营养素防护同型半胱氨酸致ECV304细胞损伤和凋亡

目的: 探讨叶酸、维生素E(VE)和硒(Se)对同型半胱氨酸(homocysteine, Hcy)诱导ECV304细胞损伤和凋亡的防护作用及其机制。方法: 采用倒置显微镜观察和MTT实验检测各种营养素对Hcy细胞损伤作用的防护,采用琼脂糖凝胶DNA电泳和流式细胞仪检测各种营养素对Hcy诱导细胞凋亡作用的防护。并通过测定细胞内脂质过氧化水平、细胞内抗氧化酶活力及对细胞内活性氧产生的改变研究其保护机制。结果: 叶酸、VE和Se都可防护Hcy的细胞增殖抑制和诱导细胞凋亡作用,并都可明显减少细胞内MDA含量。叶酸可以明显增加细胞内SOD活力,叶酸和Se可以明显增加细胞内GSH-Px活力。VE对Hcy诱导的细胞内活性氧产生具有明显抑制作用,而Se和叶酸抑制作用不明显。结论: 叶酸、VE和Se都可以防护Hcy导致的细胞增殖抑制,并可以抑制Hcy诱导的细胞凋亡,但其作用机制不同。     

同型半胱氨酸损伤血管内皮细胞的研究概况

血管内皮细胞的损伤是动脉粥样硬化性疾病的早期特征之一，内皮细胞也是同型半胱氨酸攻击的主要靶细胞，本文概述了如下3个问题：（1）同型半胱氨酸的产生及其代谢；（2）高财型半胱氨酸血症及其对血管的损害；（3）高同型半胱氨酸血症的防治，许多研究资料表明，同型半胱氨酸是动脉粥样硬化的一种新的，独立的危险因子，血浆中同型半胱氨酸水平升高可产生高同型半胱氨酸血症，对血管壁和血液凝血系统造成损害，从而易于形成动脉粥样硬化，高同型半胱氨酸血症的产生可由营养因素和遗传因素引起，通过补充B族维生素可以降低血浆中的同型半胱氨酸水平。     

PM_(2.5)颗粒物引起血管内皮细胞氧化损伤的研究

目的　探索PM2. 5颗粒物引起心血管疾病的机制。方法　ECV30 4细胞暴露于不同浓度的PM2. 5颗粒物混悬液 (5 0、2 0 0、4 0 0 μg/ ml) ,染毒 2 4小时后运用MTT法测细胞存活率、测定细胞内SOD和GSH含量、并进行流式细胞仪分析凋亡来综合分析。结果　随着染毒浓度上升 ,ECV30 4细胞存活率逐渐下降 ,死亡率逐渐上升 ;染毒浓度为 5 0、2 0 0、4 0 0 μg ml,细胞内GSH含量 (mg gprot)分别为 2 0 . 6 4 3± 2 .16 7、16. 774± 2 911(P <0. 0 5 )、15. 6 5 8± 3. 4 71(P <0. 0 1) ,SOD含量 (U mgprot)为 5. 878± 0. 4 0 1、5 14 0± 0 . 4 4 8(P <0 .0 1)、4 . 817± 0 . 4 5 1(P <0 . 0 1)。结论　PM2. 5可通过氧化损伤途径使血管内皮细胞死亡 ,导致心血管疾病的发生。     

颅脑损伤患者同型半胱氨酸的变化及临床意义

目的 研究颅脑损伤患者血清同型半胱氨酸(serum homocysteine,Hcy)活性的动态变化及临床意义. 方法 90例颅脑损伤患者按照GCS评分将患者分为轻度损伤(13～15分)29例,中度损伤(9～12分)29例,重度损伤(3～8分)32例,36例健康体检者为对照组.测定颅脑损伤患者伤后3、6、12、24、48、72 h血清中Hcy水平. 结果颅脑损伤患者伤后3 h以内血清Hcy水平比正常对照组高(P<0.01),且均与患者的病情呈正相关.不同损伤程度血清Hcy水平均受病情进程的影响(P<0.01),随病情发展伤后3 h m清Hcy水平增加,但随后开始下降,于12 h降至底峰,以后逐步上升,24 h后一直维持于一高水平,至72 h也未见下降. 结论颅脑损伤患者血清Hcy水平升高,且与病情的严重程度呈正相关.而且损伤早期还与病程发展有关,这对病情的评估及治疗方案的选择有一定的指导作用.     

