抗氧化剂阻抑肿瘤坏死因子诱导的U937细胞凋亡

目的：探讨抗氧化剂对肿瘤坏死因子(TNF)诱导的U937细胞凋亡的作用。方法：首先用TNF处理U937细胞，提取小片段DNA进行DNA断裂分析；继而以不同抗氧化剂和TNF与U937细胞共同孵育，用台盼蓝拒染法得到细胞存活曲线，并通过RT-PCR、Western blotting检测细胞的bcl-2表达。结果：抗氧化剂可抑制TNF诱导的U937细胞凋亡，上调bcl-2的表达．结论：活性氧中间产物是TNF诱导细胞凋亡的中介体之一。     

细胞同步化对肿瘤坏死因子诱导Hela细胞凋亡的影响

目的 研究细胞周期时相对肿瘤坏死因子（TNF）诱导Hela细胞凋亡的影响。方法 应用胸腺嘧啶核苷（TdR）双阻断法将培养的Hela细胞同步化,采用MTT法、流式细胞术和荧光染色,分析同步化的Hela细胞和正常培养的Hela细胞对TNF（加放线菌酮增效）诱导凋亡的敏感性。结果 同步化Hela细胞较正常培养的Hela细胞对TNF诱导调亡的敏感性增强。结论 TNF诱导Hela细胞凋亡与细胞周期有关。     

可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导肝癌细胞凋亡的研究

方法 采用原位杂交方法检测肝癌组织、肝癌细胞株以及正常肝组织中TRAILR的表达。采用不同浓度TRAIL蛋白处理肝癌细胞株Hep2和SMMC7721,应用流式细胞仪和原位末端标记,观察经药物处理前后该细胞株的凋亡发生率。结果 60例肝癌组织及20例正常肝组织均表达死亡受体DR5和DR4,但肝癌组织DR表达量显著强于正常肝组织。54例(90．0％)肝癌组织不表达诱捕受体DcR1,25例(41．7％)肝癌组织不表达DcR2,而20例正常肝组织均表达DcR。肝癌组织中DR的高表达及DcR的低表达,不同于正常肝组织中DR的低表达及DcR的高表达,两者间差异有显著性。两种肝癌细胞株中均可检测到DR5、DR4、DcR2的表达,但DcR1表达缺失。肝癌组织中DR的表达与肿瘤的分化、肿瘤分期有关,低分化的肿瘤DR表达减少(P＜0．01),Ⅲ、Ⅳ期肿瘤DR表达显著低于I、Ⅱ期(P＜0．05)。DR表达与患者的性别、年龄、HBsAg阳性与否、AFP水平、肿瘤大小以及是否转移无关。经TRAIL(100ng/ml)处理24h,肝癌细胞凋亡发生率约10％,而Jurkat细胞凋亡率达70％以上,胆管癌细胞QBC939凋亡发生率约50％。结论 肝细胞肝癌普遍存在TRAILR的表达,并存在受体类型的表达差异。但单一的TRAIL治疗只能有限的诱导肝癌细胞HepG2、SMMC7721发生凋亡,HCC对TRAIL诱导的凋亡存在耐药现象。     

细胞周期对肿瘤坏死因子诱导Hela 细胞凋亡的影响

 目的　研究细胞周期对肿瘤坏死因子 ( TNF)诱导 Hela细胞凋亡的影响。方法　通过胸腺嘧啶核苷酸 ( Td R)阻断法阻滞 Hela细胞的细胞周期 ,以 MTT法、流式细胞术和荧光染色分析 Td R阻滞细胞和周期化的 Hela细胞对 TNF诱导凋亡的敏感性。结果　Td R阻滞细胞周期较周期化的 Hela细胞对 TNF诱导的凋亡的敏感性降低。结论　揭示 TNF诱导 Hela细胞凋亡与细胞周期有关.     

