树突状细胞体外诱导抗肿瘤免疫通过诱导肿瘤细胞凋亡抑制裸鼠移植瘤生长

研究树突状细胞（ＤＣ）体外诱导的细胞免疫抑制裸鼠移植瘤生长作用及其机理。方法：联合应用粒／巨噬细胞集落刺激因子ＫＭ－ＣＳＦ）及白介素－４（ＩＬ－４）直接从肝癌患者外周血中培养出ＤＣ,以人肝癌细胞系ＨｅｐＧ２肿瘤细胞的肿瘤抗原粗提物刺激ＤＣ,ＤＣ激活同源的Ｔ淋巴细胞,建立裸鼠人肝癌细胞系ＨｅｐＧ２移植瘤模型,以被激活的Ｔ淋巴细胞治疗裸鼠ＨｅｐＧ２移植瘤并观察治疗效果,检测移植瘤标本肿瘤细胞凋亡情况。结果：ＤＣ诱导的Ｔ细胞免疫能够诱导裸鼠人肝癌细胞系ＨｅｐＧ２移植瘤肿瘤细胞大量凋亡从而抑制裸鼠ＨｅｐＧ２移植瘤生长。结论：经肿瘤抗原激活的ＤＣ作为一新概念上的抗肿瘤疫苗有可能在肿瘤的治疗中发挥重要作用。     

树突状细胞体外诱导肝癌免疫抑制裸鼠人肝癌细胞系Hep …

为研究树突状细胞（ＤＣ）体外诱发抗肿瘤免疫能否预防裸鼠发生及抑制裸鼠移植生长，联合应用粒／巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）及白介素４（ＩＬ－４）直接从肝癌患者外周血中培养出ＤＣ；以源于人肝癌细胞系ＨｅｐＧ２的肿瘤抗原粗提物刺激ＤＣ，ＤＣ激活同源的Ｔ淋巴细胞；以被激活的Ｔ淋巴细胞预防性接种于裸鼠皮下，观察进一步接种的人肝癌细胞系ＨｅｐＧ２移植瘤发生；观察被激活的Ｔ淋巴细胞抑制已接种于裸鼠的人肝癌     

树突状细胞诱导的抗大肠癌免疫预防裸鼠移植瘤发生并抑制其生长

目的　研究大肠癌患者外周血树突状细胞（ Ｄ Ｃ）体外诱导抗肿瘤免疫反应能否预防裸鼠移植瘤发生及抑制裸鼠移植瘤生长。方法　联合应用粒／巨噬细胞集落刺激因子（ Ｇ Ｍ Ｃ Ｓ Ｆ）及白介素４（ Ｉ Ｌ４）从大肠癌患者外周血中培养出 Ｄ Ｃ;人大肠癌细胞系 Ｌ Ｏ Ｖ Ｏ 细胞的肿瘤抗原粗提物刺激 Ｄ Ｃ; Ｄ Ｃ激活同源的 Ｔ 淋巴细胞; Ｄ Ｃ激活的 Ｔ 淋巴细胞预防性接种于裸鼠皮下,观察随后接种的人大肠癌细胞系 Ｌ Ｏ Ｖ Ｏ 移植瘤发生率;观察 Ｄ Ｃ 激活的 Ｔ 淋巴细胞抑制已接种于裸鼠的人大肠癌细胞系 Ｌ Ｏ Ｖ Ｏ 移植瘤生长。结果　 Ｄ Ｃ 体外激活的 Ｔ 淋巴细胞明显能预防裸鼠人大肠癌细胞系 Ｌ Ｏ Ｖ Ｏ 移植瘤发生（预防组 １０％ , 对照组 １００％ , Ｐ＜ ０００１）; Ｄ Ｃ 体外激活的 Ｔ 淋巴细胞抑制该移植瘤生长〔对照组、治疗组 及加强 治疗组 肿瘤 大小分 别为 ８７３ｍ ｍ ２ ±１９ｍ ｍ ２ 、５６９ｍ ｍ ２ ±１７ｍ ｍ ２ 、３６１ｍ ｍ ２ ±２６ｍ ｍ ２ , Ｐ＜ ００５ 及 Ｐ＜ ００１〕。结论　大肠癌患者外周血 Ｄ Ｃ体外诱导的抗肿瘤细胞免疫反应不仅能预防人大肠癌细胞系 Ｌ Ｏ Ｖ Ｏ 裸鼠移植瘤发生,而且能抑制该移植瘤生长     

