pSilencer4.1-cmv-TrkC质粒对前列腺癌细胞株PC3增殖的影响

[目的]通过pSilencer4.1-cmv-TrkC siRNA干涉质粒转染下调人前列腺癌细胞系PC3中酪氨酸激酶受体C(tyrosine lcinase C,TrkC)的表达,观察TrkC在前列腺癌细胞中的作用.[方法]根据TrkC基因序列设计并合成siRNA,构建质粒.用脂质体将pSilencer/TrkC和对照空载体pSilencer转染人前列腺癌细胞系PC3,通过Western blotting检测转染细胞的TrkC表达情况,绘制细胞生长曲线,流式细胞仪检测TrkC对细胞周期及凋亡的影响.[结果]成功利用脂质体转染PC3细胞后,Western blotting 鉴定结果显示:TrkC的表达水平显著降低,细胞生长曲线及流式细胞仪检测结果显示pSilencer4.1-cmv-TrkC脂质体转染的PC3细胞出现生长抑制及凋亡增加.[结论]下调TrkC表达可以抑制前列腺癌细胞PC3增殖,TrkC可能参与了前列腺癌的发生发展过程.     

CD59-siRNA对人卵巢癌细胞裸鼠移植瘤的作用

目的探讨针对CD59的siRNA(CD59-siRNA)对人卵巢癌裸鼠移植瘤CD59的沉默效应及其抑瘤作用。方法采用脂质体转染法将CD59干扰质粒(T组)和空质粒(V组)转染A2780细胞,获得稳定表达细胞株,将T组、V组A2780细胞和未转染(C组)的A2780细胞分别接种于裸鼠皮下建立肿瘤模型,通过绘制肿瘤生长曲线、RT-PCR和免疫组织化学法研究其抑瘤效应和对CD59基因及蛋白的沉默效应。结果与V组和C组比较,T组肿瘤体积和质量明显减小(F=301.88、5.39,q=4.01~30.41,P<0.05),CD59基因及蛋白表达减少(F=817.77、247.71,q=26.59~52.25,P<0.05)。结论特异性沉默CD59基因的siRNA表达载体可以明显抑制CD59的表达及卵巢癌在体内的生长。     

舒尼替尼靶向治疗裸鼠膀胱癌移植瘤的效果

目的观察舒尼替尼对裸鼠膀胱癌移植瘤的靶向治疗作用。方法建立裸鼠皮下人膀胱癌移植瘤模型,随机分为实验组和对照组(各6只),实验组裸鼠用舒尼替尼40 mg/kg灌胃,每天1次;对照组给予等体积蒸馏水灌胃。观察肿瘤的生长情况;用免疫组化法检测肿瘤CD34、Ki67的表达,计算肿瘤的微血管密度和增殖指数;用TUNEL法测肿瘤的凋亡指数。结果实验组裸鼠的肿瘤生长被明显抑制,抑瘤率为72.03%,肿瘤退缩率为43.42%。实验组微血管密度、肿瘤增殖指数明显低于对照组,凋亡指数高于对照组,差异均有显著性(t=10.222～18.700,P<0.05)。结论舒尼替尼可阻断裸鼠膀胱癌移植瘤血管的生成进程,使肿瘤体积退缩,对移植瘤起到了抑制作用。     

