不同加工条件下转基因大米潮霉素标记基因(hpt)稳定性研究

目的从DNA稳定性的角度,探讨转基因大米潮霉素标记基因hpt向食品或消化道微生物转移发生水平转移的可能性。方法利用针对hpt不同大小片段的PCR扩增体系,对hpt在转基因大米加工食品中的稳定性进行研究。结果建立的PCR体系能稳定扩增出hpt236bp-910bp不同大小的5个片段。利用这一PCR体系对s86转基因大米不同加工食品的检测显示,加工米饭、粥大于500bp的片段已降解,爆米花和锅巴大于236bp的hpt片段已降解。对照M86大米加工米饭和粥仅能扩出植物叶绿体基因rbcl片段,爆米花、锅巴及空白对照所有扩增均为阴性。结论hpt在转基因大米加工食品中均已不同程度的发生了降解,不同加工方式对hpt片段降解影响显著,在加工后hpt以较大或完整片段向食品或消化道微生物转移的可能性减小。     

转基因作物标记蛋白HPT融合表达载体构建、纯化及复性研究

目的潮霉素磷酸转移酶基因(hpt)是转基因作物中广泛应用的抗生素标记基因,本研究构建该基因的融合表达载体,以期得到足量纯化的HPT蛋白,为该外源蛋白的进一步安全性评价奠定基础。方法将hpt基因克隆到线性表达载体pET41 EK/LIC中,得到该基因的融合表达载体pET41EK/HPT,将pET41EK/HPT载体转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,沉淀中的包涵体进行了稀释复性、柱上复性和N-十二烷基肌氨酸钠(SKL)溶解稀释复性等复性研究及活性测定、标签切除、N端测序等工作。结果融合蛋白主要以无活性的包涵体形式存在,各复性方法表明SKL溶解稀释复性得到的蛋白在活性及产率方面明显高于其他两种方法,利用该方法每升培养物可获得78mg活性HPT融合蛋白,纯度约为93%,经肠激酶切割后,得到的蛋白与天然HPT蛋白N端氨基酸序列完全相同。结论利用本研究方法可得到在活性、分子量及氨基酸序列等方面与天然HPT蛋白一致的目的蛋白。     

转基因作物对生态环境的潜在风险

转基因作物在全球范围内的广泛应用在带给人类巨大利益的同时,也可能产生一系列风险.该文概述了转基因作物对生态环境的潜在风险,针对转基因作物的杂草化问题,分析了产生杂草化的遗传和环境因素,同时阐述了转基因作物的释放对生物多样性及生态系统的影响.     

转基因水稻潮酶素标记基因在大鼠体内代谢的初步研究

目的初步探索hpt在大鼠消化道内降解的特点和肝脏、肾脏转移的可能性。方法48只成年雄性SD大鼠随机分为8组,每组6只,6组作为转基因组,2组作为非转基因组,分别喂饲转基因饲料和非转基因饲料两周。所有动物于试验结束当天喂饲后2、4、6、8、10和24h处死动物,取胃、空肠、回肠下段、盲肠、直肠的内容物。另取20只雄性SD大鼠随机分为2组,每组10只,转基因大米饲料与非转基因饲料喂饲大鼠4周,取其肝脏、肾脏。用PCR方法检测hpt片段在肠道和肝、肾脏器中的代谢情况。结果hpt基因在胃内容物中有少量未被降解之外,在小肠、盲肠及直肠内容物中,基因大部分已被降解。hpt基因在肠道的降解存在时间和片断依赖型。在试验周期内,肝、肾脏器中未捡出hpt基因片断。结论转基因水稻hpt基因在大鼠消化道内很容易降解,且不能在肝、肾脏器中被捡出。     

转基因作物的安全性评价策略、现状及发展

基因重组技术赋予农业生产以巨大的活力 ,但转基因作物的安全性问题却不容忽视。有关国际组织及政府已达成共识 :在“实质等同性”原则的基础上 ,应对转基因作物进行详尽周密的安全性评价工作。有关策略包括实质等同性分析、毒性实验、致敏性研究、营养学评价等 ,随着新技术的发展 ,基因组学、蛋白质组学、代谢组学等新技术也将用于对非目标效应的监测 ,欧盟已在酝酿上市后监测的一些措施。总之 ,转基因作物的安全性评价策略是十分严格的 ,且还在逐步完善。     

工作场所空气中磷酸测定方法的改进

以原有钼酸铵分光光度诊测空气中磷酸,曲线显色难控制,拟对该法进行改进。其中空气中的磷酸雾用微孔滤膜采集,水洗脱后,在酸性溶液中,与钼酸铵和硫酸肼反应生成磷钼蓝。以纯水作参比,680 nm波长处测量吸光度。     

