肝纤维化大鼠转化生长因子β1／Smad蛋白的动态表达及意义

目的探讨转化生长因子TGF—β1／Smad信号通路在实验性肝纤维化发生中的作用。方法50只健康雄性SD大鼠分为2组：正常组和模型组,模型组大鼠利用40％CCl4油剂诱导形成肝纤维化模型,于6周及9周观测肝标本的病理,免疫组化法检测肝组织TGF—β1／Smad蛋白表达。结果①肝组织病理：与正常组比较,模型组大鼠肝组织都有不同程度的炎症和纤维化产生。模型组纤维化程度较正常对照组明显,差异有统计学意义（P〈0．05）;②TGF—β1／Smad基因蛋白：免疫组织化学检测显示,与正常对照组相比,模型组大鼠肝脏中TGF—β1、转化生长因子βI型受体（TβR—I）、Smad2、3、Smad,蛋白表达均显著增强（P〈0．01）,模型组大鼠肝脏TGF—β1、TβR-I、Smad。和Smad,之间存在正相关关系（P〈0．05或0．01）;模型组大鼠肝脏纤维化分级与TGF—β1、TβR—I、Smad2/3和Smad,之间存在正相关关系（P〈0．05或0．01）。结论肝组织TGF—β1／Smad蛋白表达水平与肝纤维化程度相关,TGF-β1／Smad信号的增强可能促进了肝纤维化的进展。     

肝纤维化大鼠转化生长因子β1/Smad蛋白的动态表达及意义

目的 探讨转化生长因子TGF-β1/Smad信号通路在实验性肝纤维化发生中的作用.方法 50只健康雄性SD大鼠分为2组:正常组和模型组,模型组大鼠利用40％ CCl4油剂诱导形成肝纤维化模型,于6周及9周观测肝标本的病理,免疫组化法检测肝组织TGF-β1/Smad蛋白表达.结果 ①肝组织病理:与正常组比较,模型组大鼠肝组织都有不同程度的炎症和纤维化产生.模型组纤维化程度较正常对照组明显,差异有统计学意义(P＜0.05);②TGF-β1/Smad基因蛋白:免疫组织化学检测显示,与正常对照组相比,模型组大鼠肝脏中TGF-β1、转化生长因子βⅠ型受体(TβR-Ⅰ)、Smad2/3、Smad7蛋白表达均显著增强(P＜0.01),模型组大鼠肝脏TGF-β1、TβR-Ⅰ、Smad2/3和Smad7之间存在正相关关系(P ＜0.05或0.01);模型组大鼠肝脏纤维化分级与TGF-β1、TβR-Ⅰ、Smad2/3和Smad7之间存在正相关关系(P＜0.05或0.01).结论 肝组织TGF-β1/Smad蛋白表达水平与肝纤维化程度相关,TGF-β1/Smad信号的增强可能促进了肝纤维化的进展.     

转化生长因子β1及其受体和Smad2、Smad4蛋白在横纹肌肉瘤中的表达

转化生长因子—β1(transforming growth factor—β1，YGFβ1)是一种对各种细胞具有刺激或抑制作用的多功能细胞生长因子，其信号通路中某一成分缺失，抗增殖作用丧失而可诱发上皮性肿瘤。而在横纹肌肉瘤中，TGFβ1及其受体(TGFBR)的过表达或异常表达可能促进肿瘤的发展和演进。尚不清TGFβ1受体的下游分子Smads在横纹肌肉     

