葡萄籽多酚体外逆转胆囊癌细胞株GBC-SD多药耐药作用的研究

目的:研究葡萄籽多酚(GSP)逆转胆囊癌先天性耐药细胞株GBC-SD耐药的作用,寻找高效低毒的耐药逆转剂。方法:选择GBC-SD为研究对象,MTT比色法测定各化疗药物的半数抑制浓度(IC50),RT-PCR测定MDR1mRNA的变化,流式细胞仪检测P-gp蛋白和细胞内阿霉素浓度的变化。结果:①无毒(3μg/ml)和低毒(6μg/ml)剂量浓度的GSP处理后各化疗药物的IC50值均明显降低(P〈0.05),能明显逆转GBC-SD的多药耐药性;②无毒(3μg/ml)和低毒(6μg/ml)剂量浓度的GSP能下调GBC-SD细胞MDR1mRNA表达(P〈0.05);③无毒(3μg/ml)和低毒(6μg/ml)剂量浓度的GSP能下调GBC-SD细胞P-gp蛋白表达(P〈0.05);④GSP增加GBC-SD细胞内ADM药物浓度(P〈0.05)。结论:GSP能部分逆转先天性耐药细胞株GBC-SD多药耐药性,作用机制为下调GBC-SD细胞MDR1mRNA及P-gp蛋白表达。     

葡萄籽多酚逆转人乳腺癌多药耐药性及其机制的研究

目的探讨葡萄籽多酚 (grapeseedpolyphenols ,GSP)逆转肿瘤多药耐药的作用及其相关机制。方法以人乳腺癌MCF 7细胞及其耐药株MCF 7/ADR细胞作为实验对象 ,用MTT法观察GSP对MDR的逆转作用 ,采用Westernblot、Northernblot检测GSP对MDR1基因表达的影响 ;流式细胞术 (FCM)观察GSP对P 糖蛋白 (P gp)功能的影响。结果非细胞毒性剂量GSP 1 2mg/L、2 4mg/L均能逆转MCF 7/ADR细胞的多药耐药性 ,逆转倍数分别为 5 77和 9 79倍 ;1 2mg/L、2 4mg/LGSP分别使P gp表达降至对照组的 80 83% (t=5 5 8,P <0 0 5 )和 5 0 81% (t =10 96 ,P <0 0 1) ;1 2mg/L、2 4mg/LGSP下调MDR1mRNA表达 ,降至对照组的 6 0 92 % (t =16 0 3,P <0 0 0 5 )和 4 2 0 5 % (t =2 1 70 ,P <0 0 0 5 ) ;2 4mg/LGSP可增加细胞内阿霉素 (ADM)的积累。结论体外试验证实GSP具有多药耐药逆转作用 ,是一种潜在的化疗增敏剂。     

ASODN逆转耐药肝癌细胞多药耐药基因mdr1的体内实验研究

目的　在体外实验研究的基础上进一步观察反义硫代磷酸酯寡核苷酸 (ASODN)在裸鼠体内逆转耐药肝癌细胞SMMC 772 1/ADM多药耐药基因mdr1的作用。方法　取体外培养的耐药肝癌细胞 (1× 10 7个 /0 .2ml)注射于裸小鼠腋部皮下 ,建立耐药肝癌模型 ,而后将成模裸鼠分成 4组 ,每组各 5只。ASODN组在裸鼠肿瘤局部注射浓度为 3μmol/L的ASODN 5 0 μl和脂质体Lipofectamine 5 0 μl,并在腹腔内注射阿霉素 (ADM ,每天 10mg/m2 ) ;正义链组 (SODN组 )与ASODN组的方法、剂量相同 ;对照 1组、对照 2组分别在裸鼠局部注射Lipofectamine 5 0 μl和生理盐水 2 0 0 μl,同时腹腔注射ADM (每天 10mg/m2 )。寡核苷酸于观察的两周内每周前 3d注射 ;ADM于每周的第 2～ 4天使用。Lipofectamine和生理盐水使用时间与寡核苷酸相同。结果　随着时间的推移 ,4组裸鼠的肿瘤体积逐渐增大 ,且于第 5天开始变化明显 ,此后各时相之肿瘤体积与前一时相比较 ,差异均有显著性意义 (P<0 .0 5 ) ;ASODN组的肿瘤体积在第 5天后明显小于其他 3组 (P<0 .0 5 ) ;而对照 1组、对照 2组及SODN组各时相的肿瘤体积差异无显著性意义 (P>0 .0 5 )。该实验结果提示 ,SODN及脂质体对裸鼠肿瘤的生长无明显影响 ,而ASODN对裸鼠肿瘤的生长具有明显的抑制作用     