树突状细胞体外诱导抗肿瘤免疫通过诱导肿瘤细胞凋亡抑制裸鼠 …

研究突状细胞体外诱导的细胞免疫制裸鼠移植瘤生长作用及其机理。方法联合应用粒／巨噬细胞集落刺激因子及白介素－４直接从肝癌患者外周血中培养出ＤＣ,以人肝癌细胞系ＨｅｐＧ２肿瘤细胞的肿瘤抗原粗提物刺激ＤＣ,ＤＣ激活同源的Ｔ淋巴细胞,     

树突状细胞诱导抗人肝癌细胞系的肿瘤免疫

目的 以树突状细胞（ＤＣ）在体外诱导抗肝瘤免疫。方法 自肝癌患者外周血中分离ＤＣ;以粒／巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）及白介素－４（ＩＬ－４）联合刺激ＤＣ;以人肝癌细胞系ＨｅｐＧ２细胞和ＢＥＬ－７４０２细胞的肿瘤相关抗原（ＴＡＡ）激活ＤＣ;ＤＣ诱导自体Ｔ淋巴细胞增殖、分化为细胞毒素性Ｔ细胞（ＣＴＬ）;检测ＣＴＬ对ｅｐＧ２细胞,ＢＥＬ－７４０２细胞、ＳＧＣ－７９０１细胞、ＬＯＶＯ细胞及ＨＯＳ－     

树突状细胞体外诱导抗骨肉瘤免疫预防裸鼠HOS-8603移植瘤发生并抑制其生长

为研究树突状细胞（ＤＣ）体外诱导抗肿瘤细胞免疫能否预防裸鼠移植瘤发生及抑制裸鼠移植瘤生长，联合应用粒／巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）及白细胞介素－４（ＩＬ－４）直接从骨肉瘤患者外周血中培养ＤＣ；以人骨肉瘤细胞系ＨＯＳ－８６０３肿瘤细胞的肿瘤抗原粗提物刺激ＤＣ；ＤＣ与同源的Ｔ淋巴细胞共培养以激活Ｔ淋巴细胞；以ＤＣ激活的Ｔ淋巴细胞预防性接种于裸鼠皮下，观察接种的人骨肉瘤细胞系ＨＯＳ－８６０３移植瘤发生率；并观察ＤＣ激活的Ｔ淋巴细胞对ＨＯＳ－８６０３移植瘤生长的影响。发现ＤＣ激活的Ｔ淋巴细胞不仅能抑制裸鼠人骨肉瘤细胞系ＨＯＳ－８６０３移植瘤生长，而且能预防该移植瘤发生。提示经肿瘤抗原激活的ＤＣ作为一新概念上的抗肿瘤疫苗有可能在肿瘤的预防及治疗中发挥重要作用。     

树突状细胞诱导的抗肿瘤免疫预防肝癌转移

目的 探讨树突状细胞（ＤＣ）体外诱导的抗肿瘤免疫在肝癌患者体内的抗转移作用。方法 直癌患者外周血ＤＣ及Ｔ淋巴细胞,ＨｅｐＧ２细胞抗原激活ＤＣ,粒／巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素－４联合刺激ＤＣ,ＤＣ诱导自体Ｔ淋巴细胞增殖分化为细胞毒性Ｔ细胞（ＣＴＬ）,ＤＣ及其诱导的ＣＴＬ回输肝癌患者,检测肝癌患者外周血ＡＦＰ为ｍＲＮＡ。结果 ＡＦＰ ｍＲＮＡ阳性组经ＤＣ及其诱导的ＣＴＫ,治疗２月后,治疗组９例Ａ     