肿瘤坏死因子-α诱导人胃癌细胞凋亡的实验研究

目的　探讨肿瘤坏死因子 -α(TNF -α)对人胃癌细胞的作用及规律。方法　用不同浓度的TNF -α作用于胃癌细胞 ,48小时后 ,观察细胞生长和凋亡的情况。结果　加入不同浓度的TNF -α后 ,胃癌细胞的生长出现不同程度的抑制和凋亡 ,且TNF -α的浓度愈高 ,细胞相对抑制愈高。结论　TNF -α能诱导胃癌细胞凋亡 ,抑制细胞生长 ,并在一定的范围内存在剂量效应关系。     

β肿瘤坏死因子诱导细胞凋亡的信号传导研究

本文采用与各种细胞信号传导相关的抑制剂阻断重组人β肿瘤坏死因子(rhTNF-β)对1929靶细胞的杀伤作用、并配合荧光染色、DNA电泳和FCM等实验手段,检测rhTNF-β)引起L929细胞凋亡及加入抑制剂以后的变化,这为研究TNF-β在杀伤肿瘤细胞过程中信号传导的特征提供了基础资料.hTNF-β为本实验室自行重组并纯化之产品,比活性5×10~5U/mg.信号传导仰制剂包括:Genistein (酪氨酸激酶抑制剂);Indomethacin(磷脂酶抑制剂);Quinacrine(磷脂酶抑制剂);Staurosporine(蛋白激酶 C抑制剂); TMB8(钙桔抗剂和蛋白激酶抑制剂);TPCK(丝氨酸蛋白激酶抑制剂); Verapamil(钙通道阻断剂); Wortmannin(磷脂酶 A2抑制剂)均为Sigma产品.采用:①信号传导阻断试验:将L929细胞加入96孔细胞培养板内,每孔1.5×10~4/0.1 ml/孔,培养12h后换以新鲜培养液,并加入50μl各种抑制剂及50μl rhTNF-β(终浓度62 U/ml),另设 rhTNF-β及1640培养液的对照孔.继续培养48h,用结晶紫染色方法计算存活率.②荧光染色:用以上相同的方法处理1929细胞,然后用PI及FDA双染色,荧光显微镜观察.③DNA电泳:经处理的L929细胞,通过     

肿瘤坏死因子—α诱导人胃癌细胞凋亡的实验研究

目的 探讨肿瘤坏死因子-α（TNF-α）对人胃癌细胞的作用及规律。方法 用不同浓度的TNF-α作用于胃癌细胞，48小时后，观察细胞生长和凋亡的情况。结果 加入不同浓度的TNF-α后，胃癌细胞的生长出现不同程度的抑制和凋亡，且TNF-α的浓度愈高，细胞相对抑制愈高。结论 TNF-α能诱导胃癌细胞凋亡，抑制细胞生长，并在一定的范围内存在剂量效应关系。     

三氧化二砷与重组人肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体协同诱导胃癌细胞凋亡的机制

目的 探讨三氧化二砷(As2O3)和重组人肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体(rhTRAIL)协同诱导胃癌细胞SGC7901凋亡的机制.方法 分别以As2O3、rhTRAIL及两者联合处理人胃腺癌细胞株SGC7901,用AnnexinV-FITC/PI双染色流式细胞术检测细胞凋亡,用DiOC6荧光染色流式细胞术检测细胞线粒体跨膜电位(△Ψm),比色法测定细胞Caspase-8、9活性的变化,观察Caspase-8阻断剂(Z-IETD-fmk)与二硫基还原剂(DTT)对SGC7901细胞凋亡、ΔΨm和Caspase-8、9活性变化的影响.结果 As2O3和rhTRAIL均可以导致SGC7901细胞ΔΨm 随时间延长逐渐下降,两者联用可增加SGC7901细胞ΔΨm下降.Caspase-8阻断剂Z-IETD-fmk可减少rhTRAIL诱导的SGC7901细胞发生凋亡与ΔΨm下降,但不影响As2O3的上述作用.二硫基还原剂(DTT)可减少As2O3诱导的SGC7901细胞凋亡与ΔΨm下降,但不影响rhTRAIL的上述作用.As2O3可导致SGC7901细胞Caspase-9活性升高,这种作用可被二硫基还原剂部分取消,但不受Caspase-8阻断剂的影响;rhTRAIL可导致SGC7901细胞Caspase-8、9活性升高,这种作用可被Caspase-8阻断剂部分取消,但不受二硫基还原剂的影响.结论 As2与rhTRAIL通过不同机制激活SGC7901细胞凋亡的线粒体途径,两者联合增强了线粒体途径的激活,从而在诱导胃癌细胞凋亡方面形成协同作用.     