苦参碱诱导人乳腺癌细胞MCF-7/ADR的凋亡研究

目的 研究苦参碱对人乳腺癌MCF—7／ADR细胞的生长抑制作用及诱导凋亡机制。方法 四甲基噻唑蓝(MTT)法测定苦参碱对细胞的半数抑制浓度(IC50)，用荧光显微镜、电子显微镜、激光共聚焦显微镜、流式细胞仪和DNA凝胶电泳等技术观察细胞凋亡。结果 0．3—2．5g／L浓度苦参碱对MCF—7／ADR细胞有明显的抑制作用，并诱导发生凋亡，实验范围内细胞凋亡的比率与药物浓度呈一定相关。结论 苦参碱能抑制人乳腺癌MCF—7／ADR细胞的生长，其机制与阻止细胞周期的进程，启动细胞自身调控程序，诱导凋亡有关。     

反义硫代磷酸寡核苷酸逆转肝癌细胞多药耐药的实验研究

目的 观察反义硫代磷酸寡核苷酸（ASOND）逆转耐药肝癌细胞的多药耐药作用。方法 用人工合成互补于mdrl基因5′端AUG起始密码子的反义20聚硫代磷酸寡核苷酸,以Lipofectamine为载体,转梁人耐药肝癌细胞SMMC－7721,MTTI测定细胞对化疗药物的敏感性,通过RT－PCR检测mRNA的表达,流式细胞仪分析P－170的表达。结果 ASOND可抑制SMMC－7721细胞mRNA及P－170的表达,增加耐药细胞对化疗药物的敏感性,最佳ASOND作用浓度为0．5μmol/L。结论 ASOND可增加耐药细胞对化疗药物的敏感性,部分逆转耐药肝癌细胞耐药。     

人肝癌多药耐药裸鼠模型的建立及其生物学特性研究

本实验旨在为体内逆转肿瘤多药耐药(MDR)而制作人肝癌裸小鼠模型,并对其生物学特征进行研究。 一、材料与方法 1.细胞株与裸鼠多药耐药模型建立:人肝癌HepG2细胞株(重庆医科大学医学超声工程研究所提供)及耐药细胞株HepG2/Adm[可在浓度为1.0 mg/L的阿霉素(ADM)培养基中生长并传代,对ADM耐药26倍]由重庆医科大学超声医学工程研究所建立。BALB/C-nu/nu裸小鼠(中国科学院药物研究所)在无特定病原体(SPF)条件下饲养。4～6周     

