牙髓天然免疫相关细胞的研究进展

天然免疫应答是机体抵御病原微生物入侵的第一道防线。当牙髓牙本质复合体受到外界刺激或损伤时，牙髓中的多种细胞会产生免疫应答，共同发挥防御功能保护牙髓。下面就牙髓中的成牙本质细胞、成纤维细胞、吞噬细胞、树突细胞和自然杀伤细胞等与天然免疫相关的细胞的特点和功能作一综述。     

牙髓卟啉单胞菌超声提取物对成骨细胞周期和凋亡的影响

目的:观察牙髓卟啉单胞菌超声提取物对成骨细胞周期和凋亡的影响。方法:用不同浓度牙髓卟啉单胞菌超声提取物(1、10、100μg/ml)作用成骨细胞,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪分析细胞周期分布和凋亡变化。结果:牙髓卟啉单胞菌超声提取物显著抑制成骨细胞的增殖。且在一定时间和浓度范围内具有浓度和时间依赖性。10μg/ml和100μg/ml提取物作用24 h时,处于G1期的成骨细胞明显增多;在作用48 h时,牙髓卟啉单胞菌提取物以浓度依赖方式促进成骨细胞凋亡。结论:牙髓卟啉单胞菌超声提取物可阻滞细胞于G1期,并诱导细胞凋亡,抑制成骨细胞增殖。     

变形链球菌牙面粘附唾液受体的筛选和纯化

目的：筛选和纯化变形链球菌血清型ｃ（简称变链）的牙面粘附唾液受体。方法：用全唾液包被羟基磷灰石形成实验性获得性膜（ＳＡＰ）,后用１ｍｏｌ／Ｌ ＮａＣｌ和０．５ｍｏｌ／Ｌ磷酸盐缓冲液分步洗脱,再用Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ７５分子筛层析和ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ２５离子交换层析对ＳＡＰ组分进行分离纯化,用细菌粘附实验和细菌粘附竞争抑制实验筛选受体,经聚丙烯酰胺凝胶电泳,等电聚焦电泳,淀粉酶活性测定等     

唾液对变形链球菌Mutans和变形链球菌Sobrinus粘附的影响

用＾３Ｈ标记变形链球菌遗传分型Ⅰ型Ｓ．ｍｕｔａｎｓＪＢＰ和ⅢＳ．ｓｏｂｒｉｎｕｓ６７１５，观察细菌在经兔唾液包被的羟磷灰石微珠表面的粘附量，以研究唾液对两种菌粘附的影响。结果表明，Ｓ．ｍｕｔａｎｓＪＢＰ和Ｓ．ｓｏｂｒｉｎｕｓ６７１５对经唾液包被的ＨＡ上的粘附量有明显差异，Ｉ型ＪＢＰ的粘附量显著多于Ⅲ型６７１５，在无唾液包被的ＨＡ上，两者粘附量无明显差异。结果说明变形链球菌Ｉ型Ｓ．ｍｕｔａｎｓ粘附的     

变形链球菌临床株F-ATPase亚基基因uncEBF在mRNA水平的表达

目的:研究变形链球菌临床分离株耐酸因子F-ATPase c、a、b亚基联合基因uncEBF在mRNA水平的表达差异,探讨基因表达水平与细菌耐酸力以及uncEBF基因型的关系。方法:应用半定量RT-PCR两步法和凝胶成像系统定量软件分析,分别对18株来自不同基因型和不同耐酸力变链菌的uncEBF基因表达水平进行评价,以SPSS11.0软件分析和比较mRNA表达的差异。结果:不同基因型及不同耐酸力菌株un-cEBF的mRNA表达水平不同(P<0.05),表现为A基因型uncEBF表达高于B基因型,高耐酸力菌株un-cEBF表达高于低耐酸力菌株。结论:变链菌不同基因型uncEBF基因的表达水平不同,表达水平高低与菌株的耐酸力相关。     

