巴戟天多糖对体外培养成骨细胞核心结合因子α1mRNA表达的影响

目的：观察巴戟天多糖对成骨细胞核心结合因子α1（Cbfα1）表达的影响,并与巴戟天水提物相对照,阐述巴戟天补肾阳,强筋骨作用的实质。方法：取24h内新生SD大鼠头盖骨成骨细胞,用巴戟天多糖及巴戟天水提物药物血清进行体外培养,72h后提取成骨细胞总RNA进行RT-PCR检测核心结合因子α1mRNA相对表达量。结果：巴戟天水提物组（1.3582±0.0966）与巴戟天多糖组（1.9073±0.1280）Cbfα1mRNA与对照组（0.7347±0.0327）相比具有非常显著差异,且巴戟天多糖组非常显著优于巴戟天水提物组。结论：巴戟天水提物与巴戟天多糖均能显著提高成骨细胞Cbfα1mRNA的表达,且巴戟天多糖的这种作用优于巴戟天水提物。提示巴戟天多糖是巴戟天提高成骨细胞（OB）活性的有效成分之一。     

不同性别大鼠中药含药血清对成骨细胞增殖的影响

[目的]观察不同性别大鼠的中药续断含药血清对成骨细胞增殖的影响.[方法]1)制备大鼠含药血清:取雌性与雄性Wistar大鼠各12只,按性别随机分为4组,分别为:雄性给药组,雄性对照组,雌性给药组,雌性对照组,每组各6只,给药组按体质量(4.5g/kg)分别给予续断水提液灌胃、对照组按体质量分别给予等量生理盐水.灌胃1周后取血,离心提取血清.2)分离、培养大鼠的原代成骨细胞.3)将各组大鼠血清稀释为2.5%,5%和10%3个浓度分别培养大鼠成骨样细胞,采用噻唑蓝法(MTT)检测细胞增殖能力.[结果]血清浓度为2.5%时,雌性给药组(0.569 0±0.029 5)与雄性给药组(0.361 3±0.098 3)比较,有显著性差异(P<0.05),雌性给药组与雌性对照组(0.378 7±0.047 6)比较,也有显著性差异(P<0.01);当血清浓度为5%时,雌性给药组(0.879 3±0.100 7)与雄性给药组(O.356 0±0.048 2)比较,有显著性差异(P<0.01),雌性给药组与雌性对照组(0.386 3±0.018 0)比较,也存在显著性差异(P<0.01);当血清浓度为10%时,雌性给药组(0.856 0±0.017 5)与雌性对照组(0.381 7±0.198 6)比较,存在显著性差异(P<0.05).在各浓度的血清中,雄性给药组与雄性对照组之间均无显著性差异.[结论]大鼠的续断含药血清具有刺激成骨细胞增殖的作用.这种作用在雌性大鼠的血清中表达强于雄性大鼠.     

菟丝子含药血清对成骨细胞代谢调控的影响

目的探讨菟丝子含药血清对体外培养大鼠成骨细胞代谢调控的影响。方法采用血清药理学方法制备菟丝子含药血清;采用改良的组织块法体外培养大鼠成骨细胞;分别用5%、10%、15%、20%菟丝子含药血清诱导培养成骨细胞24h、48h、72h后,MTT法检测大鼠成骨细胞的增殖情况;用对硝基苯二钠基质动力学法(PNPP)测定细胞内碱性磷酸酶(ALP)的活性;培养48h后用RT-PCR方法检测Ⅰ型胶原(COL-Ⅰ)mRNA的表达。结果 5%和10%菟丝子含药血清在48h和72h能显著促进成骨细胞增殖并提高ALP活性;在48h时10%菟丝子含药血清可促进COL-ⅠmRNA的表达。结论 10%菟丝子含药血清能够明显促进大鼠成骨细胞的增殖与分化,表明其具有促进成骨作用。     

芦丁含药血清对体外培养大鼠颅骨成骨细胞增殖与分化成熟的影响

目的 研究芦丁含药血清(Serum of rats administered Rutin,SR)对体外培养大鼠乳鼠颅骨成骨细胞(Rat calvarial osteoblasts,ROB)增殖和分化成熟的影响.方法 ①取出生24 h 内的Wistar 大鼠颅骨,采用酶解法分离获得成骨细胞,培养于含10%类标准胎牛血清(...     

