辐射后骨髓造血基质细胞对粒系造血祖细胞生长的影响

本文观察了骨髓造血基质细胞贴壁层及细胞悬液对 GM-CFU-C 生长的影响及照射后的变化。实验结果表明,骨髓基质细胞贴壁层及细胞悬液均有增高 GM-CFU-C 产率的作用。这种刺激性影响与基质细胞贴壁层的细胞密度和细胞悬液的浓度没有依赖关系。1～5Gyγ线照射的骨髓基质细胞贴壁层和细胞悬液支持 GM-CFU-C 集落生成的作用明显削弱。文中讨论了造血基质细胞的辐射损伤在放射病骨髓综合征发病机理中的意义。     

骨髓基质细胞及其辐射残留损伤

骨髓微环境特别是基质细胞对骨髓的造血起着重要的调控和支持作用。基质细胞与细胞外基质协同作用,并通过分泌众多细胞因子和表达多种粘附因子形成了一个调控造血细胞增殖和分化的网络体系。基质细胞以其较大的辐射抗性对造血系统辐射残留损伤的恢复发挥重要的作用。     

骨髓基质细胞及其辐射残留损伤

骨髓微环境特别是基质细胞对骨髓的造血起着重要的调控和支持作用。基质细胞与细胞外基质协同作用,并通过分泌众多细胞因子和表达多种粘附因子形成了一个调控造血细胞增殖和分化的网络体系。基质细胞以其较大的辐射抗性对造血系统辐射残留损伤的恢复发挥重要的作用。     

小鼠胎肝和骨髓造血基质细胞对粒系造血祖细胞增殖的影响

本文应用体外液体培养方法建立小鼠胎肝和骨髓造血基质细胞贴壁层,在贴壁细胞层上做粒系造血祖细胞集落(GM-CFU-C)培养,观察胎肝造血基质细胞和骨髓造血基质细胞对粒系造血祖细胞生长的影响。实验结果表明,培养1～2周的胎肝造血基质细胞贴壁层能抑制 GM-CFU-C 的集落生成,此抑制作用可被消炎痛拮抗。随贴壁培养时间的延长,胎肝造血基质细胞贴壁层转而增加 GM-CFU-C 产率。不同培养时间的骨髓造血基质细胞贴壁层均能明显地促进 GM-CFU-C 的生长。文中讨论了造血基质细胞与造血的关系以及两种来源造血基质细胞作用不同的可能原因。     

骨髓基质细胞异常对造血功能的影响

骨髓基质细胞是造血诱导微环境（ＨＩＥ）的重要组成成分。它通过与造血细胞密切接触、分泌细胞外基质（ＥＣＭ）和多种细胞因子调节造血，其结构和功能的完整性对于保持机体在生理状况尤其是应激状态时造血的稳定性具有十分重要的作用〔１〕。越来越多的事实表明，某些生...     

照射骨髓基质细胞对辐射损伤小鼠造血重建的影响

采用辐照方法将骨髓基质细胞(BMSC)预先强化,再经体外培养、富集后与骨髓细胞(BMC)一起经尾静脉输注给全身致死剂量照射的小鼠。采用股骨BMC计数,CFU-GM和CFU-S测定及股骨切片组织学观察等方法研究了这种细胞对辐射损伤小鼠造血重建的影响。结果表明输入的BMSC对辐射损伤小鼠造血重建具有促进作用。进一步研究表明,这种细胞对辐射损伤小鼠造血重建的促进作用不是由于其中含有造血干细胞(HSC)所致,而是通过其经血循环迁徒至造血组织后对同时输入BMC中的HSC增殖和向粒系分化发挥支持和刺激作用来实现的。     

血小板第4因子对放射损伤小鼠骨髓基质细胞周期的影响

目的探讨血小板第4因子（platelet factor 4,PF4）对5.0 Gy γ射线全身照射小鼠的骨髓基质细胞（bone marrow stromal cells,BMSCs）的保护作用,进一步探讨PF4对造血的辐射防护机制.方法30只雄性小鼠随机分为3组：①放射组,②PF4保护组,③对照组.小鼠照射前分别于26和20 h腹腔内注射PF4,每次剂量50 μg/kg.于照射后3 d取骨髓细胞体外培养,分别计数培养后3、7和14 d的骨髓基质细胞集落（CFU-F）;在培养后10 d流式细胞仪检测细胞周期.结果3组中,照射组3 d的CFU-F数量与PF4保护组差异无统计学意义,7和14 d的CFU-F数量PF4保护组较照射组明显增加.流式细胞仪检测结果表明3组中照射组G0＋G1期细胞明显高于其余两组,S,G2＋M期细胞明显低于其余两组.结论PF4对照射小鼠的骨髓基质细胞有保护作用,促进造血重建.     