043 转基因作物食用潜在致敏性的安全评价

转基因作物食用潜在致敏性是转基因作物食用安全性评价的焦点问题,目前国内外对其致敏性检测和评价尚无统一的方法和标准.本文借鉴FAO/WHO转基因食品致敏安全性评价的有关策略和评价程序,结合药品、生物制品以及化妆品的相关致敏安全性评价方法,采用危险评价、实质等同性分析、个案处理和逐步完善的评价原则,从转基因作物的转入基因、转基因作物和非预期效应等3方面进行评价,并对目前国内外采用的序列相似性比较、特异血清筛选、靶向血清筛选、模拟胃肠液消化试验和动物模型等不同方法进行综述,旨在为转基因作物食用潜在致敏安全性评价提供科学合理的方案.     

工作场所空气中磷酸的离子色谱测定方法探讨

目的建立一种测定工作场所空气中磷酸的离子色谱检测方法。方法工作场所空气中磷酸用微孔滤膜采集,用水洗脱,洗脱液经0.22μm滤膜过滤后直接进样,经离子色谱仪电导检测器检测。结果在淋洗液浓度30mmol/L KOH,流速1.00 ml/min,分离测定过程在12min内完成,磷酸保留时间为10.507 min,在0.50～10.0μg/ml范围内,线性关系良好,相关系数r=0.999以上,检出限为0.004μg/ml,最低检出浓度0.003mg/m(3以采集75L空气样品计)。结论离子色谱法能满足于工作场所空气中磷酸的检测。     

营养改良型转基因作物的营养及特殊功效评价研究进展

由于食物缺乏和营养不良等问题仍然存在,以及对高营养品质的食品需求越来越大,通过现代农业生物技术获得的营养改良型转基因作物受到越来越多的关注。目前这类产品已得到大量的研究和开发,其中一些已进入商业化生产阶段。本文就营养改良型转基因作物的营养及特殊功效评价研究进展进行综述。     

工作场所空气中磷酸测定方法的改进研究

目的改进GBZ/T160.30—2004《工作场所空气有毒物质测定无机含磷化合物》标准,建立完整的磷酸检测方法。方法在职业卫生标准方法GBZ/T160.30—2004的基础上进行探讨研究。结果对GBZ/T160.30—2004改进主要有:①明确钼酸铵溶液的配制方法;②更改了标准曲线中的标准系列;③更改了加入钼酸铵溶液的体积。结论标准的原文疑似笔误或印刷错误,改正、改进后的方法能够适应检测需要,补充了加标回收率等指标。建议对GBZ/T160.30—2004进行修订。     

两种免疫检验方法检测乙肝病毒感染血清标志物的对比分析

目的:探究两种免疫检验方法检测乙肝病毒感染血清标志物的应用效果,为临床实践提供理论依据.方法:以200例乙肝病毒感染患者为对象,研究时间为2019年12月～2020年12月,分为参照组100例、研究组100例,参照组应用酶联免疫吸附法酶联免疫吸附法诊断,研究组应用化学发光免疫分析法检测,对比诊断结果.结果:研究组乙肝e...     

乙型肝炎两种检测血清标志物方法比较

目的探讨MEIA和ELISA在对乙型肝炎患者的检测中的不同。方法对2010年1月～2010年3月在我院门诊处进行乙肝血清标志物检测的130例患者,分别采用MEIA检测方法和ELISA检测方法,对比分析两种检测方法所得的HBsAg、HBeAg、抗-HBs、抗-HBe和抗-HBc的检测结果。结果 MEIA和ELISA在检测HBsAg、HBeAg和抗-HBs中,结果基本相符,符合率为96%以上。但是,抗-HBe和抗-HBc的检测结果相符率分别为90.00%和86.15%。且MEIA(化学发光微粒子免疫分析法)比ELISA(酶联免疫吸附试验)自动化程度高,对病情可做动态监测。结论乙型肝炎的血清标志物的检测,要合理采用不同的方法进行测定,必要时可联合使用,以增加检测结果的准确性。     

乙型肝炎两种检测血清标志物方法比较

目的探讨MEIA和ELISA在对乙型肝炎患者的检测中的不同。方法对2010年1月～2010年3月在我院门诊处进行乙肝血清标志物检测的130例患者,分别采用MEIA检测方法和ELISA检测方法,对比分析两种检测方法所得的HBsAg、HBeAg、抗-HBs、抗-HBe和抗-HBc的检测结果。结果 MEIA和ELISA在检测HBsAg、HBeAg和抗-HBs中,结果基本相符,符合率为96%以上。但是,抗-HBe和抗-HBc的检测结果相符率分别为90.00%和86.15%。且MEIA（化学发光微粒子免疫分析法）比ELISA（酶联免疫吸附试验）自动化程度高,对病情可做动态监测。结论乙型肝炎的血清标志物的检测,要合理采用不同的方法进行测定,必要时可联合使用,以增加检测结果的准确性。     