喷他脒增强K562细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导凋亡敏感性

背景与目的：肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）是一种理想的抗肿瘤药物，但许多肿瘤细胞常对TRAIL。诱导凋亡耐受。本研究探讨了喷他脒增强白血病K562细胞对TRAIL。诱导凋亡敏感性方法：利用光镜彤态学和Annexin V FITC／PI双标记凋亡细胞的流式细胞仪（FACS）测定两种方法观察喷他脒预处胛K562细胞并继用TRAIL后凋亡的发生，应用蛋白印迹方法观察此过程中半胱氯酸一天冬氨酸蛋白酶（Caspase）-3，-8和聚ADP核糖聚合酶（PARP）等3种蛋白的蛋白剪切与X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）蛋白表达的改变，结果：在10μg／ml喷他脒作用K562细胞20h，K562细胞未发生凋亡，继用200ng／ml TRAIL。作用4h后，光镜和Annexin V FITC／PI双标记流式细胞仪方法均观察到细胞发生明显凋亡，井出现了Caspase-3，-8和PARP蛋白剪切．两者单独作用则无明显细胞凋亡发生．另外，喷他脒明显降低了XlAP表达结论：喷他眯联合TRAIL可能成为肿瘤治疗的一种新策略。     

姜黄素联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对前列腺癌细胞的抑制作用

目的:探讨姜黄素(curcumin,Cur)联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)对前列腺癌细胞的抑制作用。方法:CCK-8法测定Cur、TRAIL及Cur联合TRAIL作用于PC-3细胞后的细胞生存率,流式细胞技术测定细胞周期及凋亡率,光学显微镜下观察细胞形态,Western blot检测凋亡蛋白caspase-3表达水平的变化。结果:与对照组比较,Cur联合TRAIL组能显著抑制PC-3细胞增殖(P<0.05),呈时间依赖性,且使PC-3细胞阻滞于G2/M期比例明显增多(P<0.05)。镜下可见联合应用Cur和TRAIL处理的PC-3细胞凋亡形态改变明显,凋亡率较对照组高(P<0.05),凋亡蛋白caspase-3表达也增强。结论:Cur与TRAIL联用可明显增强PC-3细胞抑制效果和诱导凋亡作用,其凋亡作用机制可能与其上调caspase-3表达有关。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对非小细胞肺癌细胞凋亡诱导的基础研究

目的:观察肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对非小细胞肺癌小鼠模型肿瘤细胞凋亡诱导的作用。方法:30只小鼠接种浓度为5×106/ml非小细胞肺癌细胞Tc-1。荷瘤小鼠随机分为6组（空白对照组和5种浓度rhTRAIL实验组）。空白对照组每天注射一次灭菌生理盐水,实验组每天注射浓度不同的rhTRAIL溶液,各组均连续注射15d。每2d测量小鼠肿瘤长短直径,计算肿瘤体积。取小鼠脾脏细胞培养,测量培养液上清TNF-α浓度。结果:rhTRAIL给药组小鼠肿瘤体积明显低于空白对照组（P<0.05）,随着rhTRAIL浓度的增加,肿瘤体积相应减小;小鼠的Tc-1细胞凋亡率随着rhTRAIL浓度增高,其凋亡率逐渐升高;rhTRAIL给药组小鼠的TNF-α浓度均明显高于空白对照组,组间差异具有显著性（P<0.05）。结论:rhTRAIL能有效增强非小细胞肺癌小鼠体内的细胞因子分泌,诱导荷瘤小鼠的肿瘤细胞凋亡,表明rhTRAIL对非小细胞肺癌小鼠的肿瘤细胞具有一定的抑制作用。     

肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体对胰腺癌细胞抗肿瘤作用的研究

Objective To investigate the antitumor effect of tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL)gene transfection mediated by adenovirus into human pancreatic carcinoma cell line Panc-1, and the mechanisms involved in this effect. Methods TRAIL gene was transfected into pancreatic cancer cell line Panc-1 by an adenovirus vector (Ad-TRAIL).Level of TRAIL mRNA expression was determined using RT-PCR, and TRAIL protein synthesis was evaluated with Western blot. Cell-growth activities were determined by MTT assay. The bystander effect was observed by co-culturing the Panc-1cells with the transfected TRAIL gene at different ratios. Apoptosis in pancreatic cancer cells was detected by flow cytometry.Procaspase-8 and procaspase-3 were determined by Western blot. Results The stable overexpression of TRAIL was detected in Panc-1 cells transfected by Ad-TRAIL. Ad-TRAIL significantly inhibited of cell viability of Panc-1 cells. Furthermore,co-culture of cancer cells transfected with TRAIL with that nontransfected resulted in the cell death of both cells by bystander effect. Moreover, the percentage of apoptotic cells was significantly higher in the Ad-TRAIL-treatment group compared to the control groups (P ＜ 0.01). And there was a diminished amount of procaspase-8 and procaspase-3 after infection with Ad-TRAIL. Conclusion The overexpression of TRAIL gene in Panc-1 cells by Ad-TRAIL exerts its antitumor effects, and themechanisms involved in this effect may be proapoptosis and bystander effect.     

乳腺癌细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体耐受的分子机制

0引言 肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)是淋巴细胞分泌的一种能诱导肿瘤细胞凋亡的细胞因子,但是由于TNF对正常细胞也有同样的细胞毒性,因而限制了TNF的临床应用.1996年Pitti等[1]研究发现另外一种能特异性诱导肿瘤细胞凋亡的TNF家族成员,这个成员就是肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL),由于TRAIL具有很强的诱导肿瘤细胞凋亡能力而对大部分正常细胞毒性非常低,因而使用TRAIL进行肿瘤治疗引起广泛的关注.     

华蟾素诱导U937细胞凋亡及其作用机制

目的：研究华蟾素诱导白血病U937细胞凋亡，探讨其可能的作用机制。方法：MTT法检测细胞存活率，瑞氏染色及荧光染色观察细胞凋亡形态学改变，琼脂糖凝胶电泳观察DNA片段化改变，TdT原位标记计算凋亡率，流式细胞术检测bcl-2表达，半定量RT-PCR检测Fas和Fas-1 mRNA水平。结果：与对照组相比，0．225～1．8μg/mL华蟾素作用1-3d明显抑制U937细胞生长，具有剂量．时间相关性，24h时的IC50为1．36μg/mL。0．9μg/mL华蟾素作用1d，U937细胞出现凋亡典型形态学改变；DNA电泳出现凋亡特有“梯子”条带。0．225、0．45和0．9μg/mL华蟾素作用1d，TdT原位标记检测凋亡率分别为4．8％、13．57％和24．33％。凋亡细胞bcl-2表达及Fas-1 mRNA水平下降，Fas mRNA水平增高。结论：华蟾素可能通过抑制bcl-2、Fas-1基因及活化Fas基因的途径来抑制U937细胞生长并诱导凋亡。     

肿瘤坏死因子诱导HL60细胞凋亡时核基质的改变及意义

已知核基质的功能与细胞的分化、增殖等生命活动过程有关,且与细胞的癌变和凋亡有关[1],我们比较了肿瘤坏死因子诱导HL60细胞凋亡前及凋亡时核基质的改变,并分析了核基质蛋白在HL60细胞凋亡过程的可能作用及其意义。材料与方法1．HL60细胞的培养的准备：HL60细胞为本实验室冻存复苏,细胞培养用RPMI1640液、小牛血清10％、青霉素100u／ml、链霉素ug／ml,培养条件：温度37℃、湿度100％、CO25％。2．肿瘤坏死因子诱导HL60细胞调亡：参照文献Voelkd．Johnson等［’j介绍的方法,用还原反应测定肿瘤细胞存活率,细胞DNA的提取及琼…     

肿瘤坏死因子诱导K562细胞凋亡过程中核基质的改变及意义

真核细胞核内的核基质结构和功能复杂,已知核基质的功能与细胞的分化、增殖等生命活动过程有关,且与细胞的癌变和凋亡有关[1],我们比较了肿瘤坏死因子诱导K562细胞凋亡前及凋亡过程核基质蛋白的改变,并分析了核基质蛋白在K562细胞凋亡过程的可能作用及其意义.     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体在肿瘤治疗中的研究进展