同型半胱氨酸对Aβ经毒性促进作用

目的 研究同型半胱氨酸是否促进β淀粉样肽(β-amyloid,Aβ)对体外培养海马细胞的神经毒性.方法 用同型半胱氨酸和/或Aβ42处理体外培养的海马细胞,观察神经细胞的凋亡情况以及神经细胞内的游离钙浓度的改变、DNA损伤和氧化损伤.结果 同型半胱氨酸(250μmol/L)和Aβ42(10μmol/L)同时作用海马细胞的凋亡率显著高于Hcy或Aβ42单独作用,甚至高于两者单独作用之和.Hcy没有促进Aβ42对DNA的作用;在神经兴奋毒和氧化损伤作用方面,同型半胱氨酸(250 μmol/L)和Aβ42 (10 μmol/L)产生了协同作用,同型半胱氨酸可促进Aβ42引发海马细胞内游离钙浓度升高和MDA的产生增多.结论 同型半胱氨酸可通过神经兴奋毒作用、氧化损伤和引发凋亡等机制促进Aβ42对体外培养海马细胞的神经毒性作用.     

同型半胱氨酸诱导胚胎基因差异表达的基因芯片研究

目的：了解基因芯片技术在筛查正常或异常胚胎发育的相关基因表达变化中的应用价值。方法：用体外全胚胎培养和含有14000条人类基因的cDNA表达谱芯片,对同型半胱氨酸（0－4mmol/L）诱导的大鼠畸形胚胎进行基因表达谱分析。结果：4mmol/L的同型半胱氨酸（HCY）能诱发体外培养的大鼠胚胎发生畸变,畸形发生率为66.7％（24／36）,显著高于对照组（P＜0.05）;基因表达谱分析发现有18条基因表达明显下调。结论：同型半胱氨酸对早期大鼠胚胎具有致畸作用;运用基因芯片技术能够有效地筛检出新的胚胎发育相关基因。     

S-腺苷蛋氨酸和叶酸抑制同型半胱氨酸诱导的海马神经细胞凋亡

目的研究S-腺苷蛋氨酸和叶酸抑制同型半胱氨酸诱导的海马神经细胞凋亡作用及其相关机制。方法用同型半胱氨酸、S-腺苷蛋氨酸和叶酸处理体外培养的海马神经细胞,观察神经细胞的凋亡情况,以及凋亡相关蛋白的表达变化。结果用250μmol/L同型半胱氨酸作用4h可使神经细胞凋亡率显著升高,并呈时间依赖性。甲基供体S-腺苷蛋氨酸和叶酸可显著抑制同型半胱氨酸引起的神经细胞凋亡。同型半胱氨酸可显著促进凋亡相关蛋白P53、Bax的表达,抑制Bcl-2的表达。S-腺苷蛋氨酸和叶酸可抑制同型半胱氨酸引起的凋亡相关蛋白表达的改变。结论S-腺苷蛋氨酸和叶酸可显著抑制同型半胱氨酸引起的神经细胞凋亡,凋亡相关蛋白表达的变化可能是S-腺苷蛋氨酸和叶酸作用的分子机制之一。     

