Heptanol预处理对细胞膜及线粒体C×43参与的大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的作用研究

目的 通过对细胞膜及线粒体Cx43表达变化的研究,探讨不同浓度庚醉(Heptanol)预处理时大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤作用.方法 将SD乳鼠培养的心肌细胞随机分为5组:正常对照组(control组),缺氧/复氧组(AR组),溶酶组(DMSO组),0.lmmol/L庚醉预处理组(0.1HT组),0.5mmol/L庚醉预处理组(0.5HT组),1.0mmol/L庚醉预处理组(1.0HT组),2.0mmol/L庚醇预处理组(2.0HT组).除Control组外,H/R组,DMSO组以及各浓度heptonal预处理组均进行缺氧/复氧处理.检测CX43mRNA水平,并提取心肌细胞线粒体蛋白,应用Western blot检测其含量.结果 AR组、0.1HT组和0.51HT组较control组的CX43mRNA表达水平及线粒体Cx43含量明显减少,差异有统计学意义(P＜0.01).1.0HT组和2.0HT组与AR组相比较,Cx43mRNA表达水平及线粒体 Cx43含量明显增加,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 heptanol预处理可以逆转I/R导致的细胞膜及线粒体Cx43的减少,但作用效果与浓度有关.线粒体Cx43可能参与了heptanol预处理的心肌保护作用.     

PKC及缝隙连接蛋白Cx43改变在吗啡和舒芬太尼预处理缺氧复氧损伤心肌中的作用

目的：探讨蛋白激酶C（PKC）信号通路及心肌缝隙连接蛋白Cx43改变在阿片药物预处理中的作用。方法：原代心肌细胞分离培养。将培养5 d的心肌细胞分成8组。正常对照组（C组）不给予任何处理,建立培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤模型（I/R组）,吗啡组（MF组）加入吗啡至终浓度0.3 μmol·L^-1,舒芬太尼组（SF组）加入舒芬太尼至终浓度0.000 3 μmol·L^-1,PKC激动剂PMA+吗啡组（PMA+MF组）加入PMA至终浓度0.02 μmol·L^-1,再进行吗啡预处理;PKC抑制剂Rottlerin+吗啡组（ROT+MF组）加入Rottlerin至终浓度5 μmol·L^-1,再进行吗啡预处理;PKC激动剂PMA+舒芬太尼组（PMA+SF组）加入PMA至终浓度0.02 μmol·L^-1,再进行舒芬太尼预处理;PKC抑制剂Rottlerin+舒芬太尼组（ROT+SF组）加入Rottlerin至终浓度5 μmol·L^-1,再进行舒芬太尼预处理。各组做上述相应处理后取材检测细胞存活率。免疫荧光共聚焦技术检测缝隙连接蛋白Connexin 43（Cx43）的平均光密度（AOD）,用Western-blot检测细胞Cx43总蛋白及其磷酸化水平（P-Cx43）的表达量。结果：与C组比较,其余各组心肌细胞存活率、Cx43 AOD值、心肌细胞Cx43总蛋白表达及P-Cx43表达降低（P<0.05）;与I/R组比较,MF组、SF组、ROT+MF组、ROT+SF组、PMA+MF组、PMA+SF组心肌细胞存活率、Cx43 AOD值、Cx43总蛋白和P-Cx43表达增高（P<0.05）;与MF组比较,ROT+MF组心肌细胞存活率、Cx43 AOD值、Cx43总蛋白及P-Cx43表达降低（P<0.05）,SF组心肌细胞存活率、Cx43 AOD值和Cx43总蛋白降低（P<0.05）,而P-Cx43表达增高（P<0.05）,PMA+MF组心肌细胞存活率、Cx43 AOD值、Cx43总蛋白和P-Cx43表达均增高（P<0.05）;ROT+SF组较SF组心肌细胞Cx43 AOD值、Cx43总蛋白和P-Cx43表达低（P<0.05）,而PMA+SF组较SF组心肌细胞存活率、心肌细胞Cx43 AOD值、Cx43总蛋白和P-Cx43表达高（P<0.05）。结论：吗啡和舒芬太尼预处理可减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤,且吗啡对心肌细胞的保护作用较舒芬太尼强,这种心肌细胞保护作用可能与PKC信号通路的激活有关。     