干扰素γ对实验性大鼠肺纤维化、肺组织干扰素γ和转化生长因子β表达的影响

目的：研究干扰素γ（IFN-γ）对博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化实验模型肺泡炎和肺纤维化的影响,并探讨其对肺纤维化影响的可能机制。方法：60只SD大鼠随机分为正常对照组（N组）、模型对照组（M组）和干扰素γ组（R组）,每组各20只大鼠。于造模后3、7、14、28天分批处死动物,留取肺组织,观察肺泡炎和肺纤维化的程度,测定肺组织中的羟脯氨酸含量、IFN-γmRNA、转化生长因子β（TGF-β）mRNA的表达。结果：M组、R组大鼠肺泡炎3、7、14、28天均较N组严重,7天时最重,R组14天时肺泡炎显著高于M组;M组、R组肺纤维化评分及肺羟脯氨酸含量14、28天均高于N组,于28天最重;R组肺组织IFN-γmRNA表达3、7、14、28天均显著高于M组;R组肺组织中TGF-βmRNA表达在3天显著高于M组（P〈0.05）。结论：在博莱霉素诱导大鼠肺纤维化早期给予干扰素γ并不能减轻肺部炎症和肺纤维化,可能与其促进肺组织IFN-γ、TGF-β基因表达有关。     

上调表达Smad7显著抑制TGF-β介导的大鼠腹膜间皮细胞Smad2的表达

目的： 探讨外源性转入并上调表达抑制性信号蛋白Smad7对TGF-β₁作用下大鼠腹膜间皮细胞Smad2表达的影响。 方法： 通过脂质体介导的方法，将表达Smad7的重组质粒（PCDNA3-Smad7）转染培养的大鼠腹膜间皮细胞，分别培养于不同浓度TGF-β₁培养液(0、1.25、2.5和10 μg/L)，用RT-PCR及Western blotting的方法检测不同时间（0、5、15、30、60和120 min）Smad2、Smad7表达的水平。 结果： 正常间皮细胞Smad2 mRNA和蛋白在TGF-β₁刺激后5 min开始表达，呈时间依赖性，在30 min达到高峰，而后逐渐减弱；Smad7 mRNA和蛋白也在TGF-β₁刺激后5 min可见表达，但此后逐渐减弱，30 min达到最低，60 min又开始逐渐增强。Smad2 和Smad7 mRNA和蛋白，随TGF-β₁浓度的增高而表达增强。转染后大鼠腹膜间皮细胞可见Smad7 mRNA和蛋白表达显著上调，并可持续高表达。转染后的腹膜间皮细胞在TGF-β₁刺激下，Smad2 mRNA及蛋白的表达均低下，刺激0、5、15、30、60 和120 min后Smad2 mRNA表达分别低33%、56%、67%、71%、63%和57%（P<0.05）。Smad2蛋白表达分别低78%、89%、89%、88%和76%（P<0.05）。 结论： 上调表达抑制性信号蛋白Smad7可显著抑制腹膜间皮细胞中受体调控信号蛋白Smad2的表达和活性，提示Smad7可能对TGF-β₁起反向调控作用。     

TGF-β/Smad信号通路在肝纤维化中的研究进展

转化生长因子β (Transforming Growth Factor-β,TGF-β) 信号通路在调节细胞进程中起着至关重要的作用。就肝脏而言,TGF-β信号通路贯穿肝脏疾病始终,即从最初的肝细胞损伤到炎症、纤维化、肝硬化直至癌症发生。TGF-β导致肝星状细胞活化为成纤维细胞,并促使大量肝细胞死亡,促进了肝纤维化向肝硬化发展,而过度激活的TGF-β信号与肝癌发展密切相关。在本综述中,作者将阐述TGF-β/Smad信号通路在肝纤维化进程中的作用机制,以及目前在实验和临床诊治方面通过TGF-β信号通路靶向治疗肝脏疾病取得的新进展。以期为研究肝纤维化提供新的论据。     