华中五味子含药血清对成骨细胞增殖分化的影响

目的:探讨甘肃产华中五味子对大鼠成骨细胞增殖分化的作用。方法:采用血清药理学方法,对体外培养的大鼠成骨细胞作MTT法细胞增殖测定、PNPP法ALP活性测定、以及茜素红染色矿化结节计数。结果:培养48h,10%、15%和培养72h,5%、10%华中五味子95%乙醇提取物血清组的细胞增殖速度比对照组快(P<0.01);培养48h,10%、15%和培养72h,10%华中五味子乙醇提取物血清组的ALP活性较对照组增加(P<0.05和P<0.01);培养2周,矿化结节计数显示10%华中五味子乙醇提取物血清组多于对照组(P<0.01),华中五味子水提取物各血清组对成骨细胞增殖分化没有显著作用。结论:甘肃产华中五味子95%乙醇提取物对体外大鼠成骨细胞的增殖和分化具有促进作用。     

益骨汤含药血清对新生大鼠成骨细胞成骨性的影响

目的探讨益骨汤含药血清对新生大鼠成骨细胞增殖及其成骨分化的影响。方法实验分为益骨汤高剂量组、益骨汤中剂量组、益骨汤低剂量组、a-D3胶丸组、空白组,先制备各组相应含药血清,然后采用酶消化法获得新生大鼠的成骨细胞,每组给予相应含药血清培养成骨细胞,分别检测各组成骨细胞增殖情况及碱性磷酸酶(ALP)活性、钙盐沉积量、骨钙素分泌量。结果益骨汤高、中、低剂量组和a-D3胶丸组成骨细胞增殖情况均明显优于空白组(P均0.05),益骨汤高、中、低剂量组间比较差异无统计学意义;成骨细胞ALP活性、钙盐沉积量、骨钙素分泌量均明显高于空白组(P均0.05),而与a-D3胶丸组比较差异均无统计学意义(P均0.05)。益骨汤中剂量组ALP活性、钙盐沉积量、钙素分泌量均明显高于益骨汤低剂量组。结论益骨汤含药血清可促进成骨细胞的增殖及成骨分化。     

补肾壮骨胶囊含药血清对大鼠成骨细胞增殖及骨保护素mRNA表达的影响

目的:观察补肾壮骨胶囊含药血清对SD大鼠成骨细胞(OB)增殖、骨保护素(OPG)mRNA表达的影响,探讨其防治骨质疏松的机理。方法:将40只3月龄SD雌性大鼠分为补肾壮骨胶囊灌胃组(高、中、低剂量)和空白对照组制备含药血清和空白对照血清;取1天龄SD大鼠颅盖骨,分离、培养成骨细胞(OB),分别加入各实验血清组培养液培养OB,倒置相差显微镜下观察OB生长情况,MTT法测定OB的OD值,RT-PCR检测各组成骨细胞OPGmRNA表达。结果:3-8天时,补肾壮骨胶囊高、中、低含药血清组成骨细胞OD值均高于空白对照组(P<0.05)。各含药血清组成骨细胞OPGmRNA表达均高于空白对照组(P<0.01);补肾壮骨胶囊高、中、低含药血清组间比较,差异无显著意义(P<0.05)。结论:补肾壮骨胶囊含药血清组能促进OB增殖、上调OPGmRNA表达,可能是其防治骨质疏松的机制之一。     