MCF-7细胞系乳腺癌裸鼠模型病理学特点及生物学性状的研究

目的 探讨荷人乳腺癌裸鼠移植模型的病理学特点及生物学性状,为乳腺癌病因学、发病学研究提供可靠的工具.方法 在裸鼠右侧腋窝注射人乳腺癌MCF-7细胞悬液0.1 mL(5×10~8个/mL),建立乳腺癌裸鼠动物模型.混合干预组小鼠,肿瘤接种部位旁皮下注射瘦素0.2 mL(15×10~4 ng/mL)和雌激素0.2 mL(0.15 mg/mL),每天1次;雌激素组注射雌激素0.2 mL(O.15 mg/mL);瘦素组注射瘦素0.2 mL(15×10~4ng/mL);空白组注射0.9%氯化钠溶液,每日观察肿块生长情况及肿瘤体积变化.宰杀取材,观察肿瘤组织学特征.结果 (1)空白组肿瘤移植成功率为33.3%(10/30),瘦素组为46.7%(14/30),模型失败.混合干预组肿瘤移植成功率为96.7%(29/30),雌激素组为93.3%(28/30),两组间无明显差异(P>0.05);(2)混合干预组裸鼠平均肿瘤最长径明显优于雌激素组,差异具有统计学意义(P相似文献   

苦参碱对人乳腺癌细胞阿霉素多药耐药性的逆转作用

有研究证实苦参碱（Mat）在体外具有诱导多种肿瘤细胞的增殖、分化、凋亡等作用，毒副作用小。本研究旨在观察Mat对人乳腺癌细胞耐药株（MCF-7／ADR）的多药耐药（MDR）有无逆转作用。     

核酶对人肝癌细胞多药耐药性的逆转

目的 利用核酶技术切割肿瘤多药耐药基因(MDR1),逆转肿瘤抗药性。方法按照“锤头结构”模型设计、合成了核酶196MDR1(196 RZ),并定向克隆入包含RNA多聚酶Ⅲ启动子的逆转录病毒载体中。通过脂质体介导,将抗mdrl核酶表达质粒(N2A tRNA1^(met)-iMDRl-Rz)导入人肝癌耐药细胞株HepG2。分别采用RT-PCR、荧光PCR、蛋白质印迹分析(western blot)、流式细胞仪检测术、罗丹明聚集及MTT、方法,观察细胞的．RZ、mdrl mRNA、P糖蛋白(Pgp)表达和对化疗药物敏感性的变化。结果经抗MDR1核酶处理的耐药HepG2细胞,RZ稳定表达,MDRl mRNA、Pgp明显降低,细胞内罗丹明聚集,对阿霉素的敏感性提高200倍。结论针对多药耐药基因mdrl的核酶可明显降解mdrl mRNA,抑制Pgp的表达,具有强大的逆转肝癌耐药细胞HepG2多药耐药的作用。     

利血平对人乳腺癌耐药细胞多药耐药性逆转作用的实验研究

目的 检测利血平对人乳腺癌耐药细胞的多药耐药性的影响，为临床使用利血平逆转乳腺癌的多药耐药性提供可靠的依据。方法 以流式细胞术检测利血平对人乳腺癌耐药细胞系ＭＣＦ－７／Ａｄｒ细胞内的荧光染料罗丹明－１２３的浓度影响；以噻唑蓝（ＭＴＴ）法检测５～３０ｕｍｏｌ／Ｌ浓度的利血平对人乳腺癌耐药细胞的阿霉素毒性的影响。结果 本实验流式细胞仪检查５～３０ｕｍｏｌ／Ｌ的利血平可以显著增加人乳腺癌耐药细胞内罗丹明     

粉防己碱逆转大肠癌耐药细胞株LOVO/5-Fu多药耐药性的实验研究

目的 探讨粉防己碱(tetrandrine,Tet)逆转人大肠癌多药耐药细胞LOVO/5-Fu的多药耐药性(multidrug resistance,MDR)及其机制.方法 Tet作用于LOVO/5-Fu细胞48 h后,用噻唑蓝法检测LOVO/5-Fu细胞耐药性,流式细胞术检测细胞凋亡、周期变化及其p-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的表达水平,实时荧光定量PCR检测各组细胞MDR1 mRNA表达水平,Western blot检测各组细胞P-gp蛋白的表达水平.结果 经过Tet作用48 h后,大肠癌LOVO/5-Fu细胞株的IC50降低为(4.15±0.31)μg/ml(P＜0.05),细胞凋亡率增加为(3.44%±0.28%)(P＜0.05),MDR1 mRNA转录水平降低为(570 ±85)(P＜0.05),P-gp的表达水平下降.结论 Tet能逆转大肠癌多药耐药细胞LOVO/5-Fu的MDR,其机制可能是抑制MDR1基因的表达,使P-gp的表达降低,从而增强了LOVO/5-Fu细胞对5-Fu的敏感性.