柠檬提取物对变形链球菌乳酸脱氢酶和蔗糖酶活性的影响

目的 观察柠檬提取物对变形链球菌(Streptococcus mutans,Sm)乳酸脱氢酶、蔗糖酶活性的影响,探讨柠檬酸提取物抑制Sm致龋活力的相关机制.方法 采用二倍稀释法,用含2%蔗糖的胰蛋白胨大豆肉汤将柠檬提取物的抑菌浓度稀释为0.64、0.32、0.16、0.08及0.04 g/L共5个质量浓度的溶液(5个实验组),以胰蛋白胨大豆肉汤液体培养基作为空白对照组.加入Sm菌液,厌氧培养6、18、24及48 h,采用还原性辅酶Ⅰ氧化法测定乳酸脱氢酶活性、用pH计测定培养液的pH变化值(△pH),同时采用3,5-二硝基水杨酸显色法测定蔗糖酶的活性.结果 随着柠檬提取物浓度的升高(0.04～0.64 g/L),乳酸脱氢酶、蔗糖酶活性和△pH均逐渐降低(P＜0.01):加入Sm厌氧培养24 h后,Sm乳酸脱氢酶活性从(0.8025±0.0913)×103 U/L降至(0.2099±0.0283)×103 U/L,Sm蔗糖酶活性从(-0.0107±0.0003)×103U/L降至(-0.0078±0.0002)×103 U/L,Sm △pH从2.8067±0.0404降至2.5033±0.0416(24 h).各实验组之间及与空白对照组之间差异有统计学意义(P＜0.01);柠檬提取物对Sm产酸的抑制作用与对乳酸脱氢酶活性的抑制作用之间呈正相关(r=0.8120～0.9918,P＜0.01).结论 低于抑菌浓度的柠檬提取物对Sm乳酸脱氢酶活性和蔗糖酶活性及产酸能力都具有显著抑制作用,作用强度具有浓度依赖性,对对数期细菌抑制作用强于其他生长周期,具有防龋药物的潜能.     

银杏叶提取物对口腔致龋变形链球菌的作用研究

目的 :为探讨天然植物银杏叶的提取物对临床分离的致龋变形链球菌的体外抗菌实验。方法 :随机选取DMFT≥ 3的成人 5 4名 ,取牙菌斑接种于培养基中 37℃厌氧培养筛选传代 3次 ,每株均在 6个不同的药物浓度下进行抑菌实验 ,观察最小抑菌浓度 (MIC)。结果 :银杏叶的提取物对临床筛选出的 33例致龋变形链球菌株 ,最小抑菌浓度MIC5 0和MIC90分别为6 2 5g/L和 12 5g/L。结论 :在天然植物的提取物中 ,银杏叶提取物对临床致龋变形链球菌有较好的抑制作用     

口腔链球菌和变形链球菌耐酸相关基因ffh的同源性分析

目的 检测口腔链球菌中是否存在耐酸相关基因,并对口腔链球菌和变形链球菌的ffh同源性进行分析。方法 厌氧培养变形链球茵和口腔链球菌,试剂盒提取细菌基因组,根据GenBank基因库上发表的各种属ffh基因序列,从最保守区设计1对聚合酶链反应(PCR)引物,进行PCR。结果 在以变形链球菌和口腔链球菌基因组为模板的PCR中,所获得的特异性片段与预期结果一致。结论 口腔链球菌中存在耐酸相关ffh基因,且口腔链球菌和变形链球菌耐酸相关基因ffh同源性高。     

LuxS基因缺失对变形链球菌耐酸性的影响

目的:探讨变形链球菌Ingbritt C (血清C型) 国际标准株与LuxS基因缺失的变形链球菌突变株之间耐酸能力的差异.方法:配制相同浓度的变形链球菌标准株与LuxS缺陷株菌悬液,分别在不同pH值(pH3.5～7.0)的BHI液体培养基中培养相同时间后,用紫外分光光度计测定吸光度,比较2 种菌株的生长情况;先在轻度酸性环境(pH5.5)中预酸化,再将2 种菌株于致死性pH值环境(pH3.0)中培养,比较其适应性耐酸能力.结果:①pH值为6.0～7.0时,2 种菌珠在相同pH值条件下生长情况间的差异无显著性(P>0.05), 且3 组不同pH值条件下细菌生长情况间的差异亦无显著性(P>0.05);②pH值为4.5～5.5时,2 种菌株的生长情况的差异有显著性(P<0.05);③在pH值为3.0时,LuxS缺陷株的生存率(0.006 5%)要明显低于标准株的生存率(0.078%),差异有显著性(P<0.05).④在pH值5.5环境下预酸化后,LuxS缺陷株的生存率(0.747%)约为标准株生存率(8.65%)的1/10.结论:在亚致死性pH值中,变形链球菌标准株与LuxS缺陷株的耐酸能力具有差异,标准株的耐酸能力强于LuxS缺陷株,2 种菌株均表现出了适应性耐酸的能力;变形链球菌LuxS缺陷株对酸的敏感性增加,而适应性耐酸能力仍然存在.     