线粒体Cx43参与Heptanol保护兔心肌缺血/再灌注损伤

目的探讨线粒体Cx43和线粒体ATP敏感性钾通道(mitoKA+TP)在Heptanol保护兔心肌缺血/再灌注损伤的作用。方法兔80只,建立心肌缺血/再灌注模型,随机分5组,每组16只:假手术组(sham组)、缺血/再灌注组(IR组)、缺血预处理组(IP组)、Heptanol预处理(HT组)和5-羟葵酸加heptanol预处理组(HT+5-HD组)。测定血浆磷酸肌酸激酶同工酶(CK-MB),肌钙蛋白(cTnI)含量以及心肌梗死面积,采用电子显微镜(电镜)观测心肌线粒体结构变化,应用Westernblot检测线粒体Cx43蛋白含量。结果再灌注4h末血浆CK-MB与cTnI活性及心肌梗死面积,IP组和HT组明显低于IR组和HT+5-HD组(P<0.01)。电镜检测线粒体发现,与sham组比较,其他各组均损伤明显(P<0.01);与IR组比较,HT组、IP组(P<0.01)和HT+5-HD组(P<0.05)明显减轻;与HT+5-HD组比较,HT组和IP组损伤明显减轻(P<0.01)。Western blot检测线粒体Cx43蛋白发现,与sham组比较,HT+5-HD组和IR组线粒体Cx43蛋白明显下降(P<0.01);与IR组比较,HT组、IP组(P<0.01)和HT+5-HD组(P<0.05)心肌线粒体Cx43明显升高;与HT+5-HD组比较,HT组和IP组心肌线粒体Cx43升高(P<0.01)。结论线粒体Cx43可能参与Hep-tanol预处理的心肌保护作用,其机制可能与mitoKA+TP有关。     

氯离子参与心肌细胞缺氧复氧损伤机制的研究

目的研究氯离子参加心肌细胞缺氧/复氧(A/R)损伤的机制。方法采用原代培养新生大鼠的心肌细胞A/R损伤模型,去除细胞外的氯离子(Cl--free),或分别给予Na+-K+-2Cl-共同转运体阻断剂bumetanide,Cl-/HCO3-离子交换系统抑制剂SITS和氯通道阻断剂9-AC,观察细胞存活率、MDA含量、LDH、SOD、GSH-Px酶活性变化及细胞内的钙含量、NF-κB活性变化。结果A/R组与对照组比,MDA含量、LDH活性、细胞内的钙含量、NF-κB活性升高,细胞存活率、SOD、GSH-Px活性降低;bumetanide及9-AC组与A/R组比,各项指标无统计学意义。Cl--free、SITS处理后较A/R组,MDA含量、LDH活性、细胞内的钙含量、NF-κB活性降低,而细胞存活率、SOD、GSH-Px明显升高。结论Cl-/HCO3-离子交换系统在心肌细胞A/R损伤中起了重要作用,Cl-参与心肌A/R损伤的机制与钙超载及NF-κB活性升高有关。     