Abstract：

Objective To explore the reversal effect on MDR1 gene-mediated multidrug resistance in human colon carcinoma LOVO/5-Fu cells by tetrandrine ( Tet) and to clarify its molecular mechanism.Methods LOVO/5-Fu cells were treated for 48 h with Tet.Drug sensitivity was measured by MTT.The cell cycle, apoptosis of cells and expression of P-glycoprotein (P-gp) were determined by flow cytometry assay.Expression of MDR1 mRNA was detected by real-time quantitative PCR (real-time PCR).P-gp expression was detected by Western blot.Results After LOVO/5-Fu cells were treated for 48 h with Tet, the IC50 of 5-Fu decreased to ( 4.15 ± 0.31 ) μg/ml ( P ＜ 0.05 ) ; and the apoptotic rate increased to (3.44% ± 0.28% ) ( P ＜ 0.05) ; the expression of MDR1 mRNA reduced to (570 ± 85) (P ＜ 0.05 ).Conclusions Tetrandrine reverses MDR1 gene-mediated multidrug resistance in human colon carcinoma LOVO/5-Fu cells possibly by inhibiting the expression of MDR1, decreasing the expression of P-gp, thus enhancing the sensitivity of LOVO/5-Fu cells to 5-fluorouracil.     

RNA干扰逆转人胃癌细胞多药耐药的研究

目的：研究RNA干扰沉默多药耐药（multidrug resistance,MDR）基因对胃癌多药耐药细胞株BGC-823/5-Fu生长的影响。方法：构建靶向MDR1的shRNA干扰质粒转染人胃癌多药耐药细胞株BGC-823/5-FU,噻唑蓝（MTT）法检测耐药细胞对5-Fu的敏感性,实时荧光定量PCR（Real-time-PCR）检测MDR1 mRNA表达的变化,Western blot检测各组细胞P-gp表达的变化,流式细胞术检测细胞周期变化、凋亡情况。结果：与RNAi-control组和normal组相比,RNAi-MDR1组细胞干扰质粒细胞的IC50明显降低,为2.104±0.242（P〈0.05）,敏感性的相对逆转率为76.8%;MDR1 mRNA表达明显下调（P〈0.05）;P-gp的表达水平降低（P〈0.05）;凋亡率明显升高至（5.757±0.684）%。结论：应用RNA干扰有效抑制了MDR1的表达,使P-gp的表达降低,增强了BGC-823/5-Fu细胞对5-Fu的敏感性,为寻找逆转胃癌细胞多药耐药有效方法奠定了基础。     

病理性瘢痕裸鼠模型的建立

目的 验证所构建裸鼠瘢痕疙瘩和增生性瘢痕模型在病理性瘢痕研究中的可行性。方法 将0．8cm×0．8cm×0．5cm的人瘢痕疙瘩和增生性瘢痕组织块移植到裸鼠皮下，大体观察裸鼠及植入物情况。移植后第16天取出移植物与原标本进行下列指标的比较：体积、瘢痕的镜下特征、酸性黏多糖含量及Ⅰ、Ⅱ型胶原含量。结果 移植后裸鼠全部存活且创面愈合良好。瘢痕疙瘩、增生性瘢痕组织块的酸性黏多糖含量移植前分别为3448±1452、1940±509，移植后分别为3237±1871、1809±552，移植前后比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。植入物保持着原有的胶原特性及含量，未检测到细胞变性坏死。结论 增生性瘢痕和瘢痕疙瘩以适当体积移植到裸鼠皮下，其生物学特性可在一定时间内保持稳定，该动物模型适用于病理性瘢痕的临床研究。     