同型半胱氨酸、半胱氨酸在动脉粥样硬化发病机制中作用的对照研究

目的以动脉粥样硬化(As)病灶中的主要细胞类型—血管平滑肌细胞为模型,对比研究同型半胱氨酸(Hcy)和半胱氨酸(Cys)在致As发病效应上的异同,以期为Hcy作为As独立危验因子的分子机制提供有比较的证据。方法体外培养人脐静脉血管平滑肌细胞(VSMCs),用不同浓度的Hcy和Cys作用于细胞24h后:(1)用分光光度比色法测定细胞中SOD和MDA的含量;(2)流式细胞术检测细胞凋亡率,半定量RT-PCR方法检测caspases-3 mRNA的表达;(3)MTT法测定细胞的增殖率;(4)用1000μmol/LHcy和Cys分别作用VSMCs24、48和72h后,MS-PCR法检测ERα启动子区甲基化的状态,半定量RT-PCR法检测ERα mRNA的表达。结果(1)Hcy可导致细胞内MDA、SOD呈剂量依赖性增加,Cys使MDA、SOD增加的效应远弱于Hcy(P<0.01)。(2)流式细胞术、caspases-3 mRNA的表达和MTT试验的结果显示,Hcy、Cys对血管平滑肌细胞凋亡率和增殖率的影响差异不太明显。(3)Hcy显著增加ERα基因启动区的甲基化修饰,并使ERα mRNA的表达进行性减少。Cys不影响ERα启动子区的甲基化状态,对ERα mRNA表达的影响也远小于Hcy。结论氧化应激对DNA甲基化修饰的影响可能在Hcy致As发病的机制中占据着重要的地位,这也可能是Hcy和Cys在As发病机制中作用不同的重要原因。     

同型半胱氨酸与妊娠期高血压

<正>关于同型半胱氨酸(HCY)诱导血管内皮损伤的机制近年来取得了许多进展,有证据表明HCY可通过氧化应激,内质网应激与解折叠蛋白应答、炎症及血栓形成等途径导致血管内皮细胞损伤,与妊娠期高血压(PIH)发病密切相关,HCY可作为PIH及其并发症评价的可靠指标。1同型半胱氨酸的生物学特性同型半胱氨酸是一种含硫氨基酸、正常机体不能     

同型半胱氨酸诱导胚胎基因差异表达的基因芯片研究

目的了解基因芯片技术在筛查正常或异常胚胎发育的相关基因表达变化中的应用价值.方法用体外全胚胎培养和含有14 000条人类基因的cDNA表达谱芯片,对同型半胱氨酸(0～4 mmol/L)诱导的大鼠畸形胚胎进行基因表达谱分析.结果4 mmol/L的同型半胱氨酸(HCY)能诱发体外培养的大鼠胚胎发生畸变,畸形发生率为66.7%(24/36),显著高于对照组(P＜0.05);基因表达谱分析发现有18条基因表达明显下调.结论同型半胱氨酸对早期大鼠胚胎具有致畸作用;运用基因芯片技术能够有效地筛检出新的胚胎发育相关基因.     

纳米氧化锌诱导血管内皮细胞凋亡及氧化应激

目的 探讨纳米氧化锌诱导血管内皮细胞(ECV304)凋亡与活性氧(ROS)的关系。方法 采用龙胆紫染色观察细胞吞噬效应;四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法测定细胞生长活性;琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡;紫外分光光度计测定超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的含量;荧光分光光度计测定ROS。结果 ECV304细胞可吞噬纳米氧化锌,实验组MTT值(0.85±0.04)、(0.56±0.03)、(0.51±0.05)、(0.45±0.044)与对照组(1.21±0.11)比较,差异有统计学意义(P<0.01);实验组ROS(33.14±0.38)、(35.82±0.61)、(54.13±0.24)、(68.81±1.24)均高于对照组(30.12±1.23);实验组SOD(25.72±0.48)、(25.64±0.36)、(25.53±0.36)、(25.25±0.44)均低于对照组(26.39±0.40);实验组MDA含量均高于对照组(0.56±0.01);a-硫辛酸组细胞凋亡率明显降低。结论 纳米氧化锌可以抑制ECV304细胞的活性,通过ROS途径诱导细胞凋亡,产生细胞毒性。     