缺氧后处理对成年大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用

目的：通过建立成年大鼠心肌细胞缺氧复氧模型观察缺氧后处理的心肌保护机制。方法雄性SD大鼠,体质量250～350 g ,随机分为3组：正常组（NOR组）、缺氧组（H／R组）、缺氧后组（HP组）。采用激光共聚焦显微镜检测心肌细胞线粒体膜电位（mitochondrial membrane potential , MMP）、细胞内钙离子荧光强度以及 Western blot方法测定磷酸化 p38丝裂原活化蛋白激酶（p‐p38MAPK）表达量。结果（1）与正常组比较,H／R组和 HP组 MMP显著降低（P＜0．05）;HP组MMP明显高于 H／R组（P＞0．05）;（2）与正常组和 HP组比较,H／R组细胞内钙离子荧光强度显著升高（P＜0．01）;HP组和正常组间差异无统计学意义（P＞0．05）;（3）与正常组和 HP组比较,H／R组p‐p38MAPK表达量显著升高（P＜0．05）;HP组和正常组间表达量差异无统计学意义（P＞0．05）。结论缺氧后处理可对缺氧复氧成年大鼠心肌细胞产生保护作用,其机制可能与下调心肌细胞p‐p38M A PK 表达量、抑制线粒体膜电位下降以及防止钙超载进而抑制凋亡有关。     

意大利牛舌草的化学成分及对大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的研究意大利牛舌草的化学成分及其对大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用。方法用体积分数为60%的乙醇提取,经硅胶柱色谱、聚酰胺层析和制备液相等多种色谱方法进行分离纯化得到单体化合物,通过理化性质和核磁共振波谱鉴定化合物结构。建立大鼠乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,考察单体化合物对心肌细胞存活率、乳酸脱氢酶(LDH)水平、细胞内丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响。结果从意大利牛舌草中分离鉴定了10种化合物,分别为β-谷甾醇乙酸酯(1)、β-谷甾醇(2)、苦莓苷(3)、芦丁(4)、山柰酚(5)、咖啡酸(6)、胡萝卜苷(7)、山柰酚-3-O-芸香糖苷(8)、水仙苷(9)和迷迭香酸(10)。化合物4,8,9和10组心肌细胞存活率分别为91.05%,92.32%,93.41%和93.38%。与模型组比较,心肌细胞LDH水平和MDA含量均显著降低,SOD活性显著升高。结论化合物1,2,3,7和8均为首次从该植物中分离得到,单体化合物4,8,9和10对缺氧/复氧心肌细胞损伤具有保护作用。     

氯离子对心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响

目的　研究氯离子对心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响。方法　利用原代培养的心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,去除细胞外的氯离子或采用氯通道阻断剂DIDS、SITS进行干预,检测细胞存活率及LDH、MDA、SOD、GXH Px活性变化。结果　缺氧/复氧损伤组与对照组比,LDH、MDA活性升高,细胞存活率、SOD、GXH Px降低; Cl- free+A R组、SITS+A R组处理后较缺氧/复氧组LDH、MDA活性低,细胞存活率、SOD、GXH Px升高;DIDS+A R组的上述指标与缺氧/复氧组比无差异。结论　①氯离子在心肌细胞缺氧/复氧损伤中起了重要作用。②氯通道阻断剂SITS对抗心肌细胞缺氧/复氧损伤有明显的保护作用,而DIDS无保护作用。     

硫酸锌预处理对成年大鼠缺氧/复氧心肌细胞超微结构的影响

目的研究硫酸锌预处理对成年大鼠缺氧/复氧心肌细胞超微结构的影响。方法 分离培养SD成年大鼠心肌细胞,建立心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,将细胞随机分为正常组(N组)、缺氧/复氧组(H/R组)、缺氧预处理组(HP组)、硫酸锌(Zn SO4)预处理组(Zn P组),分别进行相应处理,然后用透射电镜对各组心肌细胞超微结构进行观察,并进行线粒体评分。结果 N组、HP组、Zn P组超微结构优于H/R组,且线粒体评分较H/R组低,差异均有统计学意义(P<0.05);HP组、Zn P组超微结构变化相似,且两组线粒体评分比较,差异无统计学意义(P>0.05),但均高于N组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 缺氧/复氧可造成成年大鼠心肌细胞超微结构的损伤,Zn SO4预处理、缺氧预处理均能减轻该损伤,且二者效果相当。     