大肠杆菌脂多糖影响Toll样受体4在人牙髓细胞的表达

目的:探讨大肠杆菌脂多糖(lippolysacchaide,LPS)对体外培养的人牙髓细胞(human dental pulp cells,HDPCs)Toll样受体4(Toll-likereceptor4,TLR4)表达的影响及TLR4在LPS对牙髓细胞激活中的作用。方法:以大肠杆菌LPS刺激体外培养的人牙髓细胞,运用实时荧光定量RT-PCR和免疫荧光技术分别检测牙髓细胞TLR4mRNA和蛋白的表达。利用抗体阻断和ELISA方法观察TLR4在LPS激活牙髓细胞释放IL-1β中的作用。结果:正常牙髓细胞不表达TLR4,1×10-4g/L大肠杆菌LPS作用HDPCs6、12、24h后均可见TLR4在胞膜/胞质的表达,胞核并不表达TLR4。FQRT-PCR结果表明LPS能明显上调牙髓细胞TLR4mRNA的表达(P<0.001),并具有LPS浓度依赖性。抗体阻断和ELISA结果证实LPS能激活牙髓细胞释放IL-1β(P<0.01),抗TLR4单抗能明显抑制LPS对HDPCs的激活(P<0.05)。结论:正常人牙髓细胞不表达TLR4,大肠杆菌LPS能诱导牙髓细胞表达TLR4mRNA和蛋白。TLR4介导了LPS对牙髓细胞的活化,在LPS对牙髓细胞激活效应中具有重要作用。     

Effect of immune bovine milk on Streptococcus mutans in human dental plaque

The use of a mouthrinse of bovine milk containing antibodies to Streptococcus mutans resulted in an initial reduction in the numbers of recoverable Strep. mutans in a group of 9 individuals. Ten volunteers who used control bovine milk that contained no antibody activity to Strep. mutans had variable levels of plaque Strep. mutans. In addition, after culture on Mitis Salivarius and Gold's agar, the plaque Strep. mutans from subjects who used the immune bovine milk rinse formed smaller colonies than those from pre-treatment plaque and from all plaque samples of subjects who used the control rinse.     

卵黄高磷蛋白对人牙髓细胞增殖的影响

目的研究卵黄高磷蛋白对体外培养的人牙髓细胞增殖的影响。方法 4个实验组分别采用1、10、100、1000ng/mL的卵黄高磷蛋白,对照组采用10%胎牛血清,分别作用于体外培养的第6代人牙髓细胞,每组8个标本,培养3、6day后分别对每组作MTT法检测,OD值进行t检验。实验组用100ng/mL卵黄高磷蛋白,对照组用10%胎牛血清作用上述人牙髓细胞,培养48h,常规消化,固定,经DNA荧光染色后,用流式细胞仪测定DNA含量。结果 1～100ng/mL卵黄高磷蛋白作用3、6day均促进人牙髓细胞增殖。10、100ng/mL卵黄高磷蛋白作用6day,对人牙髓细胞增殖的促进作用与对照组相比有显著差异(P<0.05)。1000ng/mL卵黄高磷蛋白作用3、6day均抑制人牙髓细胞增殖。100ng/mL卵黄高磷蛋白作用人牙髓细胞,与对照组相比DNA合成前期细胞比例明显降低,而DNA合成期细胞比例和细胞增殖指数均显著增高。结论卵黄高磷蛋白具有促进人牙髓细胞增殖和DNA合成的作用,可能主要通过促进处于合成前期的细胞进入合成期来实现的。     

釉基质蛋白在牙髓细胞增殖中的作用

目的探讨釉基质蛋白对牙髓细胞增殖的作用及其机理。方法分离培养人的牙髓细胞,加入不同浓度的Emdogain,采用化学发光免疫测定方法比较牙髓细胞的生长情况,采用Superarray方法研究加入Emdogain对细胞周期相关因子的影响。结果牙髓细胞在不同浓度的Emdogain作用下呈现不同的生长速率。Emdogain促进牙髓细胞生长的最佳浓度为300μg/ml。细胞周期相关因子的Superarray分析显示,Emdogain通过上调cyclin D1,p21,E6-AP,SUMO-1基因达到对细胞生长的促进作用。结论适宜浓度的Emdogain（45～600μg/ml）能够促进牙髓细胞的增殖。     

碱性成纤维细胞生长因子对人体外培养牙髓细胞增殖的影响

目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对体外培养的人牙髓细胞增殖和分化的影响.方法 以常规体外组织块培养法获得牙髓细胞,采用MTT比色测定bFGF对牙髓细胞的影响.结果 bFGF在1～100ng/ml浓度范围内,可促进人牙髓细胞的增殖,与对照组相比差异显著(P<0.01).bFGF最小显效浓度是1ng/ml,而10ng/ml的bFGF促增殖作用最强,与1ng/ml的bFGF相比差异显著(P<0.01),但与100ng/ml的bFGF无显著差异(P>0.05).从第3天起,与对照组相比bFGF对人牙髓细胞有显著的促增殖作用(P<0.01).结论 bFGF能明显促进人牙髓细胞的增殖,在牙髓组织康复治疗中起到重要作用.     

