血瘀证与NF-κB信号通路相关基因表达相关性的PCR芯片技术分析

目的 :探讨血瘀证与NF-κB信号通路相关基因表达的相关性。方法用高血压病血瘀证患者和非高血压病血瘀证患者血清作用于体外培养的人脐静脉血管内皮细胞,应用NF-κB信号通路PCR芯片技术,观察内皮细胞NF-κB信号通路相关基因表达的变化。结果在84个NF-κB信号通路相关基因中,高血压病血瘀证组与健康对照组比较,共检测到73个差异基因,其中,54个基因表达上调,19个基因表达下调。有6个上调基因和1个下调基因显示统计学差异(P0.05),上调基因包括EGR1、FOS、IKBKG、TLR9、TNFRSF10A、TRADD,下调基因为BCL2A1。非高血压病血瘀证组与健康对照组比较,共检测到71个差异基因,其中,49个基因表达上调,22个基因表达下调。有5个上调基因显示统计学差异(P0.05),包括IKBKG、NFKBIA、REL、TLR9、TRADD。可以推测:血瘀证的差异基因为IKBKG、TLR9、TRADD,均为上调基因。结论血瘀证与NF-B信号通路密切相关,其形成机制与炎症、免疫、凋亡等病理生理过程有关。     

淫羊藿总黄酮经由核因子-κB相关信号转导途径调控免疫衰老机制

目的探讨淫羊藿总黄酮（EF）经由核因子-κB（NF-κB）家族相关信号转导途径调控免疫衰老的有效机制.方法（1）采用流式细胞仪监测老龄大鼠脾淋巴细胞凋亡率.（2）采用NF-κB信号通路基因芯片（96个相关基因）,分别检测各组大鼠NF-κB相关信号差异表达,并提取其中有显著意义的主要分子,加以分析.结果（1）老年对照组大鼠普遍存在淋巴细胞过度凋亡现象,但EF组及联合组均可显著抑制这种过度凋亡状态.（2）EF干预后的基因芯片检测结果中,不同程度上调的有73个基因（其中NF-κB/Rel/I B家族成员10个）,这些基因群覆盖了NIK/IKK/I B/Rel/NF-κB信号转导途径成员、NF-κB调控靶基因、跨膜受体、转录因子及其相关的受体蛋白等.通过NF-κB阻断剂二硫代氨基甲酸吡咯烷（PDTC）对NF-κB进行阻断,未发现NF-κB家族成员上调表达,其信号转导途径相关分子亦明显减少;而联合组NF-κB家族仍可不同程度活化相关转导途径.（3）EF和联合组对NF-κB家族的影响有明显的共同特点,即EF对于NF-κB1、NF-κB2、RelB、I Bε的显著上调和对NIK/IKK/I B/Rel/NF-κB信号转导途径的激活.结论EF可抑制老年大鼠脾淋巴细胞过度凋亡、激活老年大鼠Rel/NF-κB/I B/IKK及其相关信号转导途径,最终经由I Bε、I Bα的调节,使NF-κB在适度范围上调,这可能是EF重建T淋巴细胞凋亡平衡免疫稳态、延缓免疫衰老的重要机制.     

