抗Ⅲ型胶原单克隆抗体细胞株的建立

用兔皮肤Ⅲ型胶原免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，取淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞ＮＳ－１融合，成功地得到了三株分泌抗Ⅲ型胶原抗体的杂交瘤细胞，该单克隆抗体二株属ＩｇＧｂ，一株属ＩｇＧ１，不能与Ⅰ型、Ⅱ型胶原和纤维连接蛋白结合，也不能与经过热变性和细菌性胶原酶消化后的Ⅲ型胶原反应，这表明它与Ⅲ型胶原结合部位为胶原的螺旋构型区域。     

行气消肿类中药对体外培养的软骨细胞代谢的影响

采用家兔关节软骨细胞体外培养的方法，观察４种中药黄柏、木香、续断和骨碎补不同浓度对培养的软骨细胞的影响，并采用同位素示踪观察软骨细胞ＤＮＡ、胶原和蛋白多糖的合成变化。结果显示，所有４种中药的不同浓度对软骨细胞ＤＮＡ合成均起抑制作用，除低浓度木香溶液外，对胶原合成亦呈抑制作用，１％和５％的黄柏和骨碎补对蛋白多糖合成有促进作用。认识培养软骨细胞对４种中药的特殊反应，为正确使用这些药物提供了新的参考依据。     

同种异体关节软骨细胞分离体外培养再移植修复关节软骨缺损实 …

关节软骨一旦缺损，其修复能力有限。本实验通过移植同种异体兔软骨细胞，修复关节软骨缺损。方法软骨细胞取自发生后３周雄性新西兰幼兔，体外培养，移植于成年雌性新西兰兔膝关节。股骨内髁缺损区为移植细胞组，左股骨外髁缺损为移植胶原凝胶组，右股骨外缺损为空白对照组。     

一氧化氮抑制兔关节软骨细胞II型胶原的合成

一氧化氮（NO）在骨关节炎和关节软骨代谢中具有重要的病理生理作用。为研究NO与关节软骨II型胶原的关系,我们在培养的兔关节软骨细胞中以药物刺激产生NO后,分别用ELISA及RT-PCR法测定II型胶原及前II型胶原α1链（COL2A1）mRNA表达量的变化。结果表明,0.2mM的硝普钠（SNP）可释放出大量NO,使软骨细胞II型胶原的含量减低,同时,RT-PCR法证实前II型胶原mRNA表达量也减少。100u/ml白细胞介素-1（IL-1）可刺激软骨细胞释放NO并使II型胶原量降低,其COL2A1mRNA表达量也减少。加用1mg/ml精氨酸甲酯（NAME,NO合酶抑制剂）后,则抑制了IL-1的作用,使NO产量下降,II型胶原含量部分恢复,COL2A1完全恢复。本试验证实了NO作为IL-1的下游分子抑制II型胶原的合成;其抑制作用是通过减少前II型胶原α1链mRNA表达量完成的。这在软骨细胞反分化过程中具有重要意义。     

雌激素对软骨细胞胶原表型表达的影响

目的 :观察雌激素对体外培养兔关节软骨细胞胶原表型表达的影响。方法 :体外培养雌兔关节软骨细胞 ,随机分为A、B两组 ,A组中加入 1 7β -雌二醇 0mol/L、1 0 - 6 mol/L、1 0 - 7mol/L、1 0 - 8mol/L、1 0 - 9mol/L、1 0 - 10 mol/L、1 0 - 11mol/L、1 0 - 12 mol/L干预 72小时 ;B组先用 1 0ng/mlIL - 1 β干预 2 4小时 ,随后分别加入 0mol/L、1 0 - 6 mol/L～ 1 0 - 12 mol/L 1 7β -雌二醇作用 72小时。采用RT-PCR方法观察软骨细胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原表达。结果 :1 0 - 6 mol/L雌二醇或单用IL - 1 β均抑制正常软骨细胞Ⅱ型胶原mRNA表达 ,低浓度雌二醇 (1 0 - 11、1 0 - 12 mol/L)能够对抗IL - 1 β的抑制作用 ;所有软骨细胞均未表达Ⅲ型胶原mRNA ;几乎所有浓度雌二醇 (1 0 - 12 mol/L除外 )均诱导软骨细胞表达Ⅰ型胶原。结论 :雌激素对关节软骨细胞胶原表型表达的调控作用随其浓度变化而不同。对变性软骨细胞而言 ,低于生理浓度的雌激素 (1 0 - 12 mol/L)对维持其胶原表型最适宜。     