骨康含药血清对新生大鼠成骨细胞增殖影响的研究

目的：从细胞分子学角度探讨骨康方防治骨质疏松症的作用机理。方法：通过体外分离和培养成骨细胞体系，运用MTT法分别测定骨康含药血清、罗盖全含药血清、空白血清对新生大鼠成骨细胞增殖的影响。结果：用5％和10％的血清培养第7天时三组的0D值均为最高，而20％的血清培养第5天时骨康血清组和罗盖全血清组的OD值最高。结论：骨康含药血清有恒定的促进新生大鼠成骨细胞增殖的作用。实验研究结果^[1]已经证实，骨康方能提高实验动物的骨矿含量和骨密度，改善生物力学性能，调节体内激素水平，具有促进骨形成和抑制骨吸收的双重作用。     

中药多糖及其含药血清对小鼠淋巴细胞增殖的影响

目的 探讨中药复方多糖与各单味中药多糖及其含药血清对小鼠淋巴细胞增殖的影响.方法 制备各中药多糖,并分离服用各多糖后的小鼠血清,分别加入到淋巴细胞悬液中,检测小鼠淋巴细胞增殖情况.结果 各多糖组和含多糖血清组均能不同程度的促进淋巴细胞增殖,其中复方多糖和含复方多糖血清组最显著.结论 血清药理学方法更能真实地反映药物的药理作用;各单味中药多糖对细胞免疫具有协同促进作用.     

5种中药多糖及其含药血清对MSCs增殖的影响

目的：探讨当归多糖、何首乌多糖、熟地多糖、枸杞多糖、黄芪多糖及其含药血清对骨髓间充质干细胞（MSCs）增殖的影响。方法：分离、培养大鼠MSCs,各中药多糖及其含药血清,分别加入培养基诱导72h后,MTT法检测大鼠MSCs增殖情况。结果：1mg/mL黄芪多糖及其10%含药血清对大鼠MSCs增殖的影响,与相应浓度的空白组及空白血清组比较,差异有显著性意义（P〈0.05）。结论：黄芪多糖及其含药血清可促进大鼠MSCs增殖。     

盐巴戟炮制工艺研究

目的:优化盐巴戟天最佳炮制工艺条件;方法:以多糖为指标,用正交设计试验对盐巴戟天炮制工艺进行研究;结果:巴戟天在8%食盐水中浸泡20min,蒸20min为最佳炮制工艺,且测定其百分含量为28.37%;结论:本实验结果为制定巴戟天的饮片加工及质量标准提供了依据.     

巴戟天配方颗粒和盐巴戟天配方颗粒的光谱研究

目的：鉴别和区分不具饮片外形后的巴戟天配方颗粒和盐巴戟天配方颗粒。方法：采用紫外光谱法和红外光谱法,分别对不同批次的巴戟天配方颗粒和盐巴戟天配方颗粒进行分析研究。结果：各批次的巴戟天配方颗粒和盐巴戟天配方颗粒之间的差异较少,紫外光谱和红外光谱图均具有特征吸收峰;红外二阶导数光谱可以有效地区分巴戟天配方颗粒和盐巴戟天的配方颗粒。结论：利用紫外光谱和红外光谱可以准确、直观、快速地鉴别巴戟天和盐巴戟天的配方颗粒,为有效控制其质量提供了实验依据。     

巴戟天质量标准的初步研究

目的：以巴戟天中蒽醌主要成分甲基异丙茜草素－1－甲醚为指标进行巴戟天药材及其商品的含量测定,初步制定巴戟天质量控制的标准。方法：以柱层方法从巴戟天中提取分离得到甲基异茜草素－1－甲醚,用薄层扫描法对栽培巴戟天及商品中甲基异茜草素－1－甲醚进行了含量测定。结果：栽培巴戟天及商品均含有基茜甲素－1－甲醚,同时测定了不同生长期中甲基异茜草素－1－甲醚的含量,随着栽培期的增长,甲基异茜草素－1－甲醚的含量呈上升趋势。结论：以薄层扫描法测定栽培及商品巴戟天中甲基异茜草素－1－甲醚的含量,该方法准确、稳定、简便,可作为测定巴戟天中甲基异茜草素－1－甲醚含量的方法,为制定巴戟天质量标准提供了依据。     

