溶血磷脂酸刺激兔血管平滑肌细胞增殖的信号转导途径

目的：探讨溶血磷脂酸（ＬＰＡ）刺激兔血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖的信号转导途径，方法：在培养的家兔血管平滑肌细胞上，测定＾３Ｈ－胸腺嘧啶核苷（＾３Ｈ－ＴｄＲ）参入和丝裂素活化蛋白激酶（ＭＡＰＫ）活性。结果：ＬＰＡ呈浓度依赖地刺激＾３Ｈ－ＴｄＲ参入，并平行地激活ＭＡＰＫ二间呈显正相关，乙二醇－双（氨基乙酯）－四乙酸（ＥＧＴＡ）尼卡地平，ｒｙａｎｏｄｉｎｅｔｈａｐｓｉｇａｒｇｉｎｈｅｒｂｉｍｙｃ     

丝裂素活化蛋白激酶介导同型半胱氨酸诱导的血管平滑肌细胞增生

目的：研究同型半胱氨酸（ＨＣＹ）促进血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）的增殖及其机制。方法：采用同位素技术测定３ＨＴｄＲ参入和丝裂素活化蛋白激酶（ＭＡＰＫ）活性。结果：ＨＣＹ促进ＶＳＭＣ增殖，同时ＨＣＹ增加ＭＡＰＫ活性，二者均具有剂量效应关系，而且二者之间呈显著正相关。结论：ＨＣＹ促进ＶＳＭＣ增殖，可能是通过增加ＭＡＰＫ活性的途径实现的     

L－精氨酸抑制兔肺动脉巨噬细胞平滑肌细胞增殖

目的：观察Ｌ－精氨酸是否通过抑制巨噬细胞浸润和平滑肌细胞增殖而起抗动脉粥样硬化作用。方法：２０只成年雄性新西兰兔随机分为ＡＣ组（ｌ％胆固醇＋饮水含２．２５％Ｌ－精氨酸）；ＭＣ组（１％胆固醇＋饮水含０．９％蛋氨酸；Ｃ组（１％胆固醇）和ＮＣ组（普通饲料和自来水）；每组各５只。１０周后采血标本，处死兔取主肺动脉作形态学和免疫组织化学研究。统计学采取ｔ检验和方差分析。结果：Ｌ－精氨酸使肺动脉内膜增生明显减轻（１．９４至０．６７，Ｐ＜０．０５），巨噬细胞浸润及平滑肌细胞增殖显著减少（分别为７５％～１３％，和６８％～２１％，Ｐ均＜０．０１）；而蛋氨酸却无此作用。结论：Ｌ－精氨酸能抑制高胆固醇兔肺动脉粥样硬化，其机理主要与抑制巨噬细胞浸润和平滑肌细胞增殖有关。     

机械性血管损伤对血管平滑肌细胞增殖的影响

进行了粥样硬化血管段、球囊拉伤血管段以及球囊扩张后再狭窄血管段的组织细胞培养，以３Ｈ－ＴｄＲ掺入法测定血管平滑肌细胞血管平滑肌细胞（ＤＮＡ）合成速率。观察损伤血管段培养液对培养的血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖过程的影响，结果显示：球囊成形术组的血管组织培养液对ＶＳＭＣ增殖有明显的刺激作用。单纯血管损伤组次之。本研究中的粥样硬化血管段培养液对培养的ＶＳＭＣ增殖无明显影响。     

大黄素对血管平滑肌细胞增生抑制作用的机制

目的：观察大黄素对动脉损伤后离体培养的平滑肌细胞增殖细胞核抗原（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｎｇｃｅｌｎｕｃｌｅａｒａｎｔｉｇｅｎ，ＰＣＮＡ）和细胞周期时相的影响，了解大黄素抑制离体培养的平滑肌细胞增殖的作用机制。方法：指数增长期的平滑肌细胞同步化于Ｇ０期后，加入２０ｍｇ·Ｌ－１大黄素于含胎牛血清１０％（体积分数）的细胞培养液中，２４ｈ后分别用流式细胞仪进行细胞周期时相测定和抗ＰＣＮＡ蛋白单克隆抗体染色。结果：与对照组比较，用了大黄素以后，Ｇ０／Ｇ１期细胞百分比升高，Ｓ期细胞百分比下降，下降率为７５．５％，平滑肌细胞抗ＰＣＮＡ单克隆抗体染色呈阴性。表明ＰＣＮＡ蛋白的表达受到抑制，细胞受阻于Ｇ０期。结论：抑制ＰＣＮＡ蛋白表达、阻滞细胞周期的移行是大黄素抑制平滑肌细胞增殖的重要机制之一。     

