可对阳春砂的道地性作出鉴别，明显区分其伪品。     

一种钩藤属植物的分子鉴定

目的:以核糖体转录间隔区(rDNA ITS)序列为分子标记,对1种钩藤属植物归类到种提供分子证据.方法:改良CTAB法提取钩藤植物材料总DNA,通过引物对rDNA ITS区序列进行PCR扩增,经过克隆、测序后,与GenBank中已有的钩藤属植物rDNA ITS区序列进行比对,并应用Clustal X,BioEdit等软件计算分析,用PAUP软件构建系统发育树.结果:测序得到该钩膝植物的rDNA ITS区序列长度为719bp,序列分析结果显示该钩藤植物与Genbank中已有的华钩藤Uncaria sinensis rDNA ITS区序列之间相似性达99.7%,并且在系统发育树中并排聚类成一支.结论:基于rDNA ITS区序列的测序分析和系统发育树构建的分子生物学方法,能够对该钩藤属植物进行准确的分子鉴定,为钩藤属中药材的种类鉴定和种间的分类地位提供分子生物学理论依据.     

ITS2序列鉴定筋骨草及其近缘种

本研究对筋骨草ITS2区段测序,探讨该片段用于中药筋骨草、白苞筋骨草、白毛夏枯草和夏枯草种间分子鉴别和系统学研究中的意义,我们对核基因ITS2区段进行PCR扩增并测序,获得了该区间的完整序列,所得序列用软件MEGA4.0进行相关分析。测得筋骨草、白苞筋骨草、夏枯草和白毛夏枯草的ITS2片段长度分别为312bp,304bp,303bp,304bp。四个物种ITS2片段序列的遗传距离(Kimura2)为0.010～0.175,各个筋骨草种内的不同产地该序列无差异。用MP法根据ITS2序列的遗传距离建立系统发生树,聚类结果和形态分类相符。根据ITS2序列特征,能有效区分筋骨草和其他易混中药材。ITS2具有做为鉴定的条形码序列的潜力。应用该序列可以有效鉴定筋骨草及其近缘种。     

不同来源白首乌rDNA ITS序列分析

目的:研究白首乌不同种的ITS序列遗传差异性,分析序列差异性在白首乌品种鉴定及种质资源研究中的意义。方法:从不同来源的白首乌中提取总DNA,以核基因组ITS通用引物进行扩增,扩增产物经克隆后,进行测序。结果:获得4个不同来源样品的ITS全序列及5.8 S全序列以及两端的18 S,26 S的部分序列,其中戟叶牛皮消CynanchumbungeiITS序列为国际首次获得,登录号分别分别为GU198970(野生种),GU479037(栽培种)。各样品间ITS序列存在不同,4个样品序列间共存在10个变异位点。结论:ITS序列对白首乌种质资源鉴定具有较好的分辨性,为鉴别不同来源的白首乌提供了依据。     

ITS2序列鉴定筋骨草及其近缘种

本研究对筋骨草ITS2区段测序，探讨该片段用于中药筋骨草、白苞筋骨草、白毛夏枯草和夏枯草种间分子鉴别和系统学研究中的意义，我们对核基因ITS2区段进行PCR扩增并测序，获得了该区间的完整序列，所得序列用软件MEGA4．0进行相关分析。测得筋骨草、白苞筋骨草、夏枯草和白毛夏枯草的ITS2片段长度分别为312bp，304bp，303bp，304bp。四个物种ITS2片段序列的遗传距离（Kimura2）为0．010～0．175，各个筋骨草种内的不同产地该序列无差异。用MP法根据ITS2序列的遗传距离建立系统发生树，聚类结果和形态分类相符。根据ITS2序列特征，能有效区分筋骨草和其他易混中药材。ITS2具有做为鉴定的条形码序列的潜力。应用该序列可以有效鉴定筋骨草及其近缘种。     

5种习用柴胡的ITS序列鉴别

目的:用PCR扩增方法测定5种常用柴胡的ITS序列,为柴胡的分子鉴定提供依据。方法:分别从5种柴胡的叶片中提取总DNA,以核基因组通用引物进行扩增,扩增产物经纯化后,用PCR产物直接测序。结果:各样品的ITS1长度为214～220bp,ITS2长度为230～231bp。5种柴胡的ITS序列分别有多个特异性信息位点。结论:ITS序列可以作为柴胡分子鉴定的依据。     

苏皖产大戟属药用植物rDNA的ITS序列分析

目的研究苏皖产大戟属内6种药用植物的ITS长度的变异,为探讨大戟属植物的系统演化关系和大戟属植物鉴定提供DNA分子证据。方法利用PCR技术对大戟属植物的rDNAITS区碱基序列进行测定。结果这6种大戟属植物的ITS1的长度范围为255~262bp,ITS2的长度范围为214~236bp。运用Mega2软件进行的系统分析得到大戟属内6种植物的系统进化树。这一分析结果与来自形态学的研究结果相吻合。结论此法可用于大戟属植物种间及真伪品鉴别。     