Smad7过度表达抑制3T3细胞增殖和TGF-β1基因表达

研究Smad7过度表达对TGF β1基因表达的调控和对 3T3细胞增殖的影响。实验将Smad7质粒 ,通过脂质体介导转染NIH3T3细胞 ,应用RT PCR方法鉴定转染结果和检测TGF β1mRNA的表达 ,以及用免疫细胞化学检测TGF β1蛋白的表达情况 ,并观察基因转染对细胞增殖的影响。结果显示转染Smad7后 ,NIH3T3细胞中TGF β1mRNA的表达显著减少 (P <0 0 5 ) ,TGF β1蛋白的表达下降 ,细胞增殖明显减缓 (P <0 0 5 )。提示Smad7过度表达能够抑制 3T3细胞的增殖和TGF β1基因的表达 ,可以通过阻断TGF β细胞内信号传导来调控TGF β1的生物学行为。     

石蜡包埋人胰腺癌组织中Smad4蛋白和转化生长因子β_1及其Ⅱ型受体的表达

目的　探讨转化生长因子 (TGF) β通路中Smad4蛋白、TGFβ1和转化生长因子 βⅡ型受体 (TβRⅡ )的关系及它们在胰腺癌中的可能作用机制。 方法　用EnVision免疫组织化学技术检测5 6份石蜡包埋人胰腺癌标本Smad4蛋白、TGFβ1和TβRⅡ蛋白表达的情况。 结果　 5 6份胰腺癌组织Smad4、TGFβ1和TβRⅡ阳性率分别为 5 8 93%(33)、6 6 0 7%(37)和 6 0 71%(34 ) ,对应正常胰腺组织阳性率分别为 89 2 9%(5 0 )、2 5 0 0 %(14)和 2 5 0 0 %(14)。TGFβ1的表达与临床分期、肿瘤的有无转移相关 (P <0 0 5 )。TGFβ1与TβRⅡ之间也有相关关系 (P <0 0 5 )。 结论　胰腺癌组织中Smad4表达降低 ,TGFβ1与TβRⅡ则呈过表达。TGFβ1与TβRⅡ对胰腺癌的发生可能有协同作用。Smad4在TGF β诱导基因表达调控和随后的生长抑制中是关键的转录因子 ,但TGFβ有时也可能以与Smad4无关的形式起作用。     

TGF-β,Smad家族与器官移植免疫和器官纤维化

转化生长因子β(TGF-β)超家族成员是一类多功能的细胞调节蛋白,它们在多细胞动物的发育和体内功能平衡方面发挥关键作用.它们与Ⅰ,Ⅱ型丝氨酸/苏氨酸激酶受体结合后,再与下游效应分子-Smad蛋白结合,进而介导从胞膜到胞核的多种效应.受体调节Smads的蛋白质分子,被激活的Ⅰ型受体磷酸化后与Smad4形成异源复合物,然后转位于核内以调控基因转录.在低剂量时,TGF-β可抑制淋巴细胞激活,因此具有免疫抑制作用.在高浓度时,TGF-β能促进创伤愈合和导致纤维化.     

肝纤维化启动期大鼠血清对肝星形细胞TGF-β1表达的影响

目的　研究大鼠血清与肝星形细胞表达 TGF- β1的关系 ,为临床的早期诊断和中医药治疗肝纤维化提供新的思路。　方法　制备正常大鼠血清、免疫性肝纤维化大鼠血清和益气活血复方药物血清 ,培养肝星形细胞(HSC) ,激光共聚焦显微镜定量分析其 TGF- β1的表达。　结果　 (1)造模 3周时大鼠血清使培养的 HSC中 TGF- β1表达显著增强 ,正常鼠血清、造模 5周和 7周 (即纤维化形成后 )血清没有此作用 ;(2 )添加益气活血药物血清可使造模 3周鼠血清刺激 HSC高水平表达的 TGF- β1作用消失。　结论　 (1)造模 3周鼠血清中含有强烈的刺激 HSC激活的物质 ;(2 )活血化淤方剂的作用靶点是血液中的活性物质 ,通过拮抗血液中 HSC活化物质达到抗纤维化的作用     