树突状细胞体外诱导高效而特异的抗结肠癌免疫

为达到以结肠癌患者外周血树突状细胞（ＤＣ）在体外诱导抗结肠癌免疫反应的目的，以结肠癌细胞系ＬＯＶＯ肿瘤细胞的肿瘤抗原粗提物激活并经ＧＭ－ＣＳＦ及ＩＬ－４联合刺激的结肠癌患者外周血树突状细胞（ＤＣ）体外能够诱导自体混合Ｔ淋巴细胞增殖、分化为ＣＴＬ，该ＣＴＬ及其上清液对ＬＯＶＯ肿瘤细胞均有强大的杀伤力，而对ＨｅｐＧ２肿瘤，该ＣＴＬ细胞及ＨＯＳ－８６０３肿瘤细胞仅有微弱的细胞毒作用。结果表明结肠癌患者外周血ＤＣ体外能够诱导高效而特异抗结肠癌免疫反应。提示ＤＣ作为一新概念上的肿瘤疫苗可能在肿瘤治疗及预防中发挥重要作用     

树突状细胞体外诱导抗肝癌免疫抑制裸鼠人肝癌细胞系HepG2移植瘤发生与生长

为研究树突状细胞(DC)体外诱导抗肿瘤免疫能否预防裸鼠移植瘤发生及抑制裸鼠移植瘤生长,联合应用粒/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)及白介素4(IL-4)直接从肝癌患者外周血中培养出DC;以源于人肝癌细胞系HepG2的肿瘤抗原粗提物刺激DC,DC激活同源的T淋巴细胞;以被激活的T淋巴细胞预防性接种于裸鼠皮下,观察进一步接种的人肝癌细胞系HepG2移植瘤发生;观察被激活的T淋巴细胞抑制已接种于裸鼠的人肝癌细胞系HepG2移植瘤生长.发现,DC诱导的抗肿瘤免疫不仅能预防裸鼠人肝癌细胞系HepG2移植瘤发生,而且能抑制该移植瘤生长.提示经肿瘤抗原激活的DC作为一新概念上的抗肿瘤疫苗有可能在肝癌的预防及治疗中发挥重要作用.     

树突状细胞诱导抗裸鼠人肝癌移植瘤免疫

[目的]讨究树突状细胞（DC）体外诱导的抗肝癌细胞免疫能否预防裸鼠人肝癌移植癌发生及抑制课鼠人肝癌移植瘤生长。[方法]联合应用粒／巨噬细胞集落刺激因子（GM－CSF）及白介素－4（IL－4）直接从肝癌患者外周血中培养DC：以人肝癌细胞系HepG2肿瘤细胞的肿瘤抗原粗提物刺激DC；DC激活同源的T淋巴细胞产生细胞毒性T淋巴细胞（CYL）；以DC激活的CIL预防性接种于探鼠皮下观察其后接种的人肝癌细胞系HepG2移植瘤发生率；并观察该CTL对已接种裸鼠的人肝癌细胞系HepG2移植瘤生长的影响。[结果]DC诱导的工体外对HepG2肿瘤细胞具有高效而特异杀伤作用，在裸鼠体内不能预防探鼠人肝癌细胞系HepG2移植瘤发生，而且能抑制该移植瘤生长。[结论]经肝癌肿瘤相关抗原激活的肝癌患者外用血DC体外诱导的抗肿瘤细胞免疫在体内外均具有良好的抗肿瘤作用。提示DC作为一新概念上的抗肿瘤疫苗有可能在人肝癌的预防及治疗中发挥重要作用。     

脐带血树突状细胞对小鼠S-180移植瘤的作用研究

目的 :观察脐带血树突状细胞对小鼠S - 180细胞株移植瘤的作用。方法 :采用脐带血来源的单核细胞制备树突状细胞 ,体外经S - 180细胞肿瘤相关抗原 (TAA)致敏后免疫小鼠 ,一周后接种S - 180细胞株。或先制备荷瘤小鼠模型 ,一周后再接种致敏树突状细胞。结果 :脐带血来源的树突状细胞经胃癌细胞系S - 180的TAA致敏后既能明显保护小鼠该移植瘤的发生 ,又能抑制已发生移植瘤的生长。同对照组相比 ,预防组和治疗组的瘤体积明显缩小 ,细胞免疫功能趋于正常 ,生存期延长 (P <0 0 5 )。结论 :脐带血树突状细胞对小鼠S - 180移植瘤的发生有预防作用 ,对荷瘤小鼠移植瘤的生长有抑制作用 ,为树突状细胞的临床应用提供了进一步的依据     