巴戟天雌激素样作用的实验研究

目的探讨巴戟天的雌激素样作用。方法 60只雌性ICR小鼠进行腹腔假手术或切除双侧卵巢,随机分为假手术组、去卵巢对照组、尼尔雌醇对照组(0.5 mg/kg)和巴戟天低剂量组(2.5 g/d)、巴戟天中剂量组(5 g/d)和巴戟天高剂量组(10 g/d)。术后连续给药4周,观察各组小鼠子宫质量、体内雌激素水平及子宫组织病理学的差异。结果与模型组比较,巴戟天高剂量给药组能显著增加去卵巢小鼠子宫重量及血清雌二醇含量(P<0.05),减轻子宫萎缩程度。结论巴戟天具有雌激素样作用。     

南药巴戟天的化学成分

目的：研究南药巴戟天Morinda officinalis How的化学成分。方法：利用硅胶柱层析和凝胶柱层析对南药巴戟天的根茎进行分离纯化,利用光谱学手段鉴定其结构。结果：分离得到17个已知化合物：大黄素甲醚（1）,1-羟基-2-甲基蒽醌（2）,2-羟基-1-甲氧基蒽醌（3）,甲基异茜草素（4）,甲基异茜草素1-甲醚（5）,1,3-二羟基-2-甲氧基蒽醌（6）,3-羟基-2-甲基蒽醌（7）,Digiferruginol（8）,1,2-二甲氧基-3-羟基蒽醌（9）,1,3-二羟基-2-羟甲基蒽醌（10）,光泽汀ω-乙醚（11）,蒽醌-2-羧酸（12）,7-羟基-6-甲氧基香豆素（13）,反式丁烯二酸（14）,豆甾醇（15）,胡萝卜苷（16）和β-谷甾醇（17）。结论：化合物8-12,14-16首次从该植物中分离得到,并且化合物12和14首次从巴戟天属植物中分离。     

巴戟天遗传多样性的RAPD研究

目的应用随机扩增多态性DNA(random amplified polymorphic DNA,RAPD)标记技术对广东产5个类群的栽培巴戟天进行遗传多样性研究。方法应用15种引物对64个个体进行检测,应用Popgen32软件分析群体的遗传多样性。结果共得到224条带,其中多态位点112个,多态百分率为50.00%。种群内多态位点百分率在37.05%～53.13%,平均为45.86%。Shannon指数和Nei指数均反映出巴戟天各类群遗传多样性有一定的变化。Shannon指数为0.287 6,各类群的Shannon指数在0.103 3～0.236 2,Nei指数为0.175 6,各类群的Nei指数在0.074 5～0.154 0。结论目前栽培巴戟天居群间有一定的分化,并产生了多种农家类型,其中小叶巴戟天(POP2)遗传多样性明显高于其他类型,这些可能是导致目前栽培巴戟天质量产生变异的主要原因。     

巴戟天寡糖对小鼠精子生成作用的研究

 目的探讨巴戟天寡糖促进雄性小鼠生精的药理作用。方法采用环磷酰胺(CTX)引起的精子减少雄性小鼠模型。小鼠随机分为对照组、CTX模型组、巴戟天水提液组、巴戟天体积分数80%乙醇提取液组、巴戟天寡糖结晶组、甲睾酮组。建模后连续给药4周,观察给药组、模型组与对照组小鼠性器官以及精子数的差异。结果与模型组比较,巴戟天水提液组、巴戟天体积分数80%乙醇提取液、巴戟天总寡糖结晶组均具有明显的促进精子生成作用,其中以总寡糖结晶组作用最明显。结论巴戟天寡糖可能是巴戟天促进雄性小鼠生精作用的主要物质。     