siRNA对VEGF蛋白表达的影响及对裸鼠移植肾癌的抑制作用

目的探讨siRNA沉默血管内皮生长因子(VEGF)基因对人肾癌裸鼠移植瘤VEGF蛋白的表达水平及生长抑制作用的影响。方法化学合成针对VEGF的siRNA序列,通过脂质体将VEGF-siRNA转染到ACHN细胞中,将转染VEGF-siRNA的ACHN细胞(A组)、转染空质粒的ACHN细胞(B组)及未转染的ACHN细胞(C组)分别接种于裸鼠背部皮下。在SPF环境中饲养裸鼠并观察各组裸鼠移植瘤的生长情况,每隔5d测定移植瘤体积大小(肿瘤的长轴L,短轴W,肿瘤体积V=1/2LW2),绘制肿瘤生长曲线,采用免疫组化及Western blot法测定裸鼠移植瘤组织切片中VEGF蛋白的表达水平。结果 A组小鼠移植瘤成瘤及生长明显缓慢,移植瘤的体积和质量均低于B、C组,差异有统计学意义(P<0.05);移植瘤组织切片免疫组化及Western blot法检测结果提示:与B、C组相比,A组中VEGF蛋白表达量降低,差异有统计学意义(P<0.05);而B、C组间瘤体的体积重量及VEGF蛋白表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 VEGF在肾癌的发生、发展中起着重要作用,化学合成的VEGF-siRNA可特异性抑制肾癌细胞中VEGF的表达,抑制肿瘤的生长增殖。     

膀胱癌细胞CAR的表达对E1B缺失腺病毒抗瘤活性的影响

【目的】观察不同组织类型膀胱癌细胞株表达柯萨奇病毒腺病毒受体（coxsackie and adenovirus receptor，CAR）与E1B缺失腺病毒（H101）体外感染力及体内抗瘤活性的关系。【方法】体外通过流式细胞仪法（FCM）检测不同组织类型膀胱癌细胞株表面CAR表达，用MTT法测定病毒对它们的抑制率，以观察CAR表达与H101感染力的关系；利用裸鼠移植瘤模型，观察H101对不同移植瘤的抗瘤活性。【结果】膀胱癌细胞上CAR的表达量与H101的感染力呈正相关（r=0．952）；动物移植瘤实验结果显示，H101对CAR表达高的SCaBER移植瘤的抑制率较高，有效持续的时间也较长。【结论】膀胱癌细胞株上不同的CAR表达可直接影响H101的体内外抗瘤活性。     

Survivin启动子控制LRIG1基因表达的重组腺病毒对人膀胱癌裸鼠移植瘤的治疗

[目的]探讨Survivin启动子控制LRIG1基因表达的重组腺病毒对人膀胱癌裸鼠移植瘤的治疗作用及机制.[方法]建立膀胱癌裸鼠移植瘤模型,将成瘤裸鼠随机分为3组,Ad-Surp-LRIG1组(尾静脉注射Ad-Surp-LRIG1上清液)、AD-LRlG1组(尾静脉注射Ad-LRIG1上清液)、PBS组(尾静脉注射PBS),观察各组裸鼠移植瘤生长情况并绘制肿瘤生长曲线;RT-PCR和Western blot分别检测各组肿瘤组织中LRIG1和EGFR mRNA和蛋白的表达.[结果]Ad-Surp-LRIG1组肿瘤生长速度明显慢于其他2组,治疗结束后Ad-Surp-LRIG1组肿瘤较其他2组轻,差异有统计学意义(F=97.86,P＜0.001),Ad-LRIG1组与PBS组相比差异无统计学意义(t=1.73,P=0.06).与其他两组相比,Ad-Surp-LRIG1组LRIG1的mRNA和蛋白表达水平明显升高,而EGFR的mRNA和蛋白表达水平则显著降低(P＜0.01).[结论]Ad-Surp-LRIG1在体外均能明显抑制膀胱癌的生长,其机制可能部分与LRIG1能下调EGFR的表达有关.     