锌对同型半胱氨酸致鼠胚心脏畸形的干预

目的探讨锌元素对同型半胱氨酸致鼠胚心脏发育畸形的影响作用及可能机制。方法Sprague-Dawley(SD)成年健康清洁级雌、雄大鼠各40只,常规方法交配获取孕鼠后,随机分为5个组:1空白对照组、2同型半胱氨酸致畸组、3锌 同型半胱氨酸组、4叶酸 同型半胱氨酸组、5叶酸 锌 同型半胱氨酸组(联合组),每组8只。各组孕鼠分别于妊娠第13、15、17、19天剖腹取出胚胎,通过切片进行胎鼠心脏组织学畸形观察。结果孕周注射同型半胱氨酸后,胚胎总畸形率与空白对照组相比显著增高(χ2=53.98,P<0.01),锌 同型半胱氨酸组与同型半胱氨酸致畸组比较,畸形率明显减少(χ2=10.50,P<0.01);各妊娠天数同型半胱氨酸致畸组胚胎心脏畸形率与空白对照组相比亦显著增高(χ2分别为5.74、9.63、5.96、10.08,均P<0.01),主要畸形表现为发育延迟、心房缺如、室间隔缺损、心室缺损及大体畸形等,锌 同型半胱氨酸组与同型半胱氨酸致畸组比较,各相应天数畸形率明显减少(χ2分别为3.77、4.30、3.83、4.02,均P<0.05)。同型半胱氨酸致畸组孕鼠血清铜锌-超氧化物歧化酶活力值较对照组比较明显下降(t=8.28,P<0.01);锌 同型半胱氨酸组与同型半胱氨酸致畸组比较铜锌-超氧化物歧化酶活力值则明显增加(t=5.54,P<0.01)。结论孕周注射同型半胱氨酸对大鼠胚胎有明显致畸作用,锌元素能够有效地拮抗同型半胱氨酸的致畸作用,并且有可能是通过抑制氧化反应的发生来发挥作用的。     

黑加仑提取物保护血管内皮细胞氧化损伤的实验研究

目的研究黑加仑提取物对过氧化氢所致血管内皮细胞ECV-304损伤的影响。方法建立体外过氧化氢损伤模型,测定细胞存活率、上清液中丙二醛(MDA)含量、乳酸脱氢酶(LDH)活力、一氧化氮(NO)、内皮素(ET)和前列环素(PGI2)含量,并运用流式细胞仪观察黑加仑提取物对过氧化氢对内皮细胞ECV-304凋亡的影响。结果黑加仑提取物各剂量都能显著提高H2O2损伤内皮细胞的存活率(P<0.05);显著抑制H2O2损伤引起内皮细胞的LDH和ET的释放(P<0.05);显著减少H2O2损伤的内皮细胞MDA的生成(P<0.05);增加H2O2损伤的内皮细胞NO和PGI2水平(P<0.05)。黑加仑提取物的各组、阳性对照组和正常对照组早期凋亡率和总凋亡率明显低于H2O2模型组(P<0.05)。结论黑加仑提取物对过氧化氢损伤的脐静脉内皮细胞ECV-304具有保护作用;黑加仑提取物可降低H2O2诱导的ECV-304凋亡的早期凋亡率和总凋亡率,以达到保护内皮细胞的作用。     

微囊藻毒素-LR诱导肝细胞氧化应激

目的 研究微囊藻毒素-LR在不引细胞毒性的剂量（3～30μg／L）时对肝细胞的氧化应激。方法以HL-7702细胞株为模型，检测细胞内的酶系统损伤情况。结果细胞内过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽（GSH）和超氧化物歧化酶（SOD）随着毒素剂量的升高和作用时间的延长而降低，而乳酸脱氢酶（LDH）渗出率及丙二醛（MDA）含量同对照组相比差异无统计学意义。结论微囊藻毒素-LR在非细胞毒性的剂量下可引起肝细胞的氧化应激，但尚不足以导致脂质过氧化。     