中药免疫2号方对艾滋病患者免疫重建的研究

目的:通过中药免疫2号方联合HAART干预艾滋病HAART后免疫重建不全患者,观察中药复方对免疫重建有效率、CD4细胞及亚群的影响,评价免疫重建效果.方法:在全国4个中心进行多中心随机盲法研究,选择HAART治疗1年以上,免疫重建不全的患者264例,随机分为治疗组(131例)和对照组(133例),分别采用免疫2号方(每天2次,每次1包,每包6.2g)联合HAART治疗(AZT 300 mg +3TC 150 mg+ NVP 200 mg,bid)和安慰剂(每天2次,每次1包,每包6.2g)联合HAART治疗(AZT 300 mg+ 3TC 150 mg+ NVP 200 mg,bid).观察周期6个月,观察2组患者治疗前后CD4,CD8,CD45RA,CD45RO细胞绝对计数,CD4CD28,CD8CD28,CD8CD38,HLA-DR,CD4CD25的相对计数,评价其对免疫功能的影响和免疫重建有效率.结果:中药干预6个月后,治疗组免疫重建有效率达34.48％,对照组有效率21.37％,且组间比较差异有统计学意义(P =0.021 7).CD4,CD45RA,CD45RO细胞绝对计数治疗组与对照组比较均能显著提高(P＜0.05);CD8,CD3,CD4CD28绝对计数比较组间无显著差异;CD8CD28相对计数治疗组比对照组显著提高(P＜0.05);CD4CD28,CD8CD38,CD8DR,CD4CD25相对计数组间比较无显著性差异.结论:免疫2号方干预HAART后免疫重建不全艾滋病患者治疗6月后,能够提高患者CD4,CD45RA,CD45RO细胞绝对计数,提高免疫重建有效率,促进免疫重建.     

补肾健脾活血方对骨质疏松症信号转导基因表达的调控作用

目的:观察补肾健脾活血方对骨质疏松症信号转导基因的影响,探讨补肾健睥活血方抗骨质疏松的作用机制.方法:应用基因芯片技术检测补肾健脾活血方治疗骨质疏松症前后外周静脉血信号传导基因的表达,通过美国国立医学生物技术信息中心对差异表达基因进行基因信息学分析,运用Pathway Studio软件进行信号转导信息学分析.结果:补肾健脾活血方调控18个表达差异显著的基因介导的20条信号转导通路,其中11个基因上调,7个基因下调,有8个基因共表达调控大于、等于4套信号转导通路.结论:补肾健脾活血方抗骨质疏松的作用效应是多信号转导基因共同调控的结果.补肾健脾活血方能上调成骨细胞抗凋亡和增殖基因,上调成骨基因和胶原基因,抑制蛋白酶基因,抑制破骨因子,抑制破骨细胞增殖基因,抑制炎性因子,重塑骨重建基因表达良性平衡,并能保护NEI网络功能,增强机体免疫功能,延缓衰老.     

豨莶草醇提物调控TLRs/NF-κB通路及NLRP3炎症小体干预痛风性关节炎的机制研究

目的探讨豨莶草醇提物通过Toll样受体(TLRs)/核因子κB(NF-κB)信号通路及NOD样受体蛋白3(NLRP3)干预痛风性关节炎(GA)的作用机制。方法采用脂多糖(LPS)联合尿酸钠结晶(MSU)刺激急性单核细胞白血病细胞(THP-1)源性巨噬细胞,建立GA炎症细胞模型;以豨莶草醇提物300、200、100μg·mL^-1不同浓度进行干预。采用CCK-8法检测细胞活力;ELISA法检测细胞上清中白细胞介素-1β(IL-1β)的水平;qRT-PCR法检测TLRs/NF-κB信号通路相关基因(TLR2、TLR4、MYD88、IRAK-1、TRAF-6、TAK-1、NF-κB、IL-1β)及NLRP3 m RNA的表达;Western Blot法检测NF-κB、NLRP3、IL-1β蛋白的表达。结果与对照组比较,豨莶草醇提物300、200、100μg·mL^-1浓度对THP-1巨噬细胞活力均无明显影响(P>0.05);模型组的IL-1β水平明显升高(P<0.05),TLRs/NF-κB信号通路相关基因及NLRP3 mRNA表达水平均明显上调(P<0.05),NF-κB、NLRP3、IL-1β蛋白表达水平明显上调(P<0.05)。与模型组比较,豨莶草醇提物300、200、100μg·mL^-1浓度组的细胞IL-1β水平明显降低(P<0.05),TLRs/NF-κB信号通路相关基因及NLRP3 mRNA表达水平均不同程度下调(P<0.05),NF-κB、NLRP3及IL-1β蛋白表达水平亦不同程度下调(P<0.05)。结论豨莶草醇提物可能通过调控TLRs/NF-κB信号通路及抑制NLRP3炎症小体活化,减少炎症因子的产生与释放,进而减轻痛风性炎症反应。     