相关生物因子对体外培养关节软骨细胞促增殖作用的比较研究

目的　筛选关节软骨组织工程种子细胞优化获取的高效促增殖剂。　方法　采用培养细胞3H -胸腺嘧啶脱氧核苷 (3H -TdR)掺入实验、四甲基偶氮唑蓝 (MTT)代谢检测及Ⅰ、Ⅱ型胶原mRNA逆转录聚合酶链反应 (RT -PCR)分析方法 ,比较一定浓度维生素C(vitaminC ,VC) +骨形态发生蛋白 2 (bonemorphogeneticprotein 2 ,BMP2 )、类胰岛素生长因子 1(insulin -likegrowthfac tor1,IGF1 ) (体积分数为 2 %的血清培养时 )及碱性成纤维细胞生长因子 (basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)、转化生长因子 - β1 (transforminggrowthfactor- β1 ,TGF - β1 ) (体积分数为 10 %的血清培养时 )对适宜密度接种、体外单层传代培养兔关节软骨细胞的促增殖作用。　结果　适宜浓度VC +BMP2 、IGF1 及bFGF、TGF - β1 均可促进体外传代培养关节软骨细胞的分裂增殖。增殖后的培养细胞仍具有其特异性表型表达 ,而IGF1 培养的细胞则有向成骨样细胞分化的趋向。其综合效能依次为 :VC +BMP2 >bFGF >TGF - β1 >IGF1 。　结论　一定浓度VC +BMP2 及bFGF对适宜密度接种、体外单层传代培养关节软骨细胞具有显著的促增殖作用 ;其中VC +BMP2 具有经济、高效的优点。     

抗胶原抗体对体外培养关节软骨细胞代谢的影响

通过同位素示踪,本文报告:在体外短期细胞培养的条件下,大鼠抗兔Ⅱ型抗体对家兔关节软骨细胞DNA、硫酸多糖和胶原的合成都有明显的抑制作用。     

关节软骨细胞培养过程中Ⅲ型胶原的变化

利用抗Ⅲ型胶原单克隆抗体对培养的软骨细胞进行免疫组织化学观察,发现软骨细胞在有血清培养条件下趋向成熟,肥大和衰老,Ⅲ型胶原逐渐增多,尤以第三、四代为甚,但在第五代细胞因衰老合成分泌胶原能力差,Ⅲ型胶原相对降低。     

人关节软骨细胞体外培养的传代特点及鉴定

 目的 研究软骨细胞的传代特点,为软骨细胞移植技术的临床应用提供依据.方法 用胰酶和Ⅱ型胶原酶对软骨进行双重消化得到软骨细胞,通过免疫组化对软骨细胞进行鉴定.结果 软骨细胞贴壁时间为24～36 h,传代培养4～5 d,细胞形态以圆形为主,根据免疫组化鉴定,这是一种切实可行的培养细胞的有效方法.结论 本研究建立了一种简单易行的软骨细胞分离方法,原代及第2代细胞生长情况良好,5代后细胞表型发生变化.     