Apoptin对人膀胱癌裸鼠皮下移植瘤的抑瘤作用研究

目的探讨Apoptin质粒对人膀胱癌裸鼠皮下移植瘤的抑瘤作用。方法皮下注射T24细胞,建立裸鼠移植瘤模型,于肿瘤直径0.5cm大小时,多点注射脂质体包裹质粒pApoptin-EGFP,设立空质粒组、生理盐水组作为对照组,观察裸鼠肿瘤生长情况;5周后处死,绘制肿瘤生长曲线,计算抑瘤率,肿瘤组织石蜡包埋,常规切片,TUNEL法检测移植瘤凋亡情况。结果成功建立移植瘤模型,注射脂质体包裹pApoptin-EGFP质粒能明显抑制移植瘤生长;TUNEL检测凋亡率为(23.24±6.12)%,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。结论Apoptin通过诱导凋亡能明显抑制人膀胱癌裸鼠皮下移植瘤生长。     

KISS-1对裸鼠胃癌移植瘤生长的抑制作用

目的探讨KISS-1基因对裸鼠胃癌移植瘤生长的影响。方法通过脂质体介导将pc DNA3.1-KISS-1转染人胃癌细胞BGC-823,用Western blot检测转染前后KISS-1蛋白的表达。将转染pc DNA3.1-KISS-1的BGC-823细胞(转基因组)、转染空质粒的BGC-823细胞(空质粒转染组)和单纯BGC-823细胞(对照组)分别接种于BALB/C裸鼠,构建裸鼠胃癌移植瘤模型,测量肿瘤体积和瘤质量,并绘制肿瘤生长曲线;采用免疫组织化学法和半定量反转录-聚合酶链反应检测肿瘤组织中KISS-1蛋白和mRNA的表达。结果 KISS-1基因成功转入胃癌BGC-823细胞,转基因组KISS-1蛋白的表达较空质粒转染组和对照组显著增加(P<0.05);与空质粒转染组和对照组比较,转基因组裸鼠肿瘤生长速度显著减慢、肿瘤体积显著减小,瘤体质量显著减轻(P<0.05)。结论通过基因转染的方法能表达有活性的KISS-1,并能抑制裸鼠胃癌移植瘤的生长。     

基因沉默Delta N p63对膀胱肿瘤生长抑制和CDK4的影响

目的采用RNA干扰(RNAi)方法,研究当Delta N p63基因的表达沉默后,对人膀胱癌裸鼠皮下移植模型肿瘤的抑制作用,并检测对细胞周期素依赖性激酶4(CDK4)基因和蛋白表达的影响,进一步揭示Delta N p63基因在膀胱肿瘤中的作用机制。方法首先构建Delta N p63基因特异性短发卡RNA(shRNA)表达质粒,将表达质粒转染至裸鼠皮下移植模型肿瘤瘤体内,比较各组肿瘤体积,光镜下检测肿瘤组织病理学改变,RT-PCR方法检测CKD4基因的表达变化,Western blot和SP免疫组化检测CKD4蛋白表达变化。结果质粒注射到肿瘤8周后,治疗组、对照组与生理盐水组比较,治疗组与生理盐水组瘤体积比较差异有统计学意义(P<0.01),抑瘤率74.62%。光镜结果显示治疗组肿瘤生长受到明显抑制,细胞核分裂象明显减少,可见坏死和凋亡肿瘤细胞、局部炎症细胞浸润。RT-PCR结果显示治疗组CKD4基因表达降低,蛋白检测结果显示CKD4蛋白表达下降。结论沉默Delta N p63表达后,可显著抑制人膀胱癌裸鼠肿瘤模型中肿瘤的生长,Delta N p63可能通过抑制CKD4的表达而抑制肿瘤的细胞生长。     