温阳补肾方对哮喘小鼠骨髓树突细胞TLR信号的调节作用

目的通过观察哮喘小鼠骨髓树突细胞的表达,以及Toll样受体(TLR2和TLR4)在骨髓树突细胞中的表达,探讨温阳补肾方对TLR信号介导的骨髓树突细胞在哮喘发病机制中的作用。方法 50只BALB/c小鼠随机分为正常对照组、模型组、中药组、西药组、中西医结合组,每组10只。各组进行相应干预。小鼠肺组织切片进行苏木素-伊红(HE)染色,观察形态结构及炎症浸润情况;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测肺泡灌洗液中的IL-4、IL-5、IFN-γ的含量;分离培养各组小鼠的骨髓树突细胞,在倒置相差显微镜和扫描电镜下观察树突细胞的形态变化;RT-PCR检测骨髓树突细胞中TLR2和TLR4 mRNA的表达。结果肺组织病理可见模型组小鼠气道黏膜层增厚,周围有明显的炎症细胞浸润,各治疗组炎症均有不同程度的减轻。与正常对照组比较,模型组小鼠肺泡灌洗液中IL-4表达水平上调,INF-γ水平下调,差异有统计学意义(P0.05)。与模型组比较,中药组、西药组、中西医结合组IL-4表达均下调,差异有统计学意义(P0.05)。与模型组比较,中药组和中西医结合组均可上调INF-γ水平,差异有统计学意义(P0.05)。模型组骨髓树突细胞中TLR2、TLR4 mRNA的表达明显高于正常对照组(P0.05),各治疗组均可下调骨髓树突细胞中TLR2、TLR4mRNA的表达,与模型组比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论温阳补肾方可以降低哮喘小鼠的气道阻力和减轻气道炎性反应,这可能是温肾方通过介导BMDC-TLR2/TLR4通路的信号转导,从而显著上调Th1型细胞因子分泌,下调Th2型细胞因子表达,进而调节Th1/Th2的免疫平衡。     

中药联合高效抗逆转录病毒疗法对艾滋病免疫重建不全患者IL-2及IL-10mRNA水平的影响

目的:观察中药免疫2号颗粒联合HAART疗法对44例艾滋病免疫重建不全患者IL-2及IL-10 mRNA水平的影响,初步探索该疗法对机体免疫调节的作用机制。方法:随机双盲安慰剂对照研究,治疗组23例采用HAART+免疫2号颗粒,对照组21例采用HAART+免疫2号颗粒模拟剂,观察时间1年。观察指标包括CD4~+T淋巴细胞计数、IL-2mRNA、IL-10mRNA。结果:试验组CD4+T淋巴细胞计数上升显著优于对照组,组间比较差异有统计学意义;试验组IL-2上升,ΔCt增加值试验组上升幅度明显优于对照组,2组疗后-疗前差值比较有统计学意义;试验组和对照组IL-10ΔCt值均上升,2组疗后-疗前差值比较无统计学意义。结论:中药免疫2号颗粒联合HAART治疗可较对照组明显上调艾滋病免疫重建不全患者IL-2的表达,还需扩大样本量进一步验证。     

右归丸对肾阳虚证患者TLR4/MyD88/NF-κB信号通路表达的影响

目的探讨右归丸治疗肾阳虚证的免疫调控机制。方法筛选9例肾阳虚证患者,均给予右归丸口服,连服1个月。分别于治疗前后采集患者外周静脉血,制备外周血单个核细胞(PBMC),提取RNA,按照实时定量PCR(q PCR)实验流程,检测TLR4、My D88及NF-κBmRNA表达情况,并进行比较分析。结果治疗后,患者TLR4mRNA表达水平明显下调(P0.05),My D88、NF-κB mRNA表达水平均明显上调(P均0.05)。结论右归丸可以调节TLR4/My D88/NF-κB信号通路的表达,这可能是右归丸良性调节肾阳虚证免疫功能的分子机制之一。     