同种异体骨髓基质细胞移植在急性辐射损伤小鼠体内的迁移

目的探讨小鼠在接受全身大剂量辐射后,移植体外扩增并已获标记的同种小鼠骨髓基质细胞(MSCs)。观察移植的MSCs在受体体内的存活、迁移和分布情况,揭示MSCs治疗急性辐射造血损伤的机制。方法将受体小鼠(20只)随机分为4组,每组5只:1、2、3周组和照射对照组。在体外对同种小鼠MSCs进行培养、扩增,取第三代MSCs,用Hoechst 33342标记后,通过尾静脉移植到已接受全身大剂量辐射的小鼠体内,于移植后1、2、3周取受体小鼠心、肝、脾、肺和肾做冰冻切片,在荧光显微镜下观测移植的MSCs在小鼠体内主要脏器的分布。结果接受MSCs移植的小鼠均存活至处死前,照射对照组小鼠在实验期内有3只死亡。在移植后各个时间点,几乎未见MSCs在受体小鼠心、肝、肺、肾内分布,而大量的MSCs则集中分布于受体小鼠脾表面。结论静脉移植的同种异体MSCs能在急性辐射损伤小鼠体内长期存活,具有向特定损伤部位迁移的能力,参与了急性辐射损伤后造血的重建。     

骨髓基质细胞的体外培养与临床应用

目的　验证骨髓基质细胞 (bonemarrowstromalcells,BMSCs)向成骨细胞转化的能力及其临床应用价值。方法　取健康成年大白兔股骨大转子红骨髓 ,在DMEM标准培养液中原代培养骨髓基质细胞 ,传代细胞分别用DMEM标准培养液和加入地塞米松、β 甘油磷酸钠、L 抗坏血酸的条件培养液培养 ,倒置显微镜观察不同培养条件下细胞的形态学特征 ,进行酶学测定 ,计数传代细胞中成骨样细胞转化率 ,免疫组化法检测Ι型胶原表达。同样方法培养人BMSCs,与同种异体骨基质明胶充分混合 ,应用于临床修复创伤所致的骨缺损、骨不连或骨折延迟愈合。结果　体外培养条件下 ,原代细胞呈长梭形 ,具有成纤维细胞的生长特性 ,条件培养的传代BMSCs变为三角形或锥形 ,呈多层生长 ,无接触抑制现象 ,具有与成骨细胞相似的形态和生长特点。ALP染色阳性率可达 85 %以上 ,Ι型胶原免疫组化染色呈强阳性 ,具有与成骨细胞类似的功能性表现。临床应用 4 2例病人 ,随访 8～ 2 6个月 ,取得了满意疗效。结论　BMSCs能够向成骨细胞分化和增殖 ,是骨组织工程学种子细胞的理想来源 ,并有广阔的临床应用前景     

人骨髓基质细胞体外扩增方法的研究

 目的 为提高人骨髓成纤维细胞集落(CFU-F)的产率,缩短培养时间.方法 在以往的人骨髓基质细胞体外扩增方法基础上进行了改进,每10ml培养体系中,含1×10<'7>个单个核细胞,以30%人AB血清代替小牛血清,增加了碱性成纤维细胞生长因子(bFGF),再加入氢化可的松和适量的IMDM培养液,培养第9d观察结果.结果 在一定范围内人AB血清、bFGF均能促进CFU-F增殖,提高其产率,并缩短培养时间3～5 d.结论 可应用到人骨髓基质细胞体外扩增及传代中,对于研究CFU-F的性质及在造血疾病中的应用具有重要意义.     