硫氢化钠后处理对缺氧/复氧心肌细胞线粒体渗透性转换的影响

目的观察硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)供体——硫氢化钠(sodium hydrosulfide,NaHS)后处理对培养的新生大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤中线粒体渗透性转换(mitochon-drial permeable transition,MPT)影响。方法将原代培养大鼠乳鼠心肌细胞随机分为缺氧/复氧组(H/R)和硫氢化钠后处理组(H/R+NaHS)。H/R组为缺氧2h后复氧2h。H/R+NaHS组为缺氧2h后,给予1×10-6mol·L-1NaHS后处理0.5h,再复氧1.5h。两组分别于缺氧前、缺氧2h、复氧0.5h、1和2h,应用噻唑蓝法检测细胞活性,荧光指示剂孵育激光共聚焦显微镜下检测线粒体渗透性转换孔(MPTP)的开放程度和线粒体膜电位(Δψm)的变化。结果缺氧2h内细胞活力明显下降,MPTP开放,Δψm下降。在复氧初期两组细胞损伤会进一步加剧,但H/R+NaHS组在NaHS后处理后,细胞活性(45%±3.7%)下降幅度明显小于H/R组(36.5%±1.8%,P<0.05);MPTP荧光强度(52%±5.7%)和Δψm荧光强度(47.2%±5.1%)也明显高于H/R组(40%±5.4%,33.4%±5.0%,P<0.05)。到复氧2h时,两组细胞损伤均不再加重,但H/R+NaHS组各项指标仍然明显好于H/R组(P<0.05)。结论硫氢化钠后处理可以有效调控缺氧/复氧心肌细胞线粒体渗透性转换,阻止MPTP开放,抑制Δψm下降,从而减轻缺氧/复氧造成的心肌细胞损伤。     

Pim-3对抗心肌细胞缺氧/复氧损伤的研究

目的研究原癌基因Pim-3对心肌细胞急性缺氧/复氧(A/R)损伤的保护作用。方法采用原代培养新生大鼠的心肌细胞A/R损伤和缺氧预适应(APC)保护模型,将已经构建好的pEGFP-N2/Pim-3质粒导入原代培养的乳鼠心肌细胞中,实验结束后测定Pim-3mRNA及蛋白表达水平(RT-PCR、Western blot法)的改变,同时检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性、四唑盐(MTT)比色试验测定细胞存活率、TUNEL法检测细胞凋亡。结果RT-PCR和Western blot结果显示,Pim-3在正常组几乎不表达,A/R组表达明显升高,缺氧预适应(APC)+A/R组表达则进一步升高;转染pEGFP-N2/Pim-3质粒后24h,荧光倒置显微镜显示转染效率达30%;在A/R损伤后,Pim-3基因转染组较未转染组的心肌细胞LDH值明显降低,细胞存活率则明显升高,心肌细胞的凋亡指数明显下降。结论在细胞水平,Pim-3参与心肌APC保护作用,导入外源性的Pim-3基因能对抗急性A/R损伤。     

宫颈癌中Cx43的表达

目的检测Cx43在正常宫颈、宫颈上皮内瘤样病变以及宫颈癌中的表达情况,分析其与宫颈癌相关临床病理指标的联系,探讨其在宫颈癌发生、发展中的作用。方法采用免疫组织化学方法检测正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤样病变组织、宫颈癌组织中Cx43表达差异情况。结果Cx43在正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤样病变、宫颈癌组织中的阳性表达率分别为80.0%、52.2%、50.0%。三组比较,差异有统计学意义(P<0.01),而宫颈上皮内瘤样病变组与正常宫颈组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。宫颈癌中高中分化癌组与低分化癌组Cx43蛋白的阳性表达率分别为73.9%、7.7%,差异有统计学意义(P<0.01)。结论Cx43在宫颈癌的发生发展中起抑制作用。     