银翘柴桂Ⅱ号方抗甲型流感病毒的免疫调节机制研究

目的观察银翘柴桂Ⅱ号方对流感病毒FM1感染小鼠的死亡保护作用,探讨其对TLR7/My D88/NF-κB信号通路的影响。方法制备流感病毒性肺炎小鼠模型,观察银翘柴桂Ⅱ号方对模型小鼠的死亡保护作用;ELISA法测定小鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平;荧光定量PCR和WB法检测小鼠肺组织TLR7、My D88、NF-κB m RNA和蛋白水平的表达量。结果银翘柴桂Ⅱ号方低、中、高剂量组均能提高模型小鼠的死亡保护率,降低模型小鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6水平,下调模型小鼠肺组织中TLR7、My D88、NF-κB m RNA和蛋白水平的表达(P0.05,P0.01)。结论银翘柴桂Ⅱ号方可以提高流感病毒性肺炎小鼠的死亡保护率,表现出抗流感病毒作用,该作用通过抑制由病毒激活的TLR7/My D88/NF-κB信号通路实现。     

肺康颗粒通过TLR4/ NF-κB信号通路干预COPD大鼠炎症的相关机制

目的观察肺康颗粒对Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响,探讨其干预慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠炎症的机制。方法将60只SD大鼠随机分成6组:正常组,模型组,肺康颗粒低、中、高剂量组(10.11,20.22,40.44 g·kg~(-1),以生药量计),地塞米松组(1 mg·kg~(-1))。采用持续熏烟(20周)联合气管滴注脂多糖(LPS)法建立大鼠COPD模型。第5周开始,灌胃给予肺康颗粒进行干预,连续给药16周。采用苏木素-伊红(HE)染色观察COPD模型大鼠肺脏组织病理变化;检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞总数及其种类;酶联免疫吸附法(ELISA)测定大鼠BALF中炎症细胞因子IL-1β、TNF-α、IL-6及IL-17含量;qRT-PCR法检测肺组织中TNF-α、IL-6、TLR4 mRNA表达;Western Blot法检测肺组织细胞胞浆蛋白TLR4、p-IκB、IκB及胞核蛋白NF-κB p65的蛋白表达。结果与模型组比较,肺康颗粒各剂量组治疗后肺泡结构均有所恢复;肺康颗粒中、高剂量组的IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-17含量明显降低(P0.01);肺康颗粒各剂量组的白细胞总数明显降低(P0.01),肺康颗粒中、高剂量组的中性粒细胞及高剂量组的淋巴细胞亦明显减少(P0.05,P0.01);肺康颗粒中、高剂量组肺组织中TNF-α、IL-6 mRNA的表达量均明显下调(P0.05,P0.01),而TLR4 mRNA表达则明显上调(P0.01);肺康颗粒各剂量组的TLR4、IκB蛋白表达明显上调(P0.05,P0.01),胞核蛋白p65的表达明显下调(P0.01),肺康颗粒高剂量组的p-IκB蛋白表达亦显著下调(P0.01)。结论肺康颗粒可能通过TLR4/NF-κB信号转导通路干预炎症基因的表达,减轻COPD大鼠的炎症反应。     

艾滋病免疫重建相关影响因素探讨

艾滋病患者在接受高效抗逆转录病毒疗法后,部分患者可以产生免疫重建现象,而影响免疫重建的因素极其复杂,人口学因素、人类免疫缺陷病毒（HIV）病情阶段、治疗类型、合并感染、基线CD+4T细胞水平、异常免疫激活、相关免疫表型及病原学因素等原因都可能对免疫重建造成影响,中医药对促进免疫重建具有一定作用。本文对以上因素的临床证据做简要归纳,为中医药介入艾滋病免疫重建的研究提供参考。     