Notch信号在放射损伤小鼠骨髓基质细胞中的表达

目的探讨小鼠骨髓基质细胞放射损伤后Notch信号的表达。方法应用小鼠骨髓基质细胞体外放射损伤模型，采用RT-PCR检测了小鼠骨髓基质细胞Notch1、Jagged1、Hes1基因的表达。结果正常小鼠骨髓基质细胞中未见Notch1受体、Notch1配体Jagged1、Notch通路活化的下游基因Hes1mRNA的表达，给予^60Coγ射线照射后2h即可见上述基因的表达，照射后4h达高峰，8～12h恢复正常。各组间比较，差异有统计学意义（P〈0．001）。结论γ射线作用于小鼠骨髓基质细胞后有Notch通路的活化。Notch通路参与了小鼠骨髓基质细胞的放射损伤过程。     

自体骨髓基质细胞体外扩增促进病人造血功能恢复的研究

２２例骨髓象完全缓解的急性早幼粒白血病（Ｍ３）接受相同的方案化疗，１２例在化疗结束后第２天回输体外扩增的自体骨髓基质细胞。结果：回输基质细胞的实验组化疗后１、２、３周粒、红系祖细胞产率均高于单纯化疗的对照组（Ｐ＜００５），化疗后实验组外周血象较对照组下降缓慢，且下降到最低点的时间提前，而达到最低点的血象值显著高于对照组（Ｐ＜００１），血象恢复至正常的时间也较对照组提前。提示：骨髓基质细胞输注能促进化疗后造血功能的恢复，缩短骨髓抑制期     

急性白血病骨髓基质细胞中SDF-1的异常表达研究

目的观察初诊和完全缓解的急性白血病骨髓基质细胞SDF1表达情况。方法分离培养5例初诊急性白血病患者(A组)、5例完全缓解急性白血病患者(B组)、5例正常人或无重大血液系统疾病患者(C组)骨髓基质细胞,ELISA法检测培养上清中SDF1含量。结果A、B、C三组骨髓基质细胞培养上清中SDF1含量分别为2941±374、2891±305、1583±157pg/ml,A、B两组显著高于C组(P<0.05)。结论急性白血病患者骨髓基质细胞分泌SDF1增多,完全缓解后仍存在持续异常。     

加热复合电离辐射对人骨髓细胞的影响

目的：研究了加热与电离辐射后对人离体骨髓细胞存活率及形态等方面的影响。结果：骨髓细胞存活率随加热时间增加而呈直线下降，温度越高直线斜率越大。在形态学上，骨髓细胞受热后可出现非特异性退行性变化，随着时间的延长，这些变化更加明显。骨髓细胞受单纯Ｘ射线照射后，可见随着照射剂量的增大，细胞存活率明显下降。形态学上单纯３ＧｙＸ射线照射可使少数细胞出现空泡变性，线粒体肿胀，核膜破裂等变化。骨髓细胞受Ｘ射线照射后立即给予４２℃３０分钟的加热使骨髓细胞存活率下降的程度比各自单独作用之和要大（Ｐ＜０．０１）。电镜显示结构破坏明显，细胞支架系统、细胞器均受到破坏，细胞膜、核膜破坏乃至溶解，核浆、细胞浆外溢。     

骨髓基质屏蔽白血病细胞抵抗药物诱导凋亡

目的:探索骨髓基质细胞抑制化疗药物诱导白血病细胞凋亡的可能机制.方法:体外分离培养骨髓基质细胞,与Jurkat细胞共培养.流式细胞仪检测DNR诱导Jurkat 细胞凋亡率和细胞周期分布.结果:共培养后骨髓基质细胞抑制DNR诱导的白血病细胞凋亡,而白血病骨髓基质保护效应强于正常骨髓基质细胞.共培养后Jurkat细胞出现G0/G1期阻滞.结论:G0/G1期阻滞是骨髓基质细胞保护白血病细胞的机制之一,但可能存在较细胞周期阻滞更复杂的机制.     

血管内皮生长因子在放射损伤小鼠骨髓基质细胞中的表达

目的 探讨辐射对小鼠骨髓基质细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响及凋亡率变化。方法 采用RT—PCR和Western blot方法，初步检测了昆明小鼠经6．0Gy^60Coγ射线全身照射后小同时间骨髓基质细胞VEGF mRNA和蛋白表达水平的变化；并用流式细胞术检测相应时间的骨髓基质细胞凋亡率。结果 辐射损伤后，小鼠骨髓基质细胞VEGF表达在mRNA水平和蛋白水平均显著降低，骨髓基质细胞凋亡率显著升高；随时间延长，骨髓基质细胞VEGF表达有所恢复，凋亡率也逐渐降低，但14d时仍未恢复正常。结论 6．0Gy^60Coγ射线可抑制骨髓基质细胞VFGF表达，引起细胞凋亡。说明辐射所致骨髓微环境损伤与基质细胞中VEGF表达异常有关。