溶血磷脂酸通过Rho信号转导途径增强肝癌细胞的侵袭转移

目的观察溶血磷脂酸(LPA)对恶性肿瘤细胞Rho蛋白及侵袭转移的影响。方法将SMMC7721细胞株培养后,制成单细胞悬液。在培养液中分别加入2、5、25μmol/L的LPA,为3个实验组。未加LPA为对照组。用Rho蛋白活性测定试剂盒检测溶血磷脂酸诱导SMMC7721细胞Rho蛋白活性,用Western印迹测定Rho蛋白表达,用黏附基质分析、重建基底膜侵袭模型等方法来研究药物处理后细胞侵袭、黏附、运动能力的改变。结果经溶血磷脂酸处理后,SMMC7721细胞中Rho蛋白表达增加,25μmol/L组蛋白量变化尤为明显,5h时为空白对照组的1.5倍,20h后增加至2.4倍。24h后Rho蛋白活性也明显增强,从102%±34%增加至408%±95%(P<0.01)。同时细胞的侵袭能力显著增强,对照组侵袭细胞数为531.2±65.6,25μmol/L溶血磷脂酸组为789.7±117.5(P<0.01)。60min时5和25μmol/L组细胞黏附率分别为77.9%±16.7%和83.6%±19.3%(P<0.05),80min时达到93.8%±25.6%和91.2%±29.7%,与对照组相比有显著统计学意义(P<0.01)。结论LPA主要通过Rho信号转导增强肝癌细胞的体外侵袭转移能力。     

纤维蛋白刺激平滑肌细胞的增生和胞内胆固醇堆积

在培养的家兔主动脉平滑肌细胞上观察到，纤维蛋白能够剂量依赖性地刺激平滑肌细胞增生，刺激胶原合成，增加细胞内胆固醇堆积，提示纤维蛋白很可能参与了动脉粥样硬化的发生。     

G蛋白反义寡核苷酸对血管平滑肌细胞增殖的影响

使用硫代修饰的Ｇ蛋白（Ｇαｑ／１１亚基和ｒａｓ蛋白）反义寡聚脱氧核苷酸（Ｇαｑ／１１亚基和ｒａｓ蛋白ＡＳ－ＯＤＮｓ）作用于含２０％胎牛血清ＤＭＥ培养液培养基的血管平滑肌细胞（ｖＳＭＣ）。通过细胞计数和免疫细胞化学方法，观察了Ｇαｑ／１１亚基和ｒａｓ蛋白ＡＳ－ＯＤＮｓ对ｖＳＭＣ增殖和ＰＣＮＡ表达的影响。结果表明，Ｇαｑ／１１亚基和ｒａｓ蛋白ＡＳ－ＯＤＮｓ联合应用能明显抑制ｖＳＭＣ增殖；免疫细胞化学分析亦显示ｖＳＭＣ中ＰＣＮＡ蛋白表达显著减少。而相同浓度的正义ＯＤＮｓ只有微小抑制作用。结果提示，Ｇαｑ／１１亚基和ｒａｓ蛋白ＡＳ－ＯＤＮｓ有可能应用于防治临床血管活性物质依赖性细胞增生性疾病的研究。     

自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞缺氧预处理的延迟保护作用

目的：观察缺氧预处理（ＰＣ）对于自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）缺氧复氧（Ｈ／Ｒ）损伤的延迟保护作用，并探讨其可能机制。方法：对ＶＳＭＣ于缺氧ＰＣ２４ｈ后进行Ｈ（２ｈ）／Ｒ（１ｈ），结束实验时测定其Ｈ／Ｒ后细胞存活率、乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）释放和ＡＴＰ含量，并测定其金属硫蛋白（ＭＴ）量。结果：缺氧ＰＣ明显减轻Ｈ／Ｒ造成的ＳＨＲ的ＶＳＭＣ存活率下降、ＡＴＰ耗竭和ＬＤＨ释放，并使细胞内应激蛋白ＭＴ含量升高１．３倍，上述指标与正常血压对照组ＷＫＹ大鼠ＶＳＭＣ的结果相近。结论：培养的ＳＨＲ的ＶＳＭＣ亦存在ＰＣ的延迟保护作用，其保护机制涉及ＭＴ合成增多。     

缺氧预处理对家兔血管平滑肌细胞缺氧──复氧损伤的保护

目的：观察缺氧预处理对家兔血管平滑肌细胞缺氧－复氧损伤的影响。方法：采用血管平滑肌细胞缺氧－复氧模型，用短暂缺氧进行预处理。结果：缺氧预处理能提高缺氧－复氧后血管平滑肌细胞存活率（ｐ＜０．０１）、减少细胞丙二醛产生（Ｐ＜０．０１）及乳酸脱氢酶的漏出（Ｐ＜０．０１）。结论：离体血管平滑肌细胞存在着预处理保护现象。     

二十碳五烯酸所产生的过氧化脂质对小牛主动脉内皮细胞和平滑肌细胞培养的影响

作者以硬脂酸、油酸、亚油酸为对照,观察了二十碳五烯酸(EPA)对小牛主动脉内皮细胞和平滑肌细胞TdR掺入、过氧化脂质(LPO)生成和细胞胆固醇含量的影响,以及维生素E对LPO生成的抑制作用.结果表明,用含100μmol/L EPA培养液培养内皮细胞,能明显提高细胞~3H-TdR掺入量(P<0.001);提高细胞LPO含量(P<0.01)和增加平滑肌细胞胆固醇含量(P<0.001),在培养液中加入10μg/mlα-生育酚,能明显抑制EPA组LPO的生成(P<0.001).     