艾滋病免疫重建的中医药干预研究

免疫重建是通过各种治疗方法,实现机体淋巴细胞在表型及功能上均恢复正常或接近正常水平。中医药在防治艾滋病,干预艾滋病的免疫重建中发挥着重要的作用。简要介绍了中医药干预艾滋病免疫重建的理论基础、中医药辨证治疗干预艾滋病免疫重建的方法及中医干预艾滋病免疫重建的药物研究概况。     

Icariin induces the expression of toll-like receptor 9 in ana-1 murine macrophages

Icariin is the major pharmacologically active compound of Herba epimedii which has been used as a tonic, aphrodisiac and an antirheumatic in traditional Chinese medicine. This study analysed the effect of icariin on the expression of Toll‐like receptor 9 (TLR9) which plays an important role in regulation of the innate immune response. Stimulation of Ana‐1 murine macrophages with icariin induced a significant dose‐dependent expression of TLR9, and its mRNA expression which increased from 3 h post‐treatment was approximately five‐fold that of DMSO‐treated cells. Several molecules, such as myeloid differentiation factor 88, tumor necrosis factor‐α and interleukin 6, which are involved in the TLR9 downstream signaling pathway, were also significantly up‐regulated in response to icariin stimulation. Our findings demonstrated that icariin is able to induce the expression of TLR9. Copyright © 2011 John Wiley & Sons, Ltd.     

Antiobesity effect of baicalin involves the modulations of proadipogenic and antiadipogenic regulators of the adipogenesis pathway

In this study, the antiobesity effects of baicalin, 5,6‐dihydroxyflavone‐7‐glucuronic acid, were characterized using an in vitro system of adipogenesis, i.e. fat cell formation. Baicalin‐treatment of 3T3‐L1 preadipocytes was shown to inhibit triglyceride accumulation and lipid droplet formation during induced adipogenesis. Microarray analyses showed that baicalin modulated the expression of genes located in pathways such as adipogenesis, cholesterol biosynthesis, focal adhesion and others. In the adipogenesis pathway, treatment with baicalin significantly down‐regulated terminal differentiation markers of adipocytes including fatty acid binding protein 4. The effects of baicalin on the core part of the adipogenesis pathway, however, were paradoxical; the expression levels of CCAAT/enhancer binding protein (C/EBP)β and C/EBPδ were up‐regulated, while the expression levels of the peroxisome proliferator‐activated receptor (PPAR)γ and C/EBPα were down‐regulated. The antiadipogenic mechanisms of baicalin can be explained by its effects on the upstream part of adipogenesis pathway; baicalin not only up‐regulates the antiadipogenic regulators, C/EBPγ, C/EBP homologous protein and Kruppel‐like factor (KLF)2, but also down‐regulates the proadipogenic regulator, KLF15. The overall effects of baicalin on these upstream regulators of adipogenesis were antiadipogenic, resulting in the down‐regulation of downstream genes and the inhibition of cellular fat accumulation. Copyright © 2009 John Wiley & Sons, Ltd.     

艾滋病免疫重建干预方法的研究进展

目前艾滋病患者的免疫重建治疗已成为抗病毒治疗之外的重要策略,是当今全球艾滋病领域研究的热点之一.该文综述了艾滋病免疫重建的干预方法,但因这些干预方法的临床疗效尚需考证和观察,毒副作用等亦需要寻找更好的解决办法,临床推广还有待时日.     