建立胃癌裸鼠模型的研究进展

建立动物模型是实验研究的根本.胃癌模型的制作过程包括选择实验动物、胃癌细胞株、移植细胞的数量和肿瘤移植的方式等.各制作步骤要遵循胃癌的发生发展机制,才能更好地模拟人胃癌生长过程.裸鼠先天性免疫缺陷,为我们提供了较佳的胃癌实验动物.细胞株的选择和种植方式对模型的制作也有重要的影响.     

裸鼠原位肝癌耐药模型的建立

目的 建立裸鼠原位肝癌耐药模型。方法 培养肝癌细胞系HepG2,建立裸鼠的皮下肿瘤,形成供瘤鼠。开腹直视下将瘤块种植于25只裸鼠的肝包膜下建立原位肝癌模型,通过表阿霉素间歇腹腔化疗,建立20只裸鼠原位肝癌耐药模型。对照组5只用体检、B超、CT、剖腹探查监测肝内瘤块生长情况。用逆转录聚合酶链反应和免疫组织化学方法检测肿瘤耐药基因mdrl-mRNA和p-gp蛋白的表达。结果 模型建立无手术死亡(0／25),种植成瘤率为88％(22／25),补种3只全部成功,耐药诱导成功率为80％(16／20)。诱导组20只mdrl-mRNA和p-gp蛋白的表达均明显高于对照组(5只),分别约是对照组的23倍和13倍。结论 成功地建立了与临床肝癌相似的裸鼠原位肝癌耐药模型,为进一步研究肝癌多药耐药基因的诊断和逆转提供了良好的动物平台。     

Effect of 5-aminolevulinic acid-mediated photodynamic therapy on MCF-7 and MCF-7/ADR cells

BACKGROUND AND OBJECTIVES: Photodynamic therapy (PDT) has been proposed as an alternative approach in overcoming multidrug resistance (MDR) phenotype. To verify whether 5-aminolevulinic acid (ALA)-mediated PDT is effective in MDR cells, we studied the protoporphyrin IX (PpIX) content, intracellular localization, and phototoxicity in human breast cancer cells MCF-7 and derived MDR subline, MCF-7/ADR. STUDY DESIGN/MATERIALS AND METHODS: The fluorescence kinetics of ALA-induced PpIX was evaluated by spectrofluorometer. The phototoxicity of MCF-7 and MCF-7/ADR cells was determined by tetrazolium (MTT) assays and clonogenic assay. Furthermore, Annexin V and propidium iodide (PI) binding assays were performed to analyze the characteristics of cell death after ALA-PDT. RESULTS: MCF-7/ADR accumulated a lower level of PpIX as compared to parental MCF-7 cells. Significant phototoxicity was observed in MCF-7 and increased in a fluence-dependent manner with LD(50) around 8 J/cm(2). Compared to its parental counterpart, MCF-7/ADR cells were less sensitive to ALA photodynamic treatment and PDT-induced cytotoxicity did not increase in a dose responsive manner as the concentration of ALA increased or the fluence of light increased. ALA-PDT was less effective for MCF-7/ADR cells than MCF-7 cells even under the condition when these two cell lines contained the similar amounts of PpIX. CONCLUSIONS: These results indicate that, except for the MDR related characteristics, MCF-7/ADR cells might possess intrinsic mechanisms that render them less sensitive to ALA-PDT induced phototoxicity.     