Cx43与Smad1在胃癌组织中的表达及相关性研究

目的检测Cx43与Smad1在胃癌中的表达,探讨其与胃癌发生发展的关系以及两者的相关性。方法采用免疫组织化学方法检测Cx43和Smad1在胃癌和正常胃组织中的表达,研究它们的表达与胃癌的关系以及二者的相关性。结果在胃癌中,Cx43的阳性表达率以及染色强度均随分化程度的降低而呈现出下降趋势（P〈0．05）。Smad1的阳性表达率随分化程度的降低而呈现出上升趋势（P〈0．05）。Cx43与Smad1在胃癌组织中的表达呈现出负相关性。结论Cx43在胃癌组织中的低表达与Smad1高表达显示二者存在负相关,可能对胃癌的发生发展起一定作用。     

卡维地洛与庚醇减少低氧再供氧心肌细胞凋亡及坏死的研究

目的 研究卡维地洛（carvedilol,CVD）、庚醇（heptanol ,HT）对不同时间低氧再供氧心肌细胞坏死、凋亡的影响。方法 利用锥虫蓝染色技术和流式细胞仪分别观察低氧后不同时间再供氧细胞坏死、凋亡情况,观察CVD、HT对其的影响。结果 对照组（未给药）正常和低氧30 min时凋亡指数差异无显著性（P>0.05）,再供氧1 h凋亡指数为27.4%,与正常时比较差异有极显著性（P<0.01）。坏死的心肌细胞在再供氧2 h后差异有极显著性（P<0.01）。运用CVD、HT后凋亡指数在再灌注1 h时分别较对照组减少了55.11%和21.53%。结论 HT和CVD通过不同的作用可以减少低氧再供氧心肌细胞的死亡和凋亡.     

差异表达基因整合素a2白细胞介素-8Cx43在早期宫颈鳞癌中的表达及意义

目的 研究早期宫颈鳞癌差异表达基因整合素d2、白细胞介素-8（IL-8）和间隙连接蛋白43（Cx43）在宫颈鳞癌中的表达及其与淋巴结转移的关系，探讨其在宫颈鳞癌淋巴结转移中的作用机制。方法 采用反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）、组织芯片进行的免疫组织化学方法检测早期宫颈鳞癌组织中整合素d2、IL-8和Cx43mRNA及蛋白的表达。结果有淋巴结转移的早期宫颈鳞癌组织中整合素d2和IL-8的表达显著高于非转移组织（P〈0．05），CX43的表达则相反（P〈0．01）。且整合素d2和IL-8的表达呈正相关（r=0．241，P〈0．05）。结论整合素d2、IL-8和CX43与早期宫颈鳞癌的淋巴结转移密切相关，在一定程度上发挥了促进和抑制早期宫颈鳞癌淋巴结转移的作用。     

差异表达基因整合素α_2白细胞介素-8 Cx43在早期宫颈鳞癌中的表达及意义

目的研究早期宫颈鳞癌差异表达基因整合素α2、白细胞介素-8(IL-8)和间隙连接蛋白-43(Cx43)在宫颈鳞癌中的表达及其与淋巴结转移的关系,探讨其在宫颈鳞癌淋巴结转移中的作用机制。方法采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、组织芯片进行的免疫组织化学方法检测早期宫颈鳞癌组织中整合素α2、IL-8和Cx43mRNA及蛋白的表达。结果有淋巴结转移的早期宫颈鳞癌组织中整合素α2和IL-8的表达显著高于非转移组织(P<0.05),CX43的表达则相反(P<0.01)。且整合素α2和IL-8的表达呈正相关(r=0.241,P<0.05)。结论整合素α2、IL-8和CX43与早期宫颈鳞癌的淋巴结转移密切相关,在一定程度上发挥了促进和抑制早期宫颈鳞癌淋巴结转移的作用。     