肌腱损伤修复过程中Ⅲ型胶原变化

利用抗Ⅲ型胶原单克隆抗体对肌腱损伤修复进行研究,发现修复早期Ⅲ型胶原明显增加。修复后期(56天)Ⅲ型胶原显著减少,但仍高出正常的腱组织。并认为Ⅲ型胶原是位于愈合处及周围的低分化成纤维细胞合成、分泌的产物。     

骨性关节炎关节软骨中Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型及Ⅹ型胶原的分布

目的 :研究成人骨性关节炎关节软骨中的Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型及Ⅹ型胶原的分布。方法 :分别用抗Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型及Ⅹ型胶原单克隆抗体对成人骨性关节炎关节软骨切片进行免疫组织化学染色法。结果 :骨性关节炎关节软骨全层无Ⅰ型胶原 ;Ⅹ型胶原分布在深层和钙化层 ;Ⅱ型和Ⅲ型胶原分布相同 ,轻度病变时分布于软骨全层 ,中、重度病变时主要分布于中、深层。结论 :成人骨性关节炎关节软骨中不仅含有Ⅱ型胶原 ,而且含有大量Ⅲ型和Ⅹ型胶原 ,但无Ⅰ型胶原。Ⅹ型胶原和Ⅱ、Ⅲ型胶原的分布有重叠区     

硅橡胶植入对关节软骨Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原合成的影响

目的观察植入硅橡胶对兔关节软骨细胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原合成的影响.方法18只成年新西兰大白兔,每只动物右膝为实验组,在膝关节滑车处植入硅橡胶;左膝为对照组,膝关节滑车处造成关节软骨缺损后不植入硅橡胶.分别于术后4周、24周和48周取材,采用原位杂交的方法观察关节软骨细胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达,同时运用免疫组织化学的方法观察关节软骨细胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原蛋白的合成.结果实验组中关节软骨可见Ⅱ型前胶原mRNA和胶原蛋白的稳定表达.Ⅰ型前胶原mRNA从术后4周起即有表达,且随时间延长而表达增加.但Ⅰ型胶原染色仅在24周时方开始呈现阳性.Ⅲ型前胶原的mRNA则在各期均未探测到,但从24周起Ⅲ型胶原染色呈阳性.对照组关节软骨在术后4周时即可见到Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型前胶原mRNA和胶原蛋白同时表达,且对照组中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型前胶原mRNA和胶原蛋白表达均呈减少趋势.结论(1)前胶原mRNA的表达早于胶原分泌.Ⅰ型前胶原mRNA表达在实验组中比对照组晚,而且实验组中Ⅰ型前胶原mRNA的表达时间较长,容易观察到阳性的表达信号,所以Ⅰ型前胶原mRNA可以成为早期骨关节炎(OA)的分子标志物.(2)Ⅲ型前胶原mRNA由于表达时间可能较短,所以即使在实验组有Ⅲ型胶原蛋白分泌,但不易查到有Ⅲ型前胶原mRNA的表达,因此Ⅲ型前胶原mRNA不是一个合适的早期OA的分子标志物.(3)硅橡胶植入对关节软骨的胶原合成有一定影响,但对关节软骨的影响小于对照组.硅橡胶植入修补关节软骨缺损可延缓骨关节炎的发病过程.     

Ⅲ型胶原前肽对慢性肝炎分型的诊断价值

病毒性肝炎防治方案中建议Ⅲ型胶原前肽(ＰⅢＰ)检测并结合病理判断慢性肝炎纤维化程度[1]。本组病例检测血清ＰⅢＰ探讨对该方案中慢性肝炎分型诊断的价值,现报告如下。1　材料和方法11　病例选择　观察组179例,男151例,女28例,年龄365±56岁,病程35±16ａ,均为本院住院患者。根据临床及实验室检查按该方案诊断标准[1]临床诊断慢性肝炎,其中轻型72例,中型61例,重型46例。病原学分型:乙型176例,丙型3例。对照组96例,男89例,女7例,年龄297±32岁,病程151±26ｄ。临床诊断:急性黄疸型76例,急性无黄疸型20例。病原学分型:甲型68例,乙型10例,戊…     

外源性IGF-I对大鼠急性骨骼肌钝挫伤后骨骼肌IIb型MHC及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的影响