短发夹RNA干扰表达质粒逆转人大肠癌细胞LOVO／5-Fu多药耐药的研究

目的：探讨短发夹RNA（shRNA）沉默多药耐药MDR）基因对大肠癌多药耐药细胞株LO-VO/5-Fu生长的影响。方法：构建靶向MDR1的shRNA干扰质粒转染人大肠癌多药耐药细胞株LO-VO/5-Fu,MTT法检测各组细胞对5-Fu的敏感性,流式细胞术检测细胞周期变化、凋亡情况及P-糖蛋白（P-gp）的表达,Realtime-PCR检测各组细胞MDR1 mRNA表达的变化,Western blot检测各组细胞P-gp表达的变化。结果：与对照组质粒组和未转染组相比,转染含shRNA干扰质粒细胞的实验组IC50明显降低,为（2.304±0.232）μmol/L,且差异有统计学意义（P〈0.05）,敏感性的相对逆转率为73.8%;凋亡率明显升高为（5.767±0.694）%（P〈0.05）;MDR1 mRNA表达明显下调（P〈0.05）;P-gp的表达水平降低（P〈0.05）。结论：靶向MDR1的shRNA干扰质粒有效抑制了MDR1的表达,使P-gp的表达降低,从而增强了LOVO/5-Fu细胞对5-Fu的敏感性,有可能为临床上克服大肠癌化疗过程中出现的耐药提供新的作用靶点和治疗途径。     

多西他赛联合照射对人胃癌裸鼠移植瘤生物效应的实验研究

目的:观察多西他赛对人胃癌裸鼠移植瘤的放射增敏作用和多西他赛联合放射对肿瘤细胞凋亡的影响。方法:建立人AGS胃癌裸鼠移植瘤动物模型28只,随机分为4组:对照组、单纯照射组、单纯多西他赛组、多西他赛 照射组。测量各组移植瘤体积,计算各组抑瘤率,评价多西他赛的放射增敏效果,并对标本进行光镜观察及原位末段标记(TUNEL)检测。结果:28只裸鼠的成瘤率为100%,实验期间无死亡,比较各组移植瘤体积差异有统计学意义(P<0.01)。各组抑瘤率分别为单纯照射组36.4%,单纯多西他赛组44.2%,多西他赛 照射组86.9%。多西他赛对放射治疗的增敏值(enhancement factor,EF)值为1.5。多西他赛 照射组的平均凋亡指数(AI)为(15.6±2.3)%,与其它各组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论:多西他赛对人AGS胃癌裸鼠移植瘤有良好的放射增敏作用,多西他赛联合放疗能更有效地诱导肿瘤细胞凋亡。     

短发夹RNA/MDR1逆转肝细胞癌多药耐药

目的 探讨短发夹RNA/MDR1(shRNA/MDR1)干扰技术能否体内逆转肝细胞癌多药耐药.方法 建立肝细胞癌耐药细胞株HepG2/MDR1和敏感细胞株HepG2裸鼠移植瘤模型,分腹腔注射组和瘤体内注射组,以表达载体pSUPER-shRNA/MDR1转染,阴性对照组以阴性载体pSUPER转染,72 h后行腹腔内阿霉素化疗试验,每周2次,共2周,然后处死动物,测量化疗前后肿瘤体积差,瘤体制成细胞悬液和组织切片,分别以流式细胞术和免疫组织化学检测细胞膜P-gp表达.结果 成瘤率100%,HepG2/MDR1组和HepG2组成瘤时间和化疗前肿瘤体积差异无统计学意义,HepG2/MDR1组化疗前后肿瘤体积差(mm3)与阴性对照组比较差异有统计学意义(700.14±25.61比1659.70±152.54,P＜0.01);腹腔注射组和瘤内注射组差异无统计学意义.流式细胞术检测发现治疗组细胞膜蛋白P-gp表达率(%)较阴性对照组明显下调(65.1%比94.1%,P＜0.05),腹腔注射组和瘤内注射组差异无统计学意义(94.1%比92.8%,P＞0.05).瘤体组织病理切片和免疫组织化学分析也有同样的结果.结论 表达载体pSUPER-shRNA/MDR1体内转染可以逆转肝细胞癌多药耐药.