Effect of Psidium cattleianum leaf extract on Streptococcus mutans viability, protein expression and acid production

Plants naturally produce secondary metabolites that can be used as antimicrobials. The aim of this study was to assess the effects of Psidium cattleianum leaf extract on Streptococcus mutans. The extract (100%) was obtained by decoction of 100 g of leaves in 600 ml of deionized water. To assess killing, S. mutans biofilms were treated with water (negative control) or various extract dilutions [100, 50, 25% (v/v) in water] for 5 or 60 min. To evaluate the effect on protein expression, biofilms were exposed to water or 1.6% (v/v) extract for 120 min, proteins were extracted and submitted to 2-dimensional difference gel electrophoresis. Differentially expressed proteins were identified by mass spectrometry. The effect of 1.6% (v/v) extract on acid production was determined by pH measurements and compared to a water control. Viability was similar after 5 min of treatment with the 100% extract or 60 min with the 50% extract (about 0.03% survival). There were no differences in viability between the biofilms exposed to the 25 or 50% extract after 60 min of treatment (about 0.02% survival). Treatment with the 1.6% extract significantly changed protein expression. The abundance of 24 spots was decreased compared to water (p < 0.05). The extract significantly inhibited acid production (p < 0.05). It is concluded that P. cattleianum leaf extract kills S. mutans grown in biofilms when applied at high concentrations. At low concentrations it inhibits S. mutans acid production and reduces the expression of proteins involved in general metabolism, glycolysis and lactic acid production.     

酸性环境对变形链球菌spaP基因表达的影响

目的:观察酸性环境对变形链球菌初始黏附相关基因spaP表达的影响。方法:变形链球菌分别在初始pH为5.5和7.0的条件下培养,提取总RNA,逆转录成cDNA,利用TaqMan实时荧光定量PCR技术检测不同环境条件下变形链球菌初始黏附相关基因spaP的表达。结果:pH5.5的酸性环境中变形链球菌spaP基因表达显著下调(P相似文献   

酸性环境对变形链球菌srtA基因表达的影响

目的检测酸性环境对变形链球菌初始粘附相关基因srtA表达的影响。方法变形链球菌分别在初始pH为5.5和7.0的条件下培养,提取总RNA,逆转录成cDNA,利用TaqMan实时荧光定量PCR技术检测不同环境条件下变形链球菌初始粘附相关基因srtA的表达。结果酸性环境中高粘附能力变形链球菌srtA基因表达明显上调,低粘附能力菌株的srtA基因表达也升高但不具有统计学意义;中性环境中高粘附能力菌株srtA基因表达明显高于低粘附能力菌株,而在酸性环境中这种差异无统计学意义。结论酸性环境促进变形链球菌srtA基因表达可能是变形链球菌抵抗酸性环境的机制之一;变形链球菌对牙面的粘附力可能与其srtA表达的量有关。     

葡萄糖浓度对变形链球菌spaP基因表达的影响

目的 观察不同浓度葡萄糖对变形链球菌初始粘附相关基因spaP表达的影响.方法 变形链球菌分别在0.2、1.0、5.0%葡萄糖条件下培养,提取总RNA,逆转录成cDNA,利用TaqMan实时荧光定量PCR技术检测不同环境条件下变形链球菌初始粘附相关基因spaP的表达情况.结果 在0.2%～5.0%葡萄糖浓度范围内,粘附较强的变形链球菌菌株spaP基因的表达随糖浓度的增加而明显增强,粘附较弱的菌株也呈现这样的趋势,但差异不具有统计学意义.粘附较强的变形链球菌菌株其spaP基因的表达总体上高于粘附较弱的菌株.结论 在一定浓度范围内(0.2%～5.0%),葡萄糖浓度升高利于变形链球菌spaP基因表达可能是其促进变形链球菌初始粘附的机制之一;变形链球菌对牙面的粘附力可能与其spaP表达量有关.     

蔗糖浓度对变形链球菌wapA基因表达的影响

目的:观察不同浓度蔗糖环境对变形链球菌粘附相关基因wapA表达的影响.方法:变形链球菌分别在0.5%、1%、5%蔗糖条件下培养,提取总RNA,逆转录成cDNA,利用TaqMan实时荧光定量PCR技术检测不同环境条件下变形链球菌粘附相关基因wapA的表达.结果:不同浓度蔗糖条件下变形链球菌wapA基因表达的变化不具有统计学意义;0.5%和5%蔗糖条件下,粘附较强的菌株其wapA基因的表达明显高于粘附较弱的菌株.结论:蔗糖量的增加对变形链球菌wapA基因表达的影响不大;wapA基因表达的量可能与变形链球菌的蔗糖依赖性粘附呈正相关关系.