免疫2号方对艾滋病免疫重建不全患者临床症状、体征的影响

目的观察中药免疫2号方对艾滋病高效逆转录抗病毒治疗(HAART)后免疫重建不全患者临床症状、体征的影响。方法选择艾滋病HAART治疗1年以上,免疫重建不全患者253例,随机分为对照组(126例)和治疗组(127例),最终完成随访233例,其中治疗组116例,对照组117例。对照组采用安慰剂(每次6.2g,每天2次)联合HAART治疗[齐多夫定(AZT)300mg+拉米夫定(3TC)150mg+奈韦拉平(NVP)200mg,每日2次];治疗组在HAART治疗基础上+免疫2号方(每次6.2g,每日2次)。6个月后比较两组患者治疗前后CD4+细胞绝对计数、免疫重建有效率、症状体征积分及症状体征改善率的变化。结果治疗组免疫重建有效率为34.48%,对照组为21.37%,治疗组明显优于对照组(P<0.05);两组治疗后3个月、6个月CD4+细胞绝对计数均较治疗前明显上升(P<0.05或P<0.01);与对照组同时间点比较,治疗后6个月治疗组CD4+绝对计数上升幅度明显大于对照组(P<0.05);治疗6个月后,两组各项症状、体征均有所改善甚至消失,治疗组在改善患者乏力、肌肉关节痛、皮肤瘙痒、气短等症状时疗效明显优于对照组(P<0.05)。结论免疫2号方能够提高患者CD4+细胞绝对计数,提高免疫重建有效率,改善部分临床症状、体征。     

应用基因表达谱芯片技术筛选老龄肾阳虚证特征功能类基因

目的:利用基因芯片技术探讨肾阳虚证发生的特征功能基因集。方法:在老龄肾阳虚证流行病学调查过程中,筛选出典型肾阳虚证患者2例和正常对照2例,采用美国Affymetrix公司的HG-u133Plus2.0基因表达谱芯片,按一步法抽提总RNA,分离纯化两种样品的mRNA,经逆转录合成掺入生物素标记的cDNA合成探针,与芯片杂交和严格洗片后,用荧光扫描仪扫描芯片荧光信号图像,获得肾阳虚患者差异表达基因。结果:两例患者和正常人比较获得680和503条差异表达基因,通过g:GOSt基因芯片数据分析平台进行基因功能分类,发现免疫反应功能类基因出现显著性。结论:肾阳虚证的发生与免疫反应功能类基因的异常表达密切相关。     

轮状病毒与TLRs的关系及其中医药研究进展

轮状病毒(Rotavirus,RV)感染人体,主要定植于人类小肠上皮细胞,造成小肠上皮细胞损伤,诱发腹泻、发热等症状,是引发婴幼儿腹泻的最常见原因之一。Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)作为一类在宿主免疫系统中具有重要作用的模式识别受体,在病毒感染人体后宿主免疫过程中扮演着极其重要的角色。不同的病毒感染人体后,各类病原体通过TLRs启动宿主免疫应答反应,诱导各类细胞因子的释放,激发人体出现发热、咳嗽、腹泻等一系列炎症反应,进一步可能导致更严重的不良后果。研究发现,针对不同病原体研发的各种有效治疗药物抗炎、抗病毒的作用机制可能与干预TLRs信号通路的转导,调节机体免疫反应密切相关。大量研究表明,轮状病毒感染可通过影响Toll样受体3(Toll-like receptor 3,TLR3),Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)信号转导通路上相关蛋白、基因的表达,刺激炎性细胞因子释放,诱导炎症反应,而导致发病。部分研究也从TLRs着手研究药物治疗轮状病毒性腹泻的作用机制,但是中医药与轮状病毒性腹泻的相关临床及实验研究较少涉及TLRs信号通路。因此,该文将从病毒感染与TLRs信号通路,RV感染与TLRs信号通路,轮状病毒性腹泻的相关中医药研究三方面阐述TLRs信号通路与不同病毒感染,尤其是与轮状病毒感染的关系,并对中医药治疗轮状病毒性腹泻相关实验研究进行综述,以期指导基于TLR3,TLR4信号通路的中医药治疗轮状病毒性腹泻的相关临床及实验研究。     

中药复方促进艾滋病免疫重建研究综述

该文综述了近20年来中药复方在促进艾滋病免疫重建方面的相关研究报道,发现中药复方对艾滋病免疫重建疗效确切.要充分发挥中药复方在提高机体免疫力方面的独特优势,从而改善患者症状,提高生存质量,实现艾滋病临床治疗的最优化.