目的 :观察外源性IGF -I对SD大鼠骨骼肌钝挫伤后修复过程中IIb型肌球蛋白重链(myosinheavychain ,MHC)及Ⅰ、Ⅲ型胶原(collagen-Ⅰ和Ⅲ )mRNA表达的影响。方法 :采用自制的肌肉损伤打击装置对 84只雄性SD大鼠后下肢肌群造成钝挫伤 ,然后将动物随机分为两组 ,分别于损伤局部注射外源性IGF-I及生理盐水 ,然后在损伤后第 1、3、7、1 0、1 4、2 1和 2 8天分别处死大鼠并取损伤处肌肉 ,采用半定量逆转录 -聚合酶链式反应 (semi-quantitativeRT -PCR)分析IIb型MHC、Ⅰ型及Ⅲ型胶原mRNA的表达。结果 :(1 )急性钝挫伤修复期 ,两组动物骨骼肌IIb型MHC及Ⅰ、Ⅲ型胶原的mRNA表达量均显著增高 ,第 7～1 0天达到高峰 ,然后呈下降趋势。 (2 )在骨骼肌修复过程中 ,外源性IGF-I治疗组大鼠IIb型MHCmRNA表达水平的升幅显著高于生理盐水对照组 ,且达到峰值的时程早于生理盐水组 3天。 (3 )在骨骼肌修复过程中 ,外源性IGF -I治疗组大鼠Ⅲ型与Ⅰ型胶原mRNA表达水平的改变明显低于生理盐水对照组 ,但峰值时程与生理盐水对照组相同。结论 :(1 )急性骨骼肌钝挫伤修复过程中 ,外源性IGF -I能促进骨骼肌急性钝挫伤后IIb型MHCmRNA表达。 (2 )急性骨骼肌钝挫伤修复期 ,外源性IGF -I能抑制Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达     

腹主动脉缩窄大鼠模型心肌Ⅰ型和Ⅲ型胶原改变及其mRNA的表达

目的:通过建立腹主动脉缩窄大鼠模型,观察腹主动脉缩窄大鼠心肌中Ⅰ型、Ⅲ型胶原及其mRNA的表达.方法:30只雄性SD大鼠随机分为假手术组(14只)和模型组(16只).模型组根据Doering等的方法,用银夹造成腹主动脉部分狭窄(银夹内径0.7 mm).8 w后用免疫组化法对心肌组织Ⅰ型和Ⅲ型胶原染色,并用光密度值作为其含量指标行图像分析,即时PCR扩增后分析并测定胶原mRNA水平.结果:模型组造模8 w时,Ⅰ型和Ⅲ型胶原平均光密度及其mRNA表达较假手术组显著升高(P＜0.01).胶原组化染色显示,模型组胶原明显增多、增粗、排列紊乱.结论:大鼠腹主动脉缩窄导致反应性纤维化心肌中Ⅰ型和Ⅲ型胶原及其mRNA表达升高,以心肌间质和血管周围增加为主;本模型适合高血压、心力衰竭等慢性过程致心肌纤维化的研究.     

人关节滑膜A型和B型细胞的纯化分离和体外培养

人类关节滑膜细胞主要有两种细胞类型 ,即巨噬细胞样滑膜细胞 (ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｌｉｋｅｓｙｎｏｖｉｏｃｙｔｅｓ ,ＭＬＣ/Ａ型细胞 )和成纤维细胞样滑膜细胞 (ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｌｉｋｅｓｙｎｏｖｉｏｃｙｔｅｓ ,ＦＬＣ/Ｂ型细胞 )。目前已建立的分离培养ＦＬＣ模型[1、2 ] ,其分离纯度不高 ,建立模型所需时间较长 ,而国内尚未有ＭＬＣ体外培养模型的报道 ,限制了对ＭＬＣ、ＦＬＣ的病理生理作用的深入研究。故建立一种分离、培养高纯度人类关节滑膜Ａ、Ｂ型细胞模型具有重要意义。1　材料与方法1 1　人类滑膜细胞的分离、培…     