蜂毒素对人肝癌细胞裸鼠移植瘤的生长抑制作用

目的 探讨蜂毒素对人肝癌细胞移植瘤在BALB/C裸鼠体内生长的影响.方法 建立人肝癌BEL-7402细胞裸鼠皮下移植瘤模型,观察瘤内注射蜂毒素对肝癌细胞移植瘤在裸鼠体内生长的影响.应用HE染色观察肿瘤组织形态学变化,采用免疫组织化学法检测肝癌组织微血管密度(MVD),酶联免疫吸附法检测裸鼠血清白细胞介素-8(IL-8)的水平,Western blotting法检测裸鼠肝癌组织中血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达情况.结果 荷瘤裸鼠瘤内注射蜂毒素剂量为40、60、80μg/kg时的抑瘤率分别为44.64%、62.86%、73.73%,药物处理组肿瘤体积明显小于模型组(P<0.01).光镜下见蜂毒素各组肿瘤组织出现片状坏死,肿瘤间质内可见肿瘤血管,并有血管破坏现象.蜂毒素可明显降低裸鼠肝癌组织微血管密度,药物处理组IL-8和VEGF的表达显著低于模型组(P<0.01).结论 蜂毒素能够明显抑制人肝癌细胞裸鼠移植瘤的生长,其作用机制可能与下调IL-8和VEGF的表达,抑制肿瘤血管生成有关.     

重组质粒hTERT-siRNA对胰腺癌细胞移植瘤hTERT相关基因及蛋白表达的影响

目的探讨重组质粒pSilencer4.1CMV neo-hTERT-siRNA对胰腺癌细胞BxPC-3裸鼠皮下移植瘤hTERT相关基因及蛋白表达的影响.方法建立人原发性胰腺癌裸鼠皮下移植瘤模型,将荷瘤裸鼠随机分为4组：（1）肿瘤对照组,未作任何处理;（2）空载组,即pSilencer4.1-CMV neo空质粒组;（3）T1组,即重组质粒pSilencer4.1-CMV neo-hTERT1-siRNA组;（4）T2组,即重组质粒pSilencer4.1-CMV neo-hTERT2-siRNA组）.荷瘤裸鼠分组处理30d后,RT-PCR检测各组瘤体中hTERT、Bcl-2、Bax mRNA的表达,免疫组织化学检测各组瘤体中Bcl-2、Bax、p53、VEGF、端粒酶蛋白表达,Western blot检测各组瘤体中端粒酶蛋白表达情况.结果 T1组和T2组hTERT和Bcl-2 mRNA表达较肿瘤对照组和空载组明显降低,BaxmRNA表达明显升高（P〈0.01）.与肿瘤对照组和空载组比较,T1组和T2组Bcl-2 Telomerase、p53和VEGF蛋白表达明显降低,Bax蛋白表达明显升高（P〈0.01）.结论 （1）重组质粒T1和T2能够下调裸鼠移植瘤体内抗凋亡基因hTERT mRNA、Bcl-2 mRNA和蛋白、p53和端粒酶蛋白表达水平,上调促凋亡基因Bax mRNA和蛋白表达水平,其抗胰腺癌作用可能与促进胰腺癌细胞凋亡有关.（2）重组质粒T1和T2能够显著下调裸鼠移植瘤体内VEGF蛋白表达水平,可能具有抑制肿瘤血管生成的作用。     

miRNA-155表达对人肺癌细胞A549增殖的影响

【目的】探讨miRNA-155在正常肺组织和非小细胞肺癌组织中的表达及miRNA-155对人肺癌细胞A549增殖的影响。【方法】采用实时荧光定量PCR（Real-time PCR）技术检测15例非小细胞肺癌组织及其癌旁组织中miRNA-155的表达;A549细胞分别转染miR-NC和miRNA-155 mimic ,采用Real-time PCR技术检测转染后A549细胞中的miRNA-155表达水平,同时采用MTT 技术和流式细胞技术检测转染后A549细胞增殖情况,Western印迹法检测转染后A549细胞中Akt、p-Akt（Ser473）、p27、bcl-2、bax的表达。【结果】miRNA-155在非小细胞肺癌组织中的表达情况明显高于癌旁组织（ P ＜0．05）;与转染 miR-NC 组相比, A549细胞转染miRNA-155 mimic后miRNA-155表达水平明显增高（ P ＜0．001）,MTT实验和流式细胞技术显示miRNA-155促进A549细胞的增殖;Western印迹法结果显示：转染miRNA-155的A549细胞p-Akt （Ser473）,bcl-2的表达水平增高,p27、bax的表达水平降低。【结论】miRNA-155可能通过促进细胞增殖,抑制细胞凋亡,上调p-Akt（Ser473）、bcl-2表达,同时抑制p27、bax的表达来促进非小细胞肺癌的发生发展。     