炮制方法对巴戟天蒽醌类成分指纹的影响研究

目的:建立巴戟天蒽醌类成分指纹图谱分析方法,分析炮制技术对巴戟天蒽醌类成分的影响,为巴戟天炮制品质量标准评价体系的制定提供实验参考。方法:采用HPLC法,Sinergi 4u fusion-RP 80 A色谱柱(Phenomenex,250 mm×4.6 mm,4μm),以乙腈-0.4%磷酸水梯度洗脱,检测波长:254 nm,柱温:室温。建立巴戟天蒽醌类成分指纹图谱模型,使用计算机辅助相似度评价软件及统计学方法进行数据处理,得出不同产地巴戟天生品及炮制品蒽醌类成分指纹图谱共有模式。结果:经相似度软件分析后确定不同产地巴戟天生品与广东德庆巴戟天不同炮制品的蒽醌类成分指纹图谱中均有20个共有峰。其中,不同炮制品蒽醌类成分具有相似性,但共有峰相对含量具有差异性。另对照品对样品峰进行标定,结果 12号峰为1,8-二羟基蒽醌。结论:巴戟天经不同炮制方法处理后,蒽醌类成分相对含量有变化。炮制辅料与温度为炮制过程中对巴戟天蒽醌类成分的二大影响因素。其中,以甘草制得的巴戟天蒽醌类成分含量变化尤为明显,其次为酒制与盐制,同时炒制对巴戟天中蒽醌类成分的影响较蒸制大。     

巴戟天寡糖的高效薄层色谱指纹图谱研究

 目的 建立巴戟天寡糖的高效薄层色谱（HPTLC）指纹图谱,并对不同产地巴戟天药材、炮制饮片、混伪品及含巴戟天药材的复方制剂——口服液X中寡糖成分进行分析比较。方法 在湿度40%～55%、温度20～32 ℃条件下,以乙酸乙酯-甲醇-水-冰醋酸为展开剂二次展开,展距13 cm,α-萘酚试液加热至显色,于可见光下检视。将巴戟天寡糖HPTLC指纹图谱导入指纹图谱系统解决方案软件（CHROMAP 1.5）生成共有模式。结果 巴戟天寡糖指纹图谱由11个特征条带（色谱峰）构成,并指认了其中的果糖、蔗糖、1-蔗果三糖、耐斯糖及1F-果呋喃糖基耐斯糖5个峰。结论 通过HPTLC指纹图谱考察,炮制后巴戟天寡糖成分出现质与量的改变;来源于4省的巴戟天药材无明显差异;混伪品中不含巴戟天寡糖不能作为巴戟天替代药材入药;含巴戟天药材的制剂仍可采用该HPTLC法进行制剂质量评价与控制。     

巴戟天药材寡糖化学成分的高效阴离子交换色谱-脉冲安培电化学检测器指纹图谱研究

 目的 建立巴戟天药材寡糖化学成分的高效阴离子交换色谱-脉冲安培电化学检测器（HPAEC-PAD）特征指纹图谱,为制定巴戟天药材质量标准提供参考数据。方法 利用HPAEC-PAD,色谱条件为,Hamilton RCX-10 (4.1 mm×250 mm,7 μm）,100 mmol·L-1 NaOH溶液(A)-100 mmol·L-1 NaOH,500 mmol·L-1 NaAc混合溶液(B)流动相,梯度洗脱,流速为0.8 mL·min-1,柱温为30 ℃,检测电压0.1V,分析时间为40 min。结果 建立了巴戟天药材寡糖化学成分的HPAEC-PAD指纹图谱,并标定出巴戟天药材20个共有峰,其中3个峰经与对照品比对为蔗果三糖、耐斯糖(nystose)、1F-果呋喃糖基耐斯(1F-fructofuranosylnyslose),经指纹图谱系统解决方案软件（ChromafingerTM）生成共有模式,并进行相似度和主成分分析。不同产地巴戟天药材均含有以上共有峰,但在共有峰的峰高上有差异,并可用于区别巴戟天及其常见混伪品。结论 利用该方法建立的巴戟天寡糖类化学成分的指纹图谱特征性和专属性强,且该方法快速、灵敏、可靠,可用于控制巴戟天药材的质量。