环境化学物雄激素干扰活性检测方法的建立

目的：建立雄激素受体（AR）介导的荧光素酶（Luc）报告基因试验方法,为化学物拟/抗雄激素活性的检测提供研究工具。方法：构建受雄激素反应元件调控的荧光素酶报告基因质粒pMMTV-Luc,将该质粒与表达AR的质粒AR/pcDNA3.1和阳性对照质粒phRL-tk共转染CV-1细胞,建立AR报告基因试验。以5α-双氢睾酮（5α-DHT）为阳性对照检测该方法的筛选效率。CV-1转染后用受试化学物染毒,根据Luc表达的变化,判断化学物的雄激素干扰活性。结果：5α-DHT对共转染三种质粒的CV-1的诱导作用表现为：10-10M的5α-DHT显著诱导Luc的表达,10-7M时达最大值,诱导倍数为61.83倍,计算其半数效应浓度EC50为3.65 nM。糖皮质激素受体（GR）激动剂地塞米松（dexamethasone）不诱导Luc的表达。AR拮抗剂氟他胺（flutamide）在10-7M～10-5M浓度范围内显著拮抗1nM的5α-DHT诱导的Luc的表达,其半数抑制浓度（IC50）为3.49μM。BPA在10-6M和10-5M时能拮抗1 nM 5α-DHT诱导的Luc的表达,其IC50为2.14μM。结论：本研究建立的AR报告基因试验具有较高的灵敏度和特异性,化学物BPA具有抗雄激素活性。     

酶联免疫法检测黄曲霉毒素B1的标准曲线拟合分析

目的探索酶联免疫吸附法(ELISA)检测黄曲霉毒素B1(AFB1)标准曲线的拟合方程,提高检测结果的准确性。方法用SPSS生物统计软件建立AFB1测定标准系列的拟合二次曲线及指数曲线方程,并比较两种方程的准确性。结果由拟合二次曲线方程求得的样品浓度与从标准曲线上求得的样品浓度偏差<10%。结论拟合二次曲线方程作AFB1测定标准曲线的拟合较为合适,测定快速而准确。     

蓖麻毒素B链蛋白多克隆抗体的制备及胶体金免疫层析快速检测法的建立

目的:结合蓖麻毒素(RT)的多克隆抗体和单克隆抗体,建立检测RT的胶体金免疫层析快速检测方法。方法:将纯化得到的重组蓖麻毒素B链蛋白(rRTB)免疫兔,获得抗血清经正辛酸-硫酸铵分步沉淀法纯化,利用间接ELISA方法鉴定抗体效价和特异性。结合抗重组蓖麻毒素A链蛋白(RTA)单克隆抗体,采用双抗体夹心法,建立检测天然RT的胶体金免疫层析技术,并对该方法进行特异性、敏感性、稳定性等评价;在奶粉、血清、土壤等材料中进行模拟添加RT检测。结果:间接ELISA法测定抗体效价为1:105,并可特异性与rRTB结合;胶体金法能在5~10 min内完成检测,多种不同的蛋白及近缘毒素检测评价显示该法特异性良好,检测灵敏性为50 ng/ml,环境样品的检测敏感性也相同。结论:利用兔抗RTB多抗和抗RTA单抗,建立了适用于现场的快速、特异检测天然蓖麻毒素的胶体金免疫层析方法。     

抗氧化剂对黄曲霉毒素染毒的转基因小鼠肝肿瘤的防护

目的研究抗氧化剂２,３叔丁基４羟基茴香醚（ＢＨＡ）对黄曲霉毒素（ＡＦＢ１）染毒的乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）转基因小鼠肝肿瘤发生的防护作用。方法对ＡＦＢ１染毒和未染毒的４９只转基因小鼠与４８只非转基因小鼠,测定肝醌还原酶（ＱＲ）和谷胱甘肽Ｓ转移酶（ＧＳＴ）活性、肝丙二醛（ＭＤＡ）含量、肝氧自由基浓度（ＯＦＲ）。结果染毒的转基因小鼠ＢＨＡ组肝腺瘤发生率１７％,癌变率０,显著低于普通饲料组的肝腺瘤发生率（６７％）和癌变率（２２％）。与普通饲料组比较,ＢＨＡ使肝ＯＦＲ和ＭＤＡ含量显著降低;ＢＨＡ组肝ＱＲ和ＧＳＴ活性平均升高３～７倍。结论ＢＨＡ能显著诱导肝脏生物转化Ⅱ相酶活性,清除氧自由基,抑制变异肝细胞生长,可能与抑制或延缓小鼠肝癌的发生、发展进程有关