EphA 2在膀胱移行细胞癌中的表达及其意义

[目的]探讨上皮细胞激酶2（EphA2）在膀胱移行细胞癌（Bladder transitional cell carcinoma BTCC ）中的表达及意义。[方法]采用Western blotting 和 RT-PCR技术测定20例BTCC组织和10例正常膀胱黏膜EphA2蛋白和 EphA2 mRNA的表达。[结果]EphA2蛋白在BTCC中的表达明显高于正常膀胱黏膜（ P ＜0．01）,在BTCC低分化组表达强于高分化组;EphA2 mRNA在BTCC中的表达高于正常膀胱黏膜（ P＜0．01）,与BTCC的分化程度无关（ P＝0．295）。[结论]EphA2将成为判定膀胱癌恶性程度的指标,EphA2 mRNA表达强度与EphA2蛋白表达强度不完全一致。提示转录后的调控机制干预了 BTCC中EphA2的表达。     

辛二酰苯胺异羟肟酸对裸鼠人宫颈癌移植瘤的作用及其机制

目的观察辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)对裸鼠人宫颈癌移植瘤生长的抑制作用,并对药物作用机制进行探讨。方法培养人宫颈癌SiHa细胞接种至20只裸鼠右下肢背侧根部皮下,15 d后将成瘤的18只裸鼠随机分3组:空白对照组、SAHA1组(25 mg/kg)、SAHA2组(50mg/kg),每组6只。连续4 d腹腔注射药物,间歇7 d,再连续给药4 d,1次/d。观察各组裸鼠宫颈癌移植瘤的生长情况,计算抑瘤率。免疫组化分析及Western blot方法检测各组移植瘤中的Bax及Bcl-2蛋白的表达。结果空白对照组抑廇率为0,SAHA1组为22.44%,SAHA2组为35.52%,2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。用药后,SAHA2组裸鼠体质量低于空白对照组及SAHA1组(P<0.05)。SAHA1组与SAHA2组肿瘤体积均小于空白对照组,且SAHA2组小于SAHA1组(P均<0.05)。与空白对照组相比,SAHA1组与SAHA2组裸鼠肿瘤质量低,且SAHA2组低于SAHA1组,差异均有统计学意义(P均<0.05);免疫组化及蛋白印迹法检测结果显示,与空白对照组比较,SAHA1组、SAHA2组Bax蛋白均明显升高,Bcl-2蛋白均明显降低(P均<0.05)。而SAHA2组较SAHA1组变化更明显,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论SAHA可以有效抑制人宫颈癌SiHa细胞裸鼠移植瘤的生长,Bax/Bcl-2相关的细胞凋亡是其抑癌机制之一。     

组蛋白去乙酰基酶在前列腺癌中的作用及机制研究

目的 研究组蛋白去乙酰基酶在前列腺癌中的作用及机制.方法 采用LNCaP细胞系建立前列腺癌异种移植体动物模型,分为对照组和HDAC抑制剂组,对照组动物常规饲养,HDAC抑制剂组采用0.4％HDAC抑制剂丙戊酸（VPA）饮用水连续饮用35 d.免疫组化法检测乙酰化组蛋白H3、p21WAF1/CIP1、p27KIP1、细胞周期蛋白D1、雄激素受体（AR）表达.结果 与对照组相比,HDAC抑制剂组乙酰化组蛋白H3阳性染色MOD值显著升高[（0.63±0.12）比（0.75±0.11）,P＜0.05],p21 WAF1/CIP1[（0.27 ±0.06）比（0.79±0.10）,P＜0.05]和p27KIP1 [（0.31 ±0.08）比（1.09±0.18）,P＜0.05]阳性染色MOD值显著增加,细胞周期素D1的阳性染色MOD值显著减少[（0.69±0.09）比（0.58±0.08）,P＜ 0.05],AR阳性染色MOD值显著降低[（0.62±0.10）比（0.53±0.07）,P＜0.05].结论 HDAC参与前列腺癌细胞的细胞周期调控并与AR过表达有关,HDACI可通过诱导癌细胞周期阻滞及下调AR表达水平等机制抑制前列腺癌肿瘤移植体生长.     