膀胱肿瘤抗原致敏的树突状细胞诱导 T 淋巴细胞抗肿瘤效应的研究

目的：研究经膀胱肿瘤抗原致敏后的树突状细胞（Dc）对T淋巴细胞的激活、增殖作用及对T24膀胱肿瘤细胞的抑癌效应。方法：分离健康供血者外周血单个核细胞及T淋巴细胞，联合应用粒／巨噬细胞集落刺激因子（GM—CSF）及白介素-4（IL-4）从单个核细胞中培养出Dc，以人膀胱癌细胞系T24肿瘤细胞裂解物刺激Dc，检测经膀胱肿瘤抗原致敏后的DC对T淋巴细胞的细胞增殖动力学影响并用M1rr显色法测定致敏Dc诱导的T淋巴细胞对T24膀胱肿瘤细胞体外的抗肿瘤效应。结果：膀胱癌细胞裂解物致敏的Dc可诱导T淋巴细胞强烈的增殖反应，与对照组比较具有显著性差异（P〈0．01）；增殖后的T淋巴细胞对T24膀胱肿瘤细胞有明显的细胞毒作用。结论：经膀胱肿瘤抗原致敏的Dc能诱导产生显著的T淋巴细胞增殖，在体外有明显的抑癌效应。     

膀胱肿瘤抗原致敏的树突状细胞诱导T淋巴细胞抗肿瘤效应的研究

目的：研究经膀胱肿瘤抗原致敏后的树突状细胞（Dc）对T淋巴细胞的激活、增殖作用及对T24膀胱肿瘤细胞的抑癌效应。方法：分离健康供血者外周血单个核细胞及T淋巴细胞，联合应用粒／巨噬细胞集落刺激因子（GM—CSF）及白介素-4（IL-4）从单个核细胞中培养出Dc，以人膀胱癌细胞系T24肿瘤细胞裂解物刺激Dc，检测经膀胱肿瘤抗原致敏后的DC对T淋巴细胞的细胞增殖动力学影响并用M1rr显色法测定致敏Dc诱导的T淋巴细胞对T24膀胱肿瘤细胞体外的抗肿瘤效应。结果：膀胱癌细胞裂解物致敏的Dc可诱导T淋巴细胞强烈的增殖反应，与对照组比较具有显著性差异（P〈0．01）；增殖后的T淋巴细胞对T24膀胱肿瘤细胞有明显的细胞毒作用。结论：经膀胱肿瘤抗原致敏的Dc能诱导产生显著的T淋巴细胞增殖，在体外有明显的抑癌效应。     

Dendritic cells transduced with tumor-associated antigen gene elicit potent therapeutic antitumor immunity: comparison with immunodominant peptide-pulsed DCs

Several studies have shown that vaccine therapy using dendritic cells (DCs) pulsed with specific tumor antigen peptides can effectively induce antitumor immunity. Peptide-pulsed DC therapy is reported to be effective against melanoma, while it is still not sufficient to show the antitumor therapeutic effect against epithelial solid tumors such as gastrointestinal malignancies. Recently, it has been reported that vaccine therapy using DCs transduced with a surrogate tumor antigen gene can elicit a potent therapeutic antitumor immunity. In this study, we investigated the efficacy of vaccine therapy using DCs transduced with the natural tumor antigen in comparison with peptide-pulsed DCs. DCs derived from murine bone marrow were adenovirally transduced with murine endogenous tumor antigen gp70 gene, which is expressed in CT26 cells, or DCs were pulsed with the immunodominant peptide AH-1 derived from gp70. We compared these two cancer vaccines in terms of induction of antigen-specific cytotoxic T lymphocyte (CTL) responses, CD4+ T cell response against tumor cells, migratory capacity of DCs and therapeutic immunity in vivo. The cytotoxic activity of splenocytes against CT26 and Meth-A pulsed with AH-1 in mice immunized with gp70 gene-transduced DCs was higher than that with AH-1-pulsed DCs. CD4+ T cells induced from mice immunized with gp70 gene-transduced DCs produced higher levels of IFN-gamma by stimulation with CT26 than those from mice immunized with AH-1-pulsed DCs (p < 0.0001), and it was suggested that DCs transduced with tumor-associated antigen (TAA) gene induced tumor-specific CD4+ T cells, and those CD4+ T cells played a critical role in the priming phase of the CD8+ T cell response for the induction of CD8+ CTL. Furthermore, DCs adenovirally transduced with TAA gene showed an enhancement of expression of CC chemokine receptor 7 and improved the migratory capacity to draining lymph nodes. In subcutaneous models, the vaccination using gp70 gene-transduced DCs provided a remarkably higher therapeutic efficacy than that using AH-1-pulsed DCs. These results suggested that vaccine therapy using DCs adenovirally transduced with TAA gene can elicit potent antitumor immunity, and may be useful for clinical application.     