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）基因能选择性地杀伤肿瘤细胞而对多数正常细胞没有细胞毒性。TRAIL与肿瘤放疗化疗联合具有协同效应,可为肿瘤的治疗提供新的途径和方向。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对肿瘤细胞PRDXs表达影响的观察

目的:探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对肿瘤细胞中过氧化氧化还原蛋白(PRDXs)表达的影响及其机制。方法:选取肿瘤细胞,设立对照组和TRAIL处理组;用实时定量PCR法和蛋白质印迹法检测PRDXs在各种肿瘤细胞中的表达;用PCR法克隆PRDX4启动子,用萤光素酶含量测定其含量。结果:与对照组相比,TRAIL处理组中PRDX1、PRDX2、PRDX3、PRDX5和PRDX6mRNA及蛋白表达差异无统计学意义,P>0.05;PRDX4mRNA和蛋白的表达显著降低,P<0.01;放线菌素D处理8h时,TRAIL处理组与对照组中PRDX4mRNA降解近50%,差异无统计学意义,P>0.05;TRAIL显著降低pPRDX4/-979的活性呈剂量依赖方式。结论:TRAIL在转录水平上下调肿瘤细胞中PRDX4基因的表达,对PRDX4mRNA的稳定性没有影响。     

蒽贝素协同增强肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体诱导乳腺癌细胞凋亡性死亡的实验北大核心CSCD

目的研究小分子化合物蒽贝素(Embelin)是否能协同增强肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)诱导乳腺癌细胞MDA-MB-231的凋亡性死亡。方法应用Embelin、TRAIL或者联合应用分别处理MDA-MB-231细胞。MTT法测定药物处理的细胞毒性,APOP-BRDU试剂盒及流式细胞仪测定细胞凋亡率,Western blot观察Caspase3,9和PARP的表达水平。半定量PCR和Western blot分别观察Embelin处理以后X连锁的凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)mRNA、蛋白表达水平的变化。结果 MDA-MB-231细胞呈TRAIL部分耐药,Embelin的细胞毒性在MDA-MB-231细胞呈浓度依赖性。亚毒性浓度的Embelin能显著增强TRAIL诱导的细胞毒性、凋亡率、Caspase 3,9的活化和PARP的切割。但是,亚毒性浓度的Embelin未直接改变XIAP的蛋白和mRNA表达水平。结论 Embelin能显著增强TRAIL诱导的乳腺癌细胞MDA-MB-231的凋亡性死亡。     

藤黄酸联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡的效果和机制

背景与目的：肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL）能选择性地杀伤肿瘤细胞,但多种肿瘤对其耐药。该研究旨在探讨藤黄酸（gambognic acid,GA）与TRAIL联合对人结肠癌HT-29细胞裸鼠移植瘤生长的影响及GA联合TRAIL抗结肠癌的作用机制。方法: 建立人结肠癌HT-29细胞裸鼠皮下移植瘤模型,测定TRAIL和（或）GA对裸鼠移植瘤的影响,采用H-E染色观察肿瘤组织形态结构改变,TUNEL法检测细胞凋亡状况;HT-29细胞经过siRNA干扰Nrf2表达后,通过AnnexinⅤ-FITC/PI双染检测细胞凋亡情况,流式细胞术检测细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）含量,RT-PCR法检测Nrf2、Bcl-2、Bax和DR5 mRNA的表达水平。结果: 联合应用GA显著促进了TRAIL对裸鼠皮下移植瘤的生长抑制（抑瘤率达67.0%）和诱导凋亡作用,下调了组织中Nrf2、Bcl-2的表达,增强了Bax和DR5的表达;与阴性对照siRNA相比,Nrf2干扰能明显上调TRAIL诱导HT-29细胞的凋亡率,提高ROS含量,下调Nrf2和Bcl-2表达,上调Bax和DR5表达。结论: GA可能是通过下调Nrf2表达,使ROS水平升高而激活线粒体凋亡途径与死亡受体途径,从而逆转人结肠癌HT-29细胞体内外对TRAIL的耐药性。