游离脂肪酸对大鼠骨骼肌细胞胰岛素受体与胰岛素受体底物1的表达和酪氨酸磷酸化的影响

目的：探讨游离脂肪酸是否通过改变胰岛素信号传导蛋白的表达和功能状态影响骨骼肌细胞的葡萄糖代谢。方法：分离培养Ｗｉｓｔａｒ大鼠骨骼肌细胞。软脂酸（０．２５ｍｍｏｌ·Ｌ－１）或油酸（０．１２５ｍｍｏｌ·Ｌ－１）与骨骼肌细胞共同孵育６、１２、２４ｈ，提取蛋白后用Ｗｅｓｔｅｒｎ杂交方法检测胰岛素受体和胰岛素受体底物１（ＩＲＳ１）的蛋白水平，同时应用免疫沉淀和免疫杂交技术检测胰岛素刺激后胰岛素受体β亚单位和ＩＲＳ１的酪氨酸磷酸化程度。结果：（１）软脂酸或油酸作用后骨骼肌细胞的胰岛素受体蛋白质表达量无改变。（２）骨骼肌细胞与软脂酸或油酸共同孵育１２和２４ｈ后胰岛素受体β亚单位的酪氨酸磷酸化显著降低。（３）骨骼肌细胞在软脂酸或油酸作用后各个时间点的ＩＲＳ１蛋白质量均明显降低。（４）骨骼肌细胞经软脂酸或油酸作用后ＩＲＳ１的酪氨酸磷酸化在各个时间点均显著降低。结论：游离脂肪酸可能通过抑制骨骼肌细胞的ＩＲＳ１蛋白质表达和胰岛素受体的酪氨酸磷酸化以及ＩＲＳ１的酪氨酸磷酸化阻滞胰岛素信号传导，引起骨骼肌胰岛素抵抗     

三七总皂甙、大鼠高胆固醇血清对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的：为观察tPNS对HCS刺激的VSMC增殖的影响。方法：通过MTT法和电镜观察法，观察了tPNS对VSMC的保护作用。结果：HCS可明显刺激VSMC增殖并导致其表型的改变，tPNS可呈浓度依赖性抑制VSMC的增殖（r=-0.972)，与对照组相比具显著差异；tPNS还可明显抑制HCS对VSMC的刺激增殖作用，与HCS组相比具有显著差异。结论:tPNS可抑制VSMC增殖而抗动脉粥样硬化，这种抑制作用没有种属差异性。     

家兔主动脉平滑肌细胞牛磺酸转运和缺氧－复氧损伤对其的影响

目的：观察血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）牛磺酸跨膜转运的特征及缺氧－复氧损伤后的改变。方法：用３Ｈ标记的牛磺酸在培养的家兔主动脉ＶＳＭＣ上进行实验。结果：ＶＳＭＣ的牛磺酸转运是钠浓度依赖的高亲和转运，Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶抑制剂哇巴因呈浓度依赖性地抑制其转运。ＶＳＭＣ经缺氧－复氧处理后Ｖｍａｘ下降３４％（Ｐ＜０．０１），但Ｋｍ值无明显改变。结论：ＶＳＭＣ具有高亲和牛磺酸转运系统，缺氧－复氧处理可能损伤这一转运系统。     

atRA对动脉内皮损伤后平滑肌细胞CDKs表达影响

目的探讨全反式维甲酸（atRA）对受损大鼠主动脉内皮平滑肌细胞周期素依赖性激酶（CDKs）表达的影响。方法77只大鼠随机分为假手术组、损伤组、atRA组,分别于术后2、7、14d取实验动脉段,测定内膜、中膜平滑肌细胞CDK2、CDK4的表达水平。结果损伤组CDK2、CDK4均于术后2d在中膜表达,随后表达渐少,损伤后7d,在内膜有表达,14d内膜表达呈强阳性,并可见向管腔表面聚集现象;atRA组CDK2阳性表达指数较损伤组显著下降（t=-4．97～17．86,P＜0．01）,CDK4阳性表达指数亦显著下降（t=5．64～20．05,P＜0．01）。结论atRA可能通过抑制CDK2、CDK4的过表达而抑制细胞周期进程,从而抑制内膜增生。