Antitumor Activity of Lentivirus-mediated Interleukin -12 Gene Modified Dendritic Cells in Human Lung Cancer in Vitro

Objectives: Dendritic cell (DC)-based tumor immunotherapy needs an immunogenic tumor associatedantigen (TAA) and an effective approach for its presentation to lymphocytes. In this study we explored whethertransduction of DCs with lentiviruses (LVs) expressing the human interleukin-12 gene could stimulate antigenspecificcytotoxic T cells (CTLs) against human lung cancer cells in vitro. Methods: Peripheral blood monocytederivedDCs were transduced with a lentiviral vector encoding human IL-12 gene (LV-12). The anticipated targetof the human IL-12 gene was detected by RT-PCR. The concentration of IL-12 in the culture supernatant of DCswas measured by ELISA.Transduction efficiencies and CD83 phenotypes of DCs were assessed by flow cytometry.DCs were pulsed with tumor antigen of lung cancer cells (DC+Ag) and transduced with LV-12 (DC-LV-12+Ag).Stimulation of T lymphocyte proliferation by DCs and activation of cytotoxic T-lymphocytes (CTL) stimulatedby LV-12 transduced DCs pulsed with tumor antigen against A549 lung cancer cells were assessed with methylthiazolyltetrazolium (MTT). Results: A recombinant lentivirus expressing the IL-12 gene was successfullyconstructed. DC transduced with LV-12 produced higher levels of IL-12 and expressed higher levels of CD83than non-transduced. The DC modified by interleukin -12 gene and pulsed with tumor antigen demonstratedgood stimulation of lymphocyte proliferation, induction of antigen-specific cytotoxic T lymphocytes and antitumoreffects. Conclusions: Dendritic cells transduced with a lentivirus-mediated interleukin-12 gene have anenhanced ability to kill lung cancer cells through promoting T lymphocyte proliferation and cytotoxicity.     

K-ras 抗原致敏的DC诱导CTL 对胰腺癌体内杀伤活性的研究*

目的:研究K-ras多肽的致敏树突状细胞（DC）活化的特异性细胞毒性T 淋巴细胞（CTL）对胰腺癌的体内外杀伤作用。方法:联合应用粒细胞- 巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素-4 诱导培养外周血DC。表达K-ras突变体的胰腺癌细胞株全瘤、单纯K-ras突变体多肽和K-ras突变体表位肽阳离子纳米颗粒分别致敏DC。致敏DC刺激T 淋巴细胞得到肿瘤抗原特异的细胞毒性T 淋巴细胞（CTL）。 Patu 8988、SW1990细胞系制备荷瘤裸鼠模型评价CTL 体内抗肿瘤活性。结果:负载全瘤抗原的DC其诱导产生的CTL 对胰腺癌有较好的抑制,负载单纯K-ras（12-Val ）突变体多肽、K-ras（12-Val ）突变体表位肽阳离子纳米颗粒的DC其诱导产生的CTL 对表达K-ras（12-Val ）突变体阳性（Patu 8988）的胰腺癌有较特异的抑制作用,而对K-ras（12-Val ）突变体阴性（SW1990）的胰腺癌的抑制作用与对照组比较无显著性差异。结论:负载肿瘤抗原的DC诱导的CTL 可显著提高对荷瘤裸鼠的生存时间,抑制肿瘤的生长速度,并显示其可增加抗肿瘤特异性。      