远志属7种药用植物ITS1和ITS2序列分析

目的采用ITS序列进行远志属7种药用植物的分子鉴定。方法通过测定远志Polygala tenuifolia、卵叶远志P.sibirica、瓜子金P.japonica、华南远志P.glomerata、蓼叶远志P.persicariifolia、肾果小扁豆P.furcata和小花远志P.arvensis的ITS1、ITS2序列,借助Clustal X、MEGA 3.1软件比较和分析ITS1、ITS2的序列特征。结果远志属7种药用植物ITS1长度为279~291 bp,ITS2的长度为211~219 bp,变异位点232个,信息位点53个;远志与卵叶远志的遗传距离最小,华南远志与肾果小扁豆遗传距离最大,亲缘关系最远。结论远志属7种药用植物的ITS1、ITS2序列可作为分子鉴定的依据。     

不同产地大黄ITS序列分析

目的:建立不同产地大黄的分子系统学基础,为大黄的基源鉴定和品质评价提供分子依据。方法:采用PCR技术获得ITS基因,进行测序,经软件进行统计分析,计算各样本间的遗传距离并建立系统树。结果:大黄ITS序列G+C含量较高,达66.55%～68.49%,8个样品ITS(包括5.8s)序列的长度范围为562～568。所有样品5.8srDNA高度一致,除DH5样品有两个位点的碱基转换外,其余无碱基差异。结论:ITS序列特征可以作为大黄种间鉴别的有效分子标记,药用大黄在属内与其它种关系较远。     

钩藤中不同成分降压作用的差异

目的：比较钩藤中提取的异钩藤碱、钩藤碱、钩藤总碱及非生物碱部分的降压作用。方法：大鼠麻醉后经颈总动脉插管记录外周血压和经股静脉微量输注实验用药。结果：实验表明钩藤中４种成分的降压强度为异钩藤碱（４２．０％）〉钩藤碱（３２．１％）〉钩藤总碱（２１．３％）〉钩藤非生物碱（１２．４％）。结论：提示钩藤中主要降压成分为异钩藤碱的钩藤碱。     

不同产地及不同采收期钩藤中异钩藤碱的含量分析

目的：研究不同产地及不同采收期钩藤中异钩藤碱的含量。方法应用HPLC测定8个不同产地及不同采收期钩藤中异钩藤碱含量,采用Waters Symmetry C18色谱柱(250 mm34.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.01 mol/L醋酸铵缓冲液(pH 8.0)(60∶40),柱温25℃,进样体积20μl,流速1.0 ml/min,检测波长246 nm。结果不同产地及不同采收期的钩藤中异钩藤碱含量不同,其中含量最高的地区为宁明县;含量最高的采收时间为每年9月至次年2月。结论不同产地钩藤药材异钩藤碱的含量不同,每年9月至次年2月采收的钩藤中异钩藤碱含量较高。     

中国钩藤相关发明专利的信息分析

钩藤是中药宝库中的重要药材,具有息风定惊、清热平肝的功效,用于治疗高血压病、惊痫抽搐、小儿惊啼等。本文就2016年8月以前的钩藤属中药所涉及的3304项发明专利申请信息进行检索整理,在基础研究部分数据采集于中国科学引文数据库（Chinese Science Citation Database,CSCD）,专利态势分析部分数据来源于中国科学院专利在线分析系统,并就专利年度、地区、专利技术年代、专利权人以及所涉及关键技术进行系统的分析概括,深入剖析钩藤相关发明专利申请的现状与发展趋势。结果表明由于钩藤含有益于人体健康的微量元素和化学成分而越来越受市场青睐;其专利申请热度逐渐提高,但仍存在较大局限性,专利质量也有待提高。钩藤的进一步开发利用具有广阔前景。     

不同品种不同采收期太子参中太子参环肽Pseudostellarin B含量的比较

目的分析比较不同品种不同采收期太子参环肽Pseudostellarin B的含量,为合理开发利用太子参的植物资源提供参考。方法不同品种不同采收期太子参经提取制备后,采用高效液相色谱测定太子参环肽Pseudostellarin B的含量。结果一号品种不同采收期太子参中Pseudostellarin B的平均含量为198.1μg/g,二号品种不同采收期太子参中Pseudostella-rin B的平均含量为105.8μg/g。结论不同品种不同采收期太子参中Pseudostellarin B的含量有差异。     

Anticonvulsant effect of Uncaria rhynchophylla (Miq) Jack. in rats with kainic acid-induced epileptic seizure.