丙泊酚对失血性休克致兔心肌损伤Cx43表达的影响

目的 探讨丙泊酚对失血性休克兔心肌损伤缝隙连接蛋白43(Cx43)表达的影响.方法 将雄性新西兰白兔24只采用随机数字表法分为假手术(S)组、失血性休克(HS)组及丙泊酚处理(P)组.采用Wigger's改良法制作失血性休克动物模型;P组于放血前10 min注射丙泊酚5 mg/kg,并以20 mg/(kg·h)的速度持续输注至休克后120 min;S组及HS组输注等容量生理盐水.于放血前即刻(T0)、休克30 min(T1)、60 min(T2)、90 min(T3)和120 min(T4)采集动脉血.采用ELISA法测定兔血清肌钙蛋白I(cTnI)浓度;采用自动血气分析仪检测动脉血乳酸水平;采用HE染色观察心肌病理损伤;采用Western blot法检测兔心肌Cx43表达.结果 T1~T4时HS组与P组血清cTnI浓度和动脉血乳酸水平高于S组,且P组低于HS组(P<0.05);T1~T4时HS组和P组血清cTnI浓度和动脉血乳酸水平高于T0时,且逐渐升高(P<0.05).S组心肌细胞形态正常,肌纤维排列整齐,细胞核均匀一致;HS组心肌细胞肿胀,纤维排列不规则或断裂,间质内有大量炎性细胞浸润,胞核崩解;P组心肌细胞轻度变性,少量心肌纤维断裂,细胞间隙略增宽.HS组和P组心肌Cx43含量低于S组,但P组高于HS组(P<0.05).结论 丙泊酚可减轻失血性休克心肌损伤,其机制可能与上调Cx43表达有关.     

Effects of H2O2 Pretreatment on Rat Myocardial Hypoxia/Reoxygenation Injury

目的:探讨H2O2预处理对大鼠心肌细胞缺氧/复氧引起细胞凋亡的影响.方法:大鼠心肌细胞H9C2经体外培养扩增,使用对数生长期细胞做实验处理.分别用浓度为0、5、10、20、50、100 μmol/L的H2O2处理H9C2细胞,以确定最佳H2O2预处理浓度.观察低浓度H2O2预处理对缺氧/复氧所引起细胞损伤的影响.细胞分为对照组、缺氧/复氧组、H2O2预处理组和Janus激酶2抑制剂(AG490) +H2O2组.AnnexinV-FITC/PI双染法及FCM检测细胞凋亡;MTT法检测H9C2细胞增殖活性;Western Blotting法检测信号转导子和转录激活子3(STAT3)磷酸化水平.结果:20 μmol/L H2O2组的STAT3磷酸化水平显著高于其他各浓度组,心肌细胞凋亡率显著低于50及100 μmol/L浓度组,心肌细胞活力高于50及100 μmol/L浓度组,而与10μmol/L组差异无统计学意义.缺氧损伤后给予AG490处理可使H2O2预处理保护作用消失.结论:20μmol/L H2O2预处理对心肌细胞缺氧/复氧损伤具有适应性保护作用,其可能是通过激活JAK2-STAT3通路发挥抑制细胞凋亡作用的.     

1-磷酸鞘氨醇后适应对H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的 研究1-磷酸鞘氨醇（S1P）后适应对H9c2心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法 将培养的H9c2心肌细胞随机分为5组,即①正常（Con）组;②缺氧/复氧（H/R）组;③S1P低浓度（L）组;④S1P中浓度（M）组;⑤S1P高浓度（H）组。测定各组H9c2心肌细胞的存活率; 收集细胞培养液测定超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量;流式细胞仪检测心肌细胞凋亡百分率;Fura 2-AM标记细胞内游离钙离子,检测荧光强度以反映细胞内游离钙离子浓度的变化;Western Blot法测定保护性蛋白热休克蛋白70 （HSP70）的表达情况。结果 对于H/R 损伤的H9c2心肌细胞,S1P能够提高细胞的存活率,降低细胞内MDA含量及细胞内钙离子浓度,提高细胞内SOD活力,增强抗凋亡蛋白HSP70的表达,且呈一定的浓度依赖性。结论 S1P可以减轻心肌细胞氧化应激损伤,改善心肌细胞活力并减少凋亡。S1P对心肌细胞的保护作用可能是通过减少Ca2 超负荷,增加抗凋亡蛋白HSP70表达来实现的。