DC 荷载α－GalCer 联合肿瘤特异性 CTL 对小鼠 Heps 肝癌移植瘤生长的影响

目的：探讨树突状细胞（DC）荷载α－半乳糖神经酰胺（α－GalCer）联合肿瘤特异性细胞毒 T 淋巴细胞（CTL）对小鼠 Heps 肝癌移植瘤生长的抑制作用。方法：诱导扩增小鼠骨髓来源的 DC 细胞和 T 淋巴细胞,培养成为具有肿瘤特异性的 CTL,DC 细胞体外荷载α－GalCer。建立 Heps 肝癌移植瘤模型,将36只模型鼠随机分为4组（n ＝9）,分别尾静脉给予生理盐水（对照组）、CTL（CTL 组）、DC 荷载α－GalCer（DC 荷载α－GalCer 组）、DC 细胞荷载α－GalCer ＋CTL（联合治疗组）输注。每隔两天测量移植瘤体积,观察体积变化。于治疗后第14d,处死小鼠,取眼球血及瘤体组织。流式细胞术（FCM）检测外周血 CD4＋、CD8＋ T 细胞比例。免疫组织化学染色观察肿瘤组织中 Bcl －2／Bax 凋亡蛋白的表达。结果：与对照组相比,各治疗组均可抑制肿瘤的生长,差异具有统计学意义（P ＜0．01）;联合治疗组较 DC 荷载α－GalCer 组及 CTL 组肿瘤体积明显减小（P ＜0．05）。联合治疗组小鼠外周血 CD4＋、CD8＋ T 细胞数量较另外三组显著升高（P ＜0．05）;对照组、CTL组、DC 荷载α－GalCer 组小鼠外周血中 CD4＋、CD8＋ T 细胞含量无明显差异（P ＞0．05）。与对照组相比,各治疗组移植瘤内 Bax 阳性细胞数量明显增加（P ＜0．05）,Bcl －2阳性细胞数量明显减少（P ＜0．05）;与 CTL组和α－GalCer 组相比,联合治疗组移植瘤内 Bax 阳性细胞明显增加（P ＜0．05）,Bcl －2阳性细胞明显下降（P ＜0．05）。结论：DC 荷载α－GalCer 与肿瘤特异性 CTL 联合应用能够对小鼠 Heps 肝癌移植瘤具有协同杀伤作用。     

凋亡肿瘤细胞致敏的树突状细胞疫苗治疗肺癌的实验研究

目的：用凋亡肿瘤细胞致敏的树突状细胞（dendritic cells，DCs）激发肿瘤抗原特异性的细胞毒T细胞（cytotoxic T lymphocytes，CTL）活性，观察其体内外抗肺癌的特性。方法：常规方法从健康人外周血单个核细胞中诱导DCs，采用或不采用凋亡肿瘤细胞负载DCs，并利用激发型CD40单克隆抗体（CD40mAb）诱导DCs成熟；成熟DCs与自体T细胞共育，分别获得Ag-CTL及non-Ag-CTL，流式细胞仪检测Ag-CTL细胞表型的变化；^3H-TdR掺入法测定DNA片段形成率；建立人肺癌细胞株A549荷瘤裸鼠模型，过继回输Ag-CTL和non-Ag-CTL，评价其在体内的抗肿瘤活性。结果：CD40mAb激发可使DCs上调CD1a、CD80、CD86、CD83、HLR-DR的表达；凋亡肿瘤细胞负载联合CD40mAb激发可进一步促进DCs的成熟；成熟DCs和自体的T细胞共育活化后CD8^＋T细胞明显上调；Ag—CTL对A549具有高效特异的杀伤力，明显强干Ag-CTL对肝癌细胞株HepG2的作用（P〈0．01），且Ag-CTL对A549的杀伤力明显强于non—Ag-CTL（P〈0．01），而non-Ag-CTL对A549及HepG2细胞的杀伤力无显著性差异；体内实验表明，Ag-CTL可有效抑制裸鼠皮下移植瘤的生长，与生理盐水组（NS组）、non-Ag-CTL组相比在统计学意义上有显著差异（P〈0．05），non-Ag-CTL组与NS组相比在统计学意义上有差异（P〈0．05）。结论：凋亡肿瘤细胞致敏的树突状细胞疫苗激发的Ag—CTL在体内外均呈现抑制肺癌细胞的特性。