This study investigated the anticonvulsant effect of Uncaria rhynchophylla (UR) and the physiological mechanisms of its action in rats. A total of 70 male Sprague-Dawley (SD) rats were selected for study. Thirty four of these rats were divided into 5 groups as follows: 1) Control group (n = 6): received intraperitoneal injection (i.p.) of kainic acid (KA, 12 mg/kg); 2) UR1000 group (n = 10), 3) UR500 group (n = 6) 4) UR250 group, received UR 1000, 500, 250 mg/kg i.p. 30 min prior to KA administration, respectively; 5) Contrast group: received carbamazepine 20 mg/kg i.p. 30 min prior to KA administration. Behavior and EEG were monitored from 15 min prior to drug administration to 3 hours after KA administration. The number of wet dog shakes were counted at 10 min intervals throughout the experimental course. The remaining 36 rats were used to measure the lipid peroxide level in the cerebral cortex one hour after KA administration. These rats were divided into 6 groups of 6 rats as follows: 1) Normal group: no treatment was given; 2) Control group: received KA (12 mg/kg) i.p.; 3) UR1000 group, 4) UR500 group, 5) UR250 group, received UR 1000, 500, 250 mg/kg i.p. 30 min prior to KA administration, respectively; 6) Contrast group: received carbamazepine 20 mg/kg i.p. 30 min prior to KA administration. Our results indicated that both UR 1000 and 500 mg/kg decreased the incidence of KA-induced wet dog shakes, no similar effect was observed in the UR 250 mg/kg and carbamazepine 20 mg/kg group. Treatment with UR 1000 mg/kg, 500 mg/kg, or 250 mg/kg and carbamazepine 20 mg/kg decreased KA-induced lipid peroxide level in the cerebral cortex and was dose-dependent. These findings suggest that the anticonvulsant effect of UR possibly results from its suppressive effect on lipid peroxidation in the brain.     

候钩藤总碱含量测定及其药理作用的初步研究

目的检测候钩藤的总碱含量,探讨其中枢药理作用,比较其与中药钩藤的差异。方法采用紫外分光光度法检测候钩藤总碱的含量;采用小鼠自主活动实验及戊巴比妥钠诱导催眠实验,观察候钩藤的镇静催眠作用;通过士的宁致小鼠惊厥实验,观察候钩藤的抗惊厥作用。结果紫外分光光度法检测到候钩藤带钩茎枝中总生物碱的含量为0.038%(g/g),钩藤的带钩茎枝的总碱含量为0.207%(g/g)。药理实验结果表明,候钩藤提取物能减少小鼠自主活动次数,增加戊巴比妥钠诱导小鼠入睡个数,并延长小鼠睡眠时间,减少士的宁致小鼠惊厥死亡数。候钩藤高剂量(20 g/kg)组的中枢抑制作用较显著,与钩藤组(15 g/kg)无明显差异(P>0.05),但候钩藤中、低剂量组的药理作用与钩藤组有显著差异(P<0.05或P<0.01)。结论候钩藤总碱含量较钩藤低。候钩藤具有一定程度的镇静催眠和抗惊厥作用,其作用强度与剂量有一定关系。     

华钩藤中黄酮类化学成分的分离和结构鉴定

 目的 对茜草科植物华钩藤［Uncaria sinensis（Oliv.）Havil.］的干燥带钩茎枝的黄酮类化学成分进行研究。方法 用体积分数95%乙醇对华钩藤的干燥带钩茎枝进行提取,分别对乙酸乙酯和正丁醇部位采用各种柱色谱进行分离,通过NMR和MS等波谱学数据分析进行结构鉴定。结果 分离鉴定了5个黄酮类化合物的结构：槲皮素（quercetin,1）,山柰酚（kaempferol,2）,蒙花苷（linarin,3）,槲皮素-3-O-β-D-半乳糖苷（quercetin-3-O-β-D-galactopyranside,4）,槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖基-（1→6）-β-D-半乳糖苷（quercetin-3-O-α-L-rhamnopyranosyl-（1→6）-β-D-galactopyranoside,5）。结论 化合物1~5均为首次从该植物中分离得到。     

甘肃不同产地当归ITS序列分析

目的建立甘肃产当归功效的分子系统学基础,为甘肃产当归“道地性”提供分子依据。方法采用PCR技术获得ITS基因,进行测序,经软件进行统计分析,计算各样本间的遗传距离。结果甘肃岷、漳两县当归ITS序列差异极小,在0．0000-0．0083之间,岷县5个样品与漳县DG9号样品在586位都为C,589位都为T,而漳县其他3个样品在这2个位点分别为T和G。结论ITS序列特征可以作为当归种间鉴别的有效分子标记,当归ITS序列第586位和589位2个位点碱基可能成为“岷当归”的碱基鉴别位点。     

刺革菌科4种药用真菌的ITS区序列分析

目的对刺革菌科桦褐孔菌、缝裂木层孔菌、松针层孔菌及鲍姆木层孔菌4种药用真菌rDNA ITS片段进行分析,探讨该片段在中外同类真菌的系统学及鉴别研究意义。方法对这4种药用真菌的rDNA ITS区进行了PCR扩增、测序,运用Clustal X、Mega3.1等软件对ITS区序列进行分析。结果获得rDNA ITS1、ITS2和5.8SrDNA完整序列,桦褐孔菌、缝裂木层孔菌、松针层孔菌、鲍姆木层孔菌的ITS1序列长度范围为244~324bp,ITS2序列长度范围为229~274bp。以圆瘤孢多孔菌(DQ200923)为外类群,用分子进化遗传分析软件得到了包括这4种药用真菌及GenBank中3个与这4种中3种相应真菌的ITS序列的系统发育树。这一分析结果与来自形态学的鉴别结果相吻合。结论ITS序列可作为这4种药用真菌分子鉴定的依据。