线粒体损伤和氧化应激的关系

线粒体是细胞供能代谢中心,同时也是众多环境化学外源物毒害作用的优先靶标。线粒体损伤包括形态结构破坏、线粒体DNA突变、ATP合成受限、钙稳态失衡、氧化应激产物积聚及代谢功能障碍。线粒体呼吸链已经被广泛证实是活性氧产生的最主要来源,过多产生的超氧化物若未被内源性抗氧化剂或相关酶清除,便会导致线粒体的氧化应激损伤和功能障碍,从而引发细胞死亡等多种病变。     

同型半胱氨酸对大鼠器官形成早期卵黄囊内吞功能的影响

应用显微解剖和移植术 ,初步建立了 9 5日龄大鼠卵黄囊 (VYS)胎盘体外培养模型 ,并观察了同型半胱氨酸 (HCY)对VYS内吞功能及生长发育的影响。结果显示 :HCY可抑制VYS的内吞功能 ,实验组与对照组相比内吞指数明显下降 (P <0 0 1) ;HCY还可抑制VYS生长及其血管形成 ,实验组的VYS直径明显小于对照组 (P <0 0 1)。结果提示 :VYS对胎盘内吞功能的损伤及对其血管形成分化的抑制作用 ,可能是HCY主要致畸机理之一。     

牛磺酸对高同型半胱氨酸鸡胚心脏畸形发生的作用

目的　探讨牛磺酸对高同型半胱氨酸 (HCY)鸡胚心脏发育及血管生成的影响。方法　种蛋经 1‰新洁尔灭清洗 ,分批入孵化箱 ,在 37 5℃、相对湿度 6 0 %的环境条件下培养。3天后用照蛋器检出活胚 ,随机分 3组 ,经卵黄囊给药 :(1)阴性对照组注射PBS ,(2 )HCY组注射HCY ,(3)牛磺酸组注射HCY +牛磺酸 ,继续培养 2d后组织病理检查。结果　HCY组器官形成期的心脏出现明显致畸 ,卵黄囊血管生成受到抑制 (P <0 0 5 ) ,心脏结构紊乱。牛磺酸的干预作用明显 ,有效的预防了HCY在器官形成期对心脏的致畸作用。结论　牛磺酸可防治HCY所引起的心脏发育障碍。     

硫酸镍对大鼠睾丸细胞氧化应激效应的影响

目的观察硫酸镍(NiSO4)亚慢性染毒后对大鼠睾丸细胞的氧化作用。方法健康雄性Wistar大鼠32只,随机分为4组:生理盐水(NS)组,硫酸镍(NiSO4)1.0,2.0,4.0 mg/kg组。腹腔注射染毒,0.2 ml/100(g.bw),1次/d,连续30 d。制备睾丸组织匀浆,采用分光光度法检测睾丸组织中脂质过氧化物(LPO)、总抗氧化能力(T-AOC)、抗-活性氧(anti-ROS)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平的变化。结果染毒组与对照组比较,大鼠睾丸脏器系数无明显变化(P>0.05)。镍可诱导睾丸组织中LPO含量升高,2.0,4.0 mg/kg NiSO4组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);2.0,4.0 mg/kg NiSO4组anti-ROS和GSH-Px活性低于对照组(P<0.01);各染毒组T-AOC均低于对照组(P<0.01)。结论镍对大鼠生殖系统的损伤可能与其所致的睾丸细胞氧化损伤有关。     

番茄红素对急性肺损伤大鼠肺氧化损伤影响

目的研究番茄红素对急性肺损伤(ALI)大鼠氧化损伤的保护作用。方法采用不同剂量番茄红素给大鼠连续灌胃35 d,然后腹腔注射脂多糖6.0 mg/(kg.bw)建立ALI模型,正常对照腹腔注射生理盐水,各组动物分别在注射后1,4和6 h摘取右肺,检测肺组织中丙二醛(MDA)和抗氧化酶含量。结果番茄红素能明显降低ALI模型大鼠肺组织中MDA的含量(P<0.01),对超氧化物歧化酶(SOD)无明显作用,但谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)含量明显增加(P<0.01)。结论番茄红素能降低脂多糖诱导ALI过程中的氧化损伤,对肺组织具有一定的保护作用。