TGF-β1及其信号蛋白Smad3对大鼠心肌细胞肥大的作用

目的：探讨转化生长因子β1（transforming growth factor,TGF-β1）及其信号蛋白Smad3在诱导大鼠心肌细胞肥大中的作用。 方法： 培养新生大鼠心肌细胞，流式细胞仪检测心肌细胞总蛋白含量，RT-PCR法检测胚胎抗原ANF mRNA（atrial natriuretic factor）及Smad3 mRNA的表达，Western blotting检测Smad3蛋白的表达。 结果： 不同浓度TGF-β1均能明显增加心肌细胞总蛋白含量和ANF mRNA的表达, Smad3基因反义寡核苷酸能抑制TGF-β1诱导的心肌细胞肥大，TGF-β1诱导肥大的心肌细胞内信号蛋白Smad3表达的增加。 结论： TGF-β1及其信号蛋白Smad3可能参与诱导大鼠心肌细胞肥大的病理过程。     

黄精通过TGF-β1/Smad信号通路对肝纤维化模型大鼠肝脏结构病理改善作用

目的 探讨关于黄精对大鼠肝脏纤维化的干预效果及对肝脏的保护作用.方法 研究对象来源选取Wistar大鼠,对实验动物血样及组织进行分析;样本总数45只;分为正常对照组、肝纤维化模型组以及黄精治疗干预组,每组15只.测定大鼠肝外周血TG F-β水平,使用ELISA法完成;使用免疫组化法对肝组织标本中的TGF-β1、Smad...     

石蜡包埋人胰腺癌组织中Smad4蛋白和转化生长因子β1及其Ⅱ型受体的表达

目的：探讨转化生长因子（TGF）－β通路中Smad4蛋白,TGFβ1和转化生长因子βⅡ型受体（TβRⅡ）的关系及它们在胰腺癌中的可能作用机制。方法：用EnVision免疫组织化学技术检测56份石蜡包埋人胰腺癌标本Smad4蛋白,TGFβ1和TβRⅡ蛋白表达的情况。结果：56份胰腺癌组织Smad4,TGFβ1和TβRII阳性率分别为58．93％（33）,66．07％（37）和60．71（34）,对应正常胰腺组织阳性率分别为89．29％（50）,25．00％（14）和25．00％（14）,TGFβ1的表达与临床分期,肿瘤的有无转移相关（P＜0．05）,TGFβ1和TβRII之间也有相关关系（P＜0．05）,结论：胰腺癌组织中Smad4表达降低,TGFβ1与TβRII则呈过表达,TGFβ1和TβRII对胰腺癌的发生可能有协同作用。Smad在TGF－β诱导基因表达调控和随后的生长抑制中是关键的转录因子,但TGFβ有时也可能以与Smad4无关的形式起作用。     

TGF-βRI与Fascin1的相互作用

目的探讨TGF-βRI和Fascin1的相互作用。方法用免疫荧光证实TGF-βRI和Fascin1的共定位。用GST pull-down和Co-IP的方法验证TGF-βRI和Fascin1的相互作用及其相互作用的位点。结果 TGF-βRI和Fascin1能共定位。Fascin1与TGF-βRI相互作用,相互作用位点是Fascin1的氨基端和TGF-βRI的膜内区。结论 TGF-βRI与Fascin1存在相互作用,相互作用位点是Fascin1的氨基端和TGF-βRI膜内区。     

ERK和Smad通路在TGF-β1抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的： 探讨ERK通路是否参与TGF-β/Smad 通路诱导的血管平滑肌细胞增殖及可能的分子机制。方法: 原代培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞,细胞分4组：(1)对照组;(2)TGF-β1组;(3)ERK阻断剂(PD98059)组;(4)TGF-β1+ ERK阻断剂(PD98059)组。MTT法测细胞的增殖活性,Western blotting法检测VSMCs中细胞内核增殖抗原(PCNA)、Smad2/3、ERK1/2、Smad7蛋白表达及相关磷酸化蛋白含量,RT-PCR方法测VSMCs中Smad2、3、7mRNA的表达。结果: (1)各组PCNA蛋白表达和MTT法测得A值均低于对照组 (P＜0.05),TGF-β1+ ERK阻断剂组与TGF-β1组相比无显著差异。（2）与对照组相比,TGF-β1组p-Smad2/3、p-ERK1/2蛋白含量和Smad7蛋白表达增高 (P<0.05),ERK阻断剂组则明显降低(P<0.05);与TGF-β1组比,TGF-β1+ERK阻断剂组降低 (P<0.05)。各组间Smad2/3、ERK1/2蛋白表达无显著差异。(3)与对照组相比,TGF-β1组Smad7 mRNA表达增高 (P<0.05),ERK阻断剂组和TGF-β1+ERK阻断剂组降低(P<0.05);与TGF-β1组比,TGF-β1+ERK阻断剂组表达降低(P<0.05)。各组内VSMCs 的Smad2、Smad3 mRNA表达无显著差异。结论: (1)TGF-β1诱导的Smad2/3蛋白磷酸化依赖ERK通路激活,但对TGF-β1的抑制平滑肌细胞增殖的作用无影响,可能有其它信号通路参与此过程。(2)ERK通路可通过蛋白和mRNA水平促进Smad7表达,反过来其又可促进ERK通路激活。(3)ERK通路对Smad2/3蛋白和mRNA水平无影响。     

Smad4和TGF-β1在膀胱癌的表达及意义

目的观察Smad4和转化生长因子(TGF)-β1在膀胱癌组织内的表达情况,分析Smad4和TGF-β1的表达与膀胱癌进展及预后之间的关系。方法选取临床资料完整的膀胱癌病例48例,其中,淋巴结转移组20例,无淋巴结转移组28例。免疫组化法检测膀胱癌组织内Smad4和TGF-β1的表达。取膀胱癌术后组织16例,Western blot法检测Smad4和TGF-β1在膀胱癌组织内的表达情况。结果 Smad4表达于肿瘤细胞浆和胞核,在有淋巴结转移膀胱癌组织内的表达量明显低于其在无淋巴结转移组的表达量,Smad4表达与膀胱癌临床分期、分级、淋巴结转移以及膀胱癌复发密切相关(0.05)。TGF-β1表达于肿瘤细胞的胞浆内,在有淋巴结转移膀胱癌组织中的表达量高于其在无淋巴结转移膀胱癌组织内的表达量,TGF-β1的表达与膀胱癌临床分期、分级及淋巴结转移之间具有相关性(0.05)。Smad4和TGF-β1在膀胱癌组织内的表达呈显著负相关(r=-0.324,=0.025)。Kaplan-Meier分析表明Smad4阳性患者的五年总体生存率高于Smad4表达阴性患者的生存率,而TGF-β1的表达与膀胱癌患者的预后无关。结论 Smad4和TGF-β1在膀胱癌组织的表达呈负相关,与膀胱癌临床分期、分级及淋巴结转移相关。     

TGFβ1及其受体在大鼠整胚及胎肾发育过程中的表达

目的观察TGFβ1及TβRI、TβRII在大鼠整胚及胎肾发育中的表达,探讨它们与大鼠整胚及胎肾发育间的相互关系和作用机制。方法半定量RT-PCR分析三种因子在13~17 d全胚中的变化情况;免疫组化法观察三种因子在15~17d胎肾中的表达及该组织发育结构特点。结果半定量RT-PCR示,3种因子在发育13~15 d表达呈递增趋势,16~17 d出现下降。免疫组化示,TGFβ1主要位于肾深部内管状结构的上皮细胞,TβRI、TβRII位于肾内管状结构及其周围的间充质组织细胞。结论TGFβ1及TβRI、TβRII在大鼠整胚及胎肾发育过程中起着重要的调控作用,尤其是对组织器官形态的发生。     

TGFβ1及其受体在大鼠整胚及胎肺发育过程中的表达

目的：观察TGFβ1及TβRⅠ、 TβRⅡ在大鼠整胚及胎肺发育中的表达, 探讨它们与大鼠整胚及胎肺发育间的相互关系和作用机制.方法：半定量RT-PCR分析3种因子在13 ～17 d 全胚中的变化情况;免疫组化法检测3种因子在15 ～17 d 胎肺中的表达及该组织发育结构特点.结果：半定量RT-PCR示, 3种因子在发育13 ～15 d表达呈递增趋势, 16 ～17 d 出现下降.免疫组化结果显示, TGFβ1主要位于发育中支气管上皮细胞内, TβRⅠ、 TβRⅡ位于原始肺泡组织.结论：TGFβ1及TβRⅠ、 TβRⅡ在大鼠整胚及胎肺发育过程中起着重要的调控作用, 尤其是对组织器官形态的发生.     

肝卵圆细胞对肝纤维化大鼠肝组织TGF-β/Smad信号通路的影响

目的:探讨肝卵圆细胞(HOCs)对肝纤维化(HF)大鼠肝组织TGF-β/Smad信号通路蛋白表达的影响。方法:采用CCl4和复方因素制备HF大鼠模型,取模型组大鼠分离纯化HOCs,从门静脉植入HF大鼠肝组织内,连续观察30d,同时以五灵胶囊为阳性对照。在植入后8d、15d、23d、30d各组大鼠尾静脉采血,酶法测定血清天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT),实验结束取肝组织Masson染色观察肝组织形态学变化,Western blotting检测肝组织Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(ERK)、磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(p-ERK)、转化生长因子β受体Ⅰ(TβRI)、转化生长因子β受体Ⅱ(TβRⅡ)、果蝇MAD类似基因2/3(Smad2/3)、果蝇MAD类似基因7(Smad7)蛋白的表达。结果:HOCs植入组与五灵胶囊组在植入后15d、23d、30dAST、ALT水平显著降低;肝组织胶原纤维增生程度明显减轻;肝组织表达ERK、p-ERK、TβRI、TβRⅡ蛋白作用显著降低,表达Smad7的作用显著增加。结论:植入HOCs可阻止大鼠HF的进展,其作用机制可能与其抑制肝组织内TGF-β/Smad信号通路p-ERK、TβRⅠ、TβRⅡ蛋白的表达有关。     

TGF-β1/Smad通路在血管紧张素Ⅱ下调缝隙连接蛋白43表达中的作用

目的:分析心肌梗死(MI)后心脏组织中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、缝隙连接蛋白43(Cx43)和转化生长因子β1(TGF-β1)/Smad通路相关因子的变化情况,以探讨AngⅡ能否经由TGF-β1/Smad调节Cx43的表达。方法:采用左前降支冠状动脉(LAD)结扎建立大鼠心肌梗死模型后,20只SD雄性大鼠随机分为氯沙坦(20 mg·kg~(-1)·d~(-1))治疗组与MI组,分别于结扎后及治疗2周后检测心功能情况,并检测治疗2周后左室心肌组织不同区域AngⅡ、AngⅡ1型受体(AT1)、Cx43以及TGF-β1/Smad通路相关分子的变化情况。结果:氯沙坦组左室舒张末期内径(LVIDd)和左室收缩末期内径(LVIDs)明显缩小(P0.01),室间隔厚度(IVSd)及左室后壁厚度(LVPWd)明显减小(P0.05),左室射血分数(LVEF)显著增加(P0.01);梗死区和边缘区的AngⅡ水平明显降低;梗死区AT1表达显著降低;Cx43在心肌组织不同区域表达增高,TGF-β1、Smad 2、Smad 3在心肌组织不同区域表达均降低,而Smad 7表达增高。结论:心肌梗死后AngⅡ激活可能通过作用于TGF-β1/Smad通路导致Cx43表达下调。