原位移植人肝癌裸鼠模型AFP基因甲基化状态与其表达的关系

【目的】探讨原位移植人肝癌模型肝癌组织中，AFP基因启动子区的甲基化状态同其异常表达的关系。【方法】采用甲基化特异性PCR（MSP）和亚硫酸氢盐测序法（BSP）分析模型肝癌组织中AFP基因启动子区甲基化状态；RT-PCR及Western Blotting两种方法检测AFP基因在转录水平和翻译水平的表达情况。【结果】10例肝癌模型的肝癌组织均有AFP基因mRNA和蛋白的表达（100％），AFP基因启动子区部分CG位点发生异常甲基化，其中－2431、－2494两个位点低于正常对照（P〈0．01）。【结论】AFP基因启动子区甲基化程度与其表达成负相关（P〈0．01）。     

沉默核糖核酸酶抑制因子促进膀胱癌BIU-87细胞生长和转移潜能

目的研究沉默核糖核酸酶抑制因子(ribonuclease inhibitor,RI)基因表达,对人膀胱癌BIU-87细胞增殖和侵袭能力及肿瘤生长的影响。方法通过用RI mRNA的特异性siRNA表达载体和无同源性的对照载体,在脂质体介导下稳定转染膀胱癌BIU-87细胞,通过筛选、鉴定后,用Am-blue法检测细胞增殖能力及用Western blot分析细胞中MMP-2和MMP-9的表达。将siRNA RI BIU-87(实验组)及对照组细胞皮下注射到BALB/c裸鼠中,观察肿瘤的生长和肿瘤微血管密度的变化,以及nm23-H1和E-cadherin在肿瘤中的表达。结果 RI基因表达下调显著增加了细胞的增殖,而且显著增强了MMP-2和MMP-9的表达。动物实验结果显示,实验组显著促进了肿瘤的生长(促瘤增长率31.85%),具有更大的瘤质量和更高的肿瘤微血管密度以及更低的nm23-H1和E-cadherin的表达。结论抑制RI基因的表达能显著提高膀胱癌细胞的生长和侵袭潜能,RI可能作为治疗膀胱癌的靶蛋白。     

miR-143在膀胱癌组织中的表达及意义

【目的】探讨miR-143在膀胱癌组织中的作用及机制,为膀胱癌的临床诊治提供参考。【方法】选用体外培养的T24细胞株作为研究对象,按照处理方式分为si-COX-2转染组、miRNA-143转染组、阴性对照组、空白对照组。Transwell趋化实验和3 H-thymidine 法检测 T24细胞增殖和迁移能力,免疫印迹法检测COX-2蛋白表达变化。【结果】miR-143和si-COX-2转染T24细胞48～72 h后,细胞增殖能力较正常T24细胞相比下降36％～49％（ P ＜0．01）,迁移能力下降81％。免疫印迹结果表明,si-COX-2或miR-143转染的T24细胞内源性COX-2表达水平显著减少至正常T24细胞表达水平的0．39和0．31倍（ P＜0．01）。【结论】miR-143可能通过COX-2通路发挥对膀胱癌 T24细胞的增殖和侵袭的抑制作用并抑制COX-2的表达。提示miR-143可作为膀胱癌的治疗候选药物。