羊Ⅲ型前胶原放射免疫分析法的建立

笔者以山羊胎皮为原料进行了羊Ⅲ型前胶原 (gPCⅢ )抗原性质及放射免疫分析 (简称放免 )法研究 ,现报道如下。一、材料与方法1.gPCⅢ抗原分离纯化参照文献[1]。2 .gPCⅢ抗体制备。gPCⅢ 2mg ,以完全福氏佐剂乳化后在日本大耳兔背部皮下多点免疫 ,2周后增强免疫 1次 ,以后每 2周免疫 1次 (1mg) ,共 3次。3 .标记抗原的制备。取Iodogen 2mg于 2 0ml三氯甲烷中 ;取 3 0 0 μl以 1L min流速氮气吹干。 0 2mol LPBS 50 μl,Na12 5 I 56MBq ,gPCⅢ 50 μl;0℃混旋反应10min ;SephadexG 2 5分离游离碘。4.gPCⅢ放免法。按 1996年国家质…     

染矽尘大鼠早期肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达

 目的探讨染矽尘大鼠早期肺组织中Ⅰ型、Ⅲ型胶原形成的时间规律.方法采用气管暴露法建立矽肺动物模型.取肺组织制作石蜡切片,天狼猩红法染色,偏振光显微镜观察Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达,用图像分析系统对Ⅰ、Ⅲ型胶原进行定量分析.结果染矽尘后第3天,Ⅲ型胶原开始增生,染矽尘后第7天,Ⅰ型胶原开始增生,直至染矽尘后第28天.这2种胶原进行性增加.Ⅰ、Ⅲ型胶原阳性面积百分比在染矽尘后均有不同程度的增加.染矽尘后第7天、第14天、第21天、第28天,Ⅰ型胶原阳性面积百分比分别增加27.12(P＜0.01),24.73(P＜0.01),16.01(P＜0.05),52.45(P＜0.01).染矽尘后第3天、第28天,Ⅲ型胶原阳性面积百分比分别增加2.20(P＜0.01)、24.13(P＜0.01).结论染矽尘大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原明显增加.Ⅰ、Ⅲ型胶原增生出现的时相有所不同,染矽尘后第3天,Ⅲ型胶原开始出现,染矽尘后第7天,Ⅰ型胶原开始形成,此后,Ⅰ、Ⅲ型胶原呈进行性增多的趋势.天狼猩红-偏振光显微镜法是一种定量检测Ⅰ、Ⅲ型胶原的更加准确的方法.     

原代骺板软骨细胞的高效分离和体外培养观察

目的　设计原代骺板软骨细胞的高效分离法 ,并对骺板软骨细胞的体外培养进行初步观察。　方法　改良设计以 1g L的胰蛋白酶 / 1g L的乙二胺四乙酸 (EDTA)、1g L的透明质酸酶和 2g L的Ⅰ型胶原酶系列消化分离原代软骨细胞的三步酶消化分离法 ,观察其对幼兔骺板原代软骨细胞的分离效果 ;倒置显微镜和光镜下观察体外培养条件下细胞生物学特性。　结果　 ( 1)三步酶的消化可使软骨基质完全解离降解 ,细胞均得以分离 ,收获量与组织湿重呈非常显著的正相关 ,每克软骨的细胞收获量平均为 32 .3× 10 6 个 ,细胞存活率平均为 97.6 %。 ( 2 )原代和第 1代细胞附壁生长呈三角形或多角形 ,生长融合时呈卵圆形 ,Ⅱ型胶原免疫组化和甲苯胺蓝 (TB)异染反应均呈阳性 ;第 3代以后细胞逐渐变为梭形 ,Ⅱ型胶原免疫组化为阴性 ,TB异染反应明显减弱。结论　 ( 1)原代骺板软骨细胞三步酶消化分离法具有细胞收获率高、细胞存活率高、操作简便等特点。 ( 2 )随着传代培养次数的增加 ,骺板细胞出现去分化 ,逐渐失